目的:检测胃癌组织中赖氨酸组蛋白甲基转移酶2D(KMT2D)的表达水平并探究其临床意义。方法:对100例胃癌患者癌组织及其相应的癌旁组织中的KMT2D进行免疫组织化学染色，分析其蛋白表达水平与患者临床病理特征和预后的关系。结果:100例胃癌组织中的KMT2D高表达率[78%(78/100)]显著高于癌旁组织的高表达率[12%(12/100)]。胃癌组织中的KMT2D高表达与浸润深度( χ2＝36.515， P<0.01)、淋巴结转移状态( χ2＝52.329， P<0.01)、TNM分期( χ2＝78.952， P<0.01)、肿瘤瘤体大小( χ2＝10.905， P<0.010)、淋巴管侵犯状态( χ2＝22.355， P<0.01)、静脉侵犯状态( χ2＝4.100， P<0.05)显著相关，而与患者的性别、年龄、肿瘤远处转移、肿瘤分化程度、肿瘤部位无明显相关( P>0.05)。此外Kaplan-Meier生存分析显示KMT2D高表达组的胃癌患者中位生存时间为15个月，低于KMT2D低及正常表达组的患者，两者差异有统计学意义(Log-rank＝11.146， P<0.05)。Cox单因素回归分析表明年龄[风险比( HR)＝0.544， P<0.05]、肿瘤浸润深度( HR＝2.054， P<0.05)、淋巴结转移( HR＝1.964， P<0.05)、远处转移( HR＝2.663， P<0.05)、TNM分期( HR＝2.344， P<0.05)、KMT2D表达水平( HR＝2.420， P<0.05)都是胃癌患者的不良预后影响因素，但是Cox多因素回归分析发现以上因素都不是胃癌的独立预后因素( P>0.05)。 结论:KMT2D在胃癌组织中高表达，作为癌基因促进胃癌的进展并与胃癌的预后显著相关。

目的:探讨在砷诱导肝细胞凋亡过程中，组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化（H3K27me3）水平对抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2（BCL2）基因表达的影响。方法:体外培养大鼠肝细胞BRL-3A，根据砷处理因素将实验分为两部分，未染砷时分为正常、转染试剂、阴性转染、JMJD3（H3K27me3特异性去甲基化酶）小干扰RNA（siRNA）转染、EZH2（H3K27me3甲基转移酶）siRNA转染组；染砷时分为对照、砷处理、砷+阴性转染、砷+ JMJD3siRNA转染、砷+ EZH2siRNA转染组。未染砷时siRNA和转染试剂按照100 pmol ∶ 7.5 μl比例转染细胞6 h[正常组加入与转染试剂同体积的磷酸盐缓冲液（PBS）]，再换培养基培养，共48 h；染砷时同上述方法转染和培养细胞24 h，染砷各组再加入终浓度为30 μmol/L的亚砷酸钠（NaAsO 2）处理24 h（对照组加入与NaAsO 2同体积的PBS处理24 h）。采用实时无标记细胞分析（RTCA）技术动态观察染砷时细胞增殖情况；流式细胞术检测染砷时细胞的凋亡情况；蛋白免疫印迹（Western blot）法检测未染砷时和染砷时细胞JMJD3、EZH2、H3K27me3、BCL2蛋白表达水平；染色质免疫共沉淀技术检测染砷时细胞BCL2基因启动子区H3K27me3的富集水平。 结果:对照、砷处理、砷+阴性转染、砷+ JMJD3siRNA转染、砷+ EZH2siRNA转染组细胞增殖率分别为（100.00 ± 10.43）%、（12.19 ± 3.37）%、（31.86 ± 1.95）%、（24.58 ± 3.64）%、（11.53 ± 1.11）%，细胞凋亡率分别为（1.15 ± 0.04）%、（13.06 ± 1.33）%、（17.39 ± 0.22）%、（23.90 ± 1.66）%、（15.07 ± 0.88）%，组间比较差异均有统计学意义（ F = 146.50、194.30， P均< 0.001）。JMJD3siRNA转染组H3K27me3蛋白表达水平均高于正常、转染试剂、阴性转染组，EZH2siRNA转染组则相反（ P均< 0.05）；JMJD3siRNA转染组BCL2蛋白表达水平均低于正常、转染试剂、阴性转染组，EZH2siRNA转染组则相反（ P均< 0.05），而在正常、转染试剂、阴性转染组之间，H3K27me3、BCL2蛋白表达水平均未见明显改变（ P均> 0.05）。在对照、砷处理、砷+阴性转染、砷+ JMJD3siRNA转染、砷+ EZH2siRNA转染组之间，JMJD3、EZH2、H3K27me3、BCL2蛋白表达水平比较，差异均有统计学意义（ F = 26.56、7.82、9.81、31.19， P均< 0.05）。与对照组比较，砷处理组JMJD3、EZH2蛋白表达水平均较低，H3K27me3蛋白表达水平较高，同时BCL2蛋白表达水平较低（ P均< 0.05）；与砷+阴性转染组比较，砷+ JMJD3siRNA转染组JMJD3蛋白表达水平较低，砷+ EZH2siRNA转染组EZH2蛋白表达水平较低，砷+ JMJD3siRNA转染组H3K27me3蛋白表达水平较高，同时BCL2蛋白表达水平较低，而砷+ EZH2siRNA转染组则相反（ P均< 0.05）。与对照组比较，砷处理组细胞BCL2基因启动子区（CHIP1、CHIP2）H3K27me3的富集水平均较高（ P均< 0.05）。 结论:砷通过增加BCL2基因启动子区H3K27me3的富集水平，进而抑制BCL2的表达，促进肝细胞凋亡。

果蝇Zeste基因增强子人类同源物EZH2是多梳抑制复合物2的催化亚基之一，具有组蛋白甲基转移酶的作用，通过甲基化组蛋白3第27位赖氨酸参与对目的基因的负性表观遗传调控。既往研究表明，EZH2在头颈恶性肿瘤组织中高表达，且与肿瘤发生发展、侵袭转移和预后不良密切相关，因此EZH2有望成为治疗头颈恶性肿瘤新的分子靶点。本文就EZH2的结构与功能，EZH2在头颈恶性肿瘤的作用机制做一综述。

目的:分析赖氨酸甲基转移酶（SET domain containing 1A，SETD1A）、SET结构域5（SET domain-containing 5，SETD5）在乳腺癌中的表达及其与患者临床病理特征的相关性。方法:收集2020年1月至2022年2月在东营市人民医院乳腺甲状腺外科就诊的80例乳腺癌患者，GSCA网站对SET结构域家族成员进行筛选，预测其在乳腺癌组织中的表达情况并借助免疫组化SP法进行验证。 χ 2检验与Logistic回归模型分析SETD1A、SETD5与患者临床病理特征相关性。 结果:GSCA网站显示SET结构域家族的SETD1A、SETD5在乳腺癌组织中表达较正常组织上调（均 P<0.05）。免疫组化SP法实验显示乳腺癌组织中SETD1A、SETD5阳性表达率分别为73.8%、68.8%，显著高于癌旁组织SETD1A、SETD5阳性表达率38.8%（ χ 2=19.91， P<0.001）与32.5%（ χ 2=21.03， P<0.001）。 χ 2检验结果显示SETD1A的表达与与淋巴结转移、血管浸润显著相关，SETD5的表达与神经浸润显著相关（均 P<0.05）。Logistic回归模型显示SETD1A表达与淋巴结转移（ OR=0.07，95% CI：0.01~0.25， P<0.001）、分子分型（ OR=0.04，95% CI：0.00~0.48， P=0.022）存在相关性，SETD5表达与神经浸润（ OR=6.41，95% CI：1.45~46.65， P=0.029）存在相关性。 结论:组蛋白甲基转移酶SETD1A、SETD5在乳腺癌组织中表达上调，且与患者淋巴结转移、血管浸润、神经浸润等病理特征存在相关性。

目的:探讨SET结构域分支型组蛋白赖氨酸甲基转移酶1（SETDB1）基因在卵巢高级别浆液性癌（HGSOC）组织中的表达，并探讨其对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞增殖、侵袭能力的影响及其分子机制。方法:（1）收集2009年1月至2014年12月在郑州大学第一附属医院接受初次手术治疗且临床病理资料完整的90例HGSOC患者的癌组织标本，以同期收治的30例因子宫肌瘤行子宫及双侧附件切除术患者的正常卵巢组织标本为对照。应用荧光定量PCR技术、免疫组化法检测SETDB1 mRNA、蛋白在HGSOC组织、正常卵巢组织中的表达，分析SETDB1蛋白表达与HGSOC患者临床病理特征、预后的关系；（2）荧光定量PCR技术检测卵巢癌细胞系A2780、COC1、OVCAR3、SKOV3细胞中SETDB1 mRNA的表达。（3）过度表达及沉默SETDB1基因的卵巢癌细胞株的构建及筛选后，活细胞计数法检测转染后卵巢癌细胞的增殖能力，穿膜（transwell）小室实验检测转染后卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力。（4）蛋白印迹（western blot）法检测转染后卵巢癌细胞中磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路关键分子［包括磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）］及上皮-间质转化（EMT）相关蛋白［包括E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、锌指转录因子（Slug）、波形蛋白（vimentin）］的表达。结果:（1）与正常卵巢组织比较，HGSOC组织中STEDB1 mRNA、蛋白的表达水平均显著增高（ P均<0.01），且STEDB1蛋白表达与HGSOC患者的手术病理分期、淋巴结转移状态均显著有关（ P均<0.05）；Kaplan-Meier法生存分析显示，SETDB1蛋白阳性表达患者的中位总生存时间显著短于SETDB1阴性表达者（分别为31.0、43.4个月， P=0.020）。（2）卵巢癌细胞系A2780、COC1、OVCAR3、SKOV3细胞中SETDB1 mRNA的表达水平，均显著高于正常卵巢细胞系T29细胞（ P均<0.01）。（3）沉默SETDB1基因表达的SKOV3-shSETDB1-1、SKOV3-shSETDB1-2细胞的增殖、侵袭和迁移能力，均显著低于其对照SKOV3-NC细胞（ P均<0.01）；过度表达SETDB1基因的OVCAR3-SETDB1细胞的增殖、侵袭和迁移能力，均显著高于其对照OVCAR3-NC细胞（ P均<0.01）。（4）与对照SKOV3-NC细胞比较，沉默SETDB1基因表达的SKOV3-shSETDB1-1、SKOV3-shSETDB1-2细胞中p-Akt、p-mTOR、N-cadherin、Slug、vimentin蛋白的表达强度均显著降低，E-cadherin蛋白的表达强度均显著增高；与对照OVCAR3-NC细胞比较，过度表达SETDB1基因的OVCAR3-pSETDB1细胞中p-Akt、p-mTOR、N-cadherin、Slug、vimentin蛋白的表达强度显著增高，E-cadherin蛋白的表达强度显著降低。 结论:SETDB1基因在HGSOC组织和卵巢癌细胞中均呈高表达，过度表达SETDB1基因可促进卵巢癌细胞的增殖和侵袭，其作用机制可能与激活PI3K/Akt信号通路及促进肿瘤细胞EMT相关。

目的:评价大鼠神经病理性痛时背根神经节(DRG)常染色质组蛋白赖氨酸N-甲基转移酶2(G9a)与钠依赖激活的钾离子通道(Slack通道)的关系。方法:清洁级健康雄性SD大鼠48只，1月龄，体重100~120 g，采用随机数字表法分为4组( n＝12)：假手术组(S组)、载体+假手术组(VS组)、载体+神经病理性痛组(VN组)和G9a敲减+神经病理性痛组(GN组)。S组2月龄时行假手术；VS组1月龄时于L 4和L 5DRG分别显微注射AAV5 1 μl，饲养至2月龄时行假手术；VN组和GN组1月龄时于L 4和L 5 DRG分别显微注射AAV5或AAV5-G9a CRISPR/Cas9 KO质粒1 μl，2月龄时采用脊神经节结扎法制备神经病理性痛模型。每组取6只大鼠，于DRG显微注射前(T 0)、造模前(T 1)、造模后3、5和7 d(T 2~4)时，测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。于最后1次行为学测试结束后，处死大鼠，取L 4，5节段DRG，采用Western blot法测定G9a、组蛋白H3的赖氨酸残基9二甲基化(H3K9me2)和Slack的表达。于造模后7 d时，每组取6只大鼠，培养原代DRG神经元，全细胞膜片钳技术在电压钳模式下记录DRG神经元中的Slack电流和脊髓背角浅层兴奋性突触后膜电流(mEPSCs)的振幅和频率。 结果:与S组比较，VN组T 2~4时TWL缩短，MWT降低，脊髓背角G9a和H3K9me2表达上调，Slack表达下调，DRG神经元Slack通道电流振幅和频率降低，mEPSC频率升高( P<0.05)，VS组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)；与VN组比较，GN组T 2~4时TWL延长，MWT升高，脊髓背角G9a和H3K9me2表达下调，Slack表达上调，DRG神经元Slack电流的振幅和频率升高，mEPSC频率降低( P<0.05)。 结论:大鼠神经病理性痛的机制与上调DRG G9a的表达，从而抑制Slack通道表达和开放有关。

组蛋白赖氨酸三甲基转移酶（SET domain containing 2，SETD2）基因位于人类第三号染色体短臂的2区1带（3p21.31）位点，长度约为147kb，编码人源含SET结构域蛋白SETD2，能特异性催化组蛋白H3第36位赖氨酸的三甲基化（Trimethylation of lysine 36 of Histone H3，H3K36me3）。SETD2参与DNA转录延伸、损伤修复、可变剪切、基因表达修饰、免疫应答、胚胎发育和血管生成等生物学过程。SETD2在肾细胞癌、胃癌、间皮瘤等多种肿瘤中都发生了突变或失活，主要通过抑制转录延伸、损伤修复、细胞周期进展、凋亡和细胞代谢等过程促进肿瘤的发生发展。SETD2的表达水平与癌症的临床病理参数和患者生存结局也密切相关。在肿瘤治疗上，SETD2的突变或失活可增强G2M细胞周期阻断剂、PI3K（磷脂酰肌醇3-激酶）-AKT（蛋白激酶B）抑制剂和铂类的抑癌效果，西奈芬近衍生物可直接靶向抑制SETD2蛋白，因此SETD2被认为是潜在的表观遗传治疗靶点，在相关癌症的诊疗研究中有较大的研究前景。

目的:探讨长波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞光老化中miRNA-26a的表达情况，以及上调或下调miR-26a表达对全基因组甲基化水平、靶基因组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶2（EZH2）及细胞老化的影响。方法:以10 J/cm 2 UVA照射人皮肤成纤维细胞，分别在第0、3、7天提取RNA，实时定量反转录PCR（RT-PCR）检测miR-26a的表达；通过转染miR-26a模拟物（mimic）和miR-26a抑制物（inhibitor）上调或下调miR-26a的表达，通过荧光显微镜观察和实时定量PCR检测miR-26a表达量，并评估转染效率。将人皮肤成纤维细胞分为空白对照组（不做任何处理）、UVA组（UVA照射）、miR-26a-mimic组（转染miR-26a-mimic）、UVA+miR-26a-mimic组（转染miR-26a-mimic后UVA照射）、miR-26a-inhibitor组（转染miR-26a-inhibitor）、UVA+miR-26a-inhibitor组（转染miR-26a-inhibitor后UVA照射）。第7天完成UVA照射后，收集各组细胞，采用流式细胞仪检测细胞周期，DNA甲基化定量检测试剂盒检测全基因组甲基化水平，RT-PCR检测EZH2、DNA甲基转移酶1（DNMT1）mRNA以及miR-26a的表达，Western印迹检测EZH2以及DNMT1蛋白的表达。采用单因素方差分析及LSD- t检验进行统计学分析。 结果:随着培养时间的延长，对比空白对照组，UVA照射组中miR-26a表达量逐渐增高，在UVA照射第7天后，两组间miR-26a表达水平差异有统计学意义（ t=5.295， P < 0.05）。miR-26a mimic/miR-26a inhibitor转染HSF后，细胞内均有较高的荧光表达，提示均具有较高的转染效率。流式细胞仪检测显示，空白对照组、UVA组、miR-26a-mimic组、UVA+miR-26a-mimic组、miR-26a-inhibitor组、UVA+miR-26a-inhibitor组G1期细胞比例分别为52.82% ± 2.56%、78.56% ± 4.34%、53.63% ± 3.13%、89.52% ± 4.17%、54.39% ± 3.86%、65.34% ± 4.78%，各组间差异有统计学意义（ F=46.728， P < 0.01），其中UVA组高于空白对照组（ t=8.848， P < 0.01），UVA+miR-26a-mimic高于miR-26a-mimic组（ t=11.922， P < 0.01）和UVA组（ t=3.154， P < 0.05），UVA+miR-26a-inhibitor组高于miR-26a-inhibitor组（ t=3.087， P < 0.05），但低于UVA组（ t=3.547， P < 0.05）。全基因组甲基化水平检测显示，上述各组甲基化水平（ A450值）分别为0.676 ± 0.024、0.323 ± 0.043、0.506 ± 0.035、0.169 ± 0.024、0.602 ± 0.036、0.422 ± 0.029，各组间差异有统计学意义（ F=97.402， P < 0.01），其中UVA组低于空白对照组（ P < 0.01），UVA+miR-26a-mimic低于miR-26a-mimic组（ P < 0.01）和UVA组（ P < 0.01），UVA+miR-26a-inhibitor组低于miR-26a-inhibitor组（ P < 0.01），但高于UVA组（ P < 0.05）。RT-PCR和Western印迹显示，6组细胞间EZH2、DNMT1 mRNA和蛋白表达水平差异均有统计学意义（均 P < 0.05），其中UVA组均低于空白对照组（ P < 0.05），UVA+miR-26a mimic组均低于miR-26a mimic组（ P < 0.05）和UVA组（ P < 0.05），而UVA+miR-26a inhibitor组均低于miR-26a inhibitor组（ P < 0.05），但均高于UVA组（ P < 0.05）。 结论:在UVA照射诱导皮肤成纤维细胞光老化中，miR-26a表达上调，细胞增殖活性下降，全基因组甲基化水平降低；上调miR-26a的表达，可下调其靶基因EZH2及甲基化相关基因DMNT1的表达，促进细胞光老化，反之，下调miR-26a的表达，可上调EZH2及DNMT1的表达，抑制细胞光老化。

目的:探讨SH-SY5Y细胞中果蝇zeste基因增强子同源物2（enhancer of zeste homolog 2，EZH2）调控胶质细胞源性神经营养因子受体（glial cell linederived neurotrophic factor receptor，GFR）α1启动子DNA甲基化的分子机制。方法:SH-SY5Y细胞中EZH2及DNA甲基转移酶（DNA methyltransferase，DNMT）3B过表达及干扰后，采用实时定量聚合酶链反应（real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR）及蛋白质印迹法检测EZH2、DNMT3B、GFRα1表达水平，染色质免疫共沉淀qPCR检测转染各组DNMT3B启动子区EZH2结合水平及组蛋白H3第27位赖氨酸（H3K27）甲基化水平，亚硫酸氢盐测序检测转染各组GFRα1启动子DNA甲基化的程度。采用独立样本 t检验比较两组间差异；多组数据的组内比较使用one-way ANOVA分析，并使用LSD- t检验进行两两比较。 结果:qRT-PCR及蛋白质印迹法显示，EZH2过表达组EZH2的mRNA及蛋白相对表达量高于过表达对照组，EZH2干扰组EZH2的mRNA及蛋白相对表达量低于干扰对照组（均 P<0.05）；DNMT3B过表达组DNMT3B的mRNA及蛋白的相对表达量高于过表达对照组；DNMT3B干扰组DNMT3B的mRNA及蛋白的相对表达量低于干扰对照组（均 P<0.05）。染色质免疫共沉淀qPCR显示，EZH2过表达组DNMT3B启动子区EZH2结合水平为2.25±0.15，高于过表达对照组的1.00±0.05（ t=-12.82， P=0.006）；EZH2过表达组DNMT3B启动子区H3K27甲基化水平为2.47±0.44，高于过表达对照组的1.01±0.09（ t=-6.17， P=0.025）。EZH2干扰组DNMT3B启动子区EZH2结合水平为0.57±0.08，低于干扰对照组的1.00±0.06（ t=5.80， P=0.029）；EZH2干扰组DNMT3B启动子区H3K27甲基化水平为0.31±0.09，低于干扰对照组的1.08±0.17（ t=12.24， P=0.007）。qRT-PCR及蛋白质印迹法显示，EZH2过表达组DNMT3B的mRNA相对表达水平为0.58±0.09，低于过表达对照组的1.01±0.13（ t=17.75， P=0.003）；EZH2过表达组DNMT3B的蛋白质相对表达水平为0.32±0.06，低于过表达对照组的0.54±0.05（ t=23.64， P=0.002）。EZH2干扰组DNMT3B的mRNA相对表达水平为1.79±0.05，高于干扰对照组的1.01±0.1（ t=-12.00， P=0.007）；EZH2干扰组DNMT3B的蛋白质相对表达水平为0.85±0.08，高于干扰对照组的0.51±0.07（ t=-18.78， P=0.003）。亚硫酸氢盐测序结果显示，EZH2过表达组GFRα1启动子区DNA甲基化水平为0.28±0.03，低于过表达对照组的0.52±0.01（ t=8.93， P=0.012）；EZH2干扰组GFRα1启动子区DNA甲基化水平为0.79±0.02，高于干扰对照组的0.52±0.01（ t=-44.45， P=0.001）。qRT-PCR结果显示，EZH2过表达组GFRα1 mRNA相对表达量为1.87±0.05，高于过表达对照组的1.01±0.14（ t=-10.04， P=0.001）；EZH2过表达+DNMT3B过表达组GFRα1 mRNA相对表达量为0.73±0.04，低于过表达对照组1.01±0.14（ t=3.27， P=0.031）；EZH2过表达+DNMT3B过表达组GFRα1 mRNA相对表达水平为0.73±0.04，低于EZH2过表达组的1.87±0.05（ t=30.00， P=0.001）。蛋白质印迹法显示，EZH2过表达组GFRα1蛋白相对表达量为0.89±0.07，高于过表达对照组的0.59±0.03（ t=-7.09， P=0.002）；EZH2过表达+DNMT3B过表达组GFRα1蛋白相对表达量为0.48±0.03，低于过表达对照组的0.59±0.03（ t=3.51， P=0.025）；EZH2过表达+DNMT3B过表达组GFRα1蛋白相对表达水平为0.48±0.03，低于EZH2过表达组的0.89±0.07（ t=8.84， P=0.001）。qRT-PCR结果显示，EZH2干扰组GFRα1 mRNA相对表达量为0.57±0.13，低于干扰对照组的1.03±0.13（ t=4.29， P=0.013）；EZH2干扰+DNMT3B干扰组GFRα1 mRNA相对表达量为1.59±0.06，高于干扰对照组1.03±0.13（ t=-6.67， P=0.003）；EZH2干扰+DNMT3B干扰组GFRα1 mRNA相对表达水平为1.59±0.06，高于EZH2干扰组的0.57±0.13（ t=-12.60， P=0.001）。蛋白质印迹法结果显示，EZH2干扰组GFRα1蛋白相对表达量为0.28±0.05，低于干扰对照组的0.58±0.04（ t=7.59， P=0.002）；EZH2干扰+DNMT3B干扰组GFRα1蛋白相对表达量为0.79±0.07，高于干扰对照组0.58±0.04（ t=-4.19， P=0.014）；EZH2干扰+DNMT3B干扰组GFRα1蛋白相对表达水平为0.79±0.07，高于EZH2干扰组的0.28±0.05（ t=-9.78， P=0.001）。 结论:SH-SY5Y细胞中EZH2通过抑制DNMT3B的表达，下调GFRα1启动子区DNA甲基化，进而上调GFRα1的表达。

目的:研究孕期尼古丁暴露对子代小鼠牙釉质形成的影响及其可能的表观遗传学机制。方法:通过随机数字表法将10只C57BL/6孕鼠分为对照组（皮下注射生理盐水）及孕期尼古丁暴露（prenatal nicotine exposure，PNE）组（皮下注射尼古丁溶液），每组5只，孕鼠生产后分别收集出生后0 d（postnatal day 0，P0；P14、P25含义依此类推）、P14、P25新生小鼠，根据母代分组分为子代对照组及子代PNE组，并记录P0、P25子代小鼠体质量。采用显微CT（micro-CT）扫描分析、扫描电镜和维氏显微硬度检测对子代小鼠牙槽骨和下颌切牙进行硬组织相关参数分析。提取P25子代小鼠下颌骨组织及第3代牙上皮干细胞（dental epithelial stem cell，DESC）中的总RNA，通过实时荧光定量PCR检测成骨向及成釉向分化相关基因、增殖相关标志物和干细胞标志物的表达水平。采用石蜡切片免疫组织化学染色观察增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，Pcna）、釉原蛋白（amelogenin，Amelx）、甲基转移酶ZESTE增强子同源物2（enhancer of zeste homolog 2，Ezh2）、组蛋白H3第27位赖氨酸的三甲基化修饰（histone H3 trimethylated at lysine 27，H3K27me3）阳性染色分布及水平。使用细胞增殖（cell counting kit-8，CCK-8）试剂盒对外源性添加不同浓度（0.01、0.1、1 mmol/L）尼古丁以及Ezh2抑制剂GSK126的DESC进行细胞活力检测。结果:PNE组孕鼠较对照组更容易出现不良妊娠结局，P0时子代PNE组小鼠体质量［（0.99±0.02）g］显著低于子代对照组［（1.20±0.04）g］（ P<0.001）；P25时，子代PNE组小鼠体质量［（9.65±1.32）g］显著低于子代对照组［（15.26±1.70）g］（ P<0.001），死产率［（46.40±9.30）%］显著高于对照组（0）（ P<0.001）。P14和P25时，子代PNE组小鼠下颌切牙釉质矿化沉积点与第一磨牙近中面的距离数值［分别为（-1 349±45）、（-506±380）μm］均较子代对照组［分别为（-1 192±147）、（504±198）μm］显著减小（ P<0.05， P<0.001），提示矿化沉积点延迟。子代PNE组小鼠切牙釉柱及釉柱间质较对照组排列松散无序，显微硬度［（245.7±18.4）MPa］较子代对照组［（371.9±28.7）MPa］显著降低（ P<0.001）。HE染色显示子代PNE组小鼠前成釉细胞（pre-ameloblast，Pre-Am）区域排列较对照组紊乱，矿化沉积点推迟，暂时性扩增细胞（transit-amplifying cell，TA）及Pre-Am区域延长。免疫组织化学染色显示，子代PNE组小鼠唇侧颈环（labial cervical loop，LaCL）整体Pcna表达较子代对照组显著增多（ P<0.05），H3K27me3较对照组显著富集（ P<0.01），对应区域可见Ezh2表达显著增加（ P<0.01），同时成釉细胞胞质中Amelx阳性信号减弱。体外实验添加1 mmol/L 尼古丁能显著上调子代PNE组DESC的Pcna基因表达水平（ P<0.01），同时显著下调DESC标志物B淋巴瘤Mo-MLV插入蛋白1、富亮氨酸重复序列免疫球蛋白样结构域1和成釉细胞向分化的相关基因Amelx等的基因表达水平（ P<0.05， P<0.05， P<0.01）。此外，与0 h时相比，干预24 h后1 mmol/L尼古丁可显著增强DESC的增殖活性（ P<0.001），添加10 μmol/L Ezh2抑制剂GSK126可挽救1 mmol/L尼古丁对DESC带来的增殖促进作用。 结论:孕期尼古丁暴露可能导致成釉向谱系定向分化过程延迟，致子代小鼠DESC增殖及分化异常，并且影响H3K27me3表观遗传修饰水平，造成子代牙釉质发育障碍，提示孕期尼古丁暴露是牙发育的危险环境因素。