目的:检测胃癌组织中赖氨酸组蛋白甲基转移酶2D(KMT2D)的表达水平并探究其临床意义。方法:对100例胃癌患者癌组织及其相应的癌旁组织中的KMT2D进行免疫组织化学染色，分析其蛋白表达水平与患者临床病理特征和预后的关系。结果:100例胃癌组织中的KMT2D高表达率[78%(78/100)]显著高于癌旁组织的高表达率[12%(12/100)]。胃癌组织中的KMT2D高表达与浸润深度( χ2＝36.515， P<0.01)、淋巴结转移状态( χ2＝52.329， P<0.01)、TNM分期( χ2＝78.952， P<0.01)、肿瘤瘤体大小( χ2＝10.905， P<0.010)、淋巴管侵犯状态( χ2＝22.355， P<0.01)、静脉侵犯状态( χ2＝4.100， P<0.05)显著相关，而与患者的性别、年龄、肿瘤远处转移、肿瘤分化程度、肿瘤部位无明显相关( P>0.05)。此外Kaplan-Meier生存分析显示KMT2D高表达组的胃癌患者中位生存时间为15个月，低于KMT2D低及正常表达组的患者，两者差异有统计学意义(Log-rank＝11.146， P<0.05)。Cox单因素回归分析表明年龄[风险比( HR)＝0.544， P<0.05]、肿瘤浸润深度( HR＝2.054， P<0.05)、淋巴结转移( HR＝1.964， P<0.05)、远处转移( HR＝2.663， P<0.05)、TNM分期( HR＝2.344， P<0.05)、KMT2D表达水平( HR＝2.420， P<0.05)都是胃癌患者的不良预后影响因素，但是Cox多因素回归分析发现以上因素都不是胃癌的独立预后因素( P>0.05)。 结论:KMT2D在胃癌组织中高表达，作为癌基因促进胃癌的进展并与胃癌的预后显著相关。

目的:评价大鼠神经病理性痛时背根神经节(DRG)常染色质组蛋白赖氨酸N-甲基转移酶2(G9a)与钠依赖激活的钾离子通道(Slack通道)的关系。方法:清洁级健康雄性SD大鼠48只，1月龄，体重100~120 g，采用随机数字表法分为4组( n＝12)：假手术组(S组)、载体+假手术组(VS组)、载体+神经病理性痛组(VN组)和G9a敲减+神经病理性痛组(GN组)。S组2月龄时行假手术；VS组1月龄时于L 4和L 5DRG分别显微注射AAV5 1 μl，饲养至2月龄时行假手术；VN组和GN组1月龄时于L 4和L 5 DRG分别显微注射AAV5或AAV5-G9a CRISPR/Cas9 KO质粒1 μl，2月龄时采用脊神经节结扎法制备神经病理性痛模型。每组取6只大鼠，于DRG显微注射前(T 0)、造模前(T 1)、造模后3、5和7 d(T 2~4)时，测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。于最后1次行为学测试结束后，处死大鼠，取L 4，5节段DRG，采用Western blot法测定G9a、组蛋白H3的赖氨酸残基9二甲基化(H3K9me2)和Slack的表达。于造模后7 d时，每组取6只大鼠，培养原代DRG神经元，全细胞膜片钳技术在电压钳模式下记录DRG神经元中的Slack电流和脊髓背角浅层兴奋性突触后膜电流(mEPSCs)的振幅和频率。 结果:与S组比较，VN组T 2~4时TWL缩短，MWT降低，脊髓背角G9a和H3K9me2表达上调，Slack表达下调，DRG神经元Slack通道电流振幅和频率降低，mEPSC频率升高( P<0.05)，VS组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)；与VN组比较，GN组T 2~4时TWL延长，MWT升高，脊髓背角G9a和H3K9me2表达下调，Slack表达上调，DRG神经元Slack电流的振幅和频率升高，mEPSC频率降低( P<0.05)。 结论:大鼠神经病理性痛的机制与上调DRG G9a的表达，从而抑制Slack通道表达和开放有关。

目的:研究孕期尼古丁暴露对子代小鼠牙釉质形成的影响及其可能的表观遗传学机制。方法:通过随机数字表法将10只C57BL/6孕鼠分为对照组（皮下注射生理盐水）及孕期尼古丁暴露（prenatal nicotine exposure，PNE）组（皮下注射尼古丁溶液），每组5只，孕鼠生产后分别收集出生后0 d（postnatal day 0，P0；P14、P25含义依此类推）、P14、P25新生小鼠，根据母代分组分为子代对照组及子代PNE组，并记录P0、P25子代小鼠体质量。采用显微CT（micro-CT）扫描分析、扫描电镜和维氏显微硬度检测对子代小鼠牙槽骨和下颌切牙进行硬组织相关参数分析。提取P25子代小鼠下颌骨组织及第3代牙上皮干细胞（dental epithelial stem cell，DESC）中的总RNA，通过实时荧光定量PCR检测成骨向及成釉向分化相关基因、增殖相关标志物和干细胞标志物的表达水平。采用石蜡切片免疫组织化学染色观察增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，Pcna）、釉原蛋白（amelogenin，Amelx）、甲基转移酶ZESTE增强子同源物2（enhancer of zeste homolog 2，Ezh2）、组蛋白H3第27位赖氨酸的三甲基化修饰（histone H3 trimethylated at lysine 27，H3K27me3）阳性染色分布及水平。使用细胞增殖（cell counting kit-8，CCK-8）试剂盒对外源性添加不同浓度（0.01、0.1、1 mmol/L）尼古丁以及Ezh2抑制剂GSK126的DESC进行细胞活力检测。结果:PNE组孕鼠较对照组更容易出现不良妊娠结局，P0时子代PNE组小鼠体质量［（0.99±0.02）g］显著低于子代对照组［（1.20±0.04）g］（ P<0.001）；P25时，子代PNE组小鼠体质量［（9.65±1.32）g］显著低于子代对照组［（15.26±1.70）g］（ P<0.001），死产率［（46.40±9.30）%］显著高于对照组（0）（ P<0.001）。P14和P25时，子代PNE组小鼠下颌切牙釉质矿化沉积点与第一磨牙近中面的距离数值［分别为（-1 349±45）、（-506±380）μm］均较子代对照组［分别为（-1 192±147）、（504±198）μm］显著减小（ P<0.05， P<0.001），提示矿化沉积点延迟。子代PNE组小鼠切牙釉柱及釉柱间质较对照组排列松散无序，显微硬度［（245.7±18.4）MPa］较子代对照组［（371.9±28.7）MPa］显著降低（ P<0.001）。HE染色显示子代PNE组小鼠前成釉细胞（pre-ameloblast，Pre-Am）区域排列较对照组紊乱，矿化沉积点推迟，暂时性扩增细胞（transit-amplifying cell，TA）及Pre-Am区域延长。免疫组织化学染色显示，子代PNE组小鼠唇侧颈环（labial cervical loop，LaCL）整体Pcna表达较子代对照组显著增多（ P<0.05），H3K27me3较对照组显著富集（ P<0.01），对应区域可见Ezh2表达显著增加（ P<0.01），同时成釉细胞胞质中Amelx阳性信号减弱。体外实验添加1 mmol/L 尼古丁能显著上调子代PNE组DESC的Pcna基因表达水平（ P<0.01），同时显著下调DESC标志物B淋巴瘤Mo-MLV插入蛋白1、富亮氨酸重复序列免疫球蛋白样结构域1和成釉细胞向分化的相关基因Amelx等的基因表达水平（ P<0.05， P<0.05， P<0.01）。此外，与0 h时相比，干预24 h后1 mmol/L尼古丁可显著增强DESC的增殖活性（ P<0.001），添加10 μmol/L Ezh2抑制剂GSK126可挽救1 mmol/L尼古丁对DESC带来的增殖促进作用。 结论:孕期尼古丁暴露可能导致成釉向谱系定向分化过程延迟，致子代小鼠DESC增殖及分化异常，并且影响H3K27me3表观遗传修饰水平，造成子代牙釉质发育障碍，提示孕期尼古丁暴露是牙发育的危险环境因素。

目的 探讨前列腺癌组织中微小RNA-647(miR-647)、微小RNA-122(miR-122)、组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D(KMT2D)与其临床病理特征及预后的相关性.方法 选取100 例前列腺癌患者作为研究对象,均于术中采集肿瘤组织及癌旁正常组织标本送检,统计肿瘤组织及癌旁正常组织内miR-647、miR-122、KMT2D表达水平差异;分析miR-647、miR-122、KMT2D表达与肿瘤分期、肿瘤直径、淋巴结转移、微血管侵犯等的关系;并随访 2 年,比较复发转移与未复发转移患者miR-647、miR-122、KMT2D表达间差异.结果 肿瘤组织内miR-647 表达水平为(0.62±0.13),低于癌旁正常组织的(1.02±0.19),miR-122、KMT2D表达水平为(6.45±1.24)、(1.45±0.23),低于对照组的(1.23±0.22)、(0.89±0.12)(P<0.05);肿瘤分期Ⅲ期、肿瘤直径≥3 cm、有淋巴结转移及有微血管侵犯患者miR-647 表达水平低于肿瘤分期Ⅰ～Ⅱ期、肿瘤直径<3 cm、无淋巴结转移及无微血管侵犯患者,miR-122、KMT2D表达水平高于肿瘤分期Ⅰ～Ⅱ期、肿瘤直径<3 cm、无淋巴结转移及无微血管侵犯患者(P<0.05);100 例患者术后随访 2 年,共出现 24 例复发转移,复发转移率为24.00%(24/100);复发转移患者miR-647 表达水平为(0.51±0.11),低于未复发转移患者的(0.73±0.15),miR-122、KMT2D表达水平为(8.42±1.39)、(1.89±0.32),高于未复发转移患者的(4.68±1.02)、(1.12±0.15)(P<0.05).结论 前列腺癌组织内miR-647、miR-122、KMT2D存在不同程度表达,均与肿瘤分期、肿瘤直径及淋巴结转移等关系密切,且可明显影响患者预后,还需临床高度重视.

目的:探讨肌层浸润性膀胱癌(MIBC)组织赖氨酸甲基转移酶2D(KMT2D)、微小染色体维持蛋白6(MCM6)与临床病理特征和预后的关系.方法:选择2017年5月至2019年10月长治医学院附属和平医院行手术治疗的MIBC患者96例,应用逆转录-实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测癌组织及癌旁正常组织KMT2D信使核糖核酸(mRNA)、MCM6 mRNA表达,分析KMT2D mRNA、MCM6 mRNA表达与MIBC患者临床病理特征的关系,应用Pearson相关分析法分析MIBC患者癌组织KMT2D mRNA及MCM6 mRNA表达的相关性.随访3年,比较死亡MIBC患者与存活MIBC患者癌组织KMT2D mRNA、MCM6 mRNA表达,并应用Kaplan-Meier生存曲线分析不同KMT2D mRNA、MCM6 mRNA表达分组MIBC患者预后情况.结果:MIBC癌组织中KMT2D mRNA表达水平显著低于癌旁组织,MCM6 mRNA表达水平显著高于癌旁组织(P＜0.05).MIBC患者癌组织中KMT2DmRNA、MCM6mRNA表达与侵犯输尿管、淋巴结转移、TNM分期显著相关(P＜0.05),且两者表达呈负相关(P＜0.05).至随访截止,MIBC患者死亡45例,死亡组患者癌组织中KMT2D mRNA表达水平显著低于存活组、MCM6 mRNA表达水平显著高于存活组(P＜0.05).生存曲线结果显示KMT2D mRNA高表达组3年生存率显著高于KMT2D mRNA低表达组;MCM6 mRNA低表达组3年生存率显著高于MCM6 mRNA高表达组(P＜0.05).结论:MIBC癌组织中KMT2D低表达、MCM6高表达,与MIBC侵犯输尿管、淋巴结转移、TNM分期及患者预后不良有关.

目的 检测组蛋白甲基转移酶MLL1在单侧输尿管梗阻(UUO)所导致的肾间质纤维化过程中的表达,探讨其在肾小管上皮细胞间质转分化(EMT)中的作用.方法 将42只雄性SD大鼠随机分为正常组,假手术组,UUO术后1d、1周、2周、3周和4周组,利用实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测大鼠肾组织MLL1、Ⅲ型胶原纤维(Col3α1)的表达及EMT的情况.利用siRNA-MLL1质粒抑制HK-2细胞中MLL1基因的表达后,以TGF-β1进行诱导处理,Western印迹法检测细胞中MLL1、EMT相关指标、Col3α1及组蛋白H3第4位赖氨酸三甲基化(H3K4me3)的蛋白水平;同时利用染色质免疫共沉淀(CHIP)对EMT相关基因启动子区域H3K4me3水平进行检测.结果 (1)与正常和假手术组相比,UUO术后大鼠的肾功能随着梗阻时间的增加不断丧失(P＜0.05).(2)与正常和假手术组相比,UUO术后1周和2周时大鼠肾组织肾间质纤维化最为显著(均P＜ 0.05),MLL1及EMT相关指标的表达量也最高(均P＜ 0.05).(3)与对照组相比,3 ng/ml的TGF-β1作用细胞后MLL1的表达量最高(P＜0.05),而在此浓度下HK-2细胞发生EMT也最为显著(P＜0.05).(4)将MLL1敲除后,3 ng/mlTGF-β1所诱导的HK-2细胞EMT被显著抑制(P＜0.05),α-SMA和Vimentin启动子区域的H3K4me3水平也显著下降(P＜0.05).结论 MLL1能够促进TGF-β1所诱导的HK-2细胞EMT的发生,其机制可能是使α-SMA和Vimentin启动子区的组蛋白H3第4位赖氨酸发生三甲基化(H3K4me3).

目的:探讨吡柔比星膀胱灌注化疗对膀胱肿瘤术后患者部分血清肿瘤标记分子及增殖和侵袭分子mRNA含量的影响.方法:206例行经尿道膀胱肿瘤电切术治疗膀胱肿瘤患者均分为观察组与对照组,对照组术后采用常规治疗,观察组术后采用吡柔比星膀胱灌注规范化疗1年,对两组患者定期随访1年;治疗前和治疗结束时,分别测定2组患者血清分泌型蛋白(DKK)、血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及MMP-9水平,检测血清组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶(EZH2)、细胞周期素(CyclinD1)、外泌体(exosomes)及可溶性血管黏附分子(sVCAM) mRNA含量,比较2组患者随访期间肿瘤复发率及并发症.结果:与治疗前相比,治疗结束时2组患者血清DKK、VEGF、FGF、MMP-2及MMP-9水平均显著下降,观察组下降更显著(P＜0.01);2组患者血清EZH2、Cyclin D1、exosomes及sVCAM mRNA含量也均显著下降(P＜0.01),且观察组下降也更显著(P＜0.05或P＜0.01);随访期间观察组肿瘤复发率显著低于对照组(P＜0.01),但2组发症总发生率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:膀胱肿瘤术后行吡柔比星膀胱灌注化疗可降低患者血清肿瘤标记分子水平及增殖和侵袭分子mRNA含量,且术后复发率低.

目的:观察消癌解毒方联合顺铂抑制4T1荷瘤小鼠肿瘤生长的作用及机制.方法:BALB/c小鼠皮下接种4T1乳腺癌细胞形成荷瘤模型,分别单独给予顺铂(2 mg·kg-1)、消癌解毒方(1×104 mg·kg-1)及两者联合用药进行治疗,给药期间称量并记录小鼠体质量和瘤体积,15d后脱颈处死,剥离并称量瘤块质量,计算抑瘤率,苏木素-伊红(HE)染色观察心、肝、脾、肾和瘤块的病理情况,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)观察肿瘤细胞凋亡情况并统计凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤组织中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),组蛋白去甲基化酶1(LSD1),组蛋白H3(Histone H3),组蛋白H3第4位赖氨酸二甲基化(Histone H3K4me2),组蛋白H3第9位赖氨酸二甲基化(Histone H3K9me2)的表达水平.结果:与模型组相比,顺铂给药组小鼠体质量均有下降,其中消癌解毒方+顺铂组较单用顺铂组体质量增加(P＜0.01);消癌解毒方+顺铂较单用顺铂更能缩小移植瘤体积,提高抑瘤率(P＜0.01);更明显提高了肿瘤细胞凋亡率(P＜0.05,P＜0.01);更明显下调肿瘤组织Bcl-2表达水平,上调Bax表达水平(P＜0.05,P＜0.01);各给药组均能下调LSD1蛋白的表达,增加组蛋白H3 K4,H3K9的二甲基化,消癌解毒方+顺铂组作用最为明显(P＜0.05,P＜0.01).结论:消癌解毒方+顺铂用药对于4T1荷瘤小鼠抑瘤作用明显,其机制可能与下调组蛋白去甲基化酶水平有关.

组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶2D(KMT2D),属于哺乳动物H3K4甲基转移酶家族成员,在成人组织中广泛表达,对于早期胚胎发育有重要作用.C-末端的SET区域负责组蛋白H3K4甲基化,维持KMT2D蛋白的稳定性.KMT2D与WRAD、NCOA6、PTIP、PA1和H3K27去甲基化酶UTX组成复合物,在其中起到支架蛋白的作用,维持UTX的稳定性.KMT2D主要催化哺乳动物H3K4单甲基化,与转录因子共同作用于增强子区域,从而调控基因表达.KMT2D在调节细胞发育、分化、新陈代谢和肿瘤抑制方面具有重要作用,其突变导致多种疾病发生.进一步研究KMT2D有助于揭示其异常所引发多种疾病的病因,并且对开发临床药物提供有力的帮助.

目的? 探讨组蛋白赖氨酸甲基转移酶(EZH)1对精神分裂症及其导致的行为失调的影响.方法? 选择70只C57BL/6小鼠进行以下实验:(1)采用实时定量PCR及Western Blot检测小鼠各脑区及脏器中EZH1和EZH2的表达.(2)小鼠给予腹腔注射3 mg/kg的盐酸喹吡罗建立精神分裂症动物模型,对照组给予等体积的生理盐水.给药后10 min检测小鼠前额叶皮质(PFC)中组蛋白修饰相关蛋白的表达.(3)分别给予小鼠腹腔注射5 mg/kg的氯氮平或0.5 mg/kg的氟哌啶醇,对照组注射等体积的生理盐水.21 d后检测PFC中EZH1和EZH2的表达.(4)采用立体定位注射AAV-m-EZH1-shRNA至小鼠内侧PFC中以敲减EZH1,对照组注射干扰shRNA,2周后检测小鼠的行为学指标.结果?(1)EZH1在小鼠的前额叶皮质、海马、大脑皮层、皮层下、小脑和脑干等脑区中高表达,但在心脏、肾脏、肝脏、肺、胃和肠等脏器中呈低表达.EZH2在除小脑外的各脑区及脏器中低表达.(2)在急性注射喹吡罗后,PFC中EZH1的表达显著增加(均P＜0.05),而EZH2、KDM6A、KDM6B及UTY的表达无显著变化(均P＞0.05).(3)与腹腔注射生理盐水的小鼠对比,注射氯氮平和氟哌啶醇的小鼠PFC中EZH1表达显著降低(均P＜0.05),而EZH2的表达无显著变化(P＞0.05).(4)在社交能力测试中,EZH1敲减可增加小鼠在陌生鼠笼的驻留时间及对陌生鼠的嗅探时间(均P＜0.05).在强迫游泳试验中,EZH1敲减降低小鼠的不动时间,增加游泳时间(均P＜0.05).结论? EZH1在小鼠各个脑区中高表达,在喹吡罗诱导的精神分裂症小鼠PFC中高表达,且对抗精神病药物极敏感.EZH1敲减可增加小鼠的社交能力,降低绝望行为.