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靶向性CPI-444载药纳米微粒的制备及其对T细胞活性和抗肿瘤效应的影响
编辑人员丨5天前
目的:制备并表征包载CPI-444并偶联CD8抗体的纳米微粒(CNP/αCD8),探讨其对CD8+T细胞活化、增殖和抗肿瘤作用的影响.方法:采用复乳溶剂蒸发法和EDC/NHS法制备包载腺苷受体A2A(A2AR)特异性拮抗剂CPI-444(C)或香豆素6(C6)荧光素的纳米微粒并分别在其表面偶联CD8抗体,制得CNP/αCD8和C6NP/αCD8.扫描电镜和NanoPlus粒度测定仪表征纳米微粒形态和粒径,液相色谱与串联质谱联用(LC-MS/MS)法和离心法测定纳米微粒的载药量和药物释放情况,荧光显微镜和流式细胞仪检测CD8+T细胞内化C6NP/αCD8的情况,流式细胞仪、ELISA和LDH法检测CNP/αCD8对CD8+T细胞增殖、活化、细胞毒活性和杀瘤能力的影响.结果:CNP/αCD8纳米微粒为圆形、粒径约150 nm,能有效包载CPI-444和偶联CD8抗体,药物包封率和CD8抗体偶联效率分别约为60%和53.4%;CNP/αCD8纳米微粒具有良好稳定性,能被CD8+T细胞内化,抑制A2AR分子表达.生物学功能实验显示,CNP/αCD8增强CD8+T细胞的增殖能力、促进T细胞活化、分泌细胞因子及产生颗粒酶B和穿孔素,并增强CD8+T细胞杀伤肿瘤细胞的能力.结论:CNP/αCD8纳米微粒能显著增强CD8+T细胞免疫效应功能,其增强CD8+T细胞功能可能是通过抑制A2AR分子的表达起作用.
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编辑人员丨5天前
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黄芪含药血清对NK细胞活性、NKG2A、NKG2D及细胞因子IFN-γ表达的影响
编辑人员丨5天前
目的 探讨黄芪含药血清对自然杀伤(NK)细胞的杀伤活性和NKG2D、NKG2A、细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)表达水平的影响.方法 20只SPF级SD大鼠,随机分成黄芪低、中、高剂量组(3.1、6.2、12.4 g/kg体重)和正常对照组,灌胃后制备含药血清.用NK细胞专用培养基培养NK-92MI细胞,用1640培养基培养YAC-1细胞.将NK-92MI细胞与20%不同剂量黄芪含药血清及正常对照血清孵育48 h,即分别为正常对照组、黄芪低剂量组、黄芪中剂量组以及黄芪高剂量组.通过乳酸脱氢酶(LDH)释放测定方法检测NK细胞对靶细胞YAC-1的杀伤活性,ELISA法检测IFN-γ的水平,Western blot检测NKG2D以及NKG2A蛋白表达水平.结果 与正常对照组和黄芪低剂量组相比,黄芪中、高剂量组的NK细胞活性显著升高(P<0.01).IFN-γ的表达在黄芪低、中、高剂量组中均升高,但不随浓度升高而增强.与正常对照组相比,黄芪低、中剂量组NKG2D蛋白表达水平明显升高(P<0.01),而NKG2A蛋白表达水平在各组间无明显差异(P>0.05).结论 黄芪含药血清可增强NK细胞杀伤活性、上调IFN-γ表达水平、上调NK细胞活化型受体的表达,通过调控NK细胞实现对机体的保护作用.
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编辑人员丨5天前
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脓毒症中自然杀伤细胞的作用及其变化的研究进展
编辑人员丨5天前
脓毒症是感染所致的器官功能障碍,是临床常见的危重症之一,其发病率和病死率逐年升高,已严重威胁人类健康。固有免疫是机体抵御病原体的第一道防线,自然杀伤(NK)细胞是参与脓毒症固有免疫调节的重要细胞,可以通过分泌细胞因子、诱导凋亡以及介导细胞毒作用等方式在脓毒症疾病进展中发挥重要作用。研究发现,在脓毒症起病早期NK细胞的改变与疾病预后有关。因此,进一步研究NK细胞在脓毒症中的作用可以为脓毒症的临床诊治提供新的思路,有助于脓毒症的早期病情识别和预后的改善。本文就脓毒症期间NK细胞的作用及变化做一综述。
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编辑人员丨5天前
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淋巴瘤相关噬血细胞综合征诊治中国专家共识(2022年版)
编辑人员丨5天前
噬血细胞综合征是一种由于各种诱因导致的细胞毒性T细胞和自然杀伤细胞过度活化,并刺激单核巨噬系统,分泌大量炎性细胞因子的危重疾病。淋巴瘤是导致继发噬血细胞综合征的重要病因之一。近年,随着对疾病认识的深入、检测手段的提高及新药的问世,淋巴瘤相关噬血细胞综合征的诊断和治疗体系逐渐完善。为更好地指导我国医师的临床实践,中国抗癌协会淋巴瘤专业委员会、中华医学会血液学分会淋巴细胞疾病学组以及中国噬血细胞综合征专家联盟,基于2018版《淋巴瘤相关噬血细胞综合征诊治中国专家共识》,结合新进展,对疾病的分类及治疗进行了修订,增加了中枢神经系统受累的解读,旨在规范和提高我国淋巴瘤相关噬血细胞综合征的诊治水平。
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编辑人员丨5天前
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靶向FAP的第4代CAR-T细胞的构建及其性能研究
编辑人员丨5天前
目的:构建靶向肿瘤间质癌相关成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)的第2代和第4代CAR-T细胞,并比较两者在体内外的性能差异。方法:ELISA检测CAR-T细胞的细胞因子分泌情况;手工计数检测其增殖存活能力;Transwell迁移试验检测其趋化性能;流式细胞术检测其亚型分布;荧光素酶生物发光法检测其杀伤效率;小鼠肺癌转移模型评估其安全性和有效性。结果:第2代h4BBz CAR-T细胞的CAR表达率为(74.280±4.384)%,第4代h4BBz-7.19 CAR-T为(67.220±4.013)%;h4BBz-7.19 CAR-T细胞能够分泌IL-7和CCL19,使其在体外的增殖能力和趋化能力较h4BBz CAR-T细胞强,存活能力相当。在亚型分布中,两种CAR表达率在CD4 + T细胞群和CD8 + T细胞群中均无显著性差异,但h4BBz-7.19 CAR-T细胞中的Naive和T记忆干细胞(T memory stem cell, TSCM)亚群在CD4 + T细胞群或CD8 + T细胞群中所占比例均较h4BBz CAR-T细胞高。在杀伤试验中,h4BBz-7.19 CAR-T细胞在低效靶比时显示出较h4BBz CAR-T细胞更强的杀伤效率(效靶比为1∶1、2∶1、5∶1、10∶1、20∶1时的 P值分别为: P1∶1=0.004、 P2∶1=0.000 6、 P5∶1<0.000 1、 P10∶1=0.022、 P20∶1=0.116),且其T细胞表面免疫抑制分子PD-1的表达水平较h4BBz CAR-T细胞低。在NOG小鼠肺癌转移模型中,h4BBz-7.19 CAR-T组小鼠的肿瘤生长较对照组缓慢,其生存时间更长( P=0.003 8),且对小鼠体重和脏器无影响。 结论:本研究构建的靶向FAP的第4代CAR-T细胞通过分泌IL-7和CCL19增强增殖存活、渗透趋化和特异性杀伤活性,并可在一定程度上通过改善肿瘤免疫抑制性微环境以延缓肿瘤生长、延长生存时间,从而为其在临床上的应用提供参考。
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编辑人员丨5天前
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宿主NK-DC细胞相互作用与病毒感染
编辑人员丨5天前
自然杀伤细胞(NK)和树突状细胞(DCs)之间的相互作用在调节固有免疫应答的早期阶段以及随后的适应性免疫应答中的作用机制近年来才被阐明。NK细胞与DCs之间的相互作用导致NK细胞活化、DCs成熟或凋亡,并涉及细胞因子与细胞间的直接接触。NK细胞通过诱导偏向Th1免疫应答的DCs成熟,为DCs提供抗原和杀伤未经适当成熟的iDC,来控制和增强DCs介导的抗病毒免疫应答;DCs通过可溶性和细胞接触性激活剂刺激NK细胞,从而增强其细胞增殖、存活和细胞毒性来调节固有免疫应答的强弱。最近的研究表明,NK细胞和DCs之间的相互作用在几种抗病毒反应中也起着至关重要的作用。因此,本文综述了NK-DC相互作用及其与抗病毒反应的关系,以此为病毒感染疾病中NK-DC相互作用的分子机制研究提供理论基础。
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编辑人员丨5天前
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CD1d分子与支气管哮喘
编辑人员丨5天前
CD1d分子是CD1家族的一员,广泛表达于树突状细胞和B细胞等抗原提呈细胞表面。CD1d可以将脂类或糖脂类抗原提呈给自然杀伤T细胞,使其活化并产生一系列细胞因子,直接或间接参与机体的免疫应答。研究发现,CD1d分子提呈抗原以及T细胞受体识别CD1d-抗原复合物等方面具有独特的方式。本文对CD1d分子的主要特征及其在支气管哮喘的发病和治疗中的作用作一综述。
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编辑人员丨5天前
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嵌合抗原受体T细胞靶向LMP1抗原治疗EB病毒阳性淋巴瘤的功能研究
编辑人员丨5天前
目的:制备一种靶向LMP1抗原的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞),研究其对EB病毒(EBV)阳性淋巴瘤的免疫治疗作用。方法:应用分子克隆技术构建二代LMP1 CAR表达质粒,通过慢病毒包装体系包装病毒后感染人T细胞,获得LMP1 CAR-T细胞,体外实验验证LMP1 CAR-T细胞对感染EBV后的LMP1阳性淋巴瘤细胞的特异性细胞毒性作用。结果:①LMP1蛋白表达于EBV阳性的淋巴瘤细胞表面;②成功构建了二代LMP1 CAR慢病毒载体,感染人T细胞,获取LMP1 CAR-T细胞,感染效率大于80%;③LMP1 CAR-T细胞可特异性杀伤LMP1阳性淋巴瘤细胞,当效靶比按4∶1共培养48 h后,LMP1 CAR-T细胞对Raji细胞的杀伤作用增强,对Ramos细胞无明显杀伤作用;④与LMP1阳性淋巴瘤细胞按1∶1共培养5 h后,LMP1 CAR-T细胞处理组CD107a + T细胞比例显著高于Vector-T细胞组[(13.25±2.94)%对(1.55±0.05)%, t=3.972, P=0.017],脱颗粒效果增强;⑤与LMP1阳性淋巴瘤细胞共培养后,LMP1 CAR-T细胞组CD69 +、CD25 + T细胞比例显高于Vector-T细胞组[(7.40±0.41)%对(3.48±0.47)%, t=6.268, P=0.003;(73.00±4.73)%对(57.67±2.60)%, t=2.842, P=0.047],活化效应增强。⑥与LMP1阳性淋巴瘤细胞共培养后,LMP1 CAR-T细胞组细胞因子分泌增强,高于Vector-T细胞组[IFN-γ:(703±73)ng/L对(422±87)ng/L, t=2.478, P=0.068;TNF-α:(215±35)ng/L对(125±2)ng/L, t=2.536, P=0.064]。 结论:该研究证实EBV阳性淋巴瘤细胞表面可特异表达LMP1蛋白,成功构建了LMP1 CAR慢病毒载体并感染人T细胞,成功获得LMP1 CAR-T细胞。体外实验证实:与LMP1阳性淋巴瘤细胞共培养后,LMP1 CAR-T细胞脱颗粒效果增强,活化效应增强,高效分泌细胞因子,可特异杀伤LMP1阳性淋巴瘤细胞,具有潜在的临床应用前景。
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编辑人员丨5天前
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程序性死亡受体1及其配体在急性髓系白血病患者中的表达及其体外对程序性死亡受体1阳性自然杀伤细胞抗肿瘤作用的影响
编辑人员丨5天前
目的:探讨程序性死亡受体1(PD-1)/程序性死亡受体配体1(PD-L1)通路在急性髓系白血病(AML)患者中的表达及其与临床特征、预后的关系,并体外验证其对PD-1阳性自然杀伤(NK)细胞抗AML细胞的影响。方法:前瞻性收集2019年7月至2020年12月于郑州大学附属肿瘤医院确诊的65例AML患者骨髓标本及32例AML患者外周血,同时留取24名健康人外周血作为健康对照。流式细胞术检测骨髓肿瘤细胞PD-L1、外周血NK细胞PD-1表达水平,分析骨髓肿瘤细胞PD-L1与NK细胞PD-1表达与患者临床病理特征及疗效、预后的关系。流式细胞术检测AML细胞株THP-1(靶细胞)的PD-L1、NK细胞株NKL(效应细胞)的PD-1表达水平。经及未经PD-L1抑制剂梣酮(25 μmol/L)处理的THP-1细胞分别为实验组和对照组,分别与NKL细胞按不同效靶比共培养。流式细胞术检测THP-1细胞凋亡情况和NKL细胞NKG2D的表达水平,CCK-8法检测细胞增殖情况并计算增殖抑制率,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测共培养体系上清中干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果:AML患者骨髓肿瘤细胞PD-L1阳性表达者比例高于健康对照组[38.5%(25/65)比8.3%(2/24), P=0.029],AML患者外周血NK细胞PD-1阳性表达者比例高于健康对照组[40.6%(13/32)比12.5%(3/24), P=0.035]。骨髓肿瘤细胞PD-L1阳性和阴性患者间及外周血NK细胞PD-1阳性和阴性患者间性别、年龄、就诊时血象、原始细胞比例、危险度分层、染色体核型、有无基因突变(除外NPM1基因)、融合基因及法、美、英协作组(FAB)分型的构成差异均无统计学意义(均 P>0.05)。复发难治患者中骨髓肿瘤细胞PD-L1阳性表达者比例高于初治患者[58.8%(10/17)比31.2%(15/48), P=0.045],复发难治患者与初治患者间外周血NK细胞PD-1阳性表达者比例的差异无统计学意义[38.5%(5/13)比42.1%(8/19), P=0.837]。PD-L1阳性与阴性患者完全缓解(CR)率差异无统计学意义[69.6%(16/23)比74.3%(26/35), P>0.05];PD-1阳性与阴性患者CR率差异无统计学意义[66.7%(8/12)比70.6%(12/17), P>0.05]。PD-L1阳性与阴性患者CR后复发率差异无统计学意义[12.5%(2/16)比19.2%(5/26), P>0.05];PD-1阳性与阴性患者CR后复发率差异无统计学意义[25.0%(2/8)比16.7%(2/12), P>0.05]。流式细胞术检测示,NKL细胞PD-1阳性率为(67±6)%,THP-1细胞PD-L1阳性率为(85±5)%。与NKL细胞共培养后,与对照组相比,实验组THP-1细胞凋亡率和增殖抑制率均明显增高,NKL细胞表面NKG2D表达升高,共培养上清中IFN-γ、TNF-α水平升高。 结论:AML患者骨髓肿瘤细胞PD-L1表达水平较高,外周血NK细胞PD-1表达水平亦较高,复发难治AML患者骨髓肿瘤细胞PD-L1表达水平高于初治患者。体外抑制THP-1细胞PD-L1表达可增强NKL细胞肿瘤杀伤活性,其机制可能是抑制THP-1细胞PD-L1表达后上调了NKL细胞活化型受体NKG2D的表达以及促进了IFN-γ和TNF-α的分泌。
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编辑人员丨5天前
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活化Toll样受体7增强脓毒症患者CD8 +T细胞杀伤活性
编辑人员丨5天前
目的:观察脓毒症患者外周血Toll样受体(Toll-like receptor, TLR)表达谱变化,分析活化TLR7对脓毒症患者CD8+T细胞杀伤活性的影响。方法:采用横断面研究方法,纳入2020年6月至2021年6月在新乡医学院第一附属医院就诊的脓毒症患者和对照者,于就诊本院后1 h内采血,分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs),逆转录实时定量PCR法检测PBMCs中TLR1~10 mRNA,流式细胞术检测CD8 +T细胞中TLR7和TLR9,分析TLR对预后的诊断价值。分选CD8 +T细胞,使用TLR7激动剂CL097刺激CD8 +T细胞,CD8 +T细胞与人脐静脉内皮细胞直接接触或间接接触共培养,检测免疫检查点受体表达、靶细胞死亡比例、毒性分子和细胞因子分泌。组间比较采用 t检验或Mann-Whitney检验,刺激前后比较采用配对 t检验或配对Wilcoxon秩和检验。 结果:纳入58例脓毒症患者和24例对照者。PBMCs中TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR8和TLR10 mRNA在脓毒症患者和对照者之间的差异无统计学意义(均 P>0.05)。脓毒症患者PBMCs中TLR9 mRNA低于对照者[0.94(0.81, 1.15) vs. 1.14(0.82, 2.12), P=0.046],但CD8 +T细胞中TLR9平均荧光强度与对照者差异无统计学意义[(23.83±7.44) vs. (24.95±7.97), P=0.548]。脓毒症患者PBMCs中TLR7 mRNA[1.01 (0.88, 1.15) vs. 1.61(1.04, 2.63), P<0.001]和CD8 +T细胞中TLR7平均荧光强度[(130.0±45.07) vs. (250.9±79.09), P<0.001)均低于对照者。对脓毒症患者存活组和死亡组TLR7水平进行ROC曲线分析,TLR7 mRNA和TLR7 MFI曲线下面积分别为0.70和0.73(均 P<0.05),预测价值较好。脓毒症患者CD8 +T细胞中免疫检查点受体mRNA表达升高、直接接触杀伤功能及分泌毒性分子、细胞因子水平降低(均 P<0.05)。在直接接触共培养体系中,CL097刺激可增加脓毒症患者CD8 +T细胞诱导靶细胞死亡比例[(11.92±2.81)% vs. (9.28±2.03)%, P=0.008],促进毒性分子和细胞因子分泌。在间接接触共培养体系中,CD8 +T细胞诱导靶细胞死亡比例和毒性分子分泌在经CL097刺激和无CL097刺激之间的差异无统计学意义。 结论:TLR7水平降低对脓毒症患者预后不佳有提示意义。脓毒症患者存在CD8+T细胞功能衰竭,TLR7激动剂可增强脓毒症患者CD8+T细胞杀伤功能。
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编辑人员丨5天前
