目的:分析老年结直肠癌患者的MLH1和PMS2错配修复基因表达情况，并分析其对临床病理特征的影响。方法:本研究为单中心回顾性队列研究。连续性纳入2014年1月至2018年12月北京医院诊治的老年结直肠癌患者，按照MLH1和PMS2基因表达缺失情况分MLH1组(65例)和PMS2组(80例)，比较两组与MLH1和PMS2基因正常表达患者的临床病理特征。结果:MHL1蛋白表达缺失患者中，男性、女性相似，少部分(16.9%)患者有肿瘤家族史，病理提示病变多为中分化(63.1%)和低中分化(24.6%)，T分期多为T4(44.6%)和T3(27.7%)，N分期多为N0(61.5%)，M分期多为M0(89.2%)，TNM分期多为Ⅲ期，病变多位于升结肠(61.5%)。与MHL1正常表达的患者比较，MHL1蛋白表达缺失组的年龄较小[(74.6±8.8)岁比(77.3±6.2)岁， t＝-2.072， P＝0.040]，但肿瘤最长径较大[(5.7±2.3)cm比(4.4±1.3)cm， t＝3.753， P<0.001]，两组的病变分化程度、T分期和肿瘤部位均有明显差别(均 P<0.05)。 结论:老年MLH1和PMS2基因表达缺失的结直肠癌患者的发病年龄早、肿瘤进展快，分化程度低，且与病理分期有关。

目的:研究抑癌基因孕激素和脂肪Q3 受体(progestin and adipoQ receptor 3,PAQR3)在结直肠癌和肠道黏膜中的表达水平及临床病理意义.方法:利用TIMER数据库比较PAQR3在泛癌种肿瘤组织与对照组织中的差别,进而收集天津医科大学总医院 2002 年 1 月至2005 年 12 月 65 例结直肠癌组织标本和 41 例肠道黏膜组织,采用免疫组织化学染色检测PAQR3 蛋白在结直肠癌组织和肠道黏膜组织中的表达,并将 65 例结直肠癌分为高表达组和低表达组,探讨其表达与临床病理指标之间的关系及其对患者预后的影响.采用TIMER数据库分析PAQR3 表达与免疫细胞浸润的关系,cBioPortal数据库研究PAQR3 表达改变对信号转导通路的影响.结果:TIMER数据库分析显示结直肠癌中PAQR3 癌组织表达低于正常对照组织,免疫组化染色显示PAQR3 蛋白在 65 例结直肠癌组织中阳性表达率显著低于正常黏膜组织(χ2=21.165,P<0.001).32 例结直肠癌高表达PAQR3,33 例结直肠癌呈PAQR3 低表达,PAQR3 高表达与肿瘤淋巴结转移、临床分期和远处转移呈负相关(χ2=4.481,P= 0.034,χ2=8.855,P=0.031,χ2=3.972,P=0.046).Kaplan-Meier生存分析显示结直肠癌PAQR3高表达的患者总生存和无病生存均比低表达患者好(χ2=10.305,P=0.001,χ2=4.135,P=0.042).TIMER数据库分析显示PAQR3 低表达与免疫细胞浸润下降相关,富集分析表明PAQR3可能通过影响机体蛋白质合成及修饰影响结直肠癌代谢过程.结论:结直肠癌组织中PAQR3 蛋白表达显著降低,其低表达与结直肠癌转移和免疫浸润降低密切相关.

目的 研究甲胎蛋白阴性肝细胞癌(AFP-NHCC)患者血清外泌体环状RNA(circ RNA)100338,长链非编码RNA结直肠肿瘤差别表达(colorectal neoplasia differentially expressed,CRNDE)基因表达及临床预后价值.方法 选取自 2018 年 1 月～2019 年 7 月期间联勤保障部队第九四二医院诊治的AFP-NHCC患者 98 例为研究对象,以同期健康体检的 70 例健康人作为对照组.实时荧光定量PCR检测血清外泌体circ RNA 100338 和CRNDE水平.比较不同临床病理特征AFP-NHCC患者血清外泌体circ RNA 100338 和CRNDE水平.受试者工作特征曲线(ROC)分析外泌体circ RNA 100338,CRNDE评估BCLC分期B～C期、低分化程度及肝内淋巴结转移的临界值.Kaplan-Meier生存分析(Log-Rank检验)分析血清外泌体circ RNA 100338,CRNDE对AFP-NHCC患者生存预后的影响.单因素及多因素COX回归分析影响AFP-NHCC患者预后的因素.结果 AFP-NHCC组患者血清外泌体circ RNA100338(2.78±0.67),CRNDE的相对表达量(3.05±0.70)高于对照组(0.92±0.31,1.06±0.29),差异具有统计学意义(t=21.619,22.435,均P＜0.05).AFP-NHCC组患者血清外泌体circ RNA100338 与CRNDE表达呈显著正相关性(r=0.657,P＜0.05).BCLC分期B～C期(3.43±0.69,3.71±0.75)、低分化程度(3.64±0.73,4.27±0.74)及并发肝内淋巴结转移(3.96±0.79,4.39±0.76)AFP-NHCC患者血清外泌体circ RNA100338,CRNDE表达分别高于BCLC分期0～A期(1.87±0.60,2.13±0.61)、高中分化程度(2.02±0.64,1.97±0.61)及无肝内淋巴结转移(2.03±0.60,2.20±0.65)患者,差异均有统计学意义(t=11.648,11.707,13.699;11.100,16.857,15.211,均P＜0.05).外泌体circ RNA100338 评估BCLC分期B～C期、低分化程度及肝内淋巴结转移的临界值分别为 3.51,3.69 和 4.06,外泌体CRNDE评估BCLC分期B～C期、低分化程度及肝内淋巴结转移的临界值分别为3.79,4.31和4.45.circ RNA100338高表达组和低表达组患者三年总体生存率分别为 52.08%(25/48)和 86.00%(43/50).circ RNA 100338 高表达组患者累积生存率低于低表达组患者,差异有统计学意义(Log-Rank χ2=12.490,P＜0.05).CRNDE高表达组和低表达组患者三年总体生存率分别为51.06%(24/47)和 86.27%(44/51).CRNDE高表达组患者累积生存率低于低表达组患者,差异有统计学意义(Log-Rank χ2=15.050,P＜0.05).肿瘤BCLC分期B～C(OR=1.405,P＜0.05)、低分化程度(OR=1.921,P＜0.05)、有肝内淋巴结转移(OR=1.508,P＜0.05),circ RNA100338 高表达(OR=1.906,P＜0.05)及CRNDE高表达(OR=1.733,P＜0.05)是影响AFP-NHCC患者预后的独立危险因素.结论 AFP-NHCC患者血清外泌体circ RNA 100338,CRNDE表达升高,两者表达与肿瘤BCLC分期、病理分化程度及肝内淋巴结转移有关,是影响AFP-NHCC患者生存预后的独立危险因素.

@@

目的 分析结直肠癌(CRC)组织和正常癌旁组织之间的差异表达蛋白质,探讨其与CRC疾病特征的关系. 方法 应用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳法(2D-PAGE)分析12例配对CRC组织和正常癌旁组织之间的差异表达蛋白,并运用激光解吸电离飞行时间质谱分析(MALDI-TOF-MS)和MS/MS法对差异表达的蛋白质标记点进行鉴定和分析.找出CRC组织中表达上调的蛋白脯氨酰-4-羟化酶(P4HB)β亚单位作为兴趣蛋白后,通过Western-blot验证,并运用免疫组织化学技术检测P4HB在CRC中的表达情况,分析其与CRC的临床病理特征及预后的关系. 结果 2D-PAGE分析和MALDI-TOF-MS鉴定结果显示,CRC组织中 P4HB表达丰度比正常黏膜组织上调2.01倍(P<0.01).Western-blot结果显示,CRC组织中P4HB的表达水平明显高于其配对的正常黏膜组织[(1.36 ± 0.54)vs(0.74 ± 0.35)](P<0.05).P4HB蛋白在CRC组织、腺瘤组织和正常黏膜组织中的表达阳性率依次减低,分别为43.85%(82/187),19.35%(12/62)及12.67%(19/150),三者间的差别均有统计学意义(P<0.001).P4HB蛋白表达与CRC的TNM分期(P=0.003)、肿瘤分化程度(P=0.020)、肿瘤大小(P<0.001)有关,而与患者的性别(P=0.880)、年龄(P=0.464)及肿瘤部位(P=0.293)无关.Log-rank检验结果显示,在CRC患者中,P4HB表达阳性组与阴性组的生存时间差别无统计学意义(P=0.110). 结论 CRC组织中P4HB表达上调,这与CRC更晚的分期、低分化及较大的肿瘤相关.

目的 探讨错配修复基因1(human mutl homolog 1,hMLH1)与错配修复基因2(human mutl homolog 2,hMLH2)以及错配修复基因6(human mutl homolog 6,hMLH6)三种错配修复基因蛋白表达水平对直肠癌手术治疗后短期随访肿瘤淋巴转移预后的临床意义.方法 选取本院2015年1月至2016年12月确诊结肠癌患者60例,均接受手术治疗;采用免疫组织化学SP法检测患者肿瘤组织hMLH1、hMLH2、hMLH6蛋白的表达水平,并分析与术后随访半年肿瘤淋巴转移预后的关联情况.结果 研究中男性hMLH1与hMLH2以及hMLH6蛋白表达缺失率分别为45.00%,47.50%和52.50%;女性hMLH1与hMLH2以及hMLH6蛋白表达缺失率分别为50.00%,45.00%和65.00%.三种蛋白表达缺失率在不同分化程度肿瘤中的差别无统计学意义.hMLH1蛋白表达缺失在转移者中的比例(27.27%)小于无淋巴转移的患者(70.37%), P<0.05;hMLH2蛋白表达缺失率转移组患者低于无转移组,P<0.05;而hMLH6蛋白表达缺失率在转移与非转移患者中差别未见统计学意义.结论 hMLH1与hMLH2蛋白表达缺失患者淋巴转移比例低,预后相对良好.

目的 建立人结直肠癌耐奥沙利铂(L-OHP)细胞株,检测其多药耐药性并初步探讨可能的耐药机制.方法 采用药物浓度梯度递增诱导法建立人结直肠癌耐L-OHP细胞株HCT-8/L-OHP.MTT法鉴定药敏性,并检测耐药细胞株的多药耐药性、生长曲线和细胞群体倍增时间.用光镜、电镜、流式细胞术等方法 观察亲本细胞和耐药细胞的形态、周期及细胞凋亡.通过实时荧光定量PCR和Western-blot检测HOXB8基因和ABCC1(MRP or MRPl),ERCC1,P-gp,GST-π的 mRNA及蛋白表达水平.结果 建成了肠癌耐药细胞模型HCT-8/L-OHP,半抑制浓度(IC50)为62.33 μmol/L,耐药指数(RI)为10.78.耐药株细胞形态发生变化,代谢率降低,生物活力减弱.HCT-8/L-OHP细胞株具有耐药性,细胞增殖减慢.HCT-8/L-OHP细胞在G2/M期的比例增多,在S期及 G./G,期的比例减少,相较于亲本细胞株,差别具有统计学意义(P<0. 01);HCT-8/L-OHP细胞凋亡率低于 HCT-8细胞.ABCC1(MRP or MRP1), ABCB1 (P-gp)等耐药相关基因在耐药细胞株中高表达;HOXB8基因在 HCT-8/L-OHP细胞中表达,较亲本细胞株表达明显升高,差别具有统计学意义(P<0.01). 结论 成功构建了肠癌耐药细胞株HCT-8/L-OHP,耐药的分子机制可能是ABCC1(MRP or MRP1)及ABCB1 (P-gp)等基因的表达升高.HOXB8基因过表达可能与人结直肠癌对L-OHP耐药的机制相关.

目的 分析结直肠癌(CRC)患者18 F-脱氧葡萄糖(FDG)PET图像参数与其鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)基因状态的关系,比较PET传统参数与纹理参数预测CRC KRAS基因状态的价值.方法 收集2012年12月至2017年1月间58例(男40例、女18例,平均年龄56.31岁)CRC初诊患者治疗前18 F-FDG PET数据及其KRAS基因资料.分析PET各种参数与CRC KRAS基因表达的相关关系,用受试者工作特征(ROC)曲线分析进一步比较PET传统参数与PET纹理参数预测CRC KRAS基因状态的价值.用Spearman秩相关和Mann-Whitney u检验分析数据.结果 58例CRC患者中,19例(32.8％)为KRAS基因突变型,39例(67.2％)为野生型.在用长庚影像纹理分析(CGITA)工具提取而得的46个PET图像参数中,经Spearman秩相关筛选出14个PET图像相关参数(均︳rs︳>0.8),包括12个纹理参数及2个传统参数[最大标准摄取值(SUVmax)与病灶糖酵解总量(TLG)],KRAS基因突变型组与野生型组的6项参数(包括4项纹理参数和2项传统参数)的差别均有统计学意义(u值:-4.481～-2.046,均P<0.05).纹理参数中标准摄取值(SUV)峰度(SUVkur)预测价值最好;传统参数中SUVmax预测价值最好.当SUVkur取界值为4.27时,约登指数为0.35达最大,其预测KRAS基因突变的曲线下面积(AUC)为0.667(95％CI:0.517～0.816,P=0.041),预测灵敏度为15/19,特异性为56.4％(22/39);当SUVmax取界值16.6时,约登指数为0.64达最大,其预测KRAS基因突变的AUC为0.865(95％CI:0.770～0.960,P<0.001),预测灵敏度为17/19,特异性为74.4％(29/39).SUVmax预测KRAS突变效能优于SUVkur(z=3.258,P=0.001).结论 PET纹理参数和传统参数均可用于预测CRC患者KRAS基因表达状态,其中SUVmax的预测价值最高.

目的 探讨结直肠癌肿瘤原发灶与肝脏转移灶中PD-L1表达是否一致.方法 收集结直肠癌肝转移病例,选取同时行原发灶与肝脏转移灶切除或活检的标本32例.肿瘤原发灶位于直肠7例,乙状结肠12例,降结肠2例,横结肠2例,升结肠9例.肿瘤病理类型:31例管状腺癌,1例黏液腺癌.采用免疫组化法检测结直肠癌原发灶和肝脏转移灶组织中PD-L1的表达.评估整个切片中的肿瘤区域,计数原发灶肿瘤细胞PD-L1阳性细胞百分比,计数原发灶肿瘤浸润免疫细胞PD-L1阳性细胞百分比.采用同样的方法 评估转移灶中PD-L1的表达.结果 结直肠癌原发灶肿瘤细胞PD-L1阳性率为9.4％(3/32),原发灶间质免疫细胞的阳性率为21.9％(7/32);肝脏转移灶瘤细胞PD-L1阳性率为15.6％(5/32),转移灶间质免疫细胞PD-L1阳性率34.4％(11/32).PD-L1在原发灶肿瘤细胞和肿瘤浸润免疫细胞中的表达率均低于其对应转移灶(P=0.020、0.037).结论 结直肠癌原发灶和肝脏转移灶的免疫状态存在差别,转移灶可能存在更强的免疫抑制,为临床开展肿瘤免疫治疗提供一定的参考.

目的:检测结直肠腺癌中高半胱氨酸蛋白61(CYR61)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达,分析两者在不同临床病理特征中的表达差别及相关性.方法:选择77例结直肠腺癌患者及术后的新鲜组织作为观察组,选择正常结肠黏膜新鲜组织12例作为对照组,应用流式细胞术检测两组中CYR61和VEGF的表达.结果:两组中CYR61和VEGF的表达量差别有统计学意义,观察组中CYR61和VEGF的表达与肿瘤的最大径、肿瘤的浸润深度密切相关,CYR61与肿瘤的分化程度和增殖指数密切相关,VEGF的表达与肿瘤的淋巴结转移密切相关.相关性分析显示观察组中CYR61和VEGF的表达具有正相关性.结论:结直肠腺癌组织中CYR61和VEGF高表达对促进肿瘤性病变的形成和进展有重要作用.CYR61和VEGF之间具有正向协同作用.