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基于代谢组学技术研究绞股蓝总皂苷抑制tau蛋白过表达诱导的细胞损伤机制
编辑人员丨2024/7/6
目的 研究绞股蓝总皂苷(GPs)对tau蛋白过表达细胞代谢的影响,探讨GPs治疗阿尔茨海默病(AD)的机制.方法 通过采用CRISPR/Cas9技术构建微管相关蛋白tau(MAPT)过表达N2a细胞系(MAPT细胞);用CCK-8法检测GPs对N2a、MAPT细胞存活率的影响;体外培养N2a(对照组)、MAPT细胞(模型组),向MAPT细胞中加入GPs(50、100μg·mL-1)进行干预,共同孵育24h后收集细胞,采用Western blotting技术检测总tau蛋白量水平;利用代谢组学技术检测GPs对MAPT细胞内源性代谢产物的影响,明确差异代谢产物及通路.结果 50、100、200 μg·mL-1GPs对N2a细胞活力无明显影响;5、50、100、200 μg·mL-1 GPs对MAPT细胞活力无显著性影响;与对照组相比,MAPT细胞内tau蛋白水平明显增加(P<0.001);与模型组比较,50 μg·mL-1 GPs可明显减少MAPT细胞内总tau蛋白含量(P<0.05);代谢组学结果显示,按照差异代谢产物数量占比从高到底依次为脂质和类脂分子,有机酸及其衍生物,核苷、核苷酸和类似物等.通过京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析,差异代谢产物主要富集在核苷酸代谢、氨基酸合成、甘油磷脂代谢等通路.与模型组比较,给药后参与甘油磷脂代谢通路的胞磷胆碱和磷脂酰胆碱水平显著增加(P<0.001),甘油磷酰胆碱、甘油-3-磷乙醇胺水平显著降低(P<0.001).结论 GPs可以减少细胞内tau蛋白的异常过表达,通过增加胞磷胆碱和磷脂酰胆碱水平、减少甘油磷酰胆碱和甘油-3-磷乙醇胺水平调控甘油磷脂代谢通路.
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编辑人员丨2024/7/6
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绞股蓝总苷通过miR-210/ISCU途径调节线粒体能量代谢对ApoE-/-AS小鼠的影响及机制
编辑人员丨2024/4/27
目的 探讨绞股蓝总苷通过影响miR-210/铁硫簇组装蛋白(ISCU)途径,调控线粒体能量代谢,改善动脉粥样硬化模型小鼠主动脉脂质沉积的作用机制.方法 30 只健康ApoE-/-小鼠随机分为模型组、绞股蓝总苷组和辛伐他汀组,每组 10 只.10 只C57BL/6J小鼠作为正常组.模型组、绞股蓝总苷组和辛伐他汀组采用高脂饲料喂养 12 w.绞股蓝总苷组和辛伐他汀组分别采用绞股蓝总苷[2.973 g/(kg·d)]和辛伐他汀[2.275 g/(kg·d)]灌胃 4 w,模型组、正常组灌胃给予等量生理盐水.造模结束后,全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察动脉粥样硬化斑块形成;采用紫外吸收法检测主动脉线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ;实时荧光定量-聚合酶链反应(PCR)检测主动脉miR-210、ISCU及线粒体DNA(mtDNA)mRNA表达;采用Wes全自动Western印迹定量分析系统检测线粒体能量代谢相关蛋白ISCU、mtDNA表达.结果 与正常组比较,模型组miR-210 表达、TC、TG、LDL-C水平显著升高,呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ 水平、HDL-C、ISCU mRNA及蛋白表达、mtD-NA mRNA水平显著下降(P<0.05,P<0.01),主动脉管腔见较大粥样斑块.与模型组相比,绞股蓝总苷组及辛伐他汀组TG、TC、LDL-C 水平显著降低(P<0.01,P<0.05),绞股蓝总苷组和辛伐他汀组主动脉管腔中粥样斑块面积明显减小,辛伐他汀组线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ水平显著升高(P<0.01,P<0.05),绞股蓝总苷组线粒体呼吸链复合体酶Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ含量显著增加,miR-210 表达水平显著降低(P<0.01,P<0.05),绞股蓝总苷组ISCU mRNA和蛋白表达及mt DNA mRNA水平显著升高(P<0.05),辛伐他汀组ISCU mRNA表达水平显著升高(P<0.05).结论 绞股蓝总苷可能通过miR-210/ISCU途径,调控线粒体能力代谢,缓解动脉粥样硬化斑块形成,进而防治动脉粥样硬化.
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编辑人员丨2024/4/27
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绞股蓝皂苷糖基水解研究进展
编辑人员丨2024/3/30
绞股蓝为葫芦科绞股蓝属植物绞股蓝Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino的全草,具有清热、补虚、解毒的功效.研究发现绞股蓝中主要活性成分为三萜皂苷,具有抗肿瘤、保肝、保肾、免疫调节、抗氧化等药理活性.皂苷类化合物中糖单元对于药理活性具有重要影响,针对绞股蓝皂苷进行糖基水解并总结其构效关系是挖掘活性绞股蓝皂苷及衍生物的重要手段,包括理化水解(酸水解、碱水解、热处理)以及生物转化(微生物转化、糖苷酶)两类方法.该文对绞股蓝皂苷糖基水解相关研究进行归纳总结,并展现糖基部分变化所带来的药理活性变化,旨在为后续绞股蓝皂苷糖基结构修饰及构效关系研究提供参考.
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编辑人员丨2024/3/30
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绞股蓝总苷对人脑微血管内皮氧糖剥夺的影响
编辑人员丨2023/12/30
目的 探索绞股蓝总苷对氧糖剥夺诱导的人脑微血管内皮细胞(HBMEC)氧化应激反应的影响.方法 体外培养HBMEC,使用不同绞股蓝总苷浓度 10 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L干预HBMEC,通过CCK8 法筛选绞股蓝总苷最佳剂量.建立氧糖剥夺(OGD)模型,将细胞随机分为Control组、OGD组、OGD+GP(绞股蓝总苷)组.Control组用含 10%FBS的DMEM培养基常规培养24 h,OGD组、OGD+GP组进行OGD培养24 h,使用荧光显微镜检测活性氧(ROS)水平,Western Blot检测超氧化物歧化酶(SOD)、醌NAD(P)H脱氢酶 1(NQO1)蛋白水平,qRT-PCR检测SOD、NQO1 的mRNA水平.结果 与 Control组比较,5 组绞股蓝总苷浓度(10 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L)干预后 HBMEC 活力无明显差异(P>0.05);与 OGD 组比较,绞股蓝总苷浓度为10 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L的干预后HBMEC活力差异有统计学意义(P<0.05),而绞股蓝总苷浓度为 100 mg/L干预后细胞活力较高,因此绞股蓝总苷最佳剂量为 100 mg/L.OGD 条件下,绞股蓝总苷降低HBMEC的ROS表达;与OGD组比较,使用绞股蓝总苷干预后,HBMEC的SOD和NQO1 蛋白及水平mRNA均升高(P均<0.05).结论 绞股蓝总苷对OGD后的HBMEC有抗氧化应激作用,其机制可能与降低ROS,上调SOD、NQO1水平有关.
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编辑人员丨2023/12/30
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绞股蓝总苷片联合依折麦布治疗高脂血症的临床研究
编辑人员丨2023/12/9
目的 探讨绞股蓝总苷片联合依折麦布治疗高脂血症的临床疗效.方法 选取2020 年12 月—2022年 12 月武汉市中医医院收治的136例高血脂症患者,按照数字随机法将患者分对照组(68例)和治疗组(68例).对照组患者口服依折麦布片,10 mg/次,1 次/d.在对照组的基础上,治疗组口服绞股蓝总苷片,3 片/次,3 次/d.两组连续服药 15 d.观察两组患者临床疗效,比较治疗前后两组患者症状好转时间,血脂总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,血管内皮功能内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)、血管假性血友病因子(vWF)和白细胞介素 6(IL-6)水平.结果 治疗后,治疗组临床有效率为 98.53%,明显高于对照组(85.29%,P<0.05).治疗后,治疗组症状好转时间均明显早于对照组(P<0.05).治疗后,两组患者血脂TG、TC和LDL-C水平明显降低,而HDL-C水平明显升高(P<0.05),且治疗组血脂水平明显好于对照组(P<0.05).治疗后,两组血管内皮功能ET-1、vWF、IL-6水平明显降低,而NO水平明显升高(P<0.05),且治疗组ET-1、vWF、IL-6 和NO水平均明显好于对照组(P<0.05).结论 绞股蓝总苷片联合依折麦布治疗高脂血症可促进临床症状有效改善,降低高血脂症状态,对内皮功能调节增强.
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编辑人员丨2023/12/9
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不同加工方式绞股蓝的抗炎活性比较研究
编辑人员丨2023/11/25
该研究旨在从体内、外探究晾晒干燥和杀青烘干 2 种不同干燥方式绞股蓝总皂苷及其差异部位对急性肺损伤(acute lung injury,ALI)小鼠炎症的改善作用.通过野生型C57BL/6J雄性小鼠气道喷雾脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)构建模型,造模 24 h后尾静脉注射给药.采用肺功能、肺组织湿重干重比(W/D)、肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)总蛋白浓度、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)含量等指标及肺组织病理变化评价不同绞股蓝皂苷对ALI小鼠的改善作用.研究发现晾干绞股蓝总皂苷(YGGPs)和1~2 个糖基取代的绞股蓝稀有皂苷(GPs1-2)可以改善ALI小鼠肺功能,BALF中IL-1β和TNF-α的水平显著降低,肺部炎症得到改善,且GPs1-2 抑制RAW264.7 细胞中NO释放率作用更为显著.该研究表明,绞股蓝采用不同干燥方式会对其抗炎活性造成影响,未杀青晾干绞股蓝产生的稀有皂苷具有更佳的抗炎活性.
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编辑人员丨2023/11/25
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基于mTOR/ULK1/ATG13通路探讨绞股蓝总苷对抑郁症大鼠海马神经元过度自噬的保护作用
编辑人员丨2023/11/18
目的:探讨绞股蓝总苷(Gyp)对抑郁症大鼠海马神经元自噬及雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/自噬激活激酶1(ULK1)/自噬相关蛋白13(ATG13)通路的影响.方法:取SD大鼠,随机分为正常对照组、模型组、Gyp低(25 mg/kg)剂量组、高(100 mg/kg)剂量组、自噬激活剂-雷帕霉素(Rap)组(1 mg/kg)、Gyp +Rap组(100 mg/kg +1 mg/kg),每组10 只.用慢性轻度不可预见性应激法制备大鼠抑郁模型,各组连续给药4 周,1 次/天.用旷场、糖水偏好及强迫游泳试验评估大鼠抑郁样行为,取海马组织,透射电镜观察海马神经元结构变化及自噬小体、自噬溶酶体形成情况;TUNEL法检测神经元凋亡状况;免疫组织化学染色法检测ULK1 磷酸化水平(p-ULK1)及p-ATG13 在海马组织中阳性表达水平;Western blotting检测总mTOR、p-mTOR、核糖体S6 蛋白(S6)及p-S6、ULK1 特定位点Ser757 蛋白(ULK1 Ser757)及p-ULKl Ser757、自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白轻链3(LC3)蛋白、凋亡相关蛋白-半胱天冬酶-3(Caspase-3)及多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白表达水平.结果:与正常对照组相比,模型组大鼠旷场实验中央探索时间、糖水摄取百分比均降低(P<0.01),强迫游泳不动时间延长(P<0.01),海马神经元核膜破坏严重、自噬小体形成较多,凋亡率、凋亡相关蛋白及Beclin1、LC3 蛋白表达均升高(P<0.01),mTOR/ULK1/ATG13 通路蛋白磷酸化水平均降低(P<0.01).与模型组相比,Gyp剂量越高,大鼠抑郁样行为缓解(P<0.01)、海马神经元凋亡及自噬水平减弱,mTOR/ULK1/ATG13 通路蛋白磷酸化水平升高(P<0.01);Rap组大鼠海马组织mTOR/ULK1/ATG13 通路蛋白磷酸化水平进一步降低(P<0.01),海马神经元凋亡及自噬水平进一步升高(P<0.01),大鼠抑郁样行为进一步加重(P<0.01).Gyp +Rap组大鼠上述指标变化与Gyp组相反(P<0.01).结论:Gyp可能通过激活mTOR磷酸化活性水平,促进ULK1 及ATG13 磷酸化来抑制自噬,防止神经元自噬性死亡,发挥抗抑郁作用.
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编辑人员丨2023/11/18
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绞股蓝总皂苷对非酒精性脂肪肝大鼠Treg/Th17免疫功能的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 研究绞股蓝总皂苷对非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肝脏保护作用及免疫调节作用机制.方法 48只SD大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,多烯磷脂酰胆碱胶囊组(阳性对照组,150 mg·kg-1)及绞股蓝总皂苷高、中、低(240,120,60 mg·kg-1)剂量组,除正常对照组外,其余各组连续饲喂高脂饲料10周,制备NAFLD模型;模型成功后,各组连续给药8周.实验期间,分别于给药0,4,8周眼眶取血检测血清AST、ALT;末次给药后,采用流式细胞技术检测外周血Th17和Treg细胞含量;酶联免疫法检测血清IL-17、IL-10及TNF-α含量.HE染色检查肝组织病理变化和免疫组化法检查肝组织IL-17和Foxp3表达.结果 给药4周,绞股蓝总皂苷高剂量显著降低大鼠血清ALT、AST(P<0.01);给药8周,绞股蓝总皂苷各剂量均能显著降低血清ALT、AST(P<0.05,0.01).绞股蓝总皂苷高、中剂量能改善肝组织病变,降低TNF-α水平;高剂量显著降低IL-17、升高IL-10水平(P<0.05,0.01),降低淋巴细胞IL-17含量,升高CD4+CD25+Treg含量(P<0.05),明显减少炎症因子IL-17的表达和增加Foxp3表达.结论 绞股蓝总皂苷能改善NAFLD大鼠肝脏病变,其作用机制可能与调节肝脏Treg/Th 17细胞平衡,减少促炎症因子和增加抗炎因子产生相关.
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编辑人员丨2023/8/6
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绞股蓝总皂苷调节自噬小体对动脉粥样硬化的防治作用
编辑人员丨2023/8/6
为探究绞股蓝总皂苷调节自噬小体对动脉粥样硬化的防治作用.本研究分体内、体外实验.体内实验:30只健康Apo E-/-小鼠随机分为3组,模型组、绞股蓝总皂苷组和辛伐他汀组,每组10只.10只C57BL/6J小鼠为正常组.模型制备及给药干预完成后,全自动生化分析仪检测各组小鼠血脂水平,Western blot技术检测各组小鼠主动脉Atg3、Atg4c、Atg5、Atg12蛋白表达情况.体外实验:培养EA.hy926细胞,随机分为正常组、模型组、绞股蓝总皂苷组、人参皂苷GRb3组和绞股蓝皂苷XILX组.Western blot技术检测各组细胞自噬小体形成信号通路相关蛋白Atg3、Atg4c、Atg5、Atg12的表达情况.结果发现,绞股蓝总皂苷能够降低ApoE-/-小鼠血清中的TG、TC、LDL-C水平(P<0.01),提高血清HDL-C水平(P<0.01).且绞股蓝总皂苷能够提高ApoE-/-小鼠主动脉Atg3、Atg4c、Atg5、Atg12蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01).绞股蓝总皂苷、人参皂苷GRb3和绞股蓝皂苷XILX能够提高ox-LDL诱导的EA.hy926细胞自噬小体相关蛋白Atg3、Atg4c、Atg5、Atg12的表达水平(P<0.01).且绞股蓝总皂苷效果最好.以上结果说明,股蓝总皂苷可能通过促进自噬小体形成,降低ApoE-/-小鼠血清血脂水平,保护EA.hy926细胞抗内皮损伤,进而发挥其防治AS的生物学作用,且在该过程中人参皂苷GRb3和绞股蓝皂苷XILX可能是绞股蓝总皂苷中发挥关键作用的有效成分.
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编辑人员丨2023/8/6
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绞股蓝总苷对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用研究
编辑人员丨2023/8/6
目的:探讨绞股蓝总苷对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用的研究.方法:采用ox-LDL对血管内皮细胞造成损伤模型,并将HUVEC分为空白对照组、模型组、绞股蓝高、中、低剂量组,空白对照组给予常规DMEM液+5%血清,模型组除与空白对照组相同常规DMEM液+5%血清外,予加入100mg/L ox-LDL干预,绞股蓝低、中、高剂量组在分别给予10、50、100 mg/L绞股蓝提取物24 h后,加入100mg/L ox-LDL.观察各组细胞生存活性、线粒体膜电位、iNOS、MMP-9、NF-κB p65、NO、SOD水平等指标变化,其结果应用统计学软件SPSS 19.O进行数据分析.结果:与空白对照组相比,模型组细胞生存活性、线粒体膜电位、NO、SOD等指标水平明显低于空白对照组,iNOS、MMP-9、NF-κB p65等指标水平明显高于空白对照组;对模型组相比,绞股蓝低、中、高剂量组细胞生存活性、线粒体膜电位、NO、SOD等指标水平明显高于模型组,iNOS、MMP-9、NF-κBp65等明显低于模型组.以上结果差异均有统计学意义(P<0.05).结论:绞股蓝总苷具有保护血管内皮细胞活性,维持线粒体膜电位水平,提高血管内皮细胞抗氧化活性等药理作用,并通过以上作用机制起到对氧化低密度脂蛋白损伤的血管内皮细胞的保护作用.
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编辑人员丨2023/8/6
