目的:观察并初步探讨罗汉果皂苷对过氧化氢（H 2O 2）所致视网膜色素上皮（RPE）细胞氧化应激反应的影响及其可能作用机制。 方法:实验研究。将人RPE细胞随机分为对照组、H 2O 2组、沉默信息调节因子1（SIRT1）抑制剂EX527组（EX527组）、罗汉果皂苷组、罗汉果皂苷+EX527组。噻唑蓝比色法检测各组细胞存活率；流式细胞仪检测各组细胞凋亡率；2',7'-二氯双氢荧光素二乙酸酯探针、黄嘌呤法、酶联免疫吸附试验分别检测细胞中活性氧（ROS）水平、超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）含量；实时定量聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法检测细胞中SIRT1、核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素氧合酶-1（HO-1）mRNA、蛋白相对表达量。多组间比较采用单因素方差分析；组间两两比较采用最小显著差法 t检验。 结果:与对照组比较，H 2O 2组细胞存活率降低，凋亡率升高，细胞中ROS水平升高，SOD活力降低，MDA含量升高，SIRT1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白相对表达量降低，差异有统计学意义（ P<0.05）。与H 2O 2组比较，EX527组细胞存活率降低，凋亡率升高，细胞中ROS水平升高，SOD活力降低，MDA含量升高，SIRT1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白相对表达量降低，差异有统计学意义（ P<0.05）；罗汉果皂苷组细胞存活率升高，凋亡率降低，细胞中ROS水平降低，SOD活力升高，MDA含量降低，SIRT1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白相对表达量升高，差异有统计学意义（ P<0.05）。与罗汉果皂苷组比较，罗汉果皂苷+EX527组细胞存活率降低，凋亡率升高，细胞中ROS水平升高，SOD活力降低，MDA含量升高，SIRT1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白相对表达量降低，差异有统计学意义（ P<0.05）。 结论:罗汉果皂苷可减轻H 2O 2所致RPE细胞氧化应激反应，促进细胞增生，减少细胞凋亡；其可能通过激活SIRT1/Nrf2信号通路发挥抗氧化作用。

目的:探讨罗汉果皂苷V(MV)对铁死亡诱导剂RAS选择性致死分子3(RSL3)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞铁死亡的抑制作用及可能机制.方法:用RSL3诱导SH-SY5Y细胞建立铁死亡模型.MTT法检测细胞活力;倒置显微镜观察细胞形态;亚铁离子荧光探针FerroFarRed检测细胞内亚铁离子含量;线粒体红色荧光探针MitoTracker Red CMXRos检测线粒体膜电位(MMP);超氧化物阴离子荧光探针二氢乙啶和线粒体超氧化物红色荧光探针MitoSoX Red分别检测细胞内和线粒体内活性氧(ROS).微板法检测细胞谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平.Western blot检测脂酰辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)、环加氧酶2(COX-2、)谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和溶质载体家族7成员11(SLC7A11)蛋白表达水平.分子对接技术预测MV与ACSL4、COX-2、GPX4和SLC7A11的靶向关系.结果:与control组相比,RSL3组SH-SY5Y细胞活力显著降低(P<0.01),细胞内亚铁离子含量、细胞内和线粒体内ROS水平及MDA水平显著升高(P<0.05或P<0.01),MMP和GSH水平显著降低(P<0.01),ACSL4和COX-2蛋白表达水平显著升高,而GPX4和SLC7A11蛋白表达水平显著降低(P<0.01),提示成功建立了细胞铁死亡模型.MV处理使细胞活力显著升高(P<0.05),细胞内亚铁离子含量、细胞内和线粒体内ROS水平及MDA水平显著降低(P<0.01),MMP和GSH水平显著升高(P<0.05或P<0.01);ACSL4和COX-2蛋白水平显著降低,而GPX4和SLC7A11蛋白水平显著升高(P<0.05或P<0.01).分子对接结果显示,MV与铁死亡核心蛋白AC-SL4、COX-2、GPX4和SLC7A11存在结合位点.结论:MV可抑制RSL3诱导的SH-SY5Y细胞铁死亡的发生,其机制可能与激活SLC7A11/GPX4和抑制ACSL4/COX-2有关.

目的 探究罗汉果皂苷提取物对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响及潜在分子机制.方法 体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,采用高糖和罗汉果皂苷提取物干预HK-2细胞,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力,流式细胞术分析细胞凋亡率,Western印迹分析B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2 相关X蛋白(Bax)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-199a-3p的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-8的表达.结果 高糖能够抑制HK-2 细胞活力,促进细胞凋亡和Bax的表达,抑制Bcl-2 的表达,提高TNF-α、IL-6 和IL-8的含量;罗汉果皂苷提取物能够抑制高糖诱导的HK-2 细胞凋亡,提高细胞活力,促进miR-199a-3p的表达,降低TNF-α、IL-6和IL-8的含量;过表达miR-199a-3p能够抑制高糖诱导的HK-2细胞损伤,下调miR-199a-3p能够逆转罗汉果皂苷提取物对高糖诱导的HK-2细胞损伤保护作用.结论 罗汉果皂苷提取物能够通过上调miR-199a-3p的表达对高糖诱导的HK-2 细胞损伤起保护作用.

目的 建立罗汉果超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱及多指标成分含量测定方法,为完善罗汉果药材的质量评价提供依据.方法 采用Waters Cortecs T3 C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.6 μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水,梯度洗脱,流速0.30 mL/min,检测波长0～25 min为300 nm、25.1～40 min为203 nm,柱温43℃,进样量1 μL;利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版)对15批罗汉果药材UPLC指纹图谱进行相似度分析;采用SPSS25.0和SIMCA14.1软件对罗汉果药材进行化学计量学分析;测定罗汉果药材中多指标成分的含量.结果 15批罗汉果药材指纹图谱有16个共有峰,指认其中4种成分;聚类分析和主成分分析均将15批罗汉果药材分为两类,其中广西柳州样品为一类,广西桂林样品为一类;以变量重要性投影(VIP)值>1.0为条件,共筛选出6个差异性标志物,按VIP值排序,峰13>峰9>峰5>峰7>峰15(罗汉果皂苷Ⅴ)>峰2(5-羟甲基糠醛);广西柳州样品5-羟甲基糠醛含量高于广西桂林样品,罗汉果皂苷Ⅴ含量则略低.结论 本研究建立的UPLC指纹图谱方法和含量测定方法可行,可为罗汉果质量评价提供依据.

目的 优选罗汉膏的提取工艺.方法 以罗汉果的有效成分罗汉果皂苷Ⅴ的含量和浸膏得率为评价指标,以提取时间、提取次数、加水量为考察因素,采用正交试验对提取方法的工艺条件进行优化.结果 最佳工艺为加8倍量水,提取3次,每次0.5h.结论 优选出的提取工艺合理、稳定可行.

为建立高速逆流色谱分离未成熟罗汉果中皂苷类化合物的方法,该研究将罗汉果粗提物先经过大孔树脂富集皂苷类化合物,再采用高速逆流色谱分离罗汉果皂苷.结果表明:以氯仿-甲醇-正丁醇-水(5 : 6 : 1 : 4,v/v/v/v)作为两相溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相,在主机转速为860 r·min-1,流速为2.5 mL·min-1,检测波长为203 nm的条件下,一次性制备得到4个化合物,即11-O-罗汉果皂苷Ⅱ(Ⅰ)、罗汉果皂苷ⅡE(Ⅱ)、11-O-罗汉果皂苷Ⅲ(Ⅲ)和罗汉果皂苷Ⅲ(Ⅳ),经高效液相色谱检测纯度分别为95.5%、98.2%、80.1%和97.6%.该方法实现了未成熟罗汉果皂苷快速有效的分离,具有样品回收率高、损失少、避免样品失活等优点,提高了分离效率.该研究结果为更多的罗汉果皂苷化合物的分离纯化奠定了基础,补充与优化了罗汉果皂苷类化合物的分离方法.

目的 建立HPLC-MS法同时测定罗汉果Siraitia growenorii不同部位中11-O-罗汉果苷Ⅴ、罗汉果苷Ⅴ、赛门苷Ⅰ、罗汉果苷Ⅳ的含有量.方法 罗汉果甲醇提取物的分析采用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱(150 mm×2.1 mm,3.5μm);流动相0.1％甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱;体积流量0.5 mL/min;柱温30℃.结果 11-O-罗汉果苷V在3.5 ～24.4 μg/mL (r=0.995 5)、罗汉果苷V在4.0～193.2 μg/mL(r=0.996 7)、赛门苷Ⅰ在0.1～4.9 μg/mL (r=0.995 9)、罗汉果苷ⅣV在0.4～11.5 μg/mL(r=0.995 5)范围内线性关系良好,平均加样回收率96.9～108.7％,RSD 3.2 ～7.5％.结论 该方法准确稳定,重复性好,可用于罗汉果的质量控制.

目的:此研究成功复制了阿霉素急性心肌细胞损伤大鼠模型,观察罗汉果皂苷治疗后大鼠心功能变化特点以及心肌细胞色素P4501A1表达的特点,以为罗汉果皂苷的开发和阿霉素心肌损伤的治疗提供参考.方法:雄性清洁级SD大鼠60只随机分为5组(①正常对照组;②阿霉素组;③阿霉素+罗汉果皂苷低剂量组;④阿霉素+罗汉果皂苷中剂量组;⑤阿霉素+罗汉果皂苷高剂量组),每组12只,阿霉素一次性静脉注射18 mg/kg造模,造模成功后给予相应药物治疗,4周后处死大鼠,检测心功能、血清TnI、SOD和MDA,计算心脏/体质量百分比,HE染色检测心肌病理学,Western Bloting检测心肌细胞色素P4501A1蛋白的表达变化特点.结果:心肌切片HE染色可见,正常组大鼠纤维排列整齐,细胞核分布均匀,而模型组大鼠则出现明显心肌细胞排列紊乱,与模型组相比,罗汉果皂苷3个剂量组均可以明显改善上述症状;与正常组相比,模型组心率(HR)、左心室收缩压(LVSP)、左室内压差(△LVP)、左心室内压力上升最大速率(+dp/dtmax)、左心室内压力下降最大速率(-dp/dtm.)、心脏/体质量百分比和血清TnI均明显升高(P＜0.05),罗汉果皂苷可以明显降低上述指标,特别是中剂量和高剂量组均呈现出明显的统计学意义(P＜0.05);与正常组相比,模型组血清SOD明显降低(P＜0.05),MDA明显升高(P＜0.05),罗汉果3个剂量组均可以明显升高SOD(P＜0.05),同时降低MDA(P＜0.05);与正常组相比,模型组心肌细胞中细胞色素P4501A1明显升高(P＜0.05),罗汉果皂苷3个剂量组均明显降低其表达(P＜0.05).结论:罗汉果皂苷可以明显改善阿霉素心肌损伤大鼠心肌病理学,同时改善心功能,这可能与其可以降低细胞色素P4501A1表达,进而提高机体抗氧化能力有关.

目的 优化罗汉果中罗汉果皂苷提取工艺,并评价其止咳祛痰作用.方法 在单因素试验基础上,以罗汉果皂苷V含有量为评价指标,料液比、提取时间、提取次数、浸泡时间作为影响因素,正交试验优化提取工艺.然后,分别采用小鼠氨水引咳法、小鼠气管酚红法测定水提物止咳祛痰作用.结果 最佳条件为加15倍量水浸泡30 min后提取3次,每次60 min,罗汉果皂苷V含有量5.60％.与空白组比较,罗汉果提取物组(50 g生药/kg)能显著减少小鼠咳嗽次数,延长咳嗽潜伏期(P＜0.05),并能显著增加小鼠气管酚红分泌量(P＜0.05).结论 该方法 合理、稳定、可行,可用于提取罗汉果中罗汉果皂苷,其水提物具有一定止咳祛痰作用.

目的 建立复方罗汉果清肺糖浆的特征图谱,并测定其中主要成分木犀草苷、罗汉果皂苷Ⅴ的含量.方法 采用Waters Sunfire C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.2％磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.8 mL/min,检测波长210 nm,柱温25℃,进样量10μL.结果 15批复方罗汉果清肺糖浆HPLC特征图谱确立了10个共有峰,且相对保留时间的RSD均小于2.0％.木犀草苷、罗汉果皂苷Ⅴ分别在0.1632～0.8160μg、0.7308～3.6540μg范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为96.30％、95.11％,RSD分别为2.28％、2.87％.结论 HPLC特征图谱结合主要成分含量测定能更全面反映制剂内在质量,可用于复方罗汉果清肺糖浆综合质量评价.