目的:结合网络药理学和实验验证探讨金龙补肾合剂防治高糖高脂饮食诱导代谢综合征大鼠脂质代谢紊乱的作用及机制。方法:检索TCMSP和相关文献获得金龙补肾合剂中枸杞子、金樱子、龙眼肉、大枣、绞股蓝、罗汉果、母丁香药物的活性成分和作用靶点，检索GeneCards在线数据库获得代谢综合征相关靶点，利用Venny 2.1.0获得金龙补肾合剂和代谢综合征的交集靶点，采用STRING在线数据库构建交集靶点PPI网络。使用Cytoscape 3.9.0中Cyto NCA插件筛选度值前50位的核心靶点。利用DAVID Bioinformatics Resources 6.8在线分析平台进行GO功能富集与KEGG通路富集分析。采用高糖高盐高脂饲料喂养20周建立代谢综合征大鼠模型。将造模成功大鼠按随机数字表法分为模型组、阳性对照组和金龙补肾合剂组，另设空白对照组，每组8只。金龙补肾合剂组灌胃金龙补肾合剂1.8 ml/kg，阳性对照组灌胃二甲双胍溶液90 mg/kg，空白组和模型组灌胃等体积生理盐水，1次/d，连续干预4周。观察大鼠体重、腹围及空腹血糖变化，检测大鼠血脂水平，采用HE染色观察肝组织病理变化，采用ELISA法测定肝组织中三磷酸腺苷（ATP）、IL-1β、IL-6水平，采用qRT-PCR检测肝组织肝激酶B1（LKB1）、AMPK、Akt1、肉碱棕榈酰转移酶1A（CPT1A）、下调乳酸脱氢酶A（LDH-A）mRNA水平，采用Western blot测定肝组织p-LKB1、LKB1、p-AMPK、AMPK、p-Akt1、Akt1蛋白表达。结果:获得金龙补肾合剂主要活性成分141个，841个作用靶点，代谢综合征靶点18 763 个，得到药物和疾病交集靶点820个。KEGG通路富集分析得到173条通路，主要涉及PI3K-Akt、HIF-1信号通路等。实验结果显示，金龙补肾合剂组大鼠体重、空腹血糖及血脂水平降低，大鼠肝脏糖脂质代谢紊乱改善；血清ATP水平升高（ P<0.05），IL-1β、IL-6水平降低（ P<0.05）；肝组织LKB1、AMPK、Akt1、CPT1A mRNA水平升高（ P<0.05），LDH-A mRNA水平降低（ P<0.05），p-LKB1/LKB1、p-AMPK/AMPK及p-Akt1/Akt1比值升高（ P<0.05）。 结论:金龙补肾合剂可通过多靶点、多通路改善代谢综合征脂质代谢紊乱，其机制可能通过调节LKB1/AMPK/Akt信号通路发挥作用。

目的:通过脂多糖刺激小鼠以及人单核细胞THP-1诱导的急性炎症模型，探索罗汉果醇促进AMPK磷酸化后靶向调控炎症通路的作用以及相关机制，为罗汉果醇（MO）能否对急性肺损伤的临床治疗中得到应用提供研究证据。方法:动物实验：取用24只6~8周龄清洁级C57BL/6雄性小鼠，采用随机（随机数字法）法将小鼠分为对照组、罗汉果醇(MO)组、脂多糖组、脂多糖+MO组，每组各分配6只。对照组小鼠腹腔注射生理盐水（30 mL/kg）,MO组小鼠腹腔注射MO(30 mg/kg),脂多糖组小鼠腹腔注射脂多糖（10 mg/kg），脂多糖+MO组小鼠腹腔注射MO(30 mg/kg)，30 min后另一侧腹腔注射脂多糖（10 mg/kg）。经过12 h后，处死小鼠取材，并进行病理学、分子生物学检测。细胞实验：取用状态良好的THP-1细胞用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基中培养24 h后，用100 ng/mL PMA诱导分化成巨噬细胞，设置对照组、罗汉果醇(MO)组、脂多糖组、脂多糖+MO组。药物刺激结束后收集各组细胞悬液，所得细胞及培养基上清液用于后续检测。结果:与对照组相比，脂多糖组的损伤程度明显，组织切片的H&E染色结果中可见肺泡腔结构破坏，炎症细胞浸润增多，且有出血以及肺泡腔间隔明显增厚；在加入MO干预下，小鼠肺组织的损伤程度大幅度改善，MPO、肺湿/干重比等也有了显著的降低。肺组织中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA水平也同样在MO的干预下显著下调[(2.96±0.10) vs. (5.53±0.14)，(8.62±0.17) vs. (12.31±0.09)，(3.01±0.09) vs.(4.85±0.36)]。在脂多糖组小鼠肺组织中炎性小体的主要成分蛋白NLRP3、caspase-1 p20、GSDMD-N、ASC表达量显著高于对照组,而脂多糖+MO组中AMPK磷酸化水平提高，焦亡相关蛋白的表达均得到有效地抑制[(0.58±0.09) vs.(0.89±0.15)、(0.19±0.08) vs. (0.93±0.16)、(0.65±0.09) vs. (0.86±0.14)、(0.30±0.12) vs. (0.47±0.10)，均 P<0.05]；同时通过ELISA法测得在组织中焦亡的主要标志物炎症因子IL-1β、IL-18的分泌同样可以被MO缓解。而细胞实验中MO同样促进了AMPK的磷酸化，抑制NLRP3炎症小体相关成分蛋白表达，同时明显提高了细胞活力。 结论:MO通过促进AMPK的磷酸化抑制NLRP3介导的细胞焦亡，进而缓解脂多糖诱导的急性肺损伤。

目的:观察并初步探讨罗汉果皂苷对过氧化氢（H 2O 2）所致视网膜色素上皮（RPE）细胞氧化应激反应的影响及其可能作用机制。 方法:实验研究。将人RPE细胞随机分为对照组、H 2O 2组、沉默信息调节因子1（SIRT1）抑制剂EX527组（EX527组）、罗汉果皂苷组、罗汉果皂苷+EX527组。噻唑蓝比色法检测各组细胞存活率；流式细胞仪检测各组细胞凋亡率；2',7'-二氯双氢荧光素二乙酸酯探针、黄嘌呤法、酶联免疫吸附试验分别检测细胞中活性氧（ROS）水平、超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）含量；实时定量聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法检测细胞中SIRT1、核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素氧合酶-1（HO-1）mRNA、蛋白相对表达量。多组间比较采用单因素方差分析；组间两两比较采用最小显著差法 t检验。 结果:与对照组比较，H 2O 2组细胞存活率降低，凋亡率升高，细胞中ROS水平升高，SOD活力降低，MDA含量升高，SIRT1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白相对表达量降低，差异有统计学意义（ P<0.05）。与H 2O 2组比较，EX527组细胞存活率降低，凋亡率升高，细胞中ROS水平升高，SOD活力降低，MDA含量升高，SIRT1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白相对表达量降低，差异有统计学意义（ P<0.05）；罗汉果皂苷组细胞存活率升高，凋亡率降低，细胞中ROS水平降低，SOD活力升高，MDA含量降低，SIRT1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白相对表达量升高，差异有统计学意义（ P<0.05）。与罗汉果皂苷组比较，罗汉果皂苷+EX527组细胞存活率降低，凋亡率升高，细胞中ROS水平升高，SOD活力降低，MDA含量升高，SIRT1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白相对表达量降低，差异有统计学意义（ P<0.05）。 结论:罗汉果皂苷可减轻H 2O 2所致RPE细胞氧化应激反应，促进细胞增生，减少细胞凋亡；其可能通过激活SIRT1/Nrf2信号通路发挥抗氧化作用。

背景:糖尿病微环境会造成巨噬细胞过度M1极化,这种高糖炎症状态会抑制骨髓间充质干细胞的成骨分化,从而影响糖尿病骨缺损的愈合.研究表明罗汉果苷Ⅴ具有抗炎、抗氧化、降血糖的作用,但其能否调节高糖炎症状态下巨噬细胞M1极化及骨髓间充质干细胞的成骨分化尚不清楚.目的:探讨罗汉果苷Ⅴ在高糖炎症状态下调节巨噬细胞M1型极化对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响.方法:构建糖尿病C57BL/6小鼠模型,从正常和糖尿病小鼠分离骨髓来源巨噬细胞,分别培养于低糖和高糖培养基.使用脂多糖和干扰素γ作为炎症刺激诱导骨髓来源巨噬细胞的M1型极化,同时以160,320,640 μmol/L 罗汉果苷Ⅴ干预,用流式细胞术检测F4/80+CD86+细胞比例,qRT-PCR检测诱导型一氧化氮合酶、白细胞介素1β、白细胞介素6的mRNA表达水平,ELISA检测骨髓来源巨噬细胞上清液中肿瘤坏死因子α水平.分离C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞,分别使用低糖或高糖成骨诱导液诱导成骨分化,添加M1型巨噬细胞条件培养基作为炎症刺激,以及320 μmol/L罗汉果苷Ⅴ干预,成骨诱导14 d后采用qRT-PCR检测碱性磷酸酶、Runt相关因子2、骨钙素、骨桥蛋白的mRNA表达水平,成骨诱导21 d后进行茜素红染色及定量分析.结果与结论:①流式细胞术结果显示320,640 μmol/L罗汉果苷Ⅴ组的F4/80+CD86+细胞比例明显低于高糖炎症对照组(P<0.05);②qRT-PCR结果显示160,320,640 μmol/L 罗汉果苷Ⅴ组的诱导型一氧化氮合酶、白细胞介素6的mRNA相对表达量较高糖炎症对照组显著降低(P<0.05),320,640 μmol/L罗汉果苷Ⅴ组白细胞介素1β的mRNA相对表达量较高糖炎症对照组显著降低(P<0.05);③ELISA结果显示160,320,640 μmol/L罗汉果苷Ⅴ组的肿瘤坏死因子α分泌水平较高糖炎症对照组显著降低(P<0.05);④320 μmol/L罗汉果苷Ⅴ干预后,高糖炎症状态下骨髓间充质干细胞的钙盐沉积增加(P<0.05),且碱性磷酸酶、Runt相关因子2和骨桥蛋白的mRNA相对表达量增加(P<0.05).结果表明,罗汉果苷Ⅴ可通过抑制高糖炎症状态下骨髓来源巨噬细胞的M1型极化及炎症因子表达,促进骨髓间充质干细胞的成骨分化.

为了探讨气候因子对不同季节授粉罗汉果品质影响及其分子作用机制,该文以主栽"青皮果"品种夏季与秋季授粉果实为研究对象,采用不同发育时间气候因子监测、形态大小测量、罗汉果苷代谢检测和基因表达qRT-PCR分析方法,统计分析二者生境气候因子、品质性状和基因表达差异.结果表明:(1)秋季授粉果实与夏季授粉果实相比,生境平均温度和有效积温 35d以后明显降低,昼夜温差 65d以前明显增加,并且平均温度、有效积温差异大于昼夜温差,光照强度和空气湿度则相近.(2)横径、纵径和单果重均增加,但是差异不显著.(3)罗汉果苷Ⅴ和 11-O-罗汉果苷Ⅴ合成积累速度滞后 10d左右,含量从 55d开始均显著降低并且成熟时分别降低了 40.66%和 46.07%.(4)罗汉果苷Ⅴ合成酶基因 55d协同表达的一致性差,上调数目和幅度少,而且负责最后一步合成反应的葡萄糖基转移酶基因SgUGT94-289-3 均下调表达.综上所述,夏季与秋季授粉罗汉果形态大小未受气候因子影响,而罗汉果苷Ⅴ品质则受温度影响显著,温度可能通过调控罗汉果苷Ⅴ合成酶基因协同表达的一致性和水平致使春季和秋季的罗汉果苷Ⅴ品质具有差异性.该研究结果为罗汉果优质栽培和遗传育种提供了理论依据.

目的:探讨罗汉果皂苷V(MV)对铁死亡诱导剂RAS选择性致死分子3(RSL3)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞铁死亡的抑制作用及可能机制.方法:用RSL3诱导SH-SY5Y细胞建立铁死亡模型.MTT法检测细胞活力;倒置显微镜观察细胞形态;亚铁离子荧光探针FerroFarRed检测细胞内亚铁离子含量;线粒体红色荧光探针MitoTracker Red CMXRos检测线粒体膜电位(MMP);超氧化物阴离子荧光探针二氢乙啶和线粒体超氧化物红色荧光探针MitoSoX Red分别检测细胞内和线粒体内活性氧(ROS).微板法检测细胞谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平.Western blot检测脂酰辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)、环加氧酶2(COX-2、)谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和溶质载体家族7成员11(SLC7A11)蛋白表达水平.分子对接技术预测MV与ACSL4、COX-2、GPX4和SLC7A11的靶向关系.结果:与control组相比,RSL3组SH-SY5Y细胞活力显著降低(P<0.01),细胞内亚铁离子含量、细胞内和线粒体内ROS水平及MDA水平显著升高(P<0.05或P<0.01),MMP和GSH水平显著降低(P<0.01),ACSL4和COX-2蛋白表达水平显著升高,而GPX4和SLC7A11蛋白表达水平显著降低(P<0.01),提示成功建立了细胞铁死亡模型.MV处理使细胞活力显著升高(P<0.05),细胞内亚铁离子含量、细胞内和线粒体内ROS水平及MDA水平显著降低(P<0.01),MMP和GSH水平显著升高(P<0.05或P<0.01);ACSL4和COX-2蛋白水平显著降低,而GPX4和SLC7A11蛋白水平显著升高(P<0.05或P<0.01).分子对接结果显示,MV与铁死亡核心蛋白AC-SL4、COX-2、GPX4和SLC7A11存在结合位点.结论:MV可抑制RSL3诱导的SH-SY5Y细胞铁死亡的发生,其机制可能与激活SLC7A11/GPX4和抑制ACSL4/COX-2有关.

目的 从罗汉果Siraitiagrosuenorii根中分离纯化多糖组分,初步分析其结构特征并研究其免疫调节作用.方法 干燥罗汉果根经95％乙醇脱脂,用70 ℃水提醇沉得到粗多糖,再经Cellulose DE-52纤维素阴离子交换柱、Sephadex LH-20凝胶柱分离纯化,得到均一多糖LGP-A.采用高效凝胶渗透色谱法(high performance gel permeation chromatography,HPGPC)与PMP柱前衍生化法测定其相对分子质量和单糖组成;通过傅里叶红外光谱(FT-IR)、核磁共振波谱(NMR)、刚果红实验、扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)等方法对LGP-A的初步结构进行分析.利用CCK法、ELISA试剂盒、中性红实验对RAW264.7细胞的增殖、一氧化氮(NO)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumornecrosis factor-α,TNF-α)及吞噬能力进行检测,评价LGP-A的免疫活性.结果LGP-A的相对分子质量为1.83 × 106,主要由半乳糖(Galp,51.23％)和阿拉伯糖(Araf,44.68％)组成.红外光谱及核磁波共振波谱对其结构分析证明,LGP-A可能主要含有 T-α-L-Araf(A)、→3)-α-L-Araf-(1→(B)、→5)-α-L-Araf-(1→(C)、→3,5)-α-L-Araf-(1→(D)、→3)-β-D-Galp-(1→(E)、→3,6)-β-D-Galp-(1→(F)、→6)-β-D-Galp-(1→(G)和→3)-α-D-Galp-(1→(H)片段.质量浓度在 0.625～5.0 μg/mL时,LGP-A能促进RAW264.7细胞的增殖,并能明显促进细胞分泌NO、IL-6和TNF-α,提高细胞吞噬率,表明LGP-A具有显著的免疫调节活性.结论LGP-A是从罗汉果根中得到的天然均一多糖,其初步结构和活性的研究为罗汉果根资源的开发提供了一定的依据.

目的:利用网络药理学分析罗汉果对糖尿病肾病(DN)的改善作用,阐明其可能的相关机制.方法:采用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)确定罗汉果中的有效成分及其作用靶点.通过DisGeNET数据库和GeneCards数据库筛选DN靶基因.将罗汉果与DN靶点进行对比,获取罗汉果对DN的关键靶点.通过STRING 数据库和 Cytoscape 软件构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络图,通过Cytoscape 软件进行基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析.采用分子对接技术预测DN核心靶点与罗汉果主要活性成分的结合能力.结果:采用TCMSP 数据库结合选入标准共筛选出罗汉果 5 种活性成分(ZINC03860434、Perlolyrine、beta-sitosterol、Kaempferol和Flazin)及丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 1(AKT1)、转录因子RELA、c-Jun氨基末端激酶(JUN)和肿瘤坏死因子(TNF)为代表的85个靶点,其中kaempferol所含靶点最多.筛选出的85个靶点中与DN相关的靶点有34个.GO功能富集分析主要涉及氧化应激、炎症及凋亡调控和细胞信号传导等生物学过程(BP).KEGG信号通路富集分析涉及晚期糖基化终产物(AGE)-AGE受体(AGE-RAGE)信号通路、TNF 信号通路和 C 型凝集素受体信号通路等.罗汉果主要活性成分与DN靶点蛋白分子对接分析,5种活性成分分子对接结合能均在-8.00～-5.00 kJ·mol-1之间.结论:Kaempferol是罗汉果中对DN治疗最有效的活性成分,其作用机制主要与抑制炎症有关.

目的 探究罗汉果皂苷提取物对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响及潜在分子机制.方法 体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,采用高糖和罗汉果皂苷提取物干预HK-2细胞,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力,流式细胞术分析细胞凋亡率,Western印迹分析B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2 相关X蛋白(Bax)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-199a-3p的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-8的表达.结果 高糖能够抑制HK-2 细胞活力,促进细胞凋亡和Bax的表达,抑制Bcl-2 的表达,提高TNF-α、IL-6 和IL-8的含量;罗汉果皂苷提取物能够抑制高糖诱导的HK-2 细胞凋亡,提高细胞活力,促进miR-199a-3p的表达,降低TNF-α、IL-6和IL-8的含量;过表达miR-199a-3p能够抑制高糖诱导的HK-2细胞损伤,下调miR-199a-3p能够逆转罗汉果皂苷提取物对高糖诱导的HK-2细胞损伤保护作用.结论 罗汉果皂苷提取物能够通过上调miR-199a-3p的表达对高糖诱导的HK-2 细胞损伤起保护作用.

研究罗汉果(Siraitia grosvenorii)水提果渣的化学成分及其体外抗炎活性.采用多种色谱方法对罗汉果果渣化学成分进行系统的分离纯化,得到了 26个化合物,并结合MS、NMR等波谱学手段对其进行结构鉴定,分别为齐墩果酸28-Oβ-D-吡喃葡萄糖苷(1)、齐墩果酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷-6'-乙酯(2)、(3α)-3,29-dihydroxy-7-oxomul-tiflor-8-ene-3,29-diyl dibenzoate(3)、3,29-二苯甲酰基栝楼仁二醇(4)、isomultiflorenol(5)、curcasinlignan B(6)、uroli-gnoside(7)、diospyrosin(8)、楝叶吴萸素B(9)、4'-羟基苯基乙基香草酸酯(10)、橙黄胡椒酰胺乙酸酯(11)、山柰酚-7-O-α-L-鼠李糖苷(12)、山柰苷(13)、山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷(14)、山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷-7-O-β-D-木糖苷(1-2)-O-α-L-鼠李糖苷(15)、sagittatin A(16)、葫芦烷-5,24-二烯-3β-醇(17)、balsaminol E(18)、大豆脑苷I(19)、β-谷甾醇(20)、β-胡萝卜苷(21)、胆甾-5-烯-3β,7α-二醇(22)、2E-4-羟基-壬烯酸(23)、香兰素(24)、对羟基苯乙醇(25)、β-hydroxypropiovanillone(26).化合物2、6～11为首次在葫芦科植物中分离得到,化合物1、3、4、14～16、18、19、22～26为首次从罗汉果属植物中分离得到.初步研究了化合物1～26的体外抗炎活性,化合物4、5、7、13、19和21能抑制TNF-α生成,化合物13和21能同时抑制IL-1β、IL-6的生成,化合物7、19、22能抑制IL-1β的生成,化合物5能抑制IL-6的生成.