目的 探讨循环微小核糖核酸(miR)-126-3p在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达及诊断价值.方法 收集多中心miR芯片及测序数据探讨NSCLC的循环miR-126-3p的表达差异.为了评估循环miR-126-3p综合表达水平,计算标准化均数差(SMD)和综合受试者工作特征(sROC)曲线,分析sROC曲线的曲线下面积(AUC),探讨灵敏度、特异度、阳性阴性似然比,并结合组织进一步综合分析循环miR-126-3p表达.通过miRDB、starBase v2.0和TargetScan 7.1,结合NSCLC中的上调差异基因,利用互补序列方法筛选了循环miR-126-3p潜在靶基因.结果 基于6项循环miR数据集发现循环miR-126-3p表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),受试者工作曲线显示循环miR-126-3p有较强的诊断效能(AUC＞0.5),而在199例NSCLC组中综合表达低于对照组(SMD=-1.46).sROC曲线显示循环miR-126-3p区分NSCLC组和对照组有高准确性(AUC=0.91),Egger's检验不存在发表偏倚(P＞0.05),灵敏度、特异度均≥0.80,阳性似然比、阴性似然比为5.37和0.18.此外,对26个数据集1 320例NSCLC循环和组织综合分析显示,循环miR-126-3p在NSCLC组中表达低于对照组(SMD=-2.07).sROC曲线显示低表达的循环miR-126-3p在区分NSCLC组和对照组有高准确性(AUC=0.97).此外,筛选得到循环miR-126-3p的潜在靶基因ADAM9和SLC7A5在NSCLC组中表达均高于对照组.结论 低表达的循环miR-126-3p可能是NSCLC高准确性筛查的重要生物标志物.

目的:确定肠道病毒A71型(Enterovirus-A71，EV-A71)感染人扁桃体上皮细胞后miRNA表达谱的改变。方法:EV-A71以感染复数为1感染人扁桃体上皮细胞6 h后，采用Trizol提取总RNA，构建小RNA文库，在Illumina NextSeq 500平台进行高通量测序，处理数据后确定差异表达的已知和新型miRNA种类及其靶基因，进行基因本体和信号途径分析；使用psRNATarget预测具有潜在结合EV-A71基因组的差异表达的miRNA种类。实时定量RT-PCR检测差异表达miRNA的变化倍数。结果:通过高通量测序共鉴定61个已知差异表达的miRNA(下调21个、上调40个)和559个新型miRNA，新型miRNA具有典型的前miRNA的二级发卡结构。实时定量RT-PCR确定hsa-miR-517b-3p和hsa-miR-199a-5p的变化倍数与高通量测序结果基本一致。差异表达miRNA靶基因涉及到不同的生物学过程和信号途径。共鉴定出24个差异表达的miRNA(5个已知miRNA，19个新型miRNA)具有与EV-A71结合的潜在"种子序列"。结论:EV-A71感染人扁桃体上皮细胞后引起miRNA表达谱的显著改变，且差异表达的miRNA可能靶向结合EV-A71基因组进而调控EV-A71复制。

目的:探讨hsa-miR-199a-5p对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs)纤维化过程的影响及其与转化生长因子(TGF)-β/Smad信号通路的关系。方法:将携带hsa-miR-199a-5p基因的慢病毒载体(hsa-miR-199a-5p组)及空白慢病毒载体(rLv-NC组)感染KFs，并设空白对照组(KFs正常培养)。采用CCK-8法检测各组KFs的增殖情况。慢病毒感染KFs 48 h后，应用实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组KFs的hsa-miR-199a-5p表达水平，流式细胞仪检测细胞凋亡情况，Transwell实验检测细胞侵袭能力，并分别采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad3及TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平。结果:病毒感染KFs 48 h后，hsa-miR-199a-5p组的hsa-miR-199a-5p表达量明显高于rLv-NC组和空白对照组，差异有统计学意义( P<0.01)；与rLv-NC组和空白对照组相比，hsa-miR-199a-5p组的细胞增殖率、侵袭性均有所降低，细胞凋亡率有所升高，差异有统计学意义( P<0.01)；hsa-miR-199a-5p组的Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-SMA、Smad3、TGF-β1的mRNA及蛋白表达水平均明显低于rLv-NC组和空白对照组，差异有统计学意义( P<0.01)。 结论:hsa-miR-199a-5p可能通过抑制TGF-β/Smad通路的表达，抑制KFs增殖与侵袭，并促进KFs凋亡，从而抑制瘢痕疙瘩纤维化。

目的:检测初治多发性大动脉炎（TAK）患者血浆外泌体携带的微小RNA和蛋白，分析其在TAK发病机制中的可能作用。方法:选2020年6月至11月北京协和医院风湿免疫科确诊的初治TAK患者10例，另选与之年龄性别匹配的健康对照者5例，分别通过RNA测序和蛋白质谱技术检测血浆外泌体携带的微小RNA和蛋白，筛选出差异表达的微小RNA和蛋白，并对其进行层次聚类分析、功能、信号通路和结构域富集分析，最终筛选出与血管炎有关的微小RNA和蛋白，探究其在TAK发病机制中的可能作用。统计学采用Fisher精确概率检验或 χ2检验。 结果:TAK患者血浆外泌体携带的差异表达的微小RNA 29个，其中miR-101-3p、miR-122-5p、miR-143-3p、miR-185-3p、miR-192-5p、miR-194-5p、miR-19a-3p、miR-19b-3p、miR-20b-5p、miR-21-5p、miR-22-3p、miR-335-5p、miR-34a-5p、miR-3613-5p、miR-548ad-5p、miR-590-3p、miR-7-5p表达上调，miR-1249-3p、miR-141-3p、miR-199a-5p、miR-199b-5p、miR-200a-3p、miR-200c-3p、miR-204-5p、miR-29c-5p、miR-335-3p、miR-381-3p、miR-4433b-5p、miR-584-5p表达下调。差异表达的蛋白357个，其中236个表达上调，121个表达下调，最终筛选前激肽释放酶、激肽原1、桥粒蛋白。结论:血浆外泌体携带的miR-34a-5p、miR-200c-3p、miR-143-3p、miR-22-3p、miR-21-5p、前激肽释放酶、激肽原1、桥粒蛋白可能通过调节血管生理过程、炎症反应、自身免疫等过程参与TAK的发病机制，具有作为TAK生物标志物和治疗靶点的潜在作用。

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA) SNHG12靶向微小RNA(miRNA，miR)-199a对肿瘤细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法:选取新乡医学院第一附属医院2017年9月到2021年9月手术摘除的123例宫颈癌组织和癌旁组织作为研究对象。荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析宫颈癌组织和癌旁组织lncRNA SNHG12和miR-199a表达水平；宫颈癌Hela细胞随机分为lncRNA对照组、SNHG12 KD组，miRNA对照组和miR-199a。细胞计数试剂盒(CCK-8)和体外移植瘤实验分析两组细胞增殖能力；Transwell分析细胞侵袭能力；体内实验分析细胞淋巴结转移数量；荧光素酶基因报告实验检测lncRNA SNHG12和miR-199a的关系。计量资料比较采用 t检验。 结果:癌旁组织lncRNA SNHG12表达水平(1.25±0.19)明显低于宫颈癌组织lncRNA SNHG12表达水平(2.98±0.23)，癌旁组织miR-199a表达水平(1.49±021)明显高于宫颈癌组织miR-199a表达水平(0.46±0.14)，差异有统计学意义( t＝4.001、3.891， P<0.05)。lncRNA对照组细胞48 h吸光度( A)值(1.95±0.24)明显高于SNHG12 KD组细胞48 h A值(1.33±0.17)，miRNA对照组细胞48 h A值(2.18±0.25)明显高于miR-199a组细胞 A值(1.44±0.27)，差异有统计学意义( t＝3.891、4.019， P<0.05)。lncRNA对照组细胞成瘤体积[(794.54±88.09) mm 3]明显高于SNHG12 KD组细胞成瘤体积[(372.43±34.76) mm 3]，差异有统计学意义( t＝5.309， P<0.05)。lncRNA对照组细胞侵袭数量[(109.43±16.98)个]明显高于SNHG12 KD组细胞侵袭数量[(69.44±7.09)个]，差异有统计学意义( t＝8.129， P<0.05)。lncRNA对照组细胞淋巴结转移数量[(12.43±3.09)个]明显高于SNHG12 KD组细胞成瘤体积[(5.09±2.98)个]，差异有统计学意义( t＝2.891， P<0.05)。miR-199a是lncRNA SNHG12是靶点。lncRNA对照组细胞miR-199a表达水平(1.67±0.23)明显低于SNHG12 KD组细胞miR-199a表达水平(3.91±0.31)，差异有统计学意义( t＝4.190， P<0.05)。 结论:lncRNA SNHG12在宫颈癌组织中呈高表达，通过与miR-199a吸附结合，参与宫颈癌细胞的增殖、侵袭和转移等过程。

目的:分析静止和循环张应力条件下大鼠髁突软骨细胞（mandibular condylar chondrocytes，MCC）外泌体显著差异微RNA（microRNA，miRNA）的表达谱并探究张应力调节髁突软骨内成骨的作用机制。方法:分别选择5只2周龄雄性SD大鼠（共10只）在静止和循环张应力条件下培养大鼠MCC，提取细胞外泌体，两组外泌体分别命名为对照组和实验组。采用透射电子显微镜、纳米流式检测仪、纳米颗粒追踪分析等方法观察并鉴定，通过高通量测序筛选表达显著差异的miRNA，采用TargetScan、miRanda网站进行生物信息学分析及成骨相关靶基因预测。结果:实验组大鼠MCC外泌体均呈“双凹圆盘状”单层膜结构，CD9、CD81表达阳性，粒径分布符合外泌体特征，与对照组大鼠MCC外泌体一致。高通量测序筛选表达显著差异的miRNA共85个（ P<0.05）。差异miRNA主要参与的生物学过程与分子功能分别为生物学过程和蛋白质结合；京都基因与基因组数据库通路富集分析显示在哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路有显著富集（ P<0.05）。其中miR-199a-5p的候选靶基因有骨形态发生蛋白3（bone morphogenetic protein 3，BMP3）、内皮素转换酶-1，miR-186-5p可靶向Smad8、BMP3，以发挥成骨相关功能。 结论:相比于静止状态，CTS刺激能改变大鼠MCC外泌体中miR-199a-5p、miR-186-5p等miRNA的表达量，可考虑作为调节外泌体应用潜能的一种手段。

目的:探讨姜黄素调控miR-199a-3p的基因表达对前列腺癌C4-2细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:将miR-199a-3p抑制物及阴性对照转染至C4-2细胞中，并分别标记为anti-miR-199a-3p组和anti-miR-con组；将仅加入脂质体的C4-2细胞标记为对照组。运用MTT法检测通过姜黄素(0、20、40、80 μmol/L)处理的C4-2细胞的增殖情况。40 μmol/L姜黄素处理C4-2细胞后，Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力；qRT-PCR检测细胞的miR-199a-3p表达量。将inhibitor NC、miR-199a-3p inhibitor转染至C4-2细胞中，再用40 μmol/L姜黄素处理48 h，采用MTT法、Transwell法检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭情况；Western blot检测各组C4-2细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、β-catenin、Cyclin D1和c-Myc的蛋白表达量。结果:与对照组比较，姜黄素能明显抑制C4-2细胞的增殖、迁移和侵袭( P<0.05)。姜黄素(40 μmol/L)处理后，C4-2细胞中miR-199a-3p的表达量显著增加( P<0.05)。抑制miR-199a-3p的表达，可逆转姜黄素对C4-2细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用( P<0.05)。使用姜黄素处理miR-199a-3p低表达的C4-2细胞后，与anti-miR-con组相比，anti-miR-199a-3p组C4-2细胞的MMP-2、MMP-9的表达量显著增加( P<0.05)，β-catenin、Cyclin D1和c-Myc蛋白表达量均显著增加( P<0.05)。 结论:姜黄素可上调miR-199a-3p的表达，从而抑制前列腺癌C4-2细胞的增殖、迁移和侵袭。

目的:探讨miR－199b与结直肠癌患者临床病理特征以及预后的关系。方法:收集2011年3—12月于中国医学科学院肿瘤医院接受治疗的202例结直肠癌患者的癌组织及癌旁正常组织，采用实时荧光定量PCR方法检测结直肠癌组织及相应癌旁正常组织中miR－199b的表达水平，生存分析采用Kaplan－Meier法和Log rank检验，受试者工作特征(ROC)曲线评估miR－199b预测结直肠癌患者预后的价值。结果:结直肠癌组织中miR－199b的相对表达水平(－7.88±0.11)低于癌旁正常组织(－6.49±0.12， P<0.001)。伴有淋巴结转移的结直肠癌组织中miR－199b的表达水平(－7.51±0.14)高于无淋巴结转移的结直肠癌组织(－8.23±0.17， P<0.001)。miR－199b在Ⅰ~Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期结直肠癌组织中相对表达水平逐渐升高，分别为－8.26±0.17、－7.70±0.16、－6.57±0.27，差异有统计学意义( P<0.001)。miR－199b高表达组患者的5年生存率(75.6%)低于低表达组患者(84.6%， P＝0.045)。ROC曲线显示，当miR－199b为－7.965时，曲线下面积为0.578(95% CI：0.468~0.688)。 结论:结直肠癌组织中高表达miR－199b与结直肠癌患者TNM分期晚、淋巴结转移以及不良预后有关，miR－199b可能作为结直肠癌患者术后疾病进展及预后的潜在标志物。

目的:探讨微小RNA-199a-3p（miR-199a-3p）通过沉默信息调节因子1（SIRT1）/核因子-κB（NF-κB）通路抑制支原体肺炎发展的作用。方法:80只SPF级BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、miR-199a-3p组及抑制组，每组各20例。除对照组外，通过高载量肺炎支原体菌液连续滴鼻3 d建立支原体肺炎小鼠模型。造模后，各组小鼠均进行尾静脉注射，miR-199a-3p组和抑制组小鼠分别注射agomir液、antagomir液，对照组和模型组小鼠均给予尾静脉注射等量生理盐水。实验结束后处死各组小鼠，各组小鼠均眼球取血，酶联免疫吸附试验检测白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。取各组小鼠肺组织，行HE染色观察肺组织病理改变，实时荧光定量PCR法检测肺组织 miR-199a-3p基因表达水平，Western Blot检测肺组织SIRT1/NF-κB信号通路蛋白表达。 结果:与模型组比较，miR-199a-3p组血清IL-4、IL-6、IL-1β和TNF-α水平均降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。HE染色结果显示，对照组小鼠的肺组织结构基本正常且无肺泡内渗出或炎性反应，其余3组均存在不同程度的肺泡间质增宽、肺泡内渗出以及炎性细胞浸润。与模型组比较，miR-199a-3p组 miR-199a-3p基因表达水平和SIRT1蛋白相对表达水平升高，差异均有统计学意义（均 P<0.05）；NF-κB蛋白相对表达水平降低，差异有统计学意义（ P<0.05）。 结论:miR-199a-3p基因在支原体肺炎小鼠肺组织中表达降低，提高 miR-199a-3p基因表达水平通过抗炎作用对支原体肺炎小鼠肺组织损伤起到保护作用，其作用机制可能与其对SIRT1/NF-κB通路的调控有关。

目的 探讨微小RNA(miR)-199a-5p保护脑缺血后血-脑屏障(BBB)完整性的机制.方法 通过SPF级成年雄性SD大鼠建立永久性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,48只大鼠随机分为假手术组、模型组、MCAO+miR-199a-5p组和MCAO+miR-199a-5p阴性对照组,每组12只.应用Ludmila Belayev 12分评分法评估大鼠的神经行为学表现;采用Evans蓝染色检测脑缺血后BBB的完整性;免疫荧光染色检测脑缺血后细胞凋亡;Western blotting技术检测claudin-5、磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基2(PIK3R2)、p-Akt、Akt和血管内皮生长因子(VEGF)-A的蛋白表达;利用Real-time PCR检测脑缺血半暗带、梗死区miR-199a-5p、claudin-5及VEGF-A表达水平.结果 MiR-199a-5p mimic干预增强MCAO大鼠本体感觉和运动能力.MiR-199a-5p降低脑缺血后PIK3R2的表达,激活Akt信号通路,并增加缺血半暗带中claudin-5和VEGF-A的表达.此外,miR-199a-5p减轻了脑缺血后的炎症.MiR-199a-5p降低脑缺血后BBB渗透性,减少神经细胞凋亡.结论 MiR-199a-5p可降低缺血性脑卒中后PIK3R2的表达,激活Akt信号通路,降低炎性细胞因子的表达,减轻缺血性脑卒中对BBB的破坏.