为探讨羊栖菜多糖对果蝇抗氧化作用和寿命的影响, 采用黑腹果蝇为研究对象, 添加羊栖菜多糖低、中、高剂量组 (质量浓度分别为1.0％, 2.0％, 4.0％) 的培养基饲喂, 每3 d更换1次培养基, 35日龄后, 分别测定果蝇组织匀浆中T-AOC、ASAFR、CAT、SOD的活性及MDA含量, 并每日定时观察记录果蝇存活数, 统计平均寿命、最高寿命、半数死亡期, 计算平均寿命延长率和最高寿命延长率.结果表明经过各剂量组的羊栖菜多糖饲喂后, 均可增强黑腹果蝇组织匀浆中T-AOC、ASAFR、CAT、SOD活性, 其中2.0％剂量组效果最佳, 分别提高雌性26.22％, 21.51％, 23.72％, 31.30％, 雄性18.50％, 23.07％, 15.75％, 24.85％ (P<0.05), 降低果蝇体内MDA含量, 雌性12.78％, 雄性20.06％ (P<0.05).不同羊栖菜多糖剂量组均能延长果蝇的生活寿命, 其中4.0％剂量组显著延长雌雄果蝇的最高寿命至50, 48 d (P<0.05), 提高雌雄果蝇的平均寿命达7 d和10 d (P<0.05).羊栖菜多糖抗氧化作用较强, 该结果为羊栖菜多糖应用于保健品和化妆品领域的开发提供了一定的实验基础.

目的:观察羊栖菜多糖(Sargassum fusiforme polysaccharides,SFPS)对体外培养的人肺癌细胞株SPC-A-1及裸鼠移植瘤组织中上皮钙粘蛋白(Epithelial cadherin,Ecadherin)、基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMP)2、9表达的影响.方法:应用实时细胞分析技术检测SPC-A-1细胞增殖活性,采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞培养液中Ecadherin、MMP2和MMP9含量;建立裸鼠移植瘤模型,随机分组,采用免疫组化法检测肿瘤组织中Ecadherin、MMP2和MMP9表达.结果:与对照组相比,30、100和300mg/L浓度SFPS作用24h即可抑制SPC-A-1细胞增殖,作用36小时抑制效果最为明显(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001);SFPS作用36h后,100mg/L、300mg/L浓度组的细胞培养液中Ecadherin含量明显增加(P＜0.05,P＜0.001),而MMP2和MMP9含量在各浓度组(30、100和300mg/L)均降低(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001);20、40mg/kg剂量SFPS处理组的裸鼠移植瘤组织中Ecadherin表达显著增加(P＜0.001),而MMP2和MMP9表达明显低于对照组(P＜0.001).结论:SFPS可以抑制SPC-A-1肺癌细胞生长,此作用可能与下调MMP2、MMP9表达水平、上调Ecadherin表达水平有关,提示SFPS具有潜在的抗肿瘤转移作用.

目的 研究羊栖菜多糖(SFPS)发挥抗氧化、抗衰老的作用机制.方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和 Western blotting 法检测不同月龄雄性小鼠和ig 给予SFPS 的老年雄性小鼠肝脏中c-Jun 氨基末端激酶1/2(JNK1/2)的表达; RT-PCR 特异性区分JNK 的各蛋白异构体,并检测各异构体在ig SFPS 或生理盐水的自然衰老小鼠肝脏中的表达水平;免疫共沉淀和ARE-荧光素酶报告基因检测JNK激活转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)/ARE信号通路的分子机制. 结果 JNK1/2的表达水平与小鼠的衰老进程呈负相关,JNK1-β2、JNK2-α1、JNK2-β2 mRNA 表达水平在小鼠衰老过程中显著下降,而ig给予SFPS 能够显著提高老年小鼠JNK1-β2(5.4×104)的表达水平,JNK(5.4×104)蛋白与抗氧化因子Nrf2存在相互作用,且JNK1-β2(5.4×104)能够显著激活Nrf2/ARE 信号通路.结论 JNK1-β2、JNK2-α1和JNK2-β2与衰老进程负相关,含有C-terminal tail 的JNK1-β2能够显著激活Nrf2/ARE 抗氧化信号通路.SFPS 能显著提高老年小鼠JNK1-β2(5.4×104)和Nrf2/ARE 信号通路的表达水平,进而提高机体的抗氧化能力,最终延缓小鼠的衰老进程.

为探讨海藻多糖抗氧化活性及抗衰老作用,体外测定昆布多糖,羊栖菜多糖,海蒿子多糖对羟基自由基,超氧自由基及其DPPH自由基的清除作用;采用秀丽隐杆线虫为研究模型,在培养基中添加不同浓度的海藻多糖,每日定时观察并记录线虫存活数,计算平均存活率.结果 表明海藻多糖具有抗氧化能力,其中1.2 mg/mL的昆布多糖羟基自由基清除能力最强,达到92.10％;海蒿子多糖DPPH自由基的清除能力最强,当浓度达到1.2mg/mL时,清除率为59.55％;1 mg/mL海蒿子多糖超氧自由基的清除率达15.66％.秀丽隐杆线虫寿命实验表明,不同的海藻多糖均能延长线虫的寿命,且在实验浓度下,多糖浓度越高寿命延长越明显.研究结果表明所选海藻多糖具有显著的体外抗氧化活性,动物实验表明海藻多糖具有抗衰老作用,能显著延长线虫寿命.该结果为海藻多糖应用于医药、保健品领域的开发提供了一定的实验基础.

目的:探讨羊栖菜多糖(Sargassum fusiforme polysaccha-ride,SFPS)在3T3-L1前脂肪细胞分化中的作用及其机制.方法:采用MTT法测定细胞增殖活性,采用油红O染色分析细胞分化程度,采用生化法检测甘油三酯(triglyceride,TG)的含量,蛋白印迹法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferator activator receptorγ,PPARγ)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)的蛋白表达.结果:不同浓度SFPS组与对照组比较,3T3-L1细胞的分化显著抑制,细胞中的脂质及甘油三酯含量显著降低,PPARγ、FAS蛋白表达显著减少.结论:SFPS可以抑制3T3-L1细胞分化,其机制可能与抑制PPARγ、FAS蛋白表达有关.

目的 优选羊栖菜多糖的最佳提取工艺,为药理活性研究提供物质基础,并采用此工艺比较不同来源羊栖菜中多糖含量,评价羊栖菜质量.方法 以羊栖菜多糖得率为指标,考察料液比、提取温度、提取时间和提取功率等对多糖得率的影响,通过均匀设计实验分别优化热浸法与超声法的提取工艺条件,采用优化的提取工艺比较14批羊栖菜多糖含量.结果 热浸法的最佳提取条件为:料液比1∶50,提取温度100℃,提取时间3h,羊栖菜多糖得率为5.30％;超声法最佳提取条件为料液比1∶60,提取温度75℃,提取时间60 min,提取功率300 W,羊栖菜中多糖得率为4.27％.14批样品羊栖菜中多糖含量范围为4.44％～7.12％.结论 热浸法,提取效率高,节约成本,更适用于羊栖菜多糖提取.14批样品羊栖菜中多糖均符合药典要求,以产地为山东的样品羊栖菜多糖含量最高.

利用不同极性的溶剂提取、分离并检测裙带菜、紫菜、羊栖菜、糙海参这四种海洋生物的多糖类抗氧化活性物质,以期筛选出具有显著体外活性的海洋来源抗氧化剂.采用过氧化值(POV)、稳定自由基(DPPH·)、多酚氧化酶(PPO)、超氧阴离子自由基(O2-·)四种体外筛选方法表征不同来源硫酸多糖产物的抗氧化活性.结果 显示,四种硫酸多糖可显著抑制猪油的过氧化,并可清除自由基和超氧阴离子,抑制多酚氧化酶的活性,抗氧化活性呈现出一定的浓度依赖性,显示了不同程度的抗氧化作用.这四种硫酸多糖具有发展为天然高效抗氧化剂的潜力.

褐藻硫酸岩藻聚糖是来源于褐藻的结构复杂的1类海洋硫酸多糖,主要由岩藻糖、半乳糖、甘露糖和葡萄糖醛酸组成,并含有少量的木糖、葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖和氨基葡萄糖.研究表明,褐藻硫酸岩藻聚糖的主链是由α(1→3)或α(1→3)、α(1→4)交替连接的硫酸化L-岩藻糖构成,还嵌有半乳糖、葡萄糖醛酸等,而厚叶解曼藻和羊栖菜等褐藻硫酸岩藻聚糖的主链是由1→2甘露糖和1→4葡萄糖醛酸构成的二糖重复单元.褐藻硫酸岩藻聚糖的主链上普遍存在岩藻糖、半乳糖、甘露糖或葡萄糖醛酸等寡糖的支链,因此糖链结构复杂.硫酸岩藻聚糖的硫酸根位于L-岩藻糖的C-2、C-3或C-4位,也存在C-2,4双硫取代.目前,褐藻硫酸岩藻聚糖结构的分析技术主要为甲基化法分析、核磁共振、二维核磁共振技术和串联质谱分析技术等.本文对褐藻来源硫酸岩藻聚糖的化学组成和结构以及常用分析技术进行了总结,为褐藻硫酸岩藻聚糖的结构分析以及构效关系研究提供依据.

目的 探讨羊栖菜多糖(SFPS)对过氧化氢(H2O2)引起星形胶质细胞氧化损伤的影响及作用机制.方法 用200μmol/L H2 O2处理细胞24 h作为H2 O2组,以正常培养细胞作为对照(Con)组;分别用15 mg/L、30 mg/L、60 mg/L的SFPS培养液预处理24 h后用200μmol/L H2 O2诱导处理24 h,分别记为H2 O2+SFPS-L组、H2 O2+SFPS-M组、H2 O2+SFPS-H组.将miR-NC、miR-29b-5p转染至星形胶质细胞后用200μmol/L H2 O2再诱导处理24 h,记为H2 O2+miR-NC组、H2 O2+miR-29b-5p组;将anti-miR-NC、anti-miR-29b-5p转染至星形胶质细胞后用60 mg/L的SFPS培养液处理24 h后再用200μmol/L H2O2诱导处理24 h,分别记为H2O2+SFPS+anti-miR-NC组、H2O2+SFPS+anti-miR-29b-5p组.丙二醛(MDA)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒分别检测MDA含量、SOD、GSH-Px活性;Western印迹检测水通道蛋白(AQP)9水平;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-29b-5p和AQP9 mRNA表达水平;荧光素酶报告实验检测miR-29b-5p和AQP9的靶向关系.结果 与Con组相比,H2O2组星形胶质细胞中MDA水平显著升高,SOD、GSH-Px活性显著降低(均P<0.05);与H2 O2组相比,不同浓度SFPS组星形胶质细胞中MDA含量逐渐降低,SOD、GSH-Px活性显著升高,呈浓度依赖性(均P<0.05).与Con组相比,H2 O2组星形胶质细胞中Bcl-2表达水平显著降低,Bax、酶切caspase-3表达水平及细胞凋亡率均显著升高(均P<0.05);与H2 O2组相比,不同浓度SFPS组星形胶质细胞中Bcl-2表达水平显著升高,Bax、酶切caspase-3表达水平及细胞凋亡率均显著降低,且均呈浓度依赖性(均P<0.05),与Con组相比,H2O2组星形胶质细胞中miR-29b-5p表达水平显著降低,AQP9 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05);与H2 O2组相比,不同浓度SFPS糖组星形胶质细胞中miR-29b-5p表达水平显著升高,AQP9 mRNA和蛋白表达水平均显著降低,且均呈浓度依赖性(均P<0.05).miR-29b-5p组荧光素酶活性显著低于miR-NC组(P<0.05).相较于miR-NC组AQP9蛋白表达水平,miR-29b-5p组显著降低;相较于anti-miR-NC组AQP9蛋白表达水平,anti-miR-29b-5p组显著升高(均P<0.05).与H2 O2+miR-NC组相比,H2 O2+miR-29b-5p组星形胶质细胞中miR-29b-5p表达水平显著升高,AQP9表达水平显著降低,MDA水平显著降低,SOD、GSH-Px活性显著升高,Bcl-2水平显著升高,Bax水平和细胞凋亡率显著降低(均P<0.05),与H2 O2组相比,H2 O2+SFPS组星形胶质细胞中miR-29b-5p水平显著升高,AQP9水平显著降低,MDA水平显著降低,SOD、GSH-Px活性显著升高,Bcl-2水平显著升高,Bax水平及细胞凋亡率显著降低(P<0.05);与H2O2+SFPS+anti-miR-NC组相比,H2O2+SFPS+anti-miR-29b-5p组星形胶质细胞中miR-29b-5p水平显著降低,AQP9水平显著升高,MDA水平显著升高,SOD、GSH-Px活性显著降低,Bcl-2水平显著降低,Bax水平及细胞凋亡率显著升高(均P<0.05).结论 SFPS可抑制H2O2诱导的星形胶质细胞氧化应激和凋亡,保护H2 O2引起的星形胶质细胞氧化损伤,其机制可能与miR-29b-5p和AQP9有关.

目的 研究羊栖菜的化学成分组成及体外抗神经炎症活性,为其开发利用以及药效物质研究提供参考.方法 基于超高效液相飞行时间质谱联用技术(UHPLC-QTOF-MS/MS)和气相色谱-质谱联用技术(GC-MS/MS)对羊栖菜中化学成分进行全谱分析.利用脂多糖(1μg/mL)建立小鼠小胶质细胞BV2的炎症模型,以帕罗西汀(5μg/mL)为阳性对照药物,通过CCK-8法检测20、40、60、80、100μg/mL羊栖菜提取物作用24 h后对细胞活性及形态的影响,通过酶联免疫吸附法检测40、60、80μg/mL羊栖菜提取物作用24 h后对细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)含量的影响.结果 经UHPLC-QTOF-MS/MS分析共鉴定出103种非挥发性成分,经GC-MS/MS分析共鉴定出60种挥发性成分.40、60、80μg/mL羊栖菜提取物可显著降低因脂多糖诱导而异常升高的BV2细胞活化程度和细胞上清液中TNF-α、IL-6的含量(P<0.05或P<0.01).结论 本研究建立了海藻羊栖菜的化学成分全谱,并证实了羊栖菜具有一定的体外抗神经炎症活性.