目的 探讨美洲大蠊提取物CⅡ-3对肝癌经导管动脉栓塞(transcatheter arterial embolization,TAE)术后癌旁肝组织细胞黏附分子水平的影响及其对肝脏的保护作用.方法 东南大学荷瘤兔2只,新西兰大白兔50只.开腹瘤粒注射法建立兔VX2肝癌模型,影像学确认是否造模成功并评估肿瘤种植情况.将成功建模的45只实验兔随机分为3组,每组15只.对照组不做处理,TAE组用碘化油栓塞肿瘤供血动脉,CⅡ-3组于TAE术前连续3 d耳缘静脉注射CⅡ-3(16 mg/kg).化学比色法检测各组实验兔术前及术后血清ALT及AST.免疫组化法检测各组癌旁肝组织PPAR-α、NF-κB表达水平.ELISA法检测各组癌旁肝组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)水平.RT-PCR检测各组癌旁肝组织PPAR-α、NF-κB、ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达水平.结果 术前对照组、TAE组、CⅡ-3 组 ALT水平分别为(34.49±1.33)、(34.01±1.21)、(34.06±1.23)U/L,AST水平分别为(38.44±1.41)、(38.45±1.47)、(38.42±1.38)U/L,差异无统计学意义(P＞0.05);术后对照组、TAE组、CⅡ-3组ALT水平分别为(35.61±1.56)、(118.67±3.39)、(87.24±3.67)U/L,AST水平分别为(41.03±1.83)、(220.60±3.00)、(104.46±2.66)U/L;与对照组比较,TAE组、CⅡ-3组ALT及AST水平明显上升,但CⅡ-3组ALT及AST水平低于TAE组,差异均有统计学意义(P＜0.01).对照组、TAE组、CⅡ-3组ICAM-1水平分别为(1.74±0.13)、(3.43±0.19)、(1.81±0.13)ng/L;VCAM-1 水平分别为(1.66±0.05)、(2.18±0.06)、(1.67±0.06)ng/L.对照组、TAE组、CⅡ-3组PPAR-α阳性分别为4、3、10只,NF-κB阳性分别为2、11、3只,与对照组、CⅡ-3组比较,TAE组NF-κB阳性率、NF-κB mRNA水平和ICAM-1、VCAM-1蛋白及mRNA水平明显升高;与对照组、TAE组比较,CⅡ-3组PPAR-α蛋白及mRNA水平明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 CⅡ-3可通过拮抗NF-kB的表达,降低ICAM-1、VCAM-1水平,达到减轻炎症反应,降低TAE术后肝损伤的作用.

目的 建立高效液相色谱(HPLC)一测多评法同时测定美洲大蠊中尿嘧啶、尿苷、次黄嘌呤、肌苷及鸟苷5种成分的含量.方法 采用Agilent ZORBAX SB-Aq色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);以甲醇-0.01 mol·L-1磷酸二氢钾溶液为流动相,梯度洗脱;流速:1.0 mL·min-1;柱温:20℃;检测波长:260 nm;进样量:10 μL.计算内参物尿苷与其他成分的相对校正因子(fa/b).一测多评法测定 10 批美洲大蠊中 5 种成分含量,并与外标法比较.结果 5 种核苷类在各自范围内线性良好(r＞0.999 5),平均加样回收率 97.0%～100.8%.尿嘧啶、次黄嘌呤、肌苷、鸟苷的 fa/b 分别是 0.908 0、1.005 3、1.969 5、1.303 4.结论 所建立的方法准确稳定,可为美洲大蠊药材及提取物的质量控制提供理论参考.

目的 观察不同剂量美洲大蠊提取物对慢传输型便秘模型小鼠排便功能的影响.方法 35 只雄性C57BL/6J小鼠,随机分为对照组、模型组及美洲大蠊提取物高、中、低剂量组,每天给予盐酸洛哌丁胺灌胃造模及不同浓度的美洲大蠊提取物进行干预治疗,记录各组小鼠给药后粪便排泄数量及湿重;在实验结束前,收集各组小鼠粪便,采用 16S rRNA分析其肠道菌群变化;同时测定各组小鼠首次排红便时间及小肠推进率.结果 与对照组相比,模型组小鼠的粪便湿重、粒数,肠道推进率均降低;而排红便时间延长(P<0.01).与模型组相比,各美洲大蠊治疗组小鼠的粪便湿重、粒数及小肠推进率增加,而排红便时间降低(P<0.05 或P<0.01).16S rRNA分析显示美洲大蠊提取物可明显提升便秘小鼠肠道粪便中Lachnospiraceae NK4A136 和酸性拟杆菌、Alistipes、Rikenella microfusus DSM 15922 细菌的丰度.结论 美洲大蠊提取物能够缓解盐酸洛哌丁胺诱导的小鼠便秘,其作用机制与调节肠道菌群有关.

建立土鳖虫特征离子质谱测定方法,对土鳖虫及其制剂进行真伪鉴别和质量评价.使用超高效液相色谱-三重四级杆质谱,采用多反应监测模式,选择质荷比(m/z)415.72(双电荷)→406.72、415.72(双电荷)→667.34作为检测离子对,对土鳖虫药材及其制剂进行检测.24批不同产地的土鳖虫药材、21批土鳖虫提取物、6批成方制剂均能检出该离子对色谱峰,6批不同动物药(地龙、龟甲、僵蚕、鸡内金、蝉蜕、水蛭)药材和3批土鳖虫混伪品(金边土鳖、金边龙虱、美洲大蠊)中均未检出相应的色谱峰.本研究建立的方法为有效补充土鳖虫药材及其饮片检验标准上的不足,提高其质量控制水平,及保证土鳖虫相关药品临床用药的安全性提供了参考依据.

目的:探讨美洲大蠊提取物CⅡ-3和脱脂膏对肝癌耐5-氟尿嘧啶细胞(BEL-7402/5-FU)自噬和转移侵袭能力的影响.方法:以肝癌敏感细胞BEL-7402和肝癌耐药细胞BEL-7402/5-FU作为实验对象,给予索拉菲尼、CⅡ-3和脱脂膏处理,检测自噬标志蛋白的生成,同时检测细胞中自噬相关因子和侵袭转移相关因子的水平以及细胞侵袭转移能力的变化.结果:耐药细胞组中p62蛋白低表达,给予阳性药索拉菲尼、CⅡ-3和脱脂膏后,细胞中p62蛋白表达量明显升高.和敏感细胞相比,耐药细胞中LC3B生成增多,给予CⅡ-3后LC3B生成减少.CⅡ-3和脱脂膏给药组均能明显抑制自噬和侵袭转移的部分相关因子的表达,包括降低ATG5、PIK3C3、BECLIN、LC3B、MMP-9、Akt、4EBP1 mRNA表达.划痕试验结果显示,相比于敏感细胞,耐药细胞具有更强的侵袭转移能力,给予索拉菲尼和CⅡ-3作用后均可显著抑制细胞的侵袭转移,而脱脂膏则无显著的抑制效果.结论:肝癌耐药细胞具有很强的自噬和侵袭转移能力,而美洲大蠊提取物CⅡ-3和脱脂膏体外均能明显抑制耐药细胞的自噬和侵袭转移,但仅能影响部分相关因子.

目的 研究美洲大蠊提取物CII-3 和脱脂膏对肝癌耐药细胞BEL-7402/5-FU自噬和侵袭转移的影响以及初步的作用机制.方法 对接种肝癌敏感细胞BEL-7402 和肝癌耐药细胞BEL-7402/5-FU的移植瘤裸鼠,通过索拉菲尼、CII-3 和脱脂膏药物处理后,观察给药后裸鼠血清生化指标,裸鼠瘤块变化和心、肝、肾、脾等脏器指数的变化,以及肝脏和瘤块病理学改变,同时观察肿瘤组织细胞中的自噬相关因子和侵袭转移相关因子的变化.结果 CII-3 和脱脂膏能使裸鼠体重呈下降趋势,并抑制肿瘤的生长,明显减轻瘤重(P<0.01);CII-3 能提高脾脏指数和心脏指数(P<0.05);与耐药组相比,CII-3 组裸鼠血清CR有升高趋势(P<0.05);索拉菲尼和CII-3 处理组能诱导肿瘤组织坏死,作用优于脱脂膏组;与耐药组相比,除AKT外(P>0.05),CII-3和脱脂膏给药组均能明显抑制自噬和侵袭转移相关因子(P<0.05).结论 美洲大蠊提取物CII-3 和脱脂膏均能抑制肝癌耐药细胞的自噬和侵袭转移,同时具有较好的抑瘤作用.其对裸鼠肝癌移植瘤的肝肾损伤有待进一步观察.

目的 研究美洲大蠊提取物Ento-A对免疫抑制小鼠免疫功能的影响.方法 小鼠腹腔注射环磷酰胺制备免疫抑制模型,分别用中性红法、MTT法检测Ento-A对免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬作用及T细胞增殖率的影响;以绵羊红细胞为免疫原,测试Ento-A对小鼠血清溶血素生成的作用,同时测试外周血象、计算免疫器官指数,综合评价En-to-A对免疫抑制小鼠免疫功能的影响.结果 与模型对照组比较,美洲大蠊提取物Ento-A高、中、低剂量组能提高免疫抑制小鼠血清溶血素的表达(P<0.01),升高脾脏指数(P<0.01)和胸腺指数(P>0.05),明显增加外周血象中WBC(P<0.01)、PLT(P<0.01)、HGB(P<0.01),而RBC的含量呈上升趋势,差异无统计学意义(P>0.05),明显增强腹腔巨噬细胞的吞噬功能及T淋巴细胞增殖能力(P<0.01),且呈剂量依赖性.结论 美洲大蠊提取物Ento-A对免疫抑制小鼠的免疫功能有增强作用.

对美洲大蠊(Periplaneta americana)虫体95％乙醇提取物的化学成分进行研究.采用硅胶柱色谱,凝胶柱色谱,开放ODS柱色谱和半制备高效液相色谱等技术进行分离纯化,通过核磁共振、质谱等方法鉴定化合物的结构.结果从乙酸乙酯部位分离并鉴定14个化合物,分别为:环(L-缬氨酸-L-脯氨酸)二肽(1)、3,4-二羟基苯乙醇(2)、原儿茶酸(3)、环(L-异亮氨酸-L-脯氨酸)二肽(4)、环(L-苯丙氨酸-L-缬氨酸)二肽(5)、烟酸(6)、马尿酸(7)、aspongpyrazine A(8)、aspongopusin(9)、(2R,3S)-2-(3',4'-dihydroxyphenyl)-3-acetylamino-7-hydroxyethyl-1,4-benzodioxane(10)、(2R,3S)-2-(3',4'-dihydroxyphenyl)-3-acetylamino-7-(N-acetyl-2"-aminoethylene)-1,4-benzodioxane(11)、环(亮氨酸-脯氨酸)二肽(12)、1,2-二去氢-N-乙酰多巴胺(13)、3,4-二氢-8-羟基-2(1H)-喹啉酮(14).其中化合物1、4～9和10～ 13为首次从大蠊属昆虫中分离得到,化合物10的波谱数据为首次报道.对已分离的14个化合物利用DPPH和ABTS+自由基清除实验评价化合物的体外抗氧化活性,结果显示化合物2、3、13具有潜在的抗氧化活性.

@@

目的:美洲大蠊提取物Ento-D对醋酸诱导的急性溃疡性结肠炎(UC)大鼠的影响,并初步探讨其作用机制.方法:采用醋酸刺激法建立大鼠急性UC模型,分别给予美沙拉嗪,Ento-D高、低剂量进行灌肠,通过对大鼠DAI、CMDI、HS评分,检测血清TNF-α、CRP,结肠组织中COX-2、MPO的含量,比较结肠组织的病理改变,评价Ento-D对UC大鼠的影响.结果:与模型组比较,Ento-D高、低剂量组能降低UC大鼠的CMDI、HS的评分(P＜0.05,P＜0.01),减少造模大鼠血清TNF-α、CRP和结肠组织COX-2、MPO的表达量(P＜0.01,P＜0.05),能明显改善UC大鼠结肠组织的病变程度,Ento-D高剂量组在给药第4、7天DAI评分降低(P＜0.05).结论:Ento-D对醋酸诱导的大鼠急性UC有治疗作用,机制可能与降低大鼠体内TNF-α、CRP、COX-2、MPO的表达水平有关.