目的 探讨miR-15a-5p调控Wnt信号通路对PQ致肺纤维化的影响及分子机制.方法 构建PQ诱导的16HBE细胞模型,采用高通量miRNA芯片技术和RT-qPCR筛选表达差异明显的miR-15a-5p进行实验.实验分组为:NC组(对照组):无特殊处理;PQ组:50 μmol/L PQ处理细胞72 h;miR-15a-5p组:转染miR-15a-5p过表达慢病毒的16HBE稳转株;miR-15a-5p+PQ组:50 μmol/L PQ处理稳转株细胞72 h.RT-qPCR和Western blot检测Wnt通路相关基因Wnt3 α和β-catenin、成纤维细胞标记基因Collagen I、Vimentin和α SMA,上皮细胞标记基因Occludin和CK18表达情况.构建PQ诱导的肺纤维化小鼠模型,采用Western blot、HE染色和免疫组织化学检测蛋白表达及肺组织损伤情况.数据以均数±标准差((x)±s)表示,采用独立样本t检验分析两组间数据.结果 细胞损伤模型中,Wnt3α、β-catenin、成纤维细胞标记基因Collagen I、Vimentin和α SMA表达显著上调(P＜0.05),上皮细胞标记基因Occludin和CK18显著下调(P＜0.05),过表达miR-15a-5p可靶向抑制Wnt3α表达并缓解PQ诱导的EMT进程.动物模型中,Wnt3α、β-catenin、成纤维细胞标记基因Collagen I、Vimentin和α SMA蛋白水平显著升高(P＜0.01),肺组织结构紊乱并发生纤维化,过表达miR-15a-5p可抑制Wnt3 α蛋白表达水平(P＜0.05)且改善肺组织损伤.结论 miR-15a-5p可通过调控Wnt3 α/β-catenin信号通路改善PQ导致的肺损伤,从而抑制肺纤维化的发生发展.

目的:评价青蒿琥酯对小鼠肠缺血再灌注致肺损伤的影响及其与血红素加氧酶-1(HO-1)的关系。方法:SPF级健康雄性C57BL/6小鼠24只，8~9周龄，体重18~22 g，采用随机数字表法分为4组( n＝6)：假手术组(Sham组)、肠缺血再灌注组(I/R组)、青蒿琥酯组(A组)和青蒿琥酯＋HO-1抑制剂锡原卟啉Ⅸ组(AS组)。采用夹闭肠系膜上动脉45 min再灌注2 h的方法建立肠缺血再灌注损伤模型。A组于缺血前1 h经尾静脉注射青蒿琥酯40 mg/kg，AS组于缺血前12 h经尾静脉注射锡原卟啉Ⅸ 7.5 mg/kg，缺血前1 h经尾静脉注射青蒿琥酯40 mg/kg。于再灌注2 h时麻醉处死动物，取肺组织，测定湿重/干重(W/D)比值，HE染色光镜下观察病理学结果并进行肺损伤评分，采用比色法测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性及MDA含量，采用荧光定量PCR法测定肺组织IL-6 mRNA的表达，采用TUNEL法检测细胞凋亡指数(AI)。 结果:与Sham组比较，I/R组肺损伤评分、W/D比值、MPO活性、MDA含量和AI升高，IL-6 mRNA表达上调( P<0.05)；与I/R组比较，A组肺损伤评分、W/D比值、MPO活性、MDA含量和AI降低，IL-6 mRNA表达下调( P<0.05)；与A组比较，AS组肺损伤评分、W/D比值、MPO活性、MDA含量和AI升高，IL-6 mRNA表达上调( P<0.05)。 结论:青蒿琥酯可减轻小鼠肠缺血再灌注致肺损伤，机制可能与激活HO-1有关。

目的:探讨细胞焦亡在瓦斯爆炸致大鼠急性肺损伤（ALI）中的作用及意义。方法:于2018年2月，选取SPF级雄性SD大鼠126只，按体重随机分为空白对照组（18只）和实验组（距起爆点40 m、80 m、120 m、160 m、200 m和240 m，每组18只）。实验组在巷道内进行瓦斯爆炸，构建ALI模型；对照组不实施瓦斯爆炸，其他条件与实验组一致。爆炸后24 h测定各组大鼠呼吸频率（f）、潮气量（TV）、每分通气量（MV）和气道狭窄指数（Penh）等呼吸功能指标；麻醉后每组处死大鼠5只，采用苏木精-伊红（HE）染色观察肺组织病理学形态；免疫组织化学法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）含量；蛋白免疫印迹（Western blotting）法检测肺组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）、Caspase-1、白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-18（IL-18）等细胞焦亡相关蛋白表达情况。结果:各实验组大鼠f、MV均高于对照组（ P<0.05）；除40 m、80 m组外，其他实验组大鼠TV均高于对照组（ P<0.05）；除40 m组外，其他实验组大鼠Penh均低于对照组（ P<0.05）。HE染色显示，不同距离点实验组大鼠肺组织均可见肺间质及肺泡明显水肿，肺泡腔大量红细胞、炎性细胞渗出，肺间质增厚，肺损伤评分增加（ P<0.05）。免疫组织化学结果显示，各实验组大鼠Caspase-1阳性表达均高于对照组（ P<0.05）。Western blotting结果显示，各实验组大鼠细胞焦亡相关蛋白表达均高于对照组（ P<0.05）。 结论:细胞焦亡参与了瓦斯爆炸致大鼠ALI的病理生理过程。

目的:观察脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤大鼠肺组织中微循环的变化，探讨乙酰化白藜芦醇对其干预作用及机制。方法:32只SD大鼠随机分为空白对照组、LPS处理组、乙酰化白藜芦醇预处理组和白藜芦醇预处理组，每组8只。采用气管内滴注LPS(5 mg/kg)的方法制作急性肺损伤动物模型，观察病理变化、肺组织湿/干重比值，用伊文思蓝法检测肺微血管通透性，用酶联免疫吸附试验法检测肺组织中肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β的含量，用蛋白质印迹法检测细胞骨架重构相关蛋白FAK、cofilin的表达变化，免疫荧光观察肺微血管内皮细胞单层细胞间隙改变情况。结果:LPS干预4 h后，大鼠肺部损伤明显，肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β的含量增高，肺湿/干重比值及通透性明显增加，FAK-cofilin通路明显激活，肺微血管内皮单层细胞间隙明显增加；乙酰化白藜芦醇预处理显著减轻了LPS导致的急性肺损伤，减少了炎症因子的释放，并且抑制了FAK-cofilin通路的激活及肺微血管内皮单层细胞间隙的增加。结论:肺微循环的改变参与了LPS诱导肺损伤的发生发展，乙酰化白藜芦醇能够通过抑制FAK-cofilin通路减轻肺损伤。

目的:观察自由场初级肺爆震伤（PBLI）模型猪动脉血气指标的变化，并探讨动脉血气指标在预测中重度PBLI中的应用价值。方法:选择成年健康长白猪9只，构建自由场PBLI猪模型，于爆炸前15 min（伤前）和爆炸后（伤后）10、30、60、120及180 min取动脉血，测定动脉血气指标及脉搏血氧饱和度（SpO 2），比较不同时间点血气分析指标和SpO 2水平的差异；观察肺组织大体损伤评分与病理损伤评分的变化，并分析各血气指标间的相关性。 结果:随时间延长，各时间点pH值、动脉血氧分压（PaO 2）、SpO 2均较伤前降低，血乳酸（Lac）和动脉二氧化碳分压（PaCO 2）较伤前升高。与伤前比较，伤后10 min血中pH值即明显下降（7.39±0.06比7.46±0.02， P<0.05），Lac即明显升高（mmol/L：3.61±2.89比1.10±0.28， P<0.05），持续到伤后180 min〔pH值：7.37±0.07比7.46±0.02，Lac（mmol/L）：2.40±0.79比1.10±0.28，均 P<0.05〕；而伤后180 min PaO 2、SpO 2明显下降〔PaO 2（mmHg，1 mmHg＝0.133 kPa）：59.40±10.94比74.81±9.39， P<0.05；SpO 2：0.75±0.11比0.89±0.08， P<0.05〕，PaCO 2明显升高（mmHg：56.17±5.38比48.42±4.93， P<0.05）。相关性分析显示：肺爆震伤动物大体损伤评分与病理损伤评分呈正相关（ r＝0.866， P＝0.005）；PaO 2与SpO 2呈正相关（ r＝0.703， P＝0.000）；pH值与Lac呈负相关（ r＝-0.400， P＝0.006）；pH值与PaCO 2呈负相关（ r＝-0.844， P＝0.000）。 结论:本研究成功建立了大型哺乳动物自由场PBLI模型，动脉血气分析有助于PBLI的早期诊断，SpO 2是否可用于评价肺损伤的严重程度有待于进一步验证。

目的:探讨失血性休克（HS）致急性肺损伤（ALI）中细胞外信号调节激酶（ERK）通路的改变及其抑制剂的保护作用。方法:SD大鼠分为假手术（Sham）组、HS 4 h组、HS 8 h组、干预组和溶剂对照组，每组6只。HS组和干预组采用股静脉插管定量失血建立模型，Sham组只进行手术操作。干预组和溶剂对照组在失血后20 min腹腔注射ERK蛋白磷酸化抑制剂司美替尼（Selumetinib）或等体积溶剂。细胞实验分为正常培养组、缺氧缺糖组（OGD）、Selumetinib干预组和溶剂对照组。使用肺组织苏木精-伊红（HE）染色、免疫组织化学染色、病理评估和炎性细胞计数评估肺组织损伤情况，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）分析趋化因子含量，采用蛋白质免疫印迹分析ERK蛋白磷酸化水平。两组之间统计比较使用非配对 t检验或Welch’s t检验，多组间比较使用单因素方差分析（One-Way ANOVA）或Kruskal-Wallis检验，并采用Bonferroni post-hoc检验进行组间的两两比较。 结果:HS 8 h组大鼠中性粒细胞（105.58±14.73）显著多于Sham组（25.12±5.48），差异有统计学意义（ t＝12.536， P<0.05）；HS 8 h组肺损伤评分[（0.682±0.089）分]显著高于Sham组[（0.175±0.083）分]，差异有统计学意义（ t＝10.199， P<0.05）。HS 4 h和HS 8 h组肺组织的CXCL1浓度和CXCL2浓度显著高于Sham组，差异有统计学意义（CXCL1： F＝89.38， P<0.01；CXCL2： χ2＝15.158， P<0.01）。HS 4 h和HS 8 h组血清的CXCL1和CXCL2浓度显著多于假手术组，差异有统计学意义（CXCL1： χ2＝14.000， P<0.01；CXCL2： χ2＝15.158， P<0.01）。OGD培养肺上皮细胞（A549细胞）2、4、6 h后，IL-8、CXCL1和CXCL2含量显著增多（IL-8： χ2＝21.60， P<0.01；CXCL1： F＝341.043， P<0.01；CXCL2： χ2＝17.78， P<0.01），同时，ERK蛋白磷酸化水平逐渐显著增强（ t＝6.867， P<0.05），Selumetinib显著抑制A549细胞趋化因子IL-8（ t＝10.497， P<0.01）、CXCL1（ t＝10.631， P<0.01）和CXCL2（ t＝5.504， P<0.01）的分泌。动物实验中，Selumetinib抑制CXCL1/2分泌（ P<0.01）和中性粒细胞浸润（ t＝9.731， P<0.01），减轻肺损伤（ t＝4.088， P<0.01）。 结论:失血性休克后，大鼠肺上皮细胞通过ERK通路，分泌趋化因子、募集中性粒细胞、加重肺损伤，抑制ERK蛋白磷酸化可显著抑制该过程，减轻肺损伤。

目的:采用腹腔内注射脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)的方法建立新生大鼠急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome，ARDS)肺损伤模型，检测肺组织中miR-155及IFN-γ的表达情况。方法:选取80只新生SD大鼠于生后第7天分配到实验组(LPS组)及对照组(等渗NaCl组)，每组40只。LPS溶液以4 mg/kg注射到实验组新生SD大鼠腹腔内，构建新生儿急性呼吸窘迫综合征(neonatal acute respiratory distress syndrome，NARDS)动物模型，等渗NaCl溶液以4 ml/kg注射到对照组新生SD大鼠腹腔内。分别于给药后的3 h、6 h、12 h及24 h进行肺组织标本取材，观察肺组织的表面变化，然后进行肺切片HE染色，观察其病理变化，并进行肺组织损伤评分，最后采用RT-PCR技术和ELISA方法分别测定肺组织内miR-155与IFN-γ的表达情况。结果:(1)实验开始后，实验组新生大鼠逐渐呈现出ARDS的临床表现，其肺组织肉眼观察、病理变化及肺组织损伤评分均提示出现NARDS肺损伤表现，表明建模成功。(2)实验组与对照组大鼠肺组织内miR-155(1.33±0.12 vs 0.95±0.02、1.77±0.17 vs 0.96±0.01、2.18±0.09 vs 0.96±0.02及2.43±0.06 vs 0.96±0.02)及IFN-γ(370.79±13.89 vs 273.03±11.44、424.24±10.11 vs 270.70±13.05、466.63±6.57 vs 268.11±7.88及519.13±7.09 vs 272.97±12.54)的表达量(ng/L)相比，差异有统计学意义( P<0.01)，且实验组各组进行组间比较，差异有统计学意义( F分别为165.983和408.574， P<0.01)。实验组肺组织内miR-155与IFN-γ的表达量随着时间的延长，逐渐增加，呈上升趋势。 结论:成功构建NARDS动物模型后，NARDS大鼠肺组织内miR-155及IFN-γ的表达显著增高，且具有时序性，miR-155有望成为诊断NARDS的早期生物标志物。

目的:探讨微小RNA-21-5p（miR-21-5p）是否通过激活磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（PI3K/Akt）信号通路调控Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）凋亡减轻高氧性急性肺损伤（HALI）。方法:将72只雄性SD大鼠按随机数字表法分为常氧对照组、HALI组、PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002+HALI组（LY+HALI组）、miR-21-5p过表达+LY294002+HALI组（miR-21-5p+LY+HALI组）、miR-21-5p过表达+HALI组（miR-21-5p+HALI组）及二甲基亚砜（DMSO）+ HALI组，每组12只。用95%氧气制备HALI动物模型；常氧对照组动物在常氧状态下正常饲养。制模前3周经气管导管滴入200 μL滴度（1×10 12 TU/mL）的miR-21-5p腺相关病毒载体AAV6-miR-21-5p转染肺组织；DMSO及LY294002均以0.3 mg/kg于制模前1 h经尾静脉给药。制模后48 h，取颈动脉血检测氧合指数（OI）及呼吸指数（RI），采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测miR-21-5p表达；取肺组织，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测炎症因子〔肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素（IL-6、IL-1β）〕水平，测定肺湿/干质量（W/D）比值，苏木素-伊红（HE）染色后光镜下观察肺组织病理学改变并进行病理学评分。每组取6只大鼠提纯AECⅡ细胞，应用流式细胞仪检测凋亡率，采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测磷酸酶及张力蛋白同源基因（PTEN）和PI3K/Akt信号通路蛋白的表达水平。 结果:与常氧对照组比较，高氧暴露后可见肺泡间隔增厚，大量炎症细胞浸润，RI、炎症因子、肺W/D比值、病理学评分，以及AECⅡ细胞早期凋亡率、PTEN蛋白表达和Akt磷酸化水平均升高，而OI及miR-21-5p表达降低，说明模型制备成功。LY294002预处理后，可进一步加重HALI大鼠肺组织病理损伤，RI、炎症因子、肺W/D比值均较HALI组进一步升高，OI进一步降低，同时可促进AECⅡ细胞凋亡，进一步上调PTEN蛋白表达，并抑制Akt磷酸化；而miR-21-5p预处理可负向调控PTEN，激活PI3K/Akt信号通路，抑制AECⅡ细胞凋亡，减轻HALI，与LY+HALI组比较，炎症因子水平降低〔TNF-α（μg/L）：100.33±3.48比116.55±2.53，IL-6（ng/L）：141.06±3.70比161.31±3.59，IL-1β（μg/L）：90.82±3.69比112.23±2.87，均 P<0.05〕，RI、肺损伤病理学评分、肺W/D比值及AECⅡ细胞早期凋亡率明显降低〔RI：0.81±0.02比1.05±0.07，病理学评分（分）：0.304±0.008比0.359±0.007，肺W/D比值：5.29±0.03比5.52±0.08，细胞凋亡率：（27.20±2.34）%比（34.17±1.49）%，均 P<0.05〕，OI、miR-21-5p表达均明显升高〔OI（mmHg，1 mmHg≈0.133 kPa）：266.71±2.75比230.12±4.04，miR-21-5p（2 -ΔΔCt）：2.21±0.13比0.33±0.03，均 P<0.05〕，且AECⅡ细胞PTEN蛋白表达显著降低（PTEN/GAPDH：0.50±0.06比0.93±0.06， P<0.05），Akt磷酸化明显增加〔磷酸化Akt（p-Akt）蛋白（p-Akt/GAPDH）：0.86±0.05比0.56±0.06， P<0.05〕。 结论:miR-21-5p可能通过负向调控PTEN激活PI3K/Akt信号通路，从而抑制AECⅡ细胞凋亡，减轻HALI。

目的:探讨左西孟旦预处理在减轻大鼠在体肺缺血再灌注损伤(LIRI)的作用及其机制。方法:建立大鼠在体LIRI模型，将50只SD大鼠(购自安徽医科大学动物实验中心)随机均分为5组，假手术组(Sham组)、缺血再灌注损伤组(I/R组)、缺血预处理组(IPC组)、左西孟旦预处理组(Levo组)、IPC＋Levo组，检测各组动脉血气结果、计算呼吸指数(RI)，检测肺组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性，肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-10的表达，湿/干比值(W/D)并观察肺组织的病理形态学变化。不同组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用Tukey检验。结果:与Sham组比较，I/R组RI值显著升高，肺组织MDA含量明显增加、SOD活性显著降低，TNF-α、IL-6、IL-10表达升高，W/D明显升高[RI：0.65±0.15比0.29±0.05；MDA：(8.42±0.44) nmol/mg比(2.40±0.12) nmol/mg；SOD：(5.86±0.91) U/mg比(25.93±1.42) U/mg；TNF-α：(253.83±6.11) pg/ml比(68.59±1.63) pg/ml；IL-6：(4.99±0.35) pg/ml比(1.68±0.16) pg/ml；IL-10：(29.75±5.51) pg/ml比(18.06±3.51) pg/ml；W/D：6.66±0.47比5.08±0.25， P<0.05]；与I/R组比较IPC组和Levo组RI值显著降低，肺组织MDA含量明显减少、SOD活性显著增高，TNF-α、IL-6表达降低，IL-10水平升高，W/D明显降低( F＝50.741、584.433、493.650、187.000、322.733、52.176、42.87， P<0.05)；IPC组各指标与Levo组比较差异无统计学意义；与IPC组比较IPC＋Levo组RI值明显降低，肺组织MDA含量明显减少、SOD活性显著增高，TNF-α、IL-6表达降低，IL-10水平升高，W/D明显降低[RI：0.36± 0.08比0.45±0.12；MDA：(4.32±0.31) nmol/mg比(6.41±0.37) nmol/mg；SOD：(12.56±1.54) U/mg比(9.66±1.25) U/mg；TNF-α：(143.42±6.23) pg/ml比(154.00±5.76) pg/ml；IL-6：(2.47±0.14) pg/ml比(3.13±0.24) pg/ml；IL-10：(48.54±7.74) pg/ml比(43.79±6.72) pg/ml；W/D：5.31±0.13比5.78±0.32， P<0.05]。 结论:运用左西孟旦预处理后可以减轻LIRI，其肺保护的机制可能与减轻脂质过氧化反应及炎性细胞的浸润有关。

目的:探讨尼古丁在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤炎症反应中的作用及机制。方法:本研究为实验研究。动物实验部分，应用LPS构建急性肺损伤小鼠模型，将C57BL/6J小鼠24只，按体质量排序，采用蛇形分组法分为4组，每组6只，对照组、LPS组、LPS+尼古丁组、LPS+尼古丁+3-MA组。留取肺组织行HE染色，肺泡灌洗液行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素1β(IL-1β)水平。细胞实验部分，采用MH-S细胞系，分为4组，对照组、LPS组、LPS+尼古丁组、LPS+尼古丁+3-MA组，取细胞上清液行ELISA检测IL-1β水平，采用细胞裂解液提取总蛋白行蛋白免疫印迹法检测NLRP3、Pro-caspase1、Cleaved-caspase1、LC3BⅡ、LC3BⅠ、P62蛋白水平，免疫荧光检测LC3B表达，透射电镜观测自噬小体数量。结果:LPS组较对照组，肺组织出现明显炎性细胞浸润。支气管肺泡灌洗液和MH-S细胞上清液中IL-1β水平升高；LPS+尼古丁组较LPS组，肺组织炎性细胞浸润减轻，支气管肺泡灌洗液和细胞上清液中IL-1β水平降低；LPS+尼古丁+3-MA组较LPS+尼古丁组，肺组织炎性细胞浸润加重，支气管肺泡灌洗液和MH-S细胞上清液中IL-1β水平升高，差异均有统计学意义( F值分别为446.40、656.40， P值均<0.001)。蛋白免疫印迹法检测各组MH-S细胞裂解液，LPS组较对照组NLRP3、Pro-caspase1、Cleaved-caspase1表达水平升高，LPS+尼古丁组较LPS组NLRP3、Pro-caspase1、Cleaved-caspase 1表达水平下降，LPS+尼古丁+3-MA组较LPS+尼古丁组NLRP3、Pro-caspase1、Cleaved-caspase1表达水平升高，差异均有统计学意义( F值分别为180.00、301.70、105.80， P值均<0.001)。使用透射电镜观察4组MH-S细胞自噬小体，采用蛋白免疫印迹法检测4组MH-S细胞中P62及LC3BⅡ/LC3BⅠ表达显示，与对照组比较，LPS组自噬小体数量增多，P62表达水平降低，LC3BⅡ/LC3BⅠ升高；LPS+尼古丁组较LPS组自噬小体数量增多，P62表达水平降低，LC3B Ⅱ/LC3BⅠ升高，LPS+尼古丁+3-MA组较LPS+尼古丁组自噬小体数量减少，P62表达水平升高，LC3B Ⅱ/LC3BⅠ降低，差异均有统计学意义( F值分别为45.25、152.00、137.40， P值均<0.05)。 结论:尼古丁通过增强自噬减弱LPS诱导的急性肺损伤炎症反应及NLRP3炎症小体的活性。