目的:探讨妊娠合并非霍奇金淋巴瘤（NHL）的临床病理特点、诊断、治疗及预后。方法:收集2010年1月至2022年5月南京大学医学院附属鼓楼医院收治的7例妊娠合并NHL患者的临床病理资料，回顾性分析其临床病理特点、诊断、治疗及母儿结局。结果:（1）7例妊娠合并NHL患者的中位年龄为28岁（范围：26~33岁）；主诉为腹痛3例（其中2例伴有盆腹腔巨大肿块并多发转移），咳嗽2例（其中1例伴上腔静脉闭塞综合征），面部肿痛1例，食欲差并发现上腹部肿物1例；自出现症状至就诊的中位时间为30 d（范围：15~188 d）。（2）孕期仅3例明确诊断，分别为右鼻前庭区肿块活检1例、左锁骨上淋巴结活检1例、肺穿刺活检1例，活检后病理检查诊断为NHL；1例为孕期行骨髓穿刺，疑为脾边缘区淋巴瘤，于剖宫产术后37 d因脾脏明显肿大伴腹胀行脾切除术，术后病理检查诊断为脾边缘区淋巴瘤；余3例均为剖宫产术中同时行病灶活检或部分肿瘤切除术，术后病理检查确诊为NHL。病理类型：弥漫性大B细胞淋巴瘤5例，脾边缘区淋巴瘤1例，鼻腔自然杀伤（NK）/T细胞淋巴瘤1例；临床分期：Ⅱ期1例，Ⅳ期6例。6例晚孕期终止妊娠患者中，4例分娩后胎盘送病理检查，其中1例肿瘤转移至胎盘。（3）7例妊娠合并NHL患者中，中期引产1例；晚孕期行剖宫产术终止妊娠5例，均为早产；足月产钳助产1例。6例新生儿均健康存活。7例妊娠合并NHL患者中，终止妊娠后5例接受化疗（其中1例化疗后行自体造血干细胞回输治疗），1例接受化疗+鼻咽部放疗，这6例患者随访期内（随访至2022年10月）均无复发；另1例为合并乙型肝炎病毒感染及先天性心脏病患者，于剖宫产术后18 d因多器官功能衰竭死亡。结论:妊娠合并NHL孕期诊断困难，需重视孕妇主诉，积极进行相关检查，当病变累及多器官时，需考虑淋巴瘤可能。妊娠合并NHL对化疗敏感，即使为晚期患者，经规范化治疗仍能获得良好结局。

目的:研究电离辐射对胎肝与骨髓来源造血干/祖细胞(hematopoietic stem and progenitor cells，HSPCs)的影响差异。方法:取14.5 d小鼠胎肝及8周龄小鼠骨髓，分选c-Kit +细胞体外接受 60Co单次5、10 Gy照射，检测HSPCs中细胞凋亡、线粒体活性氧(ROS)水平、集落形成能力、DNA损伤情况。将12只CD45.1背景的C57BL/6J小鼠按随机数表法分成骨髓组(BM)和胎肝组(FL)， 60Co全身照射，第1次4.5 Gy照射，间隔30 min后再进行第2次5 Gy剂量照射，6 h后进行移植，12周后检测嵌合率、谱系分化以及细胞周期。分选胎肝及骨髓的c-Kit +细胞检测线粒体压力。 结果:与骨髓HSPCs相比，照射后胎肝HSPCs的细胞凋亡比例显著升高( t＝16.21、12.27， P<0.05)，ROS水平显著增加( t＝68.72、18.89， P<0.05)；集落形成能力显著降低，在5 Gy时胎肝HSPCs成集落能力显著降低，照射剂量为10 Gy时完全不能形成集落( t＝12.41、15.67、9.46， P<0.05)；γ-H2AX免疫荧光染色结果显示，照射后胎肝HSPCs的DNA损伤更加严重，形成的Foci数量显著升高( t＝2.27、2.03， P<0.05)。这些结果表明，胎肝HSPCs对辐射更加敏感。移植结果显示，移植胎肝HSPCs的嵌合率低于骨髓细胞( t＝5.84， P<0.05)；在移植嵌合小鼠的骨髓与脾脏中，胎肝细胞组髓系细胞的比例高于骨髓细胞组，提示胎肝HSPCs体内重建能力低于骨髓HSPCs，并且更容易向髓系分化。细胞周期检测结果显示胎肝组S期比例显著高于骨髓组( t＝2.89， P<0.05)。线粒体压力结果显示胎肝HSPCs基础呼吸能力( t＝39.19， P<0.05)、质子泄漏( t＝6.64， P<0.05)、三磷酸腺苷(ATP)产生( t＝9.33， P<0.05)、耦联效率( t＝7.10， P<0.05)均高于骨髓c-Kit +细胞；呼吸储备能力( t＝5.53， P<0.05)低于骨髓细胞。 结论:利用多种方法对照射后胎肝及骨髓来源的HSPCs进行检测，明确了电离辐射对两种不同HSPCs功能的影响，为深入探索放射对不同发育阶段造血干细胞的影响奠定基础。

目的:探究人胎盘源间充质干细胞(human placenta-derived mesenchymal stem cells，hPMSCs)通过CD73/核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2，Nrf2)途径抑制CD4 ＋IFN-γ ＋T(Th1)细胞分泌TNF-α减轻急性移植物抗宿主病(graft versus-host disease，GVHD)小鼠肝损伤的作用机制。 方法:流式细胞术分析GVHD小鼠外周血和肝组织中Th1细胞对TNF-α的表达以及CD4 ＋IFN-γ ＋TNF-α ＋T(TNF-α ＋Th1)细胞上PD-1的表达水平。采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色、马松(Masson)染色和免疫荧光染色观察各组GVHD小鼠肝组织病理变化，并进一步用HE染色观察各组GVHD小鼠皮肤和肺组织病理变化。体外建立非条件性外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)向Th1细胞诱导方案，检测TNF-α ＋Th1细胞比例以及其Nrf2和磷酸化细胞核内核因子-κB(phosphorylated nuclear factor-kappa B，p-NF-κB)的平均荧光强度(mean fluorescence intensity，MFI)。 结果:与正常对照组相比，GVHD发病高峰组小鼠外周血和肝组织中TNF-α ＋Th1细胞比例和TNF-α ＋Th1细胞对PD-1的表达明显升高( P<0.01)；hPMSCs干预可降低小鼠外周血和肝组织中TNF-α ＋Th1细胞比例( P<0.001)，促进小鼠外周血和肝组织中TNF-α ＋Th1细胞对PD-1的表达( P<0.01， P<0.001)，然而shCD73对小鼠外周血和肝组织中TNF-α ＋Th1细胞的干预效果明显减弱( P<0.05， P<0.01)。肝组织病理学分析结果显示，肝脏中TNF-α ＋Th1细胞比例分别与Suzuki′s评分、胶原面积和α-SMA的MFI呈正相关( P<0.001)。同样，皮肤和肺组织病理学分析结果也显示，外周血中TNF-α ＋Th1细胞比例分别与皮肤的Cetkovic-Cvrlje评分和肺的Qiao Shukai评分呈正相关( P<0.001)。PBMCs活化实验也显示hPMSCs能下调TNF-α ＋Th1细胞比例( P<0.01)，上调TNF-α ＋Th1细胞对PD-1的表达( P<0.05)；进一步分析发现hPMSCs可增强TNF-α ＋Th1细胞中Nrf2的MFI( P<0.05)，减弱p-NF-κB的MFI( P<0.01)。 结论:hPMSCs可能通过CD73/Nrf2途径上调PD1的表达，抑制TNF-α ＋Th1细胞形成，进而减轻GVHD小鼠肝损伤。

肝脏类器官，通过胚胎干细胞、诱导性多能干细胞或成体干细胞甚至是肝细胞本身转分化获得，不仅能模拟体内肝脏的组织结构、基因表达和遗传特征，还在肝脏疾病模型、药物筛选、精准医疗以及再生医学等方面展现出巨大潜力。这项技术在模拟肝恶性肿瘤、肝纤维化、肝硬化、病毒性肝炎及多种遗传性和代谢性肝脏疾病中具有重要价值。然而，该技术在提高类器官衍生和增殖效率、构建免疫微环境、形成功能性血管网络以及实现流程化、标准化和自动化等方面仍面临挑战。随着相关技术的进步和创新，类器官技术有望在临床和医学科研中发挥更加重要的作用，为广大人群的健康提供更有力的保障。本文详细探讨了肝脏类器官技术的发展及其在生物医学领域的广泛应用，为后续的研究提供参考。

肝样细胞由胚胎干细胞、诱导多能干细胞、外周血单核细胞或其他成体细胞等非肝脏来源的细胞在不同诱导培养条件下逐步分化而成，其形态类似于原代肝细胞，具备合成、摄取、分泌和药物代谢等功能，是体外预测和评估药物性肝损伤的理想细胞模型。不同来源的肝样细胞在研究药物代谢和毒性方面各有优缺点，改进诱导策略和培养体系有助于获得功能更加成熟的肝样细胞。

目的:分析幼年型粒单核细胞白血病（JMML）的临床特征，探讨该病的诊治特点。方法:回顾性分析新乡医学院第一附属医院2015年4月至2020年2月收治的JMML患儿7例的临床资料，随访不同治疗方案的临床疗效。结果:7例JMML患儿中位诊断年龄8个月4 d；发热是主要就诊原因，多伴肝脾肿大。外周血白细胞中位值36.1×10 9/L，单核细胞中位值4.5×10 9/L，血红蛋白中位值88 g/L，血小板中位值47×10 9/L。6例外周血涂片可见髓系幼稚细胞。染色体检查：1例为-7单体，6例为正常核型。6例胎儿血红蛋白增高。基因检测4例：1例PTPN11+NF1突变，2例N-RAS突变，1例K-RAS突变。3例放弃治疗，3例接受低强度化疗，均因合并感染死亡；1例接受异基因造血干细胞移植，随访14个月仍无事件生存。 结论:JMML发病年龄小，临床特异性差，基因检测有助于早期诊断，低强度化疗可延长生存期但不能改善预后，感染为主要死亡原因，造血干细胞移植是唯一可能治愈该病的方法。

目的:探究不同来源的供体造血干细胞（hematopoietic stem cells，HSCs）体内移植后生成血小板（PLT）的差异因素，进而为解决临床上HSCs移植后PLT重建不良的问题提供新思路。方法:通过Ficoll分离技术分别从孕14.5 d（E14.5）胎肝（FL）和8周龄小鼠骨髓（BM）中分离HSCs及其下游髓系和淋巴系细胞，即单个核细胞（MNCs）总和，移植入清髓辐照后的受体小鼠胫骨骨髓腔内，构建造血重建FL-MNCs和BM-MNCs小鼠移植治疗模型。定期检测受体小鼠外周血血常规指标。通过流式细胞方法检测供体细胞在受体内的嵌合率及PLT形成上游细胞。进一步利用磁珠分选FL-MNCs和BM-MNCs供体细胞中CD41 +巨核细胞，并诱导PLT生成。另外，通过定量RT-PCR检测两种来源的CD41 +巨核细胞的PLT生成相关基因的表达情况。 结果:FL-MNCs移植组和BM-MNCs移植组的血常规参数包括白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、PLT均在移植后第4周恢复正常水平，受体的血细胞基本由供体细胞替代。FL-MNCs移植组比BM-MNCs移植组受体小鼠的PLT水平上升更快，移植后第4周FL-MNCs组和BM-MNCs组的PLT水平分别为（1.45±0.37）×10 12/L和（1.22±0.24）×10 12/L， P<0.05。同时，FL-MNCs中含有更高比例的Lin -Sca-1 +c-Kit +造血干细胞（FL-MNCs为7.60%±1.40%，BM-MNCs为1.10%±0.46%， P<0.01）、Lin -Sca-1 -c-Kit +CD41 +CD150 +巨核祖细胞（FL-MNCs为3.05%±0.22%，BM-MNCs为0.15%±0.02%， P<0.01），以及CD41 +CD42b +成熟巨核细胞（FL-MNCs为1.60%±0.06%，BM-MNCs为0.87%±0.11%， P<0.01）。体外功能性研究发现胎肝来源的FL-MNCs-CD41 +巨核细胞在体外诱导后可更快地生成前血小板样细胞，第3天即有前血小板样细胞形成，第5天有明显PLT形成，而骨髓来源的BM-MNCs-CD41 +巨核细胞第5天仍没有前血小板样细胞形成。FL-MNCs-CD41 +能表达更高水平的PLT生成相关基因Mpl（3.25倍）、Fog1（3倍）和Gata1（1.5倍）（ P<0.05）。 结论:FL-MNCs具有更好的受体血小板植入效果以及更快的体外PLT分化速率，这可能与FL-MNCs细胞组成中较高比例的巨核细胞数量及其Mpl、Fog1和Gata1等相关基因的表达水平有关。这些供体细胞特征的因素分析研究有望为临床治疗造血干细胞移植后PLT重建不良提供供体细胞参考依据。

目的:探究孕期血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体（angiotensin Ⅱ type 1 receptor autoantibody，AT1-AA）暴露对胎鼠肝脏发育的影响。方法:将36只10周龄健康Sprague-Dawley孕鼠随机分为对照组和AT1-AA组，每组各18只，分别于孕13 d和15 d鼠尾静脉注射生理盐水0.5 ml或AT1-AA 20 μg/g。孕12 d、14 d、16 d、18 d采用酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测各组孕鼠血清AT1-AA浓度、尾套法测量血压。于孕14 d、16 d、18 d分别处死孕鼠，从每只孕鼠取出2 ~3只胎鼠进行称量，计算胚胎重量、胎鼠肝脏重量和胎鼠肝脏重量/胚胎体重比值，免疫组织化学染色法检测胎鼠肝脏血浆白蛋白（Albumin）、细胞生长因子受体（c-Kit）蛋白表达，以及RNA转录组测序（RNA sequencing，RNA-seq）。体外培养HepG2细胞，分为溶剂对照组、AT1-AA处理细胞组和AT1-AA+氯沙坦处理细胞组，CCK8试剂盒检测AT1-AA对HepG2细胞活力的影响。采用独立样本 t检验、单因素方差分析对数据进行统计学分析。 结果:（1）孕16 d、18 d，AT1-AA组孕鼠血压显著高于对照组［（116.17±9.87）与（98.50±8.75）mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）、（125.00±9.80）与（99.43±11.76）mmHg， t值分别为3.28和4.09， P值均<0.05］。孕14 d、16 d、18 d，AT1-AA组血清AT1-AA高于对照组（1.44±0.09与0.45±0.09、2.03±0.09与0.47±0.06、2.28±0.08与0.42±0.08， t值分别为19.20、21.64和38.68， P值均<0.05）。提示AT1-AA组孕鼠造模成功。（2）孕14 d、16 d、18 d，AT1-AA组胚胎重量与同期对照组相比均明显降低［（248.27±19.63）与（263.12±16.22）mg、（626.83±167.49）与（788.96±32.25）mg、（841.43±57.57）与（966.73±33.68）mg， t值分别为2.18、3.43和6.20， P值均<0.05］。孕16 d、18 d，AT1-AA组胎鼠肝脏重量较同期对照组显著降低［（46.97±14.00）与（73.75±6.55）mg、（60.56±7.11）与（91.75±6.19）mg， t值分别6.28和10.94， P值均<0.05］；AT1-AA组胎鼠肝脏重量/胚胎重量的比值较同期对照组显著降低［（7.45±0.70）%与（9.34±0.64）%、（7.14±0.84）%与（9.45±0.76）%， t值分别为7.47和6.82， P值均<0.05］。（3）孕14 d、16 d，AT1-AA组胎鼠肝脏中Albumin相对表达量均较对照组显著下降［（20.13±2.61）%与（28.39±3.64）%、（11.69±1.21）%与（15.23±1.07）%， t值分别为28.39和5.37， P值均<0.05］。孕14 d、16 d、18 d，AT1-AA组胎鼠肝脏中c-Kit表达相对量较对照组明显升高［（29.82±2.46）%与（24.34±1.89）%、（28.26±1.98）%与（22.52±1.98）%、（21.51±2.71）%与（11.73±2.75）%， t值分别为4.34、5.02和6.21， P值均<0.05］。（4）CCK8检测结果显示：AT1-AA处理细胞组细胞存活率较溶剂对照组显著下降［（77.54±3.64）%与（99.92±0.15）%， q=8.564， P<0.05］，AT1-AA+氯沙坦处理细胞组细胞存活率较AT1-AA处理细胞组明显上升［（96.72±8.29%）， q=7.337， P<0.05］。（5）RNA-seq结果显示AT1-AA组差异表达基因在细胞分化通路富集，分化相关信号通路呈下调趋势。 结论:孕期AT1-AA暴露会导致胎鼠肝脏中肝母细胞数量减少、造血干细胞数量增加以及胎鼠肝脏分化相关基因的下调，从而抑制胎鼠肝脏发育。

目的:探讨胎儿期发病的家族性噬血淋巴组织细胞增生症（familial hemophagocytic lymphohistiocytosis，FHL）的临床特点及基因诊断。方法:回顾性分析首都儿研所附属儿童医院2019年9月收治的1例胎儿期发病的FHL新生儿的临床资料。以“fetus”“neonate”“familial hemophagocytic lymphohistiocytosis”为关键词检索Pubmed数据库，以“家族性噬血细胞综合征”为关键词检索中国知网及万方数据库，检索时间均为建库至2021年1月3日。总结国内外胎儿期发病的FHL的病例特点。结果:（1）本例患儿，胎龄39周 +3宫内发现脾肿大、腹腔内游离液及脑室增大，生后出现发热、呼吸急促、肝脾肿大、皮肤淤斑淤点、淋巴结肿大，伴三系下降、肝功能异常、铁蛋白及甘油三酯升高、纤维蛋白原减低。CD107a激发试验示自然杀伤细胞的脱颗粒功能降低（ΔCD107a<5%）。骨髓穿刺涂片见噬血细胞。患儿 UNC13D基因存在复合杂合突变：c.118-308C>T和c.3002T>C，患儿确诊为FHL3型。入院后予地塞米松及环孢素化疗、对症治疗，未予造血干细胞移植，生后52 d死亡。（2）共检索纳入15篇胎儿期发病的FHL的相关文献，共20例患儿，并和本例患儿进行汇总分析，发现FHL患儿胎儿期以胎儿水肿、肝脾肿大为主要表现，可伴胎儿窘迫、羊水增多等，生后可出现发热、呼吸困难、皮疹及中枢神经系统受累等。实验室及影像学检查结果符合噬血淋巴组织细胞增生症的诊断标准。目前报道的胎儿期发病的FHL基因突变类型为 PRF1基因突变（FHL2型）和 UNC13D基因突变（FHL3型），可分别检测到穿孔素和颗粒酶表达减低。目前以地塞米松、环孢素、依托泊苷等化疗及对症治疗为主，也有孕晚期对胎儿行宫内化疗及生后造血干细胞移植等治疗的报告。4例患儿宫内死亡，后期随访13例患儿于生后不同时间死亡，4例患儿存活。存活的患儿中最大随访至12岁。 结论:胎儿期发病的FHL早期表现不典型，病死率极高，诊治难度大。临床发现胎儿水肿或肝脾肿大，且鉴别诊断困难时，除考虑溶血、感染、自身免疫和遗传代谢性疾病外，还应注意与FHL鉴别。可借助免疫学技术和基因测序的方法以早期诊断、早治疗，从而改善预后。

目的:以诱导多能干细胞(iPSC)和倒置胶体晶体聚乙二醇支架(ICC)为基础构建乙型肝炎病毒(HBV)感染的肝脏类器官系统，并验证核苷类药物的抗病毒作用。方法:将iPSC分化诱导成肝细胞样细胞(HLC)，并接种至ICC中建立肝脏类器官系统。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Nanog同源框(NANOG)、性别决定区Y框(SOX)2、SOX17、叉头框蛋白A2(FOXA2)、甲胎蛋白、白蛋白的mRNA相对表达水平；应用激光共聚焦显微镜对类器官三维结构进行摄片；采用蛋白质印迹法和免疫荧光分析HLC中钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)表达水平。HepG2.2.15细胞提取HBV病毒颗粒感染肝脏类器官，RT-qPCR法检测细胞内HBV前基因组RNA(pgRNA)相对表达量；激光共聚焦显微镜下观察细胞质中乙型肝炎核心抗原(HBcAg)和乙型肝炎表面抗原(HBsAg)表达。分别以0.5 μmol/L恩替卡韦、0.5 μmol/L拉米夫定干预HBV感染细胞，采用RT-qPCR法检测感染与未感染细胞内HBV pgRNA相对表达量。统计学分析采用独立样本 t检验和单因素方差分析。 结果:iPSC分化21 d内，干细胞标志物NANOG、SOX2 mRNA表达水平降低( F＝158.90、8.31， P<0.001， P＝0.002)，内胚层SOX17、FOXA2 mRNA表达水平先升高后降低( F＝37.23、82.57，均 P<0.001)；分化后期，肝细胞中甲胎蛋白、白蛋白mRNA表达水平升高( F＝4.65、34.64， P＝0.012， P<0.001)，差异均有统计学意义。蛋白质印迹法和荧光显微镜下显示分化后细胞中NTCP高表达，其蛋白质相对表达水平为0.803±0.099，激光共聚焦显微镜显示分化后肝细胞表达白蛋白，在ICC中呈现三维球体结构。HBV pgRNA表达和HBsAg、HBcAg的免疫染色证实HBV成功感染肝脏类器官系统。核苷类药物作用类器官系统3 d后，恩替卡韦组(0.665±0.220)和拉米夫定组(0.503±0.117)的HBV pgRNA水平较未感染细胞(3.347±0.454)明显下降，差异均有统计学意义( t＝10.53、12.72，均 P<0.001)。 结论:iPSC分化后表现出肝脏特异性基因白蛋白和NTCP，以iPSC和ICC构建的肝脏类器官系统具有人体肝脏功能，HBV能感染该系统，恩替卡韦、拉米夫定能有效抑制肝细胞中HBV复制。