目的:观察人脐带间充质干细胞（UC-MSCs）对2型糖尿病（T2DM）小鼠胰岛功能的影响及其对NOD样受体家族核苷酸结合寡聚化结构域样受体3（NLRP3）炎性体和自噬过程的调节作用。方法:实验研究。选取20只8周龄雄性C57BL/6J小鼠，分为正常对照组（ n=5）和高脂喂养建模组（ n=15）；T2DM建模成功的小鼠进一步分为糖尿病组（ n=7）和UC-MSCs治疗组（ n=7）。UC-MSCs治疗组每周给予1次UC-MSCs（1×10 6/0.2 ml磷酸盐缓冲液）尾静脉输注治疗，共治疗4周；糖尿病组注射等量生理盐水，正常对照组不予处理。治疗结束后1周各组小鼠行腹腔糖耐量和胰岛素耐量试验检测糖耐量和胰岛素敏感性变化；采用免疫荧光染色法观察胰岛结构改变并检测胰岛中白细胞介素1β（IL-1β）和胰十二指肠同源框因子1（PDX-1）的表达。体外用脂多糖和三磷酸腺苷对小鼠骨髓诱导的原代巨噬细胞进行刺激（处理组）后，与UC-MSCs进行Transwell共培养实验24 h（治疗组），采用酶联免疫吸附法检测各组上清液中IL-1β的分泌水平，采用免疫荧光染色检测NLRP3炎性体和自噬相关蛋白的表达。统计学分析采用单因素方差分析及重复测量方差分析。 结果:体内实验表明，与糖尿病组相比，UC-MSCs治疗组小鼠胰岛结构部分修复，糖耐量和胰岛素敏感性均改善（均 P<0.05），共聚焦显微镜下观察胰岛中PDX-1表达增高，IL-1β的表达水平降低。体外实验表明，相较于处理组，治疗组中巨噬细胞分泌的IL-1β水平降低［（85.9±74.6）比（883.4±446.2）pg/ml， P=0.001］，共聚焦显微镜下观察NLRP3炎性体的表达降低，自噬底物蛋白P62表达降低，微管相关蛋白轻链β3（LC3B）、自噬效应蛋白Beclin-1表达增高。 结论:UC-MSCs可降低T2DM小鼠胰岛炎症水平，保护胰岛功能，可能与UC-MSCs抑制巨噬细胞NLRP3炎性体的活性，增强自噬水平有关。

目的:研究长链非编码RNA GAS5(long non-coding RNA GAS5，GAS5)靶向调控miR-29、miR-96和miR-208促进胰岛β细胞分泌胰岛素的作用及其机制。方法:采用Q-PCR法检测122名健康人血清和88例2型糖尿病(T2DM)患者血清以及大鼠胰岛细胞瘤株INS-1832/13中，长链非编码RNA GAS5与miR-29、miR-96和miR-208的表达水平及其相关性。通过慢病毒载体构建，沉默和过表达GAS5观察对胰岛β细胞分泌胰岛素功能的影响。采用生物信息学预测GAS5与miR-29、miR-96和miR-208有互补结合位点，用荧光素酶报告系统验证其靶向关系。在胰岛β细胞中共转染GAS5 shRNA,用上述方法检测其对胰岛素受体(insulin receptor, INSR)、胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate-1, IRS-1)和磷酸肌醇3-激酶(phosphatidylinositide 3-kinase, PI3K)水平的影响，从而揭示GAS5刺激胰岛β细胞分泌胰岛素的作用机制。结果:与健康人血清相比，2型糖尿病患者血清中GAS5的表达低于健康对照组( t＝4.632, P<0.01)，miR-29、miR-96和miR-208高于健康对照组( t分别为7.832、9.164、12.359，均 P<0.01)，而且GAS5水平与miR-29、miR-96和miR-208呈负相关( r分别为-0.50、-0.47、-0.70)。慢病毒过表达GAS5导致葡萄糖刺激的胰岛素分泌增加，胰岛素含量增加。相反，GAS5的下调导致葡萄糖刺激的胰岛素分泌和胰岛素含量显著降低。利用生物信息学工具，筛选了miR-29、miR-96和miR-208作为GAS5的靶点，并通过双荧光素酶报告基因实验验证GAS5可以通过靶向抑制miR-96、miR-29和miR-208的表达发挥作用。shGAS5显著降低INSR、IRS-1和PI3K的表达( P分别为0.022、0.038、0.009)，而过表达GAS5在mRNA和蛋白水平上均显著上调INSR、IRS-1和PI3K的表达( P分别为0.024、0.045、0.016)。 结论:GAS5可能通过靶向调控miR-29、miR-96和miR-208的表达，进而对这些miRNA可能存在的负调控因子INSR、IRS-1和PI3K等的表达进行正向调控，刺激胰岛β细胞分泌胰岛素。

目的:探讨艾赛那肽对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus，T2DM)大鼠胰岛β细胞凋亡的保护作用及其分子机制。方法:大鼠高脂喂养后，采用链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)30 mg/kg腹腔注射，选择血糖值>16.7 mmol/L作为T2DM大鼠模型。将造模成功大鼠分为模型组、二甲双胍组、艾赛那肽组，每组10只。模型组灌服相同体积生理盐水，二甲双胍组灌胃给药二甲双胍200 mg/kg，艾赛那肽组皮下注射艾赛那肽10 μg/kg，每天2次。6周后检测大鼠空腹血糖(fasting blood glucose，FBG)、空腹胰岛素(fasting insulin，FINS)水平和胰腺组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malonaldehyde，MDA)水平；Western blot法检测胰岛素受体底物2(insulin receptor substrate 2，IRS-2)、人Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein，BAX)、Cleaved caspase-3蛋白表达；原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TdT-mediated dUTP nick-end labeling，TUNEL)联合免疫组化法检测胰岛β细胞凋亡率。结果:艾赛那肽组大鼠中FBG、FINS表达水平和胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment insulin resistance，HOMA-IR)均较模型组明显降低，差异具有统计学意义[(18.69±1.77)mmol/L比(25.71±2.39)mmol/L，(21.60±3.58)mU/L比(26.02±4.68)mU/L，(17.79±2.46)比(29.72±5.97)， t值分别为2.219，2.699和3.584， P值均<0.05]；艾赛那肽组MDA和SOD含量也较对照组明显降低，差异具有统计学意义[(8.48±1.37)nmol/mL比(10.65±2.00)nmol/mL，(181.69±30.46)U/mL比(124.90±41.55)U/mL， t值分别为2.864和5.698， P值均<0.05]。此外，艾赛那肽能够上调IRS-2蛋白表达，降低BAX、Cleaved caspase-3表达水平( t值分别为4.535，3.232和5.297， P值均<0.05)，并降低T2DM大鼠胰岛β细胞凋亡率( t＝2.598， P<0.05)。 结论:艾赛那肽能够改善T2DM大鼠胰岛β细胞凋亡，其机制可能与提高抗氧化能力，上调IRS-2蛋白表达有关。

目的:探讨长链非编码RNA 钾电压门控通道亚家族Q成员1重叠转录物1（Kcnq1ot1）通过调节miR-92a-1-5p影响胰岛β细胞胰岛素分泌的作用机制。方法:自2020年6至12月在中山大学附属第三医院招募初诊2型糖尿病（T2DM）患者25例，同时招募年龄匹配且无糖尿病的受试者21例作为对照组。收集受试者的年龄、体重指数（BMI），检测空腹血糖（FPG）和糖化血红蛋白（HbA 1c），采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测血清中Kcnq1ot1表达量，并分析其与FPG和HbA 1c的相关性。12只5周龄雄性C57BL/6J小鼠采用随机数字表法分为高脂饮食（HFD）组（ n=6）和正常饮食（CD）组（ n=6），喂养20周后，提取原代胰岛细胞RNA。将体外培养的Min6细胞分为牛血清白蛋白（BSA）组和棕榈酸（PA，400 μmol/L）组；按照是否转染Kcnq1ot1 siRNA分为si-NC组和si-Kcnq1ot1组；按照是否转染miR-92a-1-5p的模拟物或抑制剂分为：模拟物对照组、模拟物组、抑制剂对照组和抑制剂组；按照转染Kcnq1ot1/NC siRNA后是否加入抑制剂分为si-NC+抑制剂对照组、si-Kcnq1ot1+抑制剂对照组、si-NC+抑制剂组和si-Kcnq1ot1+抑制剂组。采用qRT-PCR检测Kcnq1ot1、miR-92a-1-5p和胰岛素转录本1（ Ins1）、胰岛素转录本2（ Ins2）、胰岛素受体（ Insr）、NK6同源盒蛋白1（ Nkx6.1）、胰岛素受体底物1（ Irs1）和神经生成素3（ Ngn3）mRNA水平；Western blotting检测胰岛素和Insr蛋白表达水平；葡萄糖刺激胰岛素释放实验检测胰岛素分泌水平；双荧光素酶报告基因实验验证Kcnq1ot1与miR-92a-1-5p之间的直接作用关系。各组间指标的差异比较采用独立样本 t检验、方差分析，采用Pearson相关分析法分析受试者Kcnq1ot1表达量与FPG和HbA 1c的相关性。 结果:T2DM患者血清中Kcnq1ot1的表达量较对照组显著下调（ P<0.01），且Kcnq1ot1的表达量与FPG和HbA 1c呈负相关关系（ r=-0.52、-0.49，均 P<0.05）。与CD组相比，HFD组小鼠胰岛中Kcnq1ot1表达量下调（ P<0.001）。在Min6细胞中，与BSA组相比，PA组细胞中Kcnq1ot1表达量下调（ P<0.01）；与si-NC组相比，si-Kcnq1ot1组葡萄糖刺激的胰岛素分泌降低（ P<0.05），且 Ins1、 Ins2、 Insr、 Nkx6.1、 Irs1和 Ngn3的mRNA水平及Insr和胰岛素的蛋白水平均降低（ P<0.05）；与模拟物对照组相比，模拟物组葡萄糖刺激的胰岛素分泌降低（ P<0.05），且 Ins1、 Ins2、 Insr、 Nkx6.1、 Irs1和 Ngn3的mRNA水平及Insr和胰岛素的蛋白水平均降低（ P<0.05）；与抑制剂对照组相比，抑制剂组葡萄糖刺激的胰岛素分泌水平升高（ P<0.05），且 Ins1、 Ins2、 Insr、 Nkx6.1、 Irs1和 Ngn3的mRNA水平及Insr和胰岛素的蛋白水平均升高（ P<0.05）。双荧光素酶报告实验显示，模拟物和Kcnq1ot1-WT质粒共转染细胞后，Kcnq1ot1-WT荧光素酶活性降低（ P<0.05）；抑制剂和Kcnq1ot1-WT质粒共转染细胞后，Kcnq1ot1-WT的荧光素酶活性显著升高（ P<0.05）。与si-NC组相比，si-Kcnq1ot1组miR-92a-1-5p表达升高（ P<0.05）；与si-Kcnq1ot1+抑制剂对照组相比，si-Kcnq1ot1+抑制剂组Min6细胞中的 Ins1、 Ins2、 Insr、 Irs1和 Ngn3转录水平及胰岛素和Insr的蛋白水平升高（ P<0.05）。 结论:长链非编码RNA Kcnq1ot1可能通过靶向调控miR-92a-1-5p影响胰岛β细胞功能。

胰岛素抵抗是2型糖尿病的标志，胰岛素信号在大脑功能的建立和维持中发挥重要作用。糖尿病脑病是糖尿病并发症之一，与阿尔茨海默病一样与大脑胰岛素抵抗密切相关。同为异质性失调，两者的核心特征均是胰岛素信号不同节点的异常，涉及胰岛素分子与受体的结合、胰岛素受体的自磷酸化激活、受体底物的活化及胞内信号的转导和调控。而且，二者与蛋白质错误折叠、形成异常构象的淀粉样不溶性聚集物密切相关，其共同的病理表现为Aβ的沉积和Tau蛋白过度磷酸化。越来越多的事实证明，胰岛素原构象的改变、胰岛素受体受损及胰岛淀粉样多肽生成，在糖尿病脑病的发生发展中具有重要作用。蛋白质稳态概念的提出，为2型糖尿病与阿尔茨海默病一样作为一种蛋白质错误折叠病，开启了胰岛素抵抗研究的全新领域。

目的:分析肥胖症内脏脂肪组织中环状RNA(circRNA)表达水平。方法:留取北京朝阳医院2020年1月至9月收治患者的内脏脂肪组织，根据体重指数，分肥胖(>32.5 kg/m 2)和正常组(<20.0 kg/m 2)，选取10份(肥胖组6份，正常组4份)行全转录组测序，比较circRNA表达水平并利用生物信息学方法分析其功能。以Log2(Fold change>1)且 P<0.05筛选差异化表达的circRNA，以 P<0.05为条件筛选富集的通路和分子功能。 结果:与正常组比较，肥胖组有52个差异表达的circRNA[Log2 (Fold change)>1，且 P<0.05]，其宿主基因主要富集在"胰岛素抵抗"、"肿瘤坏死因子通路"和"细胞因子-因子受体通路"等通路( P<0.05)，筛选出上述通路中的关键基因，如趋化因子(CX3CL1)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、白细胞介素6(IL-6)、胰岛素受体底物2(ISR2)等，这些基因与慢性炎性反应密切相关。 结论:circRNAs可能通过调控慢性炎性反应在肥胖症发生发展中发挥作用。

目的:探讨长链非编码RNA AW112010(lncRNA AW112010)是否可能通过miR-204/POU类同源盒2(POU2F2)信号通路改善衰老脂肪细胞的胰岛素抵抗。方法:体内实验：将C57BL/6小鼠按体重分成年轻对照组(4月龄)、衰老模型组(18月龄)；实时荧光定量PCR及Western印迹法检测附睾脂肪组织中lncRNA AW112010、miR-204-5p、POU2F2、衰老相关指标(p16、p21)及胰岛素信号通路基因[胰岛素受体(INSR)、胰岛素受体底物1(IRS1)、磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)]的表达量。体外实验：用阿霉素诱导3T3-L1衰老脂肪细胞模型，β-gal染色观察细胞衰老，成功构建miR-204抑制剂及miR-204模拟物的小干扰RNA，转染3T3-L1脂肪细胞。结果:实时荧光PCR与Western印迹结果表明，与年轻小鼠比较，衰老小鼠附睾脂肪组织中AW112010的表达水平增高，而miR-204-5p的表达水平降低；衰老小鼠附睾脂肪组织中POU2F2、p16、p21的表达水平增高，而INSR、IRS1、PI3K、GLUT4 mRNA及蛋白的表达水平降低。β-gal染色结果表明，阿霉素诱导的3T3-L1衰老脂肪细胞数量明显增多，且与对照组相比，阿霉素诱导的衰老脂肪细胞中AW112010、POU2F2、p16、p21的表达量增高，而miR-204-5p、INSR、IRS1、PI3K、GLUT4的表达量降低，培养基中葡萄糖的剩余量增多。与对照组相比，miR-204过表达后，衰老指标p16、p21及靶基因POU2F2的表达量降低；INSR、GLUT4的表达量增高。结论:衰老小鼠脂肪细胞中上调的lncRNA AW112010可能通过靶向miR-204-5p/POU2F2/IRS1导致胰岛素抵抗。

目的 探究糖尿病小鼠来源的骨髓间充质干细胞及其旁分泌作用在诱发胰岛素抵抗(IR)中扮演的角色.方法 建立小鼠糖尿病模型,提取并培养骨髓间充质干细胞(BMSC),收集培养上清液(M-BMSC-CS).①细胞实验:将HepG2肝细胞分为正常低糖培养组[用低糖DMEM(5.55 mmol·L-1)进行培养]、M-BMSC-CS实验组(M-BMSC-CS 75 μL)、高糖高脂对照组(给予25 mmol·L-1高糖DMEM+0.25 mmol·L-1棕榈酸).②动物实验:小鼠分为正常小鼠组(腹腔注射等体积0.9％NaCl)和M-BMSC-CS-m组(M-BMSC-CS通过腹腔注射给予正常小鼠,注射剂量0.2 mI/10 g).用葡萄糖氧化酶法检测葡萄糖摄取量,用免疫荧光法检测Glut2蛋白荧光强度,用蛋白质印迹法检测胰岛素信号通路蛋白表达;检测口服葡萄糖耐量(OGTT)和胰岛素耐量(ITT).结果 正常低糖培养组、M-BMSC-CS实验组和高糖高脂对照组的葡萄糖摄取量分别为(2.96±0.05)、(1.64±0.28)和(1.42±0.32)mmol·L-1,葡萄糖转运蛋白 2(Glut2)荧光表达分别为53.21±2.70、30.95±3.39 和 34.96±7.60,磷酸化胰岛素受体底物1-ser307(p-IRS-1ser307)表达蛋白相对水平分别为0.46±0.21、1.09±0.24和0.91±0.16,磷酸化蛋白激酶(p-AKT)蛋白相对表达水平分别为0.94±0.05、0.59±0.06和0.53±0.05,Glut2蛋白表达水平分别为 1.08±0.14、0.58±0.14 和 0.62±0.09;M-BMSC-CS 实验组的上述指标与正常低糖培养组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).正常小鼠组和 M-BMSC-CS-m 组空腹血糖分别为(5.23±0.57)和(9.30±1.14)mmol·L-1,p-AKT蛋白相对表达水平分别为1.27±0.21和0.51±0.19,Glut2蛋白相对表达水平分别为1.17±0.17和0.79±0.09;M-BMSC-CS-m组的上述各指标与正常小鼠组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 糖尿病小鼠来源的BMSC培养上清液在体外引起正常HepG2肝细胞胰岛素抵抗,在体内诱发正常小鼠胰岛素抵抗.

目的 探讨前列腺素家族(prostaglandins,PGs)成员对非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的影响.方法 以人肝癌细胞系HepG2细胞为研究对象.试验设为对照组(Ctrl)、脂肪变组(FFA)、前列腺素B2(PGB2、10 μg/mL)处理组、15-酮基-前列腺素E2(15-keto-PGE2、10 μg/mL)处理组、8-异前列腺素F2a(8-iso-PGF2a、10 μg/mL)处理组.采用噻唑蓝(MTT)试验检测细胞活性,油红O染色检测脂质沉积,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测炎性因子基因的表达情况,Western blot检测磷酸化胰岛素受体底物(p-IRS)蛋白的表达水平.另取15只SPF级雄性C57BL/6J小鼠,随机分为基础组(CD组,n=5,10％低脂饲料喂养16周)、高脂组(HFD组,n=5,60％高脂饲料喂养16周,建模NAFLD)、PGB2组(n=5,60％高脂饲料喂养16周后,每天给予尾静脉注射PGB2 20 μg/kg,持续2周).采用小鼠葡萄糖耐量试验(IPGTT)检测小鼠的糖耐量水平,HE染色验证小鼠肝脏脂肪变程度.结果 油红O染色结果显示,PGs对NAFLD的脂质沉积没有显著影响,但PGs能够缓解NAFLD伴随产生的炎症.qRT-PCR结果显示,FFA组IL-1β水平[(2.274±0.550)倍]与对照组相比显著升高(P=0.002 8),而在50 μg/mL PGB2、10μg/mL 15-keto-PGE2 和 10μg/mL 8-iso-PGF2α 的作用下,IL-1β 分别降低至[(0.720±0.036)倍,P=0.003 1、(0.857±0.225)倍,P=0.006 4 和(1.767±0.725)倍,P=0.029 7].Western blot 结果显示,经过 PGs 处理,p-IRS蛋白的表达水平增加.CD组小鼠体重为(28.560±2.028)g,HFD组小鼠体重升高至(49.300±0.667)g,而PGB2组显著降低至(40.840±4.043)g,各组间差异有统计学意义(P=0.001 7);此外,PGB2组葡萄糖耐量结果优于HFD组.HE染色结果显示,与HFD组比较,PGB2组肝脏脂肪变的程度降低.结论 PGs中的PGB2、15-keto-PGE2、8-iso-PGF2α可通过缓解IL-1β介导的炎症,上调p-IRS表达,促进胰岛素信号传导,减轻胰岛素抵抗,缓解NAFLD的发生、发展.

[目的]归纳总结国内外对2型糖尿病(diabetes mellitus type 2,T2DM)发病中炎症因子作用的认识、T2DM湿热证与炎症的相关性以及从湿热证治疗T2DM的经验,以期为T2DM治疗提供新思路.[方法]查阅T2DM相关资料,阅读相关文献,总结国内外关于炎症因子在T2DM发病中作用的研究结果,总结湿热证与炎症的相关性以及中医从湿热论治T2DM的经验.[结果]T2DM的发病与炎症因子关系密切,T2DM患者血清中炎性因子如肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)等均高于正常水平.炎症因子在T2DM发病中的作用包括阻碍胰岛素受体底物(insulin receptor substrate,IRS)正常酪氨酸磷酸化,加速IRS与磷脂酸肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3K)解离以及IRS的降解,影响下游的PI3K磷酸化,干扰胰岛素信号经此通路下传,引发胰岛素抵抗(insulin resistance,IR);促进核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活化,通过正反馈机制不断加重炎症状态,导致IR;直接或间接引起胰岛β细胞破坏和胰岛素分泌功能减退.中医辨证T2DM患者多为湿热证,湿热证T2DM的TNF-α、IL-6、超敏C反应蛋白(hypersensitive-C reactive protein,hs-CRP)水平更高,脂代谢紊乱、IR及炎症状态更为严重,提示T2DM湿热证与机体的炎症状态存在较强相关性.中医通过应用各种清热化湿中药复方与单药治疗T2DM湿热证,能够降低机体炎症因子水平.[结论]T2DM、炎症、湿热证之间存在相关性,T2DM多属于湿热证,运用清热化湿中药复方与单方治疗T2DM湿热证有效,从湿热论治T2DM可成为治疗T2DM的新思路.