目的:探讨线粒体自噬对脂多糖(LPS)诱导的髓核(NP)细胞NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体活化的影响。方法:以大鼠椎间盘NP细胞为研究对象，首先以LPS(200 μg/ml)分别干预髓核细胞0、24、48 h，通过蛋白质印迹法(Western blot)检测LPS对NLRP3炎症小体活化和线粒体自噬的影响；通过免疫荧光观察LPS对线粒体自噬水平的影响；组间比较采用单因素方差分析。进一步利用线粒体自噬抑制剂Mdivi-1阻断线粒体自噬，实验分组为对照组(con)、LPS(24 h)+Mdivi-1、LPS(24 h)。通过Western blot检测Mdivi-1对LPS诱导的NLRP3炎症小体活化的影响；通过免疫荧光评估各实验组Mito Tracker Red探针标记的线粒体与LC3B及NLRP3的细胞内共定位；通过免疫荧光评估各实验组Mito Tracker Red探针标记的线粒体与LC3B的细胞内共定位；通过免疫荧光检测分析Mdivi-1对LPS诱导的NP细胞线粒体膜电位(ΔΨm)及线粒体ROS的影响；组间比较采用 t检验。 结果:与对照组比较，随着LPS干预时间延长(24、48 h)，NLRP3( F＝175.147， P<0.01)、GSDMD ( F＝398.479， P<0.01)、裂解的GSDMD(cleaved-GSDMD， F＝327.951， P<0.01)和白细胞介素(IL)-1β ( F＝228.902， P<0.01)的蛋白表达逐渐上调；与对照组比较，在LPS(24 h)组p62蛋白表达明显降低( t＝14.336， P<0.01)而LC3B Ⅱ蛋白表达明显升高( t＝10.909， P<0.01)；对比分析LPS(24 h)组和LPS(48 h)组发现，LPS(48 h)组p62蛋白表达明显升高( t＝－13.972， P<0.01)而LC3B Ⅱ蛋白表达明显降低( t＝6.247， P<0.05)；免疫荧光观察线粒体和LC3B共定位显示，与对照组比较，在LPS干预24 h后线粒体自噬增强( t＝－11.408， P<0.01)，而在LPS干预48 h后线粒体自噬逐渐减弱( t＝9.869， P<0.05)；利用Mdivi-1阻断线粒体自噬后显示，与LPS(24 h)组比较，在Mdivi-1预处理组NLRP3 ( t＝－7.551， P<0.05)、GSDMD( t＝－7.089， P<0.05)、cleaved-GSDMD( t＝－4.396， P<0.05)和IL-1β ( t＝－10.451， P<0.01)的表达明显升高，ΔΨm丢失更加严重( t＝－6.213， P<0.05)，线粒体ROS产生增加( t＝－6.496， P<0.05)。 结论:阻断线粒体自噬进一步活化了LPS诱导的NLRP3炎症小体，表明线粒体自噬在LPS诱导NP细胞死亡中具有保护作用。

目的:探索小鼠心肌细胞中哺乳动物不育系20样激酶1（mammalian sterile 20-like kinase 1，Mst-1）调控缺氧复氧（hypoxia reoxygenation，HR）诱导的心肌细胞自噬及凋亡机制。方法:采用酶消化法结合差速贴壁的方法培养小鼠乳鼠心肌细胞，通过缺氧24 h复氧6 h的方法建立HR模型。实验分组：对照组：正常培养的心肌细胞；Mst-1空病毒组：用重组慢病毒空载体转染心肌细胞48 h；Mst-1敲低组：用携带Mst-1小干扰RNA（siRNA）的重组慢病毒转染心肌细胞48 h；Mst-1过表达组：用携带Mst-1基因的重组慢病毒转染心肌细胞48 h；HR组：建立心肌细胞HR模型；Mst-1敲低+HR组：用携带Mst-1 siRNA的重组慢病毒转染心肌细胞后48 h建立心肌细胞HR模型；Mst-1过表达+HR组：用携带Mst-1基因的重组慢病毒转染心肌细胞后48 h建立心肌细胞HR模型。采用实时荧光定量RCR（qPCR）以及Western blot检测细胞中Mst-1 mRNA及蛋白相对表达量，免疫荧光染色检测心肌细胞标志物心肌肌钙蛋白T（cTnT），及细胞自噬体与自噬溶酶体变化，脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）法检测心肌细胞凋亡水平，Western blot检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）Ⅱ/LC3Ⅰ，P62及凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸酶剪切体（cleaved-caspase）9、半胱氨酸天冬氨酸酶前体（pro-caspase）9、cleaved-caspase-3、pro-caspase-3，以及髓细胞白血病1基因（MCL-1）的表达情况达。予以MCL-1抑制剂A1210477做回复实验，验证Mst-1通过调控MCL-1参与心肌细胞凋亡及自噬。结果:免疫荧光检测发现培养细胞表达心肌细胞特异性标志物cTnT；HR情况下心肌细胞中Mst-1表达增加，慢病毒转染可有效抑制或过表达细胞中Mst-1。HR组与Mst-1过表达+HR组心肌细胞内自噬体及自噬溶酶体含量低于对照组，而Mst-1敲低+HR组心肌细胞内自噬体及自噬溶酶体含量高于HR组（ P均<0.05）。TUNEL结果显示，HR组及Mst-1过表达+HR组中TUNEL阳性细胞比例高于对照组，而Mst-1敲低组+HR组中TUNEL阳性细胞比例低于HR组（ P均<0.05）。Western blot结果显示，与对照组比较，HR组及Mst-1过表达+HR组细胞中LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ值较低，P62与 cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3表达水平较高（ P均<0.05）；与HR组比较，Mst-1敲低+HR组中LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ值较高，P62与cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3表达水平较低（ P均<0.05）。HR与Mst-1过表达+HR组心肌细胞中磷酸化（P）MCL-1蛋白表达水平低于对照组，Mst-1敲低+HR组的P-MCL-1蛋白表达水平高于HR组（ P均<0.05）。回复实验显示抑制细胞中MCL-1可阻断Mst-1 siRNA 对细胞自噬及凋亡的调节作用。 结论:抑制心肌细胞中Mst-1的表达，可促进HR诱导的心肌细胞自噬，改善心肌细胞凋亡，该作用可能与其调控MCL-1表达相关。

目的:探讨钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKII）对离体心肌缺血-再灌注损伤的影响及对细胞凋亡与自噬的作用。方法:选取心电图正常的SPF级雌性SD大鼠（体重250~280 g），Langendorff灌流系统建立成功的离体心肌缺血-再灌注损伤模型共70只，随机分为五组（ n = 14），心脏缺血-再灌注组（IR组）、CaMKII磷酸化激活剂组（IR+异丙肾上腺素组）、CaMKII磷酸化抑制剂类似物组（IR+KN92组）、CaMKII磷酸化抑制剂组（IR+KN93组）、空白对照组（Control组）。采用再灌注末，左心室功能的变化、心肌细胞形态的变化评价心肌损伤程度；原位末端标记(TUNEL)法来检测细胞凋亡指数；蛋白印迹法（Western blot）检测CaMKII、受磷蛋白（PLN）的磷酸化水平（p-CaMKII/CaMKII、p-PLN/PLN）、以及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3和自噬标记蛋白LC3II/LC3I、Beclin-1、P62的表达水平。 结果:与Control组相比，IR组的大鼠左心室功能降低,心肌纤维形态排列紊乱，凋亡指数增高，p-CaMKII/CaMKII、p-PLN/PLN、Cleaved Caspase-3、Bax/Bcl-2、LC3II/LC3I、Beclin-1表达增多，P62表达减少，凋亡和自噬水平明显升高（均 P < 0.05）。与IR组相比，IR+KN93组的大鼠心肌损伤有明显改善，凋亡指数减少，p-CaMKII/CaMKII、p-PLN/PLN、Cleaved Caspase-3、Bax /Bcl-2、LC3II/LC3I、Beclin-1表达减少，P62表达增多，凋亡和自噬水平明显降低（均 P < 0.05）。IR+异丙肾上腺素组与IR组相比，进一步降低大鼠左心室功能，同时凋亡和自噬水平进一步升高（ P < 0.05），而IR+KN92组大鼠与IR组相比，心肌各指标比较差异无统计学意义（ P > 0.05）。 结论:抑制CaMKII磷酸化通过降低细胞凋亡和自噬进而减轻离体心肌缺血-再灌注损伤。

目的:探索哺乳动物耳蜗K?lliker器退化过程中是否存在自噬现象。方法:以P1~P14的SD大鼠耳蜗为研究对象，运用HE染色和透射电镜观察K?lliker器在耳蜗早期发育过程中的显微和亚显微形态学改变，并利用免疫组化、Western blot分子生物学实验观察自噬标记物LC3、Beclin1、P62在早期发育过程中的动态变化。结果:利用HE染色及透射电镜大鼠耳蜗K?lliker器支持细胞的形态从底回向顶回逐渐由假复层柱状上皮转变为单层立方上皮，细胞层数和数量逐渐减少，最终形成成熟的内沟区域，并观察到自噬小体。免疫组化耳蜗K?lliker器支持细胞LC3-II、Beclin1、P62呈阳性。Western blot观察到P3~P10自噬相关蛋白呈逐渐下降的趋势。结论:哺乳动物耳蜗K?lliker器退化过程中存在时间依赖性的自噬现象。

目的:探讨过表达Un51样激酶3（ULK3）介导胶质瘤相关癌基因同源基因1（Gli1）对膀胱癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响及其机制。方法:培养人膀胱癌T24细胞分为对照组、ULK3过表达组（ULK3+组）、Gli1过表达组（Gli1+组）、ULK3和Gli1过表达组（ULK3+/Gli1+组）、ULK3过表达和Gli1敲低组（ULK3+/Gli1-组），分别使用阴性对照试剂、过表达ULK3质粒、过表达Gli1质粒、shRNA敲低Gli1质粒对相应各组进行细胞转染 。收集转染后的各组细胞，采用细胞计数试剂盒（CCK）-8检测细胞的增殖能力，划痕实验检测细胞运动能力，Transwell实验检测细胞的迁移、侵袭能力，Western blotting检测LC3A/B、P62蛋白表达情况，荧光蛋白标记技术检测自噬小体LC3B蛋白表达情况。 结果:（1）对照组、ULK3+组、Gli1+组、ULK3+/Gli1+组、ULK3+/Gli1-组细胞培养0 h时OD值差异无统计学意义（ P=1.000），培养24、48、72 h时，ULK3+组、Gli1+组、ULK3+/Gli1+组、ULK3+/Gli1-组的OD值均大于对照组，差异均有统计学意义（ F=60.98、56.53、112.70， P值均<0.001）。（2）对照组、Gli1+组、ULK3+组、ULK3+/Gli1+组、ULK3+/Gli1-组细胞迁移数分别为（292.3±28.5）、（376.7±8.1）、（365.7±8.1）、（505.7±22.4）、（301.3±26.7）个，细胞侵袭数分别为（127.7±10.0、（185.0±11.5）、（191.3±8.0）、（278.3±11.0）、（128.7±4.0）个，24 h细胞迁移率分别为8.8%±0.2%、18.8%±0.3%、18.8%±0.4%、24.6%±0.4%、13.8%±0.3%，48 h细胞迁移率分别为14.9%±0.3%、30.3%±2.1%、29.8%±1.6%、50.1%±3.7%、24.9%±1.7%。ULK3+组、Gli1+组、ULK3+/Gli1+组、ULK3+/Gli1-组细胞迁移、侵袭数目，以及24、48 h细胞迁移率均大于对照组，差异均有统计学意义（ F=50.82、126.80、112.20、106.70， P值均<0.001）。（3）对照组、Gli1+组、ULK3+组、ULK3+/Gli1+组、ULK3+/Gli1-组细胞LC3A/B蛋白相对表达量分别是0.18±0.01、0.41±0.02、0.41±0.03、0.63±0.03、0.25±0.03，P62蛋白相对表达量分别为1.06±0.07、0.88±0.01、0.87±0.02、0.53±0.02、0.98±0.04；ULK3+组、Gli1+组、ULK3+/Gli1+组、ULK3+/Gli1-组LC3A/B蛋白的相对表达量均高于对照组，P62蛋白的相对表达量均低于对照组，差异均有统计学意义（ F=152.80、72.48， P值均<0.001）。（4）ULK3+组、Gli1+组、ULK3+/Gli1+组、ULK3+/Gli1-组自噬小体LC3蛋白荧光表达量均多于对照组。 结论:过表达ULK3可以增强人膀胱癌T24细胞增殖、迁移及侵袭能力，其机制可能是通过介导Gli1诱导了细胞自噬反应的增强。

目的:探讨雷帕霉素对高糖状态下肾小球系膜细胞自噬的影响。方法:将人肾小球系膜细胞(HMC)在恒温培养箱中培养，将细胞分为HMC组、低糖组、高糖组、甘露醇等渗组和雷帕霉素组。采用GFP-RFP-LC3标记各组细胞的自噬流；采用Western blot检测各组细胞的自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62的表达情况；采用ELISA法测定各组细胞的细胞Ⅳ型胶原纤维(Col Ⅳ)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LA)的含量。结果:高糖组的自噬溶酶体最少，HMC组、低糖组、甘露醇等渗组、雷帕霉素组的自噬溶酶体均较高糖组多，其中雷帕霉素组的自噬溶酶体最多。与HMC组、低糖组、甘露醇等渗组相比，高糖组的LC3-Ⅱ表达明显减少，LC3-Ⅰ表达明显增多，P62明显增多(均 P<0.05)。雷帕霉素组的LC3-Ⅱ表达较高糖组明显增多，而LC3-Ⅰ及P62表达明显减少(均 P<0.05)。高糖组的Col Ⅳ、HA、LA含量均较HMC组、低糖组和甘露醇等渗组明显升高，差异均有统计学意义(均 P<0.001)。雷帕霉素组的Col Ⅳ、HA、LA的含量均较高糖组明显下降，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:高糖状态可以抑制HMC自噬活性，增加细胞外基质的聚集，促进糖尿病肾病进展，而雷帕霉素可诱导细胞自噬的发生，减少肾小球系膜细胞系膜基质增生，进而抑制糖尿病肾病进展。

目的:观察缓激肽后处理对心肺复苏（CPR）大鼠的神经保护作用，并探讨其可能机制。方法:将48只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组（Sham组）、心搏骤停组（CA组）、缓激肽后处理组（BK组）、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）抑制剂Compound C+缓激肽后处理组（CP+BK组），每组最终取8只大鼠进行后续实验。采用窒息法诱导大鼠心搏骤停模型；Sham组仅给予动静脉置管、气管插管及机械通气等有创操作，未用窒息法诱导心搏骤停。心搏骤停前30 min，CP+BK组大鼠腹腔注射Compound C（250 μg/kg），其余各组大鼠经腹腔注射相同剂量的二甲亚砜（DMSO），自主循环恢复（ROSC）后48 h BK组和CP+BK组经腹腔注射缓激肽150 μg/kg，其余各组经腹腔注射相同剂量的生理盐水。ROSC后72 h用神经功能缺损评分（NDS）量表评价各组大鼠神经功能；采用免疫组化法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）、p62的表达；透射电镜下观察各组自噬小体形成情况；采用原位末端缺刻标记试验（TUNEL）检测各组海马CA1区神经元凋亡情况。结果:与Sham组比较，CA组NDS评分明显降低（分：60.75±5.80比80.00±0.00， P<0.01），LC3、p62蛋白表达量明显增多〔LC3（ A值）：1.04±0.64比0.40±0.14，p62（ A值）：2.75±0.57比0.36±0.12，均 P<0.05〕，自噬小体明显增多，细胞凋亡率明显升高〔（39.00±8.00）%比（3.87±1.90）%， P<0.05〕。与CA组比较，BK组NDS升高（分：67.75±6.32比60.75±5.80， P<0.05），LC3蛋白表达量明显升高（ A值：1.60±0.34比1.04±0.64， P<0.05），自噬小体数量增多，p62蛋白表达量及细胞凋亡率明显降低〔p62（ A值）：1.51±0.32比2.75±0.57，细胞凋亡率：（23.03±1.91）%比（39.00±8.00）%，均 P<0.05〕。与BK组比较，CP+BK组NDS降低（分：59.00± 8.19比67.75±6.32， P<0.05），自噬小体数量减少，自噬相关蛋白LC3表达量明显降低（ A值：0.62±0.41比1.60± 0.34， P<0.05），p62表达量和细胞凋亡率均明显升高〔p62（ A值）：3.50±0.47比1.51±0.32，细胞凋亡率：（44.53±10.15）%比（23.03±1.91）%，均 P<0.05〕。 结论:缓激肽后处理可以通过激活自噬、减少神经元凋亡，从而发挥神经保护作用。

目的:探讨间歇性热量限制对辐射所致小鼠认知功能障碍的作用及可能机制。方法:将36只7周龄c57BL/6J雄性小鼠按随机数表法分为假辐射+随意饮食组(sham-irradiation and ad libitum，Sham-AL)、辐射+随意饮食组(irradiation and ad libitum，IR-AL)、辐射+间歇性热量限制组(irradiation and intermittent fasting，IR-IF)，每组12只。采用新旧事物识别实验检测各组小鼠认知功能；Western blot分别检测小鼠海马自噬相关基因5(ATG5)、微管相关蛋白1轻链3-II(LC3II)、自噬接头蛋白P62、线粒体阴离子通道蛋白1(VDAC1)、白介素1(IL-1β)、突触囊泡膜蛋白(SYP)、突触蛋白1(SYN-1)、突触后致密物-95(PSD95)；免疫荧光法确定VDAC1在小鼠海马中定位。结果:与Sham-AL组新事物识别指数(30.02 ± 9.05)相比，IR-AL组小鼠新事物识别指数(-22.45 ± 16.76)下降，两组比较差异有统计学意义( t＝3.03， P<0.05)。与Sham-AL组相比，IR-AL组自噬标记蛋白ATG5和LC3II表达下降，抗自噬蛋白P62表达升高，VDAC1蛋白表达下降，IL-1β蛋白表达上升，SYP、SYN-1、PSD95蛋白表达降低( t＝2.49、2.19、2.40、3.47、2.87、2.25、2.17、2.31, P<0.05)。与IR-AL组新事物识别指数(-22.45 ± 16.76)相比，IR-IF组小鼠新事物识别指数(21.22 ± 5.62)上升，两组比较差异有统计学意义( t＝2.70， P<0.05)。与IR-AL组相比，IR-IF组自噬标记蛋白ATG5和LC3II表达上升，抗自噬蛋白P62表达降低，VDAC1蛋白表达升高，IL-1β蛋白表达下降，SYP、SYN-1、PSD95蛋白表达升高( t＝2.88、2.71、3.18、3.18、3.11、3.30、3.35、2.53, P<0.05)。免疫荧光显示，VDAC1与离子钙接头蛋白分子1(IBA-1，小胶质细胞标记物)和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP，星形胶质细胞标记物)共表达，但与神经元核抗原蛋白(NEUN，神经元标记物)不共表达。 结论:间歇性热量限制可改善小鼠放射性认知功能障碍，其机制可能与上调海马区VDAC1蛋白表达、诱导自噬发生，最终抑制炎症因子释放和保护神经元突触可塑性有关。

目的 探讨丙泊酚(Pro)通过叉头盒蛋白O1(Fox O1)/硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)信号通路介导自噬对高糖(HG)诱导心肌细胞损伤的影响.方法 将H9c2细胞分为空白组(5.5 mmol·L-1葡萄糖)、高葡萄糖(HG)组(30 mmol·L-1葡萄糖)、HG+Pro 组(30 mmol·L-1 葡萄糖+25 μmol·L-1Pro)、HG+Pro+阴性对照(OE NC)组(先转染 OE NC,再以 30 mmol·L-1 葡萄糖+25 μmol·L-1Pro处理)、HG+Pro+Fox O1过表达质粒(Fox O1-OE)组(先转染Fox O1-OE,再以30 mmol·L-1葡萄糖+25 μmol·L-1 Pro处理).用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法、原位末端转移酶标记技术(TUNEL)法、酶联免疫吸附试验(ELISA)、透射电镜、蛋白质印迹法(Western blot)分别检测细胞存活率、凋亡率、上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平以及自噬体、Fox O1/TXNIP及自噬蛋白表达水平变化.结果 空白组、HG组、HG+Pro组、HG+Pro+OE NC 组、HG+Pro+Fox O1-OE 组细胞活力分别为(100.00±0.00)％、(48.15±4.82)％、(79.66±7.98)％、(78.89±7.91)％和(49.22±4.93)％,凋亡率分别为(12.04±1.21)％、(42.34±4.25)％、(26.22±2.63)％、(27.02±2.71)％和(38.29±3.86)％,SOD 水平分别为(62.24±6.25)、(28.21±2.85)、(55.37±5.58)、(55.09±5.53)和(30.66±3.08)U·mg-1 pro,MDA 水平分别为(0.38±0.04)、(1.43±0.15)、(0.67±0.07)、(0.72±0.08)和(1.34±0.14)U·mg-1 pro,自噬体数量分别为(6.24±0.63)、(13.05±1.32)、(8.31±0.84)、(8.55±0.86)和(12.22±1.23)个,磷酸化 Fox O1(p-Fox O1)/Fox O1 比值分别为 0.34±0.04、0.86±0.09、0.48±0.05、0.43±0.05 和0.74±0.08,TXNIP 表达分别为 0.24±0.03、0.62±0.08、0.38±0.04、0.36±0.04和 0.58±0.06,Bcelin-1 表达分别为 1.12±0.12、0.53±0.06、1.02±0.11、1.05±0.11 和 0.62±0.07,p62 表达分 别 为 0.56±0.06、1.56±0.16、0.82±0.09、0.86±0.09 和 1.44±0.15.HG 组的上述指标与空白组比较,HG+Pro组的上述指标与HG组比较,HG+Pro+Fox O1-OE组的上述指标与HG+Pro+OE NC组比较,在统计学上差异均有统计学差异(均P＜0.05).结论 Pro通过抑制Fox O1/TXNIP信号通路抑制自噬,改善HG诱导心肌细胞损伤.

目的:探究锰诱导的BV2细胞炎症活化是否与线粒体自噬有关.方法:小鼠小胶质细胞BV2予以不同浓度锰暴露(0 μmol/L、50 μmol/L、100 μmol/L)12 h,并以1 μg/mL脂多糖(LPS)为阳性对照组;刃天青法检测细胞活性;荧光探针检测溶酶体数量及荧光强度变化;透射电镜观察自噬变化;共聚焦显微镜观察溶酶体和线粒体荧光共定位的程度;蛋白免疫印迹(western blotting)实验检测不同浓度锰暴露12h后细胞炎症蛋白NLRP3、自噬相关蛋白(p62、LC3-Ⅱ/Ⅰ)以及线粒体外膜蛋白VDAC1的表达水平;线粒体自噬抑制剂巴弗洛霉素A1预处理验证锰暴露对自噬流及上述炎症标志蛋白表达的影响.结果:BV2细胞染锰浓度≥50 μmol/L时,BV2细胞存活率下降,NLRP3表达上调(P<0.01),溶酶体数量及与线粒体共定位显著增加(P<0.05);锰暴露组VDAC1和自噬标志蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达水平下降,p62的蛋白表达水平升高(P<0.05);巴弗洛霉素A1预处理后,显著逆转除p62外的其他自噬标记蛋白表达(P<0.05).结论:50～100 μmol/L染毒剂量下,锰诱导BV2细胞炎症活化和线粒体自噬增加;巴弗洛霉素A1抑制线粒体自噬可促进锰暴露诱导的BV2细胞炎症活化.