目的:探索小鼠心肌细胞中哺乳动物不育系20样激酶1（mammalian sterile 20-like kinase 1，Mst-1）调控缺氧复氧（hypoxia reoxygenation，HR）诱导的心肌细胞自噬及凋亡机制。方法:采用酶消化法结合差速贴壁的方法培养小鼠乳鼠心肌细胞，通过缺氧24 h复氧6 h的方法建立HR模型。实验分组：对照组：正常培养的心肌细胞；Mst-1空病毒组：用重组慢病毒空载体转染心肌细胞48 h；Mst-1敲低组：用携带Mst-1小干扰RNA（siRNA）的重组慢病毒转染心肌细胞48 h；Mst-1过表达组：用携带Mst-1基因的重组慢病毒转染心肌细胞48 h；HR组：建立心肌细胞HR模型；Mst-1敲低+HR组：用携带Mst-1 siRNA的重组慢病毒转染心肌细胞后48 h建立心肌细胞HR模型；Mst-1过表达+HR组：用携带Mst-1基因的重组慢病毒转染心肌细胞后48 h建立心肌细胞HR模型。采用实时荧光定量RCR（qPCR）以及Western blot检测细胞中Mst-1 mRNA及蛋白相对表达量，免疫荧光染色检测心肌细胞标志物心肌肌钙蛋白T（cTnT），及细胞自噬体与自噬溶酶体变化，脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）法检测心肌细胞凋亡水平，Western blot检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）Ⅱ/LC3Ⅰ，P62及凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸酶剪切体（cleaved-caspase）9、半胱氨酸天冬氨酸酶前体（pro-caspase）9、cleaved-caspase-3、pro-caspase-3，以及髓细胞白血病1基因（MCL-1）的表达情况达。予以MCL-1抑制剂A1210477做回复实验，验证Mst-1通过调控MCL-1参与心肌细胞凋亡及自噬。结果:免疫荧光检测发现培养细胞表达心肌细胞特异性标志物cTnT；HR情况下心肌细胞中Mst-1表达增加，慢病毒转染可有效抑制或过表达细胞中Mst-1。HR组与Mst-1过表达+HR组心肌细胞内自噬体及自噬溶酶体含量低于对照组，而Mst-1敲低+HR组心肌细胞内自噬体及自噬溶酶体含量高于HR组（ P均<0.05）。TUNEL结果显示，HR组及Mst-1过表达+HR组中TUNEL阳性细胞比例高于对照组，而Mst-1敲低组+HR组中TUNEL阳性细胞比例低于HR组（ P均<0.05）。Western blot结果显示，与对照组比较，HR组及Mst-1过表达+HR组细胞中LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ值较低，P62与 cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3表达水平较高（ P均<0.05）；与HR组比较，Mst-1敲低+HR组中LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ值较高，P62与cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3表达水平较低（ P均<0.05）。HR与Mst-1过表达+HR组心肌细胞中磷酸化（P）MCL-1蛋白表达水平低于对照组，Mst-1敲低+HR组的P-MCL-1蛋白表达水平高于HR组（ P均<0.05）。回复实验显示抑制细胞中MCL-1可阻断Mst-1 siRNA 对细胞自噬及凋亡的调节作用。 结论:抑制心肌细胞中Mst-1的表达，可促进HR诱导的心肌细胞自噬，改善心肌细胞凋亡，该作用可能与其调控MCL-1表达相关。

目的:评价高浓度氢气对脓毒症小鼠心肌损伤及哺乳动物不育系20-样激酶1(Mst1)表达的影响。方法:清洁级健康雄性C57BL/6J小鼠105只，6~8周龄，体质量20~25 g，采用随机数字表法分为3组( n＝35)：假手术组(Sham组)、脓毒症组(SEP组)和脓毒症+高浓度氢气组(SEP+HCH组)。采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症小鼠心肌损伤模型。SEP+HCH组术后1和6 h时分别吸入高浓度(66.7%)氢气1 h。每组随机取20只小鼠，观察术后7 d生存情况。于术后24 h时深麻醉后取内眦血样，采用ELISA法测定TNF-α和IL-6浓度，随后处死取心脏组织，光镜下观察病理学结果，TUNEL法观察心肌细胞凋亡情况，Western blot法检测Mst1、动力相关蛋白1(Drp1)和线粒体融合蛋白2(Mfn2)的表达。 结果:与Sham组比较，SEP组术后7 d生存率降低，心肌病理学损伤评分、心肌细胞凋亡指数、TNF-α和IL-6浓度升高，Mst1和Drp1表达上调，Mfn2表达下调( P<0.05)；与SEP组比较，SEP+HCH组术后7 d生存率升高，心肌病理学损伤评分、心肌细胞凋亡指数、TNF-α和IL-6浓度降低，Mst1和Drp1表达下调，Mfn2表达上调( P<0.05)。 结论:吸入高浓度氢气可减轻脓毒症小鼠心肌损伤，其机制可能与下调Mst1表达，改善线粒体动力学，抑制心肌细胞凋亡有关。

目的:探讨长链非编码核糖核酸ZNRD1-AS1(lncRNA ZNRD1-AS1)在胃癌多药耐药(MDR)中的作用及机制。方法:采用24孔板体外培养胃癌MGC-803细胞株，设空白对照组、MDR组、空载质粒组、lncRNA ZNRD1-AS1过表达组、微小核糖核酸-375模拟物(miR-375 mimic)组及联合干预组。除空白对照组以外，均采用阿霉素梯度浓度法建立MDR株。建立成功以后，lncRNA ZNRD1-AS1过表达组和miR-375 mimic组分别采用慢病毒转染法转染lncRNA ZNRD1-AS1过表达质粒和miR-375 mimic，空载质粒组转染空载质粒与模拟物对照(mimic NC)。共培养48 h，采用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测lncRNA ZNRD1-AS1和miR-375表达，采用蛋白质印迹法(Western blot)实验检测Yes相关蛋白1(YAP1)、哺乳动物不育系20样激酶1(Mst1)、大肿瘤抑制基因-1(Lats1)的蛋白表达，采用噻唑蓝(MTT)实验和流式细胞实验检测细胞的增殖活力与凋亡率，Transwell实验检测MGC-803细胞侵袭能力。结果:各组之间的lncRNA ZNRD1-AS1、miR-375、YAP1表达水平差异均有统计学意义( F＝60.465、75.695、63.441，均 P<0.05)；细胞增殖活力、凋亡率与侵袭数目差异也有统计学意义( F＝ 26.818、63.854、16.323，均 P<0.05)。MDR组lncRNA ZNRD1-AS1和YAP1表达水平分别为1.736±0.084和0.825±0.135，高于对照组(1.025±0.036和0.155±0.02)，miR-375表达为0.054±0.018，低于对照组(0.128±0.028)；细胞增殖活力和迁移数目分别为0.855±0.026和152.5±20.5，高于对照组(0.652±0.015和85.0±15.5)，凋亡率为(3.85±1.02)%，低于对照组[(6.55±1.05)%， P<0.05]。lncRNA ZNRD1-AS1过表达组lncRNA ZNRD1-AS1和YAP1表达水平分别为6.582±1.035和1.256±0.185，均高于MDR组，miR-375表达水平为0.015±0.011，低于MDR组；细胞增殖活力和迁移数目分别为0.987±0.030和(202.5±32.5)个，高于MDR组，凋亡率为(2.03±0.62)%，低于MDRMDR组( P<0.05)。miR-375 mimic组lncRNA ZNRD1-AS1和YAP1表达水平分别为0.225±0.086和0.056±0.035，均低于MDR组，miR-375表达水平为32.524±5.254，高于MDR组；细胞增殖活力和迁移能力为0.562±0.085和(80.5±14.6)个，低于MDR组，凋亡率为(18.25±2.10)%，高于MDR组( P<0.05)。共干预组各个指标的变化水平介于lncRNA ZNRD1-AS1过表达组与miR-375 mimic组之间，与两组比较差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:lncRNA ZNRD1-AS1能够通过miR-375调节胃癌细胞的行为学特征，从而促进MDR，其机制可能与YAP1介导的Hippo信号通路有关。

目的 通过病例-对照关联研究的方法,在包头地区汉族人群中探讨哺乳动物不育系 20 样激酶 1(Mammalian sterile 20-like kinase 1,MST1)基因多态性及其单体型与结直肠癌、直肠癌和结肠癌发病风险的关联性.方法 收集经病理学确诊的结直肠癌患者390 例和正常体检人群413 例,留取2ml外周血用于后续基因分型;根据美国国家生物技术信息中心-人类单体型图数据库提供的中国汉族人群遗传多态性数据筛选MST1 基因的单核苷酸多态性(SNP);采用Taqman探针法进行基因分型;Logistic回归计算各SNP在共显性、显性、超显性、隐性四种遗传模型下与结直肠癌、直肠癌和结肠癌发病风险之间的关联性.结果 共筛选出 4 个MST1 基因SNP,即rs8000、rs2234197、rs2267853、rs6073629,其中SNP rs2234197 与直肠癌发病风险有关,相对于 GG+AA基因型,AG基因型可降低直肠癌发病风险,OR[95%置信区间(CI)]=0.657(0.442～0.976);SNP rs8000 与结肠癌发病风险有关,相对于TT+GT基因型,GG基因型可降低结肠癌发病风险[OR(95%CI)=0.425(0.182～0.992)].结论 MST1 基因SNP rs2234197 AG基因型和SNP rs8000 GG基因型可能分别是直肠癌和结肠癌的保护性因素.

目的 研究白头翁汤含药血清对口腔扁平苔藓上皮细胞生物活性及Hippo信号通路的作用机制.方法 将体外建立的口腔扁平苔藓炎症模型细胞采用数字随机法分为4组,对照组、空白组、低剂量组、高剂量组.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HOK细胞Toll样受体(TLR)4、肿瘤坏死因子(TNF)-α及核因子(NF)-κB mRNA表达水平.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HOK细胞中白细胞介素(IL)-6、IL-8水平;Western印迹检测HOK细胞中转录共激活因子相关蛋白(YAP)、哺乳动物不育系20样激酶(Mst1)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Lats)1/2蛋白表达.结果 与对照组相比,空白组HOK细胞增殖明显降低,凋亡率、TLR4、TNF-α、NF-κB mRNA、IL-6、IL-8、YAP、Mst1、Lats1/2表达明显升高(P＜0.05).与空白组相比,低剂量组HOK细胞增殖明显升高,凋亡率、TLR4、TNF-α、NF-κB mRNA、IL-6、IL-8、YAP、Mst1、Lats1/2表达明显降低(P＜0.05).与低剂量组相比,高剂量组HOK细胞增殖明显升高,凋亡率、TLR4、TNF-α、NF-κB mRNA、IL-6、IL-8、YAP、Mst1、Lats1/2表达明显降低(P＜0.05).结论 白头翁汤通过降低炎性水平抑制人口腔黏膜角质形成细胞凋亡、促进其增殖,改善病情严重程度,其作用机制与调控Hippo信号通路有关.

目的 分析剖宫产术后感染产妇炎症因子和T淋巴细胞亚群水平变化及对Hippo信号通路的影响.方法 纳入2020年9月-2022年9月于河南省生殖妇产医院、河南省妇幼保健院就诊的剖宫产术后感染产妇158例和术后未感染产妇173例,分别纳入感染组与非感染组,分析剖宫产术后感染病原菌分布及对炎症因子和T淋巴细胞亚群及Hippo信号通路基因水平的影响.结果 158例剖宫产术后感染产妇共分离出病原菌171株,其中革兰阴性菌118株,革兰阳性菌44株,真菌9株,占比分别为69.01％、25.73％、5.26％;与非感染组比较,感染组血清白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、可溶性髓系细胞触发受体-1(sTREM-1)水平及外周血Hippo信号通路基因哺乳动物不育系20样激酶1(mst 1)、Tafazzin蛋白(taz)、Yes相关蛋白(yap)表达水平均升高(P＜0.05),外周血CD3+、CD4+、CD3+CD8+水平降低(P＜0.05);与普通感染产妇比较,严重感染产妇血清IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α、sTREM-1水平与外周血Hippo信号通路基因mst1、taz、yap表达水平更高(P＜0.05),外周血CD3+、CD4+、CD3+CD8+水平更低(P＜0.05).结论 剖宫产术后感染病原菌以革兰阴性菌为主,感染可导致血清IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α、sTREM-1及外周血Hippo信号通路基因mst1、taz、yap表达水平升高,外周血CD3+、CD4+、CD3+CD8+水平降低.

目的 探究在肥胖合并妊娠期糖尿病产妇中,高血糖、高血脂促进胎盘滋养层细胞凋亡的机制.方法 留取天津医科大学第二医院产科2020年1月至2023年1月收治的健康(NC)产妇、妊娠期糖尿病(GDM)产妇、肥胖(OB)产妇和肥胖合并妊娠期糖尿病(OB+GDM)产妇各20例的胎盘,分别予HE染色、免疫组化检测胎盘病理变化及凋亡相关蛋白的表达,通过Western印迹检测哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)、B细胞淋巴瘤-2基因(BCL-2)、半胱氨酸蛋白水解酶3(CASP3)等凋亡相关蛋白的表达.结果 胎盘HE染色发现,高血糖、高血脂可导致胎盘合体滋养细胞和细胞滋养细胞相对减少且大小不一;TUNEL法发现,高血糖和高血脂导致滋养层细胞凋亡增加,以合体滋养细胞凋亡为主,OB+GDM组凋亡最为严重;免疫组化检测发现,高血糖、高血脂可以诱导胎盘凋亡相关蛋白MST1、JNK的表达增加;Western印迹检测发现,MST1-JNK-BAX-CASP3凋亡调控通路可能参与胎盘滋养层细胞凋亡过程.结论 肥胖合并妊娠期糖尿病产妇的胎盘滋养层细胞可能在高血糖、高脂血症形成的内环境下,过度产生活性氧,通过MST1-JNK-BAX-CASP3凋亡调控通路介导胎盘滋养层细胞的凋亡,从而影响胎盘功能.

目的 探究虎杖苷(PD)对缺氧性肺动脉高压(HPH)新生大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖与凋亡的影响及其作用机制.方法 将新生大鼠随机分为6组:对照组、模型组、PD低剂量组、PD中剂量组、PD高剂量组、PD高剂量+Hippo通路抑制剂(PD高剂量+XMU-MP-1)组,每组10只.缺氧2周后,检测各组大鼠右心室收缩压(RVSP)和右心室肥厚指数(RVHI),苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理学变化,并计算肺动脉管壁厚度占总厚度的百分比(WT％)和管壁面积占总面积的百分比(WA％).分离各组新生大鼠PASMCs,分为NC组、低氧(Hypoxia)组、PD低剂量组、PD中剂量组、PD高剂量组、PD高剂量+XMU-MP-1组.CCK-8和EdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹(Western blot)检测肺组织和PASMCs中Yes相关蛋白1(YAP1)、PDZ结合域的转录共刺激因子信号通路(TAZ)、哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)蛋白表达.结果 与对照组相比,模型组大鼠肺动脉管壁明显增厚,管腔变窄,RVSP、RVHI、WT％、WA％、YAP1、MST1、TAZ蛋白表达显著升高(均P＜0.05);与模型组相比,PD低、中、高剂量组大鼠肺动脉增厚减少,管腔变大,RVSP、RVHI、WT％、WA％、YAP1、MST1、TAZ蛋白表达显著降低,且PD各组间差异存在剂量依赖性(均P＜0.05);XMU-MP-1可逆转这一结果.与NC组相比,Hypoxia组细胞A450nm值、EdU阳性率、YAP1、MST1、TAZ、Bcl-2蛋白表达显著升高,凋亡率、Bax蛋白表达显著降低(均P＜0.05);与Hypoxia组相比,PD低、中、高剂量组细胞A450nm值、EdU阳性率、YAP1、MST1、TAZ、Bcl-2蛋白表达显著降低,凋亡率、Bax表达显著升高,且PD各组间有剂量依赖性(均P＜0.05);XMU-MP-1可逆转这一结果.结论 PD可能通过抑制YAP1/TAZ信号通路抑制HPH新生大鼠PASMCs增殖,促进凋亡.

目的 制备髓系(包括巨噬细胞和粒细胞)特异敲除哺乳动物不育系20 样激酶 1(MST1)基因小鼠,为研究巨噬细胞MST1 在临床相关疾病发生中的作用及机制提供动物模型.方法 利用 MST1 基因携带 loxP 位点的小鼠(Mst1flox/flox)和髓系细胞特异表达LysM-Cre小鼠杂交构建巨噬细胞特异性敲除 MST1 小鼠(Mst1flox/floxLysM-Cre+,即Mst1ΔM/ΔM);通过聚合酶链式反应(PCR)分别扩增loxP位点和Cre基因进行基因型鉴定;通过定量PCR以及免疫荧光验证MST1 在巨噬细胞中的敲除效率;通过流式细胞术检测肝脏主要免疫细胞群.结果 Mst1flox/floxLysM-Cre+,即Mst1ΔM/ΔM为巨噬细胞特异性敲除 MST1 小鼠基因型;qPCR和免疫荧光检测表明骨髓来源的巨噬细胞和腹腔巨噬细胞的MST1 敲除效率达70%以上;流式检测表明敲除巨噬细胞MST1 基因对小鼠肝脏的主要免疫细胞群无明显影响.结论 成功构建巨噬细胞特异敲除MST1 小鼠模型,为进一步研究巨噬细胞 MST1 在临床相关疾病中的作用及机制奠定了基础.

目的 探讨结直肠癌患者术后腹腔感染病原菌和危险因素及其HIPPO通路基因.方法 回顾性分析2019年5月-2022年11月东营市东营区人民医院收治的198例结直肠癌术后患者的临床资料,根据腹腔感染情况分为感染组34例和未感染组164例;统计腹腔感染病原菌,比较两组HIPPO通路基因及临床资料,并予以多因素Logistic回归分析法分析结直肠癌患者术后腹腔感染的危险因素.结果 34例感染患者共培养分离病原菌37株,其中革兰阴性菌28株占75.68％,革兰阳性菌8株占21.62％,真菌1株占2.70％,以大肠埃希菌为主;多因素Logistic回归分析结果显示,合并糖尿病、引流管留置时间、术前肠梗阻是结直肠癌患者术后腹腔感染的危险因素(OR=1.726、1.960、2.683,P＜0.05);感染组Yes相关蛋白(Yap)、PDZ结合基序转录共激活因子(TAZ)、哺乳动物不育系20样激酶1(mst1)信使核糖核酸(mRNA)水平均高于未感染组(P＜0.05).结论 结直肠癌根治术后腹腔感染的风险较高,HIPPO通路可能与腹腔感染的发生有关,而合并糖尿病、引流管留置时间、术前肠梗阻是结直肠癌患者术后腹腔感染的危险因素,且病原菌以革兰阴性菌为主,临床可据此给予针对性的预防及抗菌治疗.