目的:探讨外泌体在草酸钙晶体所致肾损伤及肾间质纤维化中的作用。方法:C57小鼠30只(6～8周龄，体重24～26 g)，其中24只野生型(WT)小鼠，6只纯合子Rab27a -/-(KO)小鼠。WT小鼠随机分为空白对照(NC)组、造模1周组、造模2周组、造模4周组(WT造模组)，Rab27a -/-小鼠为KO造模组，每组6只，1.25%乙二醇灌胃，分别持续给药0、1、2、4及4周，构建肾结石小鼠动物模型。苏木精-伊红(HE)染色评估肾小管损伤，Von-kossa染色评估结石晶体形成，Masson染色评估肾间质胶原纤维沉积，免疫组织化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(Fibronectin)及外泌体标志物白细胞分化抗原63(CD63)表达，两组间比较采用 t检验。 结果:HE染色显示，在野生型小鼠中，造模1周、造模2周及造模4周肾小管损伤逐渐加重(0.57±0.18比1.30±0.19， t＝6.248， P<0.05；1.30±0.19比2.30±0.28， t＝6.642， P<0.05)，Von-kossa染色显示，肾脏晶体形成逐渐增加(1.42±0.61比5.24±0.55， t＝10.410， P<0.05；5.24±0.55比10.01±0.94， t＝9.946， P<0.05)，差异均有统计学意义。免疫组织化学染色显示，造模1周、造模2周及造模4周CD63阳性表达面积逐渐增加(1.33±0.34比4.92±0.71， t＝10.250， P<0.05；4.92±0.71比8.55±1.04， t＝6.448， P<0.05)差异有统计学意义。WT造模组Masson染色胶原纤维沉积面积高于NC组(8.57±0.84比0.60±0.34， t＝19.660， P<0.05)，α-SMA阳性表达面积高于NC组(11.30±1.04比1.63±0.55， t＝18.430， P<0.05)，Fibronectin阳性表达面积高于NC组(12.85±0.68比2.78±0.55， t＝25.810， P<0.05)，差异均有统计学意义。WT造模组Masson染色胶原纤维沉积面积高于KO造模组(8.57±0.84比5.53±0.74， t＝6.082， P<0.05)，α-SMA阳性表达面积高于KO造模组(11.30±1.04比6.63±0.91， t＝7.553， P<0.05)，Fibronectin阳性表达面积高于KO造模组(12.85±0.68比8.80±0.93， t＝7.875， P<0.05)，差异均有统计学意义。 结论:肾结石形成过程中，肾小管损伤加重，外泌体分泌增加。同时，抑制外泌体分泌能减轻草酸钙晶体诱导的肾脏纤维化。

草酸钙结石是肾结石最主要的类型。草酸钙晶体或高草酸尿诱导的肾小管上皮细胞损伤和程序性死亡是草酸钙结石形成的关键因素。肾小管上皮细胞程序性死亡可为草酸钙晶体提供附着位点、参与构成结石成分和加剧周边组织损伤。多种细胞程序性死亡模式可同时参与损伤过程，调节其中串联点，有望达到多层级调控。本文就肾小管上皮细胞程序性死亡与草酸钙结石形成机制间的联系，以及不同的程序性死亡模式参与草酸钙结石发病机制的相关研究进行总结和探讨。

目的:探讨草酸钙(CaOx)晶体诱导人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)发生铁死亡的机制。方法:2021年3—9月使用CaOx晶体悬浊液干预HK-2细胞，构建HK-2-CaOx反应模型。设置CaOx晶体浓度分别为0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mmol/L，干预HK-2细胞24 h，干预完成后提取HK-2细胞蛋白。采用最佳干预浓度的CaOx晶体干预HK-2细胞，分别于干预后0、3、6、9、12、24、48 h提取细胞蛋白。蛋白质印迹法检测细胞内铁死亡标志蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达情况。用铁死亡诱导剂爱拉斯汀(Erastin)和铁死亡抑制剂3-氨基-4-环己基氨基苯甲酸乙酯(Fer-1)干预HK-2细胞以调控细胞内铁死亡水平。将HK-2细胞分为4组：正常对照组(NC组)，无干预处理，单纯使用完全培养基培养；CaOx晶体刺激组(CaOx组)，使用含4.0 mmol/L CaOx晶体的完全培养基培养；CaOx晶体+Erastin处理组(CaOx+Erastin组)，使用含10.0 μmol/L Erastin和4.0 mmol/L CaOx晶体的完全培养基培养；CaOx晶体+Fer-1处理组(CaOx+Fer-1组)，使用含1.0 μmol/L Fer-1和4.0 mmol/L CaOx晶体的完全培养基培养。培养24 h后，采用蛋白质印迹法和免疫荧光技术检测GPX4、长链脂酰辅酶A合成酶4 (ACSL4)和溶质载体家族7成员11(SLC7A11)在HK-2细胞内的表达情况；检测HK-2细胞内谷胱甘肽含量；采用DCFH-DA荧光染色法观察HK-2细胞活性氧(ROS)表达情况。通过光学显微镜观察各组HK-2细胞内CaOx黏附情况，DAPI染色检测HK-2细胞核损伤情况。结果:采用0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mmol/L浓度CaOx晶体干预24 h后，细胞中GPX4的表达量分别为5.67±1.05、5.60±0.02、4.99±0.94、4.82±0.93、4.50±0.70、4.14±0.53、0.97±0.53，4.0 mmol/L组与0 mmol/L组相比差异有统计学意义( P＝0.026)。选用4.0 mmol/L作为最佳浓度干预细胞，干预0、3、6、9、12、24、48 h后细胞中GPX4的表达量分别为11.73±1.29、11.68±1.32、11.72±1.30、10.97±1.28、10.63±1.21、8.79±1.10、8.03±1.06，24 h组与0h组相比差异有统计学意义( P＝0.090)。CaOx+Erastin组与NC组相比，ACSL4表达量(9.71±0.68与3.96±0.17， P<0.01)升高；SLC7A11(5.76±1.31与9.18±1.54， P＝0.001)和GPX4(3.61±0.25与9.26±0.13， P<0.01)表达量降低；CaOx+Fer-1组与CaOx组相比，GPX4(7.52±0.23与3.61±0.25， P<0.01)、SLC7A11(7.85±1.34与5.76±1.31， P＝0.012)表达量升高，ACSL4(5.84±0.62与9.71±0.68， P＝0.002)表达量显著降低。CaOx+Erastin组与CaOx组相比，GPX4(2.71±0.18与3.61±0.25， P＝0.001)、SLC7A11(3.82±1.60与5.75±1.31， P＝0.017)表达量显著降低，ACSL4(11.15±0.44与9.71±0.68， P<0.01)表达量升高。NC组、CaOx组、CaOx+Fer-1组、CaOx+Erastin组的谷胱甘肽含量分别为(81.88±4.02)、(53.38±3.53)、(68.26±4.55)、(38.22±2.95)mmol/L；DCFH-DA荧光染色强度分别为(22.72±3.73)、(63.36±5.17)、(82.38±6.25)、(45.32±4.33)；免疫荧光强度分别为(50.36±4.23)、(31.63±2.86)、(23.36±3.74)、(39.89±3.35)，CaOx组与NC组、CaOx+Fer-1组、CaOx+Erastin组相比差异均有统计意义( P<0.05)。DAPI染色计算NC组、CaOx组、CaOx+Fer-1组、CaOx+Erastin组细胞核损伤比例分别为2.85%、11.96%、8.76%、16.27%。 结论:CaOx晶体可以通过增加HK-2细胞内氧化应激水平进而诱导HK-2细胞发生铁死亡。

目的:对比金钱草与广金钱草抑制大鼠肾草酸钙结石的具体机制与作用效果。方法:54只SPF级SD雄性大鼠适应性喂养1周至体重180~200 g，使用乙二醇灌胃法建立SD大鼠肾草酸钙结石模型，而后将大鼠按照随机数字表法分为9组处理并进行对照，分别为健康对照组(A组)，阳性对照组(建模组，B组)，金钱草低、中、高剂量组(C1、C2、C3组，共3组)，广金钱草低、中、高剂量组(D1、D2、D3组，共3组)，疗效对照组(枸橼酸氢钾钠组，E组)，每组各6只。4周后收集标本测定各组大鼠血尿生化指标，并行Von Kossa染色检测肾草酸钙晶体，在偏振光显微镜下观察大鼠肾组织草酸钙结晶沉积情况，利用测算照片中阳性面积百分比与相关血尿生化指标判断两者药效差异。计量资料以均数±标准差( ± s)表示，组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用SNK- q检验；结晶形成情况组间比较采用Kruskal-Wallis检验。 结果:与阳性对照组相比，高剂量的广金钱草相对金钱草能显著降低肾草酸钙结石大鼠血肌酐水平，应用金钱草后血肌酐水平为(86.70±11.49) μmol/L，应用广金钱草后血肌酐水平为(70.72±9.08) μmol/L，两者差异有统计学意义( P<0.01)；高剂量金钱草、广金钱草均能显著升高尿镁水平，降低血尿素水平，两者相比差异无统计学意义( P>0.05)；与阳性对照组相比，给予高剂量金钱草( P<0.000 1)与高剂量广金钱草( P<0.000 1)均能显著抑制大鼠肾草酸钙晶体形成，保护大鼠肾脏，两者作用效果相比差异无统计学意义( P>0.05)；给予金钱草与广金钱草均未能观察到显著升高尿pH值与显著降低尿钙、尿草酸、24 h尿量、血钙、血磷、血镁、血尿酸和肾草酸含量的效果。 结论:广金钱草抑制大鼠肾草酸钙结石发生的功效优于金钱草，对肾功能具有更好的保护作用。

草酸钙结石是最常见的肾结石。草酸钙肾结石的草酸钙晶体在体内或体外实验中晶体形成的过程目前仍未完全阐明。晶体成核、生长和聚集的每一环节都受到尿液内大分子物质及肾小管上皮细胞的影响，并且晶体也会反过来作用和影响肾小管上皮细胞。这种晶体-细胞交互作用是肾结石形成的重要过程。本文综述了草酸钙晶体形成过程中的物理化学变化和草酸钙晶体-肾小管上皮细胞的交互作用方面的文献，以期总结草酸钙晶体与肾小管上皮细胞交互作用的研究进展。

目的:比较断层红外光谱法与常规红外光谱法对较大体积泌尿系结石成分分析结果的一致性。方法:采用清华大学附属北京清华长庚医院2019年1月至2021年6月收治的105例患者的术后泌尿系结石标本，其中肾结石81例(77.14%)，输尿管结石16例(15.24%)，膀胱结石8例(7.62%)。所有结石术前影像学检查测量最大径均≥0.8 cm。84例经皮肾镜碎石取石术和输尿管镜碎石取石术后标本，以结石碎块为主，采用常规红光谱法随机多点取样进行结石成分分析和复测。2020年11月1日后通过腹腔镜切开取石术或标准通道经皮肾镜取石术中利用网篮抓取获得的21例肾结石标本，术后测量最大径≥0.8 cm。根据术中所见，此21例取材时尽量选择包含完整分层构造的标本。此21例标本均分别采用常规红外光谱法和断层红外光谱法分析结石成分和复测。断层红外光谱法即取2个相对最大的同轴断面，断面垂直间距>2 mm，根据第1个断面的形态学分层进行多点取样，若断面无明显分层结构，则由中心向外周均匀样2~3处；若断面有明显分层结构，则依据分层，每层取样1处，每次取样材料分别进行红外光谱法分析，多点分析结果汇总为1次断层红外光谱法分析结果，取同一标本中另一同轴断面进行复测。记录21例标本结石成分的立体分布特征，比较常规红外光谱法、断层红外光谱法对同一样本结石成分分析结果一致性。结果:本研究105例的常规红外光谱法成分分析结果一致率为56.19%(59/105)，断层红外光谱法两次检测结果一致率为80.95%(17/21)，两种方法的一致性差异有统计学意义(χ 2＝4.447， P＝0.035)。21例标本的常规红外光谱法结果一致率为38.10%(8/21)，低于断层红外光谱法的一致率(χ 2＝7.814， P＝0.005)。在成分立体分布特征方面，5种常见结石成分的颜色和晶体形态各有特点，结石断面可观察到分层结构。结石成分相同时，结石仍可表现出不同的形态。部分复合成分结石中可观察到由中心至边缘不同分层间成分占比的趋势性变化。 结论:在对较大体积泌尿系结石进行成分分析时，断层红外光谱法的复测一致率高于常规红外光谱法。结石成分的立体分布具有一定的特征性表现。

目的:探讨C-X-C趋化因子受体4(CXCR4)在小鼠草酸钙晶体致肾损害和纤维化中的作用和机制。方法:2021年6月将15只雄性C57/BL6小鼠按随机数字表法分为对照组5只、模型组5只、AMD3100干预组5只。模型组和AMD3100干预组连续7 d腹腔注射乙醛酸水溶液(100 mg/kg)制备草酸钙结石动物模型。AMD3100干预组同时连续7 d腹腔注射AMD3100(1 mg/kg)。对照组连续7 d腹腔注射与模型组等量生理盐水。处理7 d后取各组小鼠外周血测定血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)水平评估肾功能；同时取左侧肾脏行HE、Von-Kossa、Picrosirius Red染色，观察肾组织的病理改变；采用免疫组化法染色和蛋白质印迹法检测CXCR4、转化生长因子β1(TGF-β1)的表达水平；采用蛋白质印迹法检测PI3K/AKT通路相关蛋白的表达水平。结果:生化指标检测结果显示，模型组较对照组血清Scr[(108.03±13.56)μmol/L与(39.50±4.48)μmol/L， P<0.01]和BUN[(5.66±0.48)mmol/L与(0.77±0.10)mmol/L， P<0.01]水平显著上升；AMD3100干预组较模型组Scr[(65.77±3.27)μmol/L与(108.03±13.56)μmol/L， P<0.05]和BUN[(2.97±0.44)mmol/L与(5.66±0.48)mmol/L， P<0.05]水平显著下降。病理检查结果显示，模型组较对照组肾组织的肾小管明显扩张，伴炎性细胞浸润，同时出现大量草酸钙晶体及胶原纤维沉积；AMD3100干预组较模型组肾脏的损伤程度、草酸钙晶体及胶原纤维沉积均显著缓解。蛋白质印迹法检测结果显示，模型组较对照组CXCR4(0.639±0.019与0.158±0.012， P<0.01)和TGF-β1(0.698±0.018与0.314±0.015， P<0.05)的相对表达量明显增多；AMD3100干预组较模型组CXCR4(0.322±0.231与0.639±0.019， P<0.05)和TGF-β1(0.445±0.017与0.698±0.018， P<0.05)的相对表达量明显下降。免疫组化染色检查结果显示各组的CXCR4和TGF-β1表达趋势与蛋白质印迹法检测结果一致。蛋白质印迹检测结果显示，模型组较对照组p-PI3K(0.613±0.016与0.213±0.011， P<0.01)和p-AKT(0.149±0.013与0.047±0.014， P<0.01)的相对表达量明显增多；AMD3100干预组较模型组p-PI3K(0.292±0.020与0.613±0.016， P<0.05)和p-AKT(0.098±0.021与0.149±0.013， P<0.05)的相对表达量明显下降。 结论:CXCR4通过靶向PI3K/AKT通路抑制小鼠草酸钙晶体导致的肾损伤和间质纤维化。

目的:探讨左卡尼汀对草酸钙诱导肾小管上皮细胞(HK-2)铁死亡的影响。方法:采用蛋白质印迹法检测不同浓度(0、2、4、8 mmol/L)草酸钙对HK-2细胞铁死亡相关蛋白长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)、胱氨酸转运蛋白系统(XCT)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)表达的影响，筛选实验最适的草酸钙浓度。将HK-2细胞分为4组：①对照组，细胞贴壁后用正常培养基培养12 h，然后继续用正常培养基；②左卡尼汀组，细胞贴壁后用含5 mmol/L左卡尼汀的培养基预处理12 h，然后更换为含有5 mmol/L左卡尼汀的培养基；③草酸钙组，细胞贴壁后用正常培养基培养12 h，然后更换为含有最适浓度草酸钙的培养基；④草酸钙+左卡尼汀组，细胞贴壁后用含5 mmol/L左卡尼汀的培养基预处理12 h，然后更换为含有5 mmol/L左卡尼汀和最适浓度草酸钙的培养基。4组更换培养基后继续培养24 h，收集细胞或上清液，采用蛋白质印迹法检测铁死亡相关蛋白醌氧化还原酶(NQO1)、ACSL4、XCT、GPX4蛋白表达水平。采用相应试剂盒分别检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛水平；活性氧试剂盒检测细胞活性氧水平；二价铁离子探针检测细胞内铁离子蓄积情况。采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞损伤程度。采用透射电镜观察线粒体损伤情况。对细胞行DAPI染色观察细胞核损伤情况；行苏木素染色观察草酸钙晶体黏附情况。结果:蛋白质印迹法检测结果显示，0、2、4、8 mmol/L草酸钙组的ACSL4蛋白表达分别为0.37±0.16、0.68±0.16、0.73±0.09、0.89±0.03，XCT蛋白表达分别为1.11±0.10、0.91±0.14、0.83±0.09、0.80±0.07，GPX4蛋白表达分别为1.23±0.13、0.99±0.17、0.81±0.05、0.72±0.06，与0 mmol/L组相比，2、4、8 mmol/L组ACSL4蛋白表达升高，XCT、GPX4蛋白表达降低，差异均有统计学意义( P<0.05)，其中4 mmol/L组与0 mmol/L组比较差异更显著( P<0.01)，故将4 mmol/L作为最适浓度进行后续实验。对照组、左卡尼汀组、草酸钙组、草酸钙+左卡尼汀组的NQO1水平分别为0.36±0.06、0.54±0.05、0.76±0.07、0.90±0.03，左卡尼汀组与对照组比较差异有统计学意义( P<0.05)，草酸钙组与对照组比较差异有统计学意义( P<0.01)，草酸钙+左卡尼汀组与草酸钙组比较差异有统计学意义( P<0.05)；ACSL4水平分别为0.66±0.10、0.58±0.08、0.99±0.03、0.77±0.09，XCT水平分别为0.93±0.08、0.85±0.07、0.76±0.06、0.99±0.05，GPX4水平分别为1.10±0.09、1.09±0.09、0.85±0.03、0.99±0.02，左卡尼汀组与对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)，草酸钙组与对照组比较差异有统计学意义( P<0.01)，草酸钙+左卡尼汀组与草酸钙组比较差异有统计学意义( P<0.05)。对照组、左卡尼汀组、草酸钙组、草酸钙+左卡尼汀组SOD水平分别为(100.00±5.79)%、(105.80±3.26)%、(44.74±7.60)%、(85.01±5.15)%，GSH水平分别为(100.00±4.73)%、(107.10±5.48)%、(53.49±3.98)%、(81.18±5.48)%，丙二醛水平分别为(100.00±2.36)%、(98.00±11.10)%、(129.11±2.59)%、(113.35±5.79)%，左卡尼汀组与对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)，草酸钙组与对照组比较差异有统计学意义( P<0.01)，草酸钙+左卡尼汀组与草酸钙组比较差异有统计学意义( P<0.05)。对照组、草酸钙组、草酸钙+左卡尼汀组活性氧荧光强度分别为(63.98±9.41)AU、(145.41±8.39)AU、(85.37±4.51)AU，亚铁离子荧光强度分别为(39.77±0.68)AU、(68.40±3.14)AU、(48.60±4.30)AU，草酸钙组与对照组比较差异有统计学意义( P<0.01)，草酸钙+左卡尼汀组与草酸钙组比较差异有统计学意义( P<0.01)。对照组、左卡尼汀组、草酸钙组、草酸钙+左卡尼汀组LDH水平分别为(100.00±5.37)%、(99.50±6.38)%、(153.77±6.06)%、(132.50±5.58)%，左卡尼汀组与对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)，草酸钙组与对照组比较差异有统计学意义( P<0.01)，草酸钙+左卡尼汀组与草酸钙组比较差异有统计学意义( P<0.05)。透射电镜检查结果显示，相较于对照组，草酸钙组的线粒体皱缩，嵴断裂或消失，可见明显的双层膜结构；相较于草酸钙组，草酸钙+左卡尼汀组线粒体皱缩情况减轻，嵴相对增多，个别可见双层膜结构。DAPI染色结果显示，相较于对照组，草酸钙组部分细胞核损伤明显加重；相较于草酸钙组，草酸钙+左卡尼汀组细胞核损伤明显减轻。晶体黏附实验结果显示，相较于对照组，草酸钙组草酸钙晶体呈黑色颗粒状黏附于细胞，汇聚成团；相较于草酸钙组，草酸钙+左卡尼汀组黑色颗粒黏附于细胞的情况明显减轻。 结论:左卡尼汀能够减轻草酸钙诱导HK-2细胞的氧化应激和铁死亡，从而减轻细胞损伤和晶体黏附。

肾结石因其高发病率，一直以来都是一个全球性的公共卫生问题。引起肾结石最常见的化学成分是草酸钙，其通过肾间质细胞外基质的结晶形成、晶体生长、聚集、晶体与细胞黏附、侵袭等过程形成结石病灶。在这些过程中，晶体与细胞的相互作用至关重要。蛋白质组学已广泛应用于肾结石研究中。主要对肾结石中草酸钙晶体与细胞相互作用蛋白质组学的研究进展进行综述，以期更好地了解肾结石的发病机制。