目的 探讨荔枝核总黄酮对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化模型的抗肝纤维化作用机制.方法 利用40%CCl4-花生油溶液背部皮下注射构建肝纤维化大鼠模型,将造模成功的大鼠分为模型组、扶正化瘀组、荔枝核总黄酮低、中、高剂量组,另设空白组.连续灌胃给药 8 周后,取肝左大叶进行HE染色,观察肝脏组织病理变化;RT-qPCR法检测各组大鼠肝脏Col Ⅰ、Col Ⅲ、α-SMA mRNA的表达水平;并通过Western blotting检测大鼠肝脏Toll样受体-4(TLR4)、转化生长因子β激活激酶 1(TAK1)、磷酸化转化生长因子β激活激酶 1(P-TAK1)、氨基末端蛋白激酶(JNK)、磷酸化氨基末端蛋白激酶(P-JNK)的表达情况.结果 肝组织HE染色显示,与肝纤维化模型大鼠比较,荔枝核总黄酮各剂量均能不同程度的改善大鼠肝脏炎症浸润情况.肝纤维化相关因子检测显示,荔枝核总黄酮各剂量肝脏Col Ⅰ、Col Ⅲ与α-SMA mRNA表达下降(P<0.05 或P<0.01).Western blotting检测结果显示,与模型组比较,荔枝核总黄酮低、中剂量组肝脏TLR4、P-TAK1 蛋白表达下降(P<0.05),低剂量组的肝脏P-JNK蛋白也降低(P<0.05).结论 荔枝核总黄酮能减轻CCl4 诱发的大鼠肝纤维化,此作用可能与抑制肝脏TLR4-TAK1 通路有关.

目的 观察荔枝核总黄酮对HSC-T6 细胞中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白表达的影响,探讨荔枝核总黄酮是否可通过调控MAPK信号通路影响肝纤维化的进程.方法 设置荔枝核总黄酮20 μg/mL、40 μg/mL、80 μg/mL、160 μg/mL、320 μg/mL组和细胞对照组、空白组,CCK-8 法检测各组细胞吸光度,计算细胞增殖抑制率,选择最佳的荔枝核总黄酮浓度进行后续实验.后续实验设置荔枝核总黄酮组、秋水仙碱组、细胞对照组及空白组,加入相应培养基培养24 h、48 h、72 h后,CCK-8 法检测各组细胞吸光度,计算细胞增殖抑制率;各组细胞培养72h后,透射电镜观察细胞的超微结构,ELISA法检测细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)水平,RT-PCR法检测细胞中c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)、p38 mRNA表达情况,免疫组化法检测细胞中JNK、ERK、p38 蛋白及其相应磷酸化蛋白(p-JNK、p-ERK、p-p38)表达情况.结果 荔枝核总黄酮的最佳实验浓度为160 μg/mL,最佳干预时间为72 h;与细胞对照组比较,荔枝核总黄酮组和秋水仙碱组培养24 h、48 h、72h后的吸光度均明显降低(P均<0.05).培养 72h后,荔枝核总黄酮组细胞之间间隙变大,细胞膜四周纤毛脱落,细胞浆内线粒体嵴断裂或消失,部分线粒体呈空泡状,粗面内质网扁池扩张,附着的核糖体脱粒,细胞核内染色质浓缩凝结,部分染色质边聚,核膜皱缩,可见凋亡小体形成;荔枝核总黄酮组、秋水仙碱组MMP-2、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ水平均明显低于细胞对照组(P均<0.05),秋水仙碱组MMP-2 水平明显低于荔枝核总黄酮组(P<0.05);荔枝核总黄酮组JNK、ERK、P38 mR-NA相对表达量和p-JNK、p-ERK、p-P38 蛋白相对表达量均明显低于细胞对照组(P 均<0.05),与秋水仙碱组比较差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 荔枝核总黄酮具有抗肝纤维化的生物学效应,其作用机制可能与调控MAPK信号通路相关.

目的:探讨基于MAPK信号通路荔枝核总黄酮抗肝纤维化的作用机制.方法:通过皮下注射四氯化碳混合液建立大鼠肝纤维化模型,造模大鼠随机分为模型组、水飞蓟宾阳性对照组及荔枝核总黄酮低、中、高剂量组,另设正常对照组,连续灌胃 28 d.28 d后采集大鼠血清,ELISA法检测HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C水平;摘取大鼠肝脏进行HE染色和Masson染色,观察肝脏组织病理学改变;RT-PCR检测各组大鼠肝组织P38、ERK1、ERK2、JNK mRNA表达;Western Blot检测各组大鼠肝组织ERK、JNK、P38、p-ERK、p-JNK、p-P38 蛋白表达.结果:与正常对照组比较,模型组大鼠肝组织不同程度损伤及胶原沉积,有明显肝纤维化表现,血清HA、LN、Col-Ⅳ、PCⅢ水平及肝组织JNK、ERK1、ERK2、P38 mRNA和p-JNK、p-ERK、p-P38 蛋白表达显著升高(P<0.05).与模型组比较,各给药组大鼠肝脏纤维化损伤不同程度减轻,血清 HA、LN、Col-Ⅳ、PCⅢ水平及肝组织 JNK、ERK1、ERK2、P38 mRNA 和 p-JNK、p-ERK、p-P38 蛋白表达显著降低(P<0.05).结论:荔枝核总黄酮对肝纤维化大鼠具有一定治疗作用,其机制可能与调控MAPK信号通路的相关蛋白有关.

肺纤维化是以成纤维细胞增殖及大量细胞外基质聚集并伴炎症损伤、组织结构破坏为特征的一大类肺疾病的终末期表现.研究表明,黄酮类成分具有抗肺纤维化的作用,其中二氢杨梅素、桑色素、漆黄素等可通过抑制成纤维细胞分化,阿尔泰金莲花总黄酮、橘皮苷、蒙花苷等可通过发挥抗炎作用,黄芩总黄酮、黄芩苷、白杨素等可通过抑制上皮-间充质转化,荔枝核总黄酮、地奥司明、水飞蓟宾等可通过抑制氧化应激,槲皮素、黄芩苷、芹菜素等可通过调控自噬,镰形棘豆总黄酮、毛蕊异黄酮、二氢槲皮素等可通过调控细胞凋亡过程,柚皮素、黄芩苷、香草兰总黄酮等可通过抑制细胞焦亡等多种途径,发挥抗肺纤维化的作用.

目的 探究荔枝核总黄酮(TFL)对直肠癌裸鼠瘤体体积、微血管密度及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 选取 24 只SPF级SD雄性裸鼠,随机分为正常(A)组、模型(B)组、莪术醇(C)组、荔枝核总黄酮(D)组,每组 6 只,B、C、D组采用直肠微注射直肠癌细胞进行直肠癌建模,A组不建立该模型,建模成功后,C组灌胃 80 mg/kg莪术醇,D组灌胃200 mg/kg荔枝核总黄酮,A、B组同期给予灌胃同体积生理盐水,血流动力学监测左侧股动脉平均动脉压(MAP)及心率(HR),苏木素-伊红(HE)染色法检测直肠组织病理形态,免疫组化法检测直肠组织微血管密度,免疫印迹法检测裸鼠直肠组织VEGF蛋白表达.结果 各组治疗前后MAP、HR均变化无明显差异(P>0.05);各组MAP、HR无显著差异(P>0.05);与B组比较,C、D组裸鼠瘤体体积均明显缩小,且D组较C组明显缩小(P<0.05);A组直肠组织结构完整,腺腔内含丰富的杯状细胞且排列规则,而B组直肠结构遭到明显破坏,黏膜肌薄而不完整,杯状细胞急剧减少且有大量癌细胞浸润,核仁明显,排列紊乱;与B组比较,C、D两组病理结构明显改善,且D组比C组改善明显;与A组比较,B组直肠组织中MVD显著升高(P<0.05);与B组比较,C、D两组直肠组织中MVD表达显著降低,且D组比C组变化显著(P<0.05);与A组比较,B组直肠组织中VEGF蛋白表达显著升高(P<0.05);与B组比较,C、D两组直肠组织中VEGF蛋白表达显著降低,且D组比C组变化显著(P<0.05).结论 TFL对直肠癌具有显著疗效,其可显著降低直肠癌裸鼠瘤体体积,改善微血管密度,降低VEGF表达.

目的 通过对荔枝核中总黄酮的提取及分离工艺的优化及其降血糖活性和抗氧化活性的研究,为其在治疗糖尿病方面的开发利用提供理论依据.方法 以芦丁为对照品,采用L9(34)正交设计考查热浸提取法和超声波提取法对荔枝核中总黄酮提取率的影响,并选择HPD-BJQH、HPD-417和AB-8三种型号大孔树脂,通过动态吸附和解吸附实验,确定总黄酮的最佳分离纯化工艺,利用α-葡萄糖苷酶抑制活性实验模型测定总黄酮粗品的降血糖活性,采用DPPH自由基清除实验与铁离子还原实验测定HPD-BJQH总黄酮粗品的抗氧化活性.结果 荔枝核总黄酮的最佳提取工艺为:采用热浸提取法,用50％乙醇溶液,70℃提取1.5h,料液比为1∶20,荔枝核中总黄酮得率为4.23％.分离纯化的最佳条件为:采用HPD-BJQH型大孔树脂,上样液流速为0.5ml·min-,上样液中总黄酮浓度为5.5 mg· ml-1,以70％乙醇洗脱,得荔枝核HPD-BJQH总黄酮粗品,其纯度为52.3％.当HPD-BJQH总黄酮粗品溶液的浓度为1 mg· ml-1时,其对α-葡萄糖苷酶的抑制率为92.1％,高于阳性市售药阿卡波糖.在DPPH自由基清除实验中,经HPD-BJQH纯化的总黄酮粗品的IC50值为0.00016 mg·ml-1,远高于阳性对照原花青素、2,6-二叔丁基对甲苯酚(BHT)和维生素C.结论 该研究为荔枝核降糖药物的开发提供理论依据.

目的 探讨荔枝核总黄酮(TFL)对转化生长因子β1(TGF-31)诱导的人肝星状细胞(HSC-LX2)凋亡的影响,探讨其相关的分子机制.方法 将培养好的HSC-LX2随机分为正常组、TGF-β1组及150、300、600 mg/LTFL组.正常组常规培养;其他四组接种于含10％ FBS的DMEM+5μg/L TGF-β1、培养皿中培养24 h后,150、300、600 mg/L TFL组分别加入150、300、600 mg/L TFL继续培养48 h.用Hoechst33258染色法观察各组细胞形态学变化;用流式细胞术检测细胞周期;用FITC Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡情况;用Western blotting法检测细胞中Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)、白细胞介素1受体Ⅰ(IL-1R Ⅰ)蛋白表达.结果 正常组、TGF-β1组细胞核形态完整,TGF-β1组细胞增殖活跃;150、300、600 mg,/L TFL组可见细胞核固缩、裂解、凋亡小体形成等细胞凋亡形态学变化.随TFL浓度升高,TFL组G0/G1期细胞增多(P＜0.05),S期细胞减少(P＜0.05).随TFL浓度升高,TFL对HSC-LX2凋亡具有促进作用,更倾向于促进细胞晚期凋亡.150、300、600 mg/L TFL组TLR4、NF-κB、IL-1R Ⅰ蛋白表达量低于TGF-β1组(P均＜0.05);且随TFL浓度升高,HSC-LX2内TLR4、NF-κB、IL-1R Ⅰ蛋白表达量逐渐降低(P均＜0.05).结论 TFL可促进TGF-β1诱导的HSC-LX2细胞凋亡,尤其促进细胞晚期凋亡;其分子机制可能与降低细胞内TLR4、NF-κB、IL-1R Ⅰ的表达有关.

目的 研究荔枝核总黄酮(TFL)对体外由转化生长因子β1(TGF β1)诱导活化的大鼠肝星状细胞T6细胞株(HSC-T6)中核因子κB (NF-κB)核转位及相关蛋白表达的影响,探究该药抗肝纤维化的作用机制. 方法 体外培养HSC-T6,通过TGF β1诱导24 h后以125、250、500 μg/ml的TFL干预48 h,采用激光共聚焦显微镜观察TFL对HSC-T6内NF-κB核转位的影响,并以Western blot法检测TFL对细胞中TLR4、p-IκB α、p-NF-κB p65、NF-κB及Collagen Ⅰ蛋白表达水平的影响,免疫荧光法检测TLR4、p-NF-κB p65的表达.数据采用均数±标准差表示,先进行方差齐性检验,再行单因素方差分析(ANOVA),组间多重比较采用LSD检验,P＜ 0.05为差异具有统计学意义. 结果 激光共聚焦显微镜可见TFL抑制活化HSC-T6中NF-κB的核转位,并具有浓度依赖性.TFL可下调HSC-T6中TLR4、p-IκB α、p-NF-κB p65、NF-κB及Collagen Ⅰ的蛋白表达水平,同时具有浓度依赖性. 结论 TFL的抗肝纤维化的机制可能与其抑制活化HSC-T6内NF-κB的核转位,下调HSC-T6中TLR4、p-IκB α、p-NF-κB p65、NF-κB及Collagen Ⅰ的表达相关.

目的:为中草药黄酮类化合物治疗肝纤维化的进一步研究提供参考.方法:以"中草药""黄酮类化合物""肝纤维化""信号通路""Chinese herbal medicine""Flavonoids""Hepatic fibrosis""Signaling pathway"等为关键词,在中国知网、万方数据、维普网、PubMed、Medline等数据库中组合查询2002年1月-2018年8月发表的相关文献,对中草药黄酮类化合物治疗肝纤维化分子信号通路[如转化生长因子β(TGF-β)/Smad、Wnt/β-联蛋白(β-catenin)、Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)、Janus激酶/信号转导子和转录激活因子(JAK/STAT)、磷酯酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)等]的相关研究进行论述.结果与结论:共检索到相关文献169篇,其中有效文献47篇.肝纤维化是肝星状细胞活化导致细胞外基质大量沉积的结果,肝纤维化的发生和发展过程受多个分子信号转导通路的调控.柚皮素、槲皮素、荔枝核总黄酮、白杨素、葛根素等黄酮类化合物能干预与肝纤维化发生密切相关的TGF-β/Smad、Wnt/β-catenin、TLR4/NF-κB、JAK/STAT和PI3K/Akt信号通路.该类化合物治疗肝纤维化具有多靶点、多通路、多环节的特点,同一化合物可影响多个信号通路.今后应对黄酮类化合物对分子信号通路介导肝纤维化的作用机制进行研究.

目的 筛选适合分离和纯化荔枝核总黄酮的大孔吸附树脂,并确立其纯化工艺参数,以期制备出符合中药有效部位要求的荔枝核总黄酮,为将荔枝核总黄酮开发成中药五类新药奠定基础.方法 采用静态吸附-洗脱试验筛选纯化荔枝核总黄酮的大孔吸附树脂,在单因素实验基础上,以吸附率等综合评分为指标,考察乙醇体积分数、上样液质量浓度、上样液pH值、径高比、上样体积、上样体积流量、洗脱液体积分数、洗脱液体积及洗脱体积流量对其纯化工艺的影响,并确定最佳纯化工艺参数.结果 AB-8型大孔吸附树脂纯化荔枝核总黄酮的最佳工艺参数为树脂与药材的质量比3:1,上样液质量浓度为4～6 mg/mL,上样体积流量1mL/min,上样体积2BV,径高比1:12,上样液pH为2,洗脱时先以20％乙醇3BV除杂,再用60％乙醇3 BV洗脱,洗脱体积流量4 mL/min.结论 AB-8型大孔吸附树脂可以纯化荔枝核总黄酮,在所确定的纯化工艺参数下,荔枝核总黄酮质量分数从29.22％升至平均67.37％,固形物由1.25 g减少至0.40 g,建立的工艺稳定、可行,可作为荔枝核总黄酮的纯化工艺条件.