莱菔子为重要的药食兼用的传统中药,是"生熟异治,生升熟降"的典型药物.该文以莱菔子生熟异治为主题,就近年来生、熟莱菔子的化学成分和药理作用等各方面的差异研究进行综述,较全面、系统地总结了莱菔子生熟异治的研究,并基于中药质量标志物(Q-marker)的原则,通过对生、熟莱菔子的化学成分生源途径、化学成分检测技术以及双向调节药效与化学成分关联的比较分析,发现莱菔素和萝卜硫苷可分别作为生、熟莱菔子质量标志物的候选化合物.以期为莱菔子的深入炮制研究、新药开发及其临床应用安全性和有效性的提高提供参考.

目的:研究染色体区域维持因子1 (chromosomal region maintenance 1,CRM1)在套细胞淋巴瘤中的表达情况,并进一步探讨天然产物莱菔素LFS-01抑制套细胞淋巴瘤细胞增殖的分子机制.方法:通过Oncomine数据库挖掘分析CRM1在套细胞淋巴瘤中的表达水平.用LFS-01处理套细胞淋巴瘤JeKo-1细胞后,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,激光共聚焦显微镜下观察CRM1蛋白的核转运功能,蛋白质印迹法检测CRM1蛋白表达水平,FCM法检测和透射电子显微镜观察细胞周期和凋亡,蛋白质印迹法检测凋亡通路相关蛋白表达,CCK-8和FCM法检测凋亡抑制剂z-VAD-FAM对LFS-01作用的影响.构建CRM1基因突变的慢病毒稳定感染的JeKo-1细胞,激光共聚焦显微镜和CCK-8法再次检测LFS-01对CRM1核转运和细胞增殖的影响.通过RNAseq数据分析LFS-01作用后JeKo-1细胞转录组水平的变化,并采用CCK-8法检测Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)抑制剂TAK-242和LFS-01联用对JeKo-1细胞增殖的影响.结果:CRM1在套细胞淋巴瘤中呈现高表达(P＜0.05).LFS-01能够抑制JeKo-1细胞增殖,24和48 h时的半数抑制浓度(50％ inhibitory concentration,IC50) 分别为5.81 μmol/L和9.09 μmol/L.20.0 μmol/LLFS-01可明显抑制CRM1的核转运功能(P＜0.05);6.0 μmol/L LFS-01可明显下调CRM1的表达水平(P＜0.05);10.0 μmol/L LFS-01可将细胞周期抑制在G2/M期,并诱导细胞凋亡(P值均＜0.05);4μmol/L LFS-01可明显上调凋亡通路蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶、剪切型caspase-3和剪切型caspase-9 (P值均＜0.01)的表达.凋亡抑制剂z-VAD-FAM可逆转LFS-01的凋亡诱导作用(P＜0.01).当CRM1基因突变后,LFS-01失去靶向抑制CRM1核转运和细胞增殖的功能(P值均＜0.01).RNAseq分析表明LFS-01对细胞增殖相关信号通路有明显的抑制作用(P＜0.01),并且TLR抑制剂TAK-242联合LFS-01用药具有协同抗肿瘤作用(P＜0.01).结论:LFS-01可诱导套细胞淋巴瘤细胞发生周期阻滞和凋亡,其中CRM1是一个关键蛋白.TLR抑制剂TAK-242和LFS-01具有协同抗肿瘤作用.

目的:探讨染色体区域维持因子1(CRM1)抑制剂莱菔素(LFS-01)通过抑制信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路杀伤三阴性乳腺癌(TNBC)细胞的作用及其机制.方法:通过分子动力学模拟技术,验证LFS-01是否可与CRM1分子结构上的核输出信号(NES)口袋结合.通过CCK-8法检测LFS-01对4种不同的乳腺癌细胞杀伤活力.用不同浓度的LFS-01处理TNBC细胞MDA-MB-468和MDA-MB-231,免疫荧光法检测CRM1货物蛋白STAT3以及带有NES序列的蛋白在细胞内定位的变化;WB检测LFS-01对STAT-3信号通路以及其下游蛋白表达的影响;WB、细胞免疫荧光和透射电镜法检测自噬的发生;通过流式细胞术检测药物对细胞周期和凋亡的影响.结果:分子动力学模拟结果表明,LFS-01能够与CRM1的NES口袋结合,显示其在结构上影响后者蛋白转运功能的可能性.LFS-01能特异性杀伤TNBC细胞MDA-MB-468和MDA-MB-231.10 μmol/LLFS-01处理后TNBC细胞中STAT3和带有NES标签的蛋白均被阻滞于细胞核中,而在对照组中这些蛋白均匀分布在细胞质中.随着LFS-01剂量的提高和处理时间的延长,MDA-MB-468和MDA-MB-231细胞中磷酸化STAT3蛋白、Bcl-xL和Cylin D1表达均降低,细胞内自噬标志蛋白LC3B表达上升;同时出现高密度、多层的团状自噬小体;细胞周期阻滞于S期,并且凋亡率显著升高(P＜0.05或P＜0.01).结论:LFS-01可阻断CRM1运载蛋白出核、进而抑制STAT3信号通路的激活,从而促进TNBC细胞MDA-MB-468和MDA-MB-231发生自噬、细胞周期阻滞和凋亡.

目的 建立莱菔子生品和炒制品的特征图谱并测定其特征成分含量,探讨莱菔子炮制前后化学成分变化规律,为合理控制莱菔子质量提供参考.方法 采用HPLC对12批莱菔子炮制前后样品进行研究,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版)建立莱菔子生品和炒制品特征图谱并进行相似度评价,对其特征图谱峰面积进行聚类分析(HCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA).结果 莱菔子生品和炒制品特征图谱分别标定出8、11个共有峰,12批莱菔子生品和炒制品与对照图谱相似度均大于0.95.HCA和OPLS-DA可明显区分生品和炒制品,萝 卜硫苷特征峰标识性最强.生品中未检出萝 卜硫苷,芥子碱硫氰酸盐、莱菔素和芥子酸含量分别为0.21％～0.36％、0.80％～1.61％、0.02％～0.05％;炒制品中萝 卜硫苷、芥子碱硫氰酸盐含量分别为2.70％～4.52％、0.29％～0.52％,莱菔素和芥子酸均未检出.结论 莱菔子生品和炒制品特征图谱专属性强、差异显著,结合特征成分含量测定可有效区分莱菔子生品和炒制品并控制其质量.