目的:探究白念珠菌anillin家族蛋白Int1对septin细胞骨架组织的调控。方法:构建白念珠菌Int1蛋白的全长及截短的系列片段质粒，使其与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达，通过荧光显微镜观察其胞内定位，鉴定Int1中介导芽颈定位的区域。在模式生物酿酒酵母细胞中，对Int1全长及片段进行过量表达，观察其对细胞生长、细胞形态和septin组织的影响，从而确定Int1中介导与septin相互作用，发挥主要生物学效应的功能区段，研究这一区段与septin的共定位。结果:Int1全长1 661个氨基酸残基，鉴定出一段仅含有209个氨基酸的中间区段Int1-M4(739~947 aa)，在小芽和大芽时期均可以定位在芽颈。过量表达Int1-M4导致细胞产生显著的生长缺陷、芽体变长的细胞形态和septin组织絮乱。在芽体变长的细胞中，Int1-M4与异常的septin结构存在明显共定位。结论:Int1中一段仅含有209个氨基酸的中间区段Int1-M4(739~947 aa)介导了其芽颈定位和与septin的相互作用，在调控septin组织过程中发挥重要功能。

目的:探讨不同产膜能力白色念珠菌入侵后诱导人气道上皮细胞的免疫损伤机制。方法:选择2019年6至12月宁夏医科大学总医院分离培养的25株白色念珠菌，质控菌株SC5314为标准菌株。建立白色念珠菌生物膜体外模型，利用结晶紫染色和酶标板法检测不同白色念珠菌的生物膜形成能力；采用酶标板法测定570 nm处的吸光度值（ A570）： A570≥0.5为强产膜菌（SBF），0.25< A570<0.5为中产膜菌（DRF）， A570≤0.25为不产膜菌（WBF）。在体外分离培养并建立人气道上皮细胞的气液相培养模型，分为5组：空白对照组（ n=20）、标准菌株组（ n=20）、强产膜组（ n=19）、不产膜组（ n=17）、耐氟康唑组（ n=18）。扫描电镜观察气液相培养上皮细胞的形态。采用免疫荧光检测气液相培养上皮细胞体外模型标志蛋白的表达。通过微孔板法检测细胞中乳酸脱氢酶（LDH）含量，利用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测细胞培养液中细胞内β-防御素（hBD2）、粒巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、粒细胞集落刺激因子（G-CSF）等的分泌情况。 结果:强产膜菌株以菌丝相互交错生长，能看到极少数酵母细胞包裹于其中。扫描电镜观察气液相培养的上皮细胞菌丝能够主动入侵上皮细胞；纤毛乙酰化的微管蛋白和角蛋白的表达量明显减少，同时细胞增殖相关蛋白的表达也被下调。空白对照组、标准菌株组、强产膜组、不产膜组、耐氟康唑组细胞中LDH含量分别为（12.21±5.68）、（46.35±6.35）、（18.69±4.38）、（12.56±3.69）、（13.48±4.28）U/L，差异有统计学意义（ P<0.001）；与标准菌株组相比，强产膜组、不产膜组、耐氟康唑组细胞内LDH含量均降低（均 P<0.01）。空白对照组、标准菌株组、强产膜组、不产膜组、耐氟康唑组细胞内hBD2的含量分别为（26.14±0.77）、（56.18±0.83）、（30.66±2.59）、（29.22±0.48）、（28.28±1.56）ng/L，差异有统计学意义（ P<0.001）；与空白对照组相比，只有标准菌株组的上皮细胞可诱导细胞内hBD2表达量增加（ P<0.001）。不同组别间细胞内GM-CSF、G-CSF的表达量差异均无统计学意义（均 P>0.05）。 结论:强产膜白色念珠菌可通过下调细胞增殖相关蛋白的表达，抑制细胞的增殖，破坏上皮细胞的完整性，从而诱导细胞损伤。

目的:探讨诺卡菌角膜炎的临床及活体共聚焦显微镜（IVCM）影像学特征。方法:回顾性病例系列研究。收集2018年至2022年首都医科大学附属北京同仁医院连续就诊的诺卡菌角膜炎16例（16只眼）患者资料，其中男性11例，女性5例；年龄为（42.6±15.5）岁。所有患者均有典型诺卡菌角膜炎临床表现及至少1项阳性病原学检查结果（角膜病灶刮片或微生物培养）。收集患者完整的病史、临床资料及微生物学检查结果，包括危险因素、确诊时间、临床表现、诊断方法、分离菌种、治愈时间及治疗前后最佳矫正视力；裂隙灯显微镜及IVCM检查、刮片细胞学检查、微生物培养与质谱鉴定等。结果:诺卡菌角膜炎的主要危险因素为植物或其他异物伤（5/16）、角膜接触镜（4/16）、穿透性角膜移植术后（1/16）、脑膜瘤术后（1/16）。患者出现症状到确诊的时间为（20.8±11.8）d，随访时间（46.8±12.6）d。就诊时最佳矫正视力<0.05者和≥0.05且<0.3者均为7只眼，≥0.3者2只眼。典型体征为角膜浅层花环状灰白色浸润灶，随病情进展出现角膜溃疡及表面干燥隆起灰白色坏死组织，严重患者可致角膜溃疡穿孔。12只眼（12/16）刮片细胞学提示诺卡菌感染，9只眼（9/16）微生物培养质谱鉴定提示诺卡菌感染，8只眼（8/16）刮片细胞学和微生物培养均提示诺卡菌感染。IVCM下，角膜病灶区可见较多量纤细丝状中高反光菌丝，呈细长、串珠、分枝状结构排列，菌丝周围有较多量高反光圆形炎症细胞浸润。14例患者给予药物治疗后痊愈，2例患者行角膜移植术后感染被控制，治愈时间（37.5±25.2）d，随访6个月无复发病例。结论:诺卡菌角膜炎早期以角膜基质圆形或花环状致密浸润为主，中晚期灰白色干燥角膜溃疡或前房积脓。病灶区纤细的分枝状或串珠状中高反光菌丝样结构为其IVCM典型特征。

目的:探讨角膜层间感染的临床特征。方法:回顾性病例系列研究。收集2018年1至12月因角膜移植手术或角膜屈光手术后角膜层间感染就诊于北京同仁眼科中心的8例患者（8只眼）资料，其中男性2例，女性6例，年龄18~55岁（中位数27岁）。记录患者的一般资料及其手术类型、发病时间、临床表现；采用活体角膜激光共聚焦显微镜（IVCM）等对病灶进行检查，并进行微生物培养及药物敏感性试验。结果:8例患者中飞秒激光小切口角膜基质透镜取出术（SMILE）后4例，板层角膜移植术后2例，角膜内皮移植术后2例。术后发病时间为2~30 d，平均为9.8 d。3例SMILE术后患者的治疗转归为角膜斑翳或白斑，其余5例层间感染均需要行角膜移植手术。4例角膜移植术后层间感染的病原菌均为念珠菌属。IVCM镜下可见角膜层间细菌感染患者的角膜基质层内大量无正常组织结构的坏死组织，其间可见炎症细胞浸润，局部炎症细胞聚集，未见典型的病原体；真菌感染患者可见角膜帽下真菌菌丝（丝状真菌感染）或角膜层间密集的点状高反光结构（酵母样真菌感染）。结论:角膜层间感染不易被早期诊断，预后较差，IVCM可辅助其早期诊断；角膜层间感染的病原谱与角膜外伤所致的角膜感染可能存在差异。

患者男，52岁，因"头痛8 d，视力下降5 d"2021年8月24日入住本院耳鼻喉科。患者8 d前受凉后出现头痛，伴双侧鼻塞和嗅觉减退，无涕中带血，无鼻腔异味，无眶周肿痛，无视力下降，自行口服头孢类抗生素治疗3 d，头痛较前减轻。5 d前出现眼周胀痛、红肿，视力下降，就诊眼科及耳鼻喉门诊，行颅脑MR检查：鼻窦炎。眼眶CT ：左眶内炎症。给予抗炎治疗3 d，无效。既往史：糖尿病病史10余年，未治疗，平素未检测血糖。查体：体温36.1 ℃，脉搏64次/min，呼吸频率16次/min，血压130/81 mmHg，神志清，左眼突出，视物不见，左侧上睑下垂，眼球各方位运动受限，球结膜充血（+++）、结膜下出血（++），球结膜呈紫红色表现，全角膜白色浑浊，余眼内结构无法窥见。右眼查体未见异常。鼻外形正常，鼻根部皮肤充血（见图1）。辅助检查：电子鼻咽镜示左侧鼻腔内大量干痂附着，予以清理后见部分痂皮与下鼻甲组织黏连紧密，中鼻道见少许菌丝样物质，少许白色分泌物流出，局部见质软肉芽组织，左侧中鼻道、嗅裂未窥及，鼻中隔略右偏，右侧鼻腔未见明显新生物（见图2）。

患者男，65岁，主诉左小腿红斑及增殖性斑块伴痒30余年，加重半年。患者于1990年左右无明显诱因左外踝出现瘙痒，搔抓后形成红斑、丘疹，逐渐累及左小腿，部分皮损较肥厚，呈增殖性改变，且瘙痒加重，无关节痛及发热等不适，否认有足癣病史。1997年在当地医院手术切除部分增殖性皮损后，左小腿外侧形成溃疡。2007年至2016年多次在各地皮肤科就诊，诊断为真菌感染（具体不详）。在医生指导下口服伊曲康唑200 mg每日2次，疗程1年，效果不明显，遂遵医嘱改为盐酸特比萘芬250 mg/d疗程2年，自觉效果不佳，遂自行停药，未再治疗。2016年8月无明显诱因患者发现皮疹再次增多，并向大腿蔓延，遂就诊，无发热、咳嗽咳痰，无关节畸形及疼痛，无明显体重减轻，饮食睡眠及二便尚可。家族中无类似疾病患者。既往无输血及应用血制品史，无高血压、糖尿病等病史，无传染性疾病史，无食物、药物过敏史。系统检查：一般情况尚可，各系统无明显异常。实验室检查：血尿常规、肝肾功能正常，梅毒螺旋体和人免疫缺陷病毒相关检查均为阴性。皮肤科检查：左小腿可见多发性黄豆至鸽蛋大小红斑、丘疹及增生性结节、斑块，小腿外侧部分斑块破溃，见较多黏性渗出物及黄褐色结痂，左踝及足背肿胀（图1A）。溃疡边缘行组织病理检查：表皮角化过度，棘层增生肥厚，呈假上皮瘤样增生，真皮中上可见密集中性粒细胞、淋巴细胞、组织细胞及多核细胞浸润（图1B），过碘酸希夫染色可见硬壳小体（图1C）。真菌直接镜检：取溃疡处脓液和黑色小点部位脓液涂片可见少量杆状细菌和少量真菌菌丝。组织液细菌培养：血平板37 ℃培养7 d有细菌生长，通过VITEK2 COMPAC型全自动药敏分析系统鉴定为奇异变形杆菌、摩尔摩根菌摩根亚种（ Morgamella morganii subsp. morganii）。脓液真菌培养：沙氏培养基27 ℃培养4周见单个黑色菌落，表面凸起灰黑色菌落，背面呈深橄榄黑色，表面可见气生绒毛（图2A）。行小培养4周，显微镜下见大片枝孢型或喙枝孢型分支，分生孢子主要位于孢子梗顶端，以单细胞性紧密堆积成球状或排列成短链状（图2B）。药敏检测显示，伊曲康唑、氟康唑、伏立康唑、泊沙康唑、特比萘芬、两性霉素B和卡泊芬净最小抑菌浓度值分别为128、128、256、4、512、256和256 μg/ml。分子生物学鉴定：提取真菌DNA送至北京华大基因公司进行序列测定，Genbank BLAST比对结果提示该菌株与 Fonsecaea nubica碱基序列一致性大于99%，该菌序列已上传至Genbank数据库并获得编号MW269556（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/MW269556），通过内部转录间隔序列构建系统发育树，并使用MEGA7.0建立邻里连接，最终显示菌株的来源属 Fonsecaea nubica。

目的:研究18株野生云芝种质资源的农艺性状和药材品质,为筛选可供人工培育的高产优质云芝药材菌种提供理论参考.方法:测定18株云芝菌丝、子实体农艺性状及子实体多糖、浸出物、麦角甾醇含量和重金属含量,并进行综合评价.结果:菌株YUN5、HN04、JL3、NX17首茬子实体生物产量较高;菌株YUN4、YUN5、DB5、NX4子实体多糖含量均超过2020年版中国药典规定的3.2％;14个菌株子实体浸出物含量均超过药典标准规定的18％,YUN1、HN02、NX6、NX18未达药典标准.子实体中麦角甾醇含量最高菌株为NX4,达到0.58 mg/g;菌株YUN5、HN01、DB4、JL2、NX4子实体中Cr、Cu、As、Cd、Pb含量均未超过标准规定的限量值.结论:菌株NX4、DB5、YUN5在加权评分及主成分分析评价中排名前列且符合2020年版中国药典规定的云芝外观、多糖含量和浸出物含量要求,可作为优质云芝种质资源,同时也可作为云芝药材品质优良菌种;加权评分排名靠前的YUN2、YUN4以及主成分分析排名靠前的NX17子实体外观不符合药典要求,但菌株YUN4的多糖含量、菌株YUN2的浸出物和麦角甾醇含量、菌株NX17的麦角甾醇含量和单袋首茬产量上相对于其他菌株具有优势,可分别考虑作为有效成分提取的菌种资源.

目的 探究掩味型紫草红花乳膏剂在体内和体外抗炎抗真菌的作用机制.方法 体外采用MTT、qPCR和ELISA法测定其抗炎作用;通过肉汤稀释实验、杀菌动力学、芽管抑制、XTT还原试验等方法来考察掩味型紫草红花乳膏剂的抗真菌作用;体内实验研究通过建立小鼠白色念珠菌皮肤病模型,考察其疗效和机制.结果 掩味型紫草红花乳膏剂中的紫草对RAW264.7 细胞增殖有明显抑制作用,红花呈剂量依赖性地抑制LPS诱导的IL-6 的生成.紫草显著抑制白色念珠菌活性,其杀菌模式具有时间和浓度依赖性;紫草能显著减少白色念珠菌芽管的形成,破坏其生物被膜;红花对白色念珠菌没有直接杀灭作用,不能抑制其生物被膜形成,但其显著减少白色念珠菌的菌丝生长,并提高其ROS水平.结论 掩味型紫草红花乳膏剂中紫草和红花配伍,可以协同起效,具有减轻炎症损伤,治疗皮肤白色念珠菌感染的功效.

目的:从采自云南省丽江郊野的土壤中筛选出具有抑菌活性的菌株,分离其活性成分进行抗菌作用机制初步研究以寻找抗菌活性物质.方法:使用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等6种细菌以及白色念珠菌等11种真菌作为指示菌,采用管碟法和菌丝生长速率法对拮抗菌进行筛选,通过生理生化测试和16S rDNA序列分析鉴定菌种;对发酵液中分离出的活性化合物使用液相色谱-质谱/质谱技术进行结构分析;采用氯化三苯四氮唑法检测RN8菌株发酵液不同稀释倍数处理大肠杆菌和白色念珠菌后的细胞脱氢酶活力,利用分光光度法测定蛋白质、DNA和钾离子泄漏率;将环四肽RN作用于白色念珠菌进行代谢组研究.结果:RN8菌株发酵液对17种测试指示菌具有拮抗效果,鉴定为枯草芽孢杆菌;RN鉴定为环肽类化合物,当其质量浓度为12.5 μg/mL时,抑制率达73.41％,EC50为4.69 μg/mL;KEGG数据库和路径拓扑分析显示,五个主要代谢途径有显著影响,包括嘧啶代谢,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成,苯丙氨酸代谢,烟酸和烟酰胺代谢,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的生物合成,这些过程涉及2'-脱氧胞苷等37种代谢物.结论:枯草芽孢杆菌RN8是广谱拮抗性菌株,其抑菌活性成分造成白色念珠菌细胞外膜的损伤,破坏细胞膜整体结构,导致细胞内物质泄漏,显著影响主要代谢途径,从而起到抗菌作用.

口腔是人体中微生物定植最丰富的位点之一,维持其微生态的平衡能有效促进口腔健康.唾液联合乳杆菌(Ligilactobacillus salivarius)作为联合乳杆菌的一种,有着良好的口腔定植能力及改善口腔微生态以防治疾病的潜力.目前,唾液联合乳杆菌在口腔疾病中的应用及机制研究主要包括:通过直接抑制变异链球菌生长以及下调其致龋毒力因子葡萄糖基转移酶基因(glucosyltransferases,gtfs)表达,减少牙面黏附变异链球菌数量,防治龋病;减少牙周炎相关关键微生物,并减少伴放线菌团聚杆菌毒力因子细胞致死膨胀毒素B(cytolethal distending toxin B,CdtB)、白细胞毒素(leukotoxin,LtxA)表达,减轻牙周炎患者局部微生物刺激,同时,直接抑制巨噬细胞的丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)以及核因子NF-κB(nuclear factor NF-kappaB,NF-κB)通路激活进而抑制破骨作用,减轻牙周骨吸收;对于黏膜炎症,唾液联合乳杆菌可拮抗白色念珠菌,抑制致病性菌丝或胚管形成,防治念珠菌性口炎,还可减少金黄色葡萄球菌数量,并缓解其感染所致的巨噬细胞的toll样受体/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(toll-like receptor/phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B/mammalian target of rapamycin,TLR/PI3K/Akt/mTOR)信号通路和toll样受体/磷脂酰肌醇 3-激酶/蛋白激酶B/kappa B抑制因子/核转录因子kappaB(toll-like receptor/phos-phoinositide 3-kinase/protein kinase B/inhibitors of kappa B/nuclear factor kappa B,TLR/PI3K/Akt/IκB/NF-κB)通路激活,减轻口咽部炎症反应;通过对口腔肿瘤细胞体外研究发现,唾液联合乳杆菌可下调癌细胞蛋白激酶B/细胞周期蛋白D1(protein kinase B/cyclin D1,Akt/cyclin D1)表达,诱导肿瘤细胞的直接凋亡并降低环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达水平,改善肿瘤免疫抑制微环境.然而唾液联合乳杆菌变异多,需要更深入的研究以厘清具体菌株的临床功效、安全性及其治病机制.尽管新兴微生物研究技术已出现,但在唾液联合乳杆菌的应用尚较少.如何运用这些方法来研究唾液乳杆菌对口腔疾病的作用将是未来发展方向之一.本文对唾液联合乳杆菌在口腔领域的现存研究进行综述,以期为今后的研究提供参考.