目的 探讨蓝盆花醇提物抗肝纤维化(HF)的作用及机制.方法 采用四氯化碳灌胃法建立HF模型.通过观察肝组织病理学变化,检测HF指标[α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅰ(Collagen Ⅰ)]及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路相关因子mRNA和蛋白表达水平,考察低、中、高剂量(50、100、200 mg/kg)蓝盆花醇提物对HF模型大鼠的改善作用及可能机制.按1 800 mg/(kg·d)(以生药量计)灌胃大鼠蓝盆花醇提物制备含药血清,以低、中、高浓度(将含药血清稀释至10%、15%、20%)蓝盆花醇提物含药血清干预HSC-T6细胞,观察其对微小RNA-21(miRNA-21)表达的影响;将miRNA-21模拟物/抑制剂转染至HSC-T6细胞,并检测PI3K/Akt信号通路相关因子的mRNA和蛋白表达水平.结果 体内实验结果表明,低、中、高剂量蓝盆花醇提物均可显著改善HF模型大鼠肝组织病理学变化,降低其胶原百分比(P＜0.01),下调其HF指标及PI3K、Akt的mRNA和蛋白表达(P＜0.01),上调其磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)的mRNA及其蛋白表达(P＜0.01).体外实验结果表明,低、中、高浓度蓝盆花醇提物含药血清均可显著抑制miRNA-21的表达(P＜0.01);转染miRNA-21模拟物后,细胞中PI3K、Akt的mRNA和蛋白表达上调(P＜0.01),PTEN的mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.01);而转染miRNA-21抑制剂后,细胞中上述指标的变化与转染miRNA-21模拟物相反(P＜0.01).结论 蓝盆花醇提物可通过抑制miRNA-21表达、上调PTEN表达,进而抑制PI3K/Akt信号通路活性,最终发挥抗HF的作用.

目的:初步探讨蒙药蓝盆花乙醇提取物在大鼠体内的血中移行成分,为阐明该药的药效物质基础提供参考.方法:将10只大鼠随机分成给药组(以生药量计为0.3 g/100 g)和空白组(0.5%羧甲基纤维素钠溶液),每组5只,灌胃给药,给药量均为2 mL/100 g,早、晚8:00各给药1次,连续给药3 d.末次给药30 min后,肝门静脉取血,经有机溶剂沉淀法分别制得含药血清和空白血清样品.以蓝盆花原药材为对照,采用超高效液相色谱-串联质谱法进行测定,通过比较3种样品的化学成分差异,再结合化合物对照品和文献数据,鉴定蓝盆花乙醇提取物灌胃后大鼠体内的血中移行成分.结果:共发现了39个血中移行成分,其中原型成分17个、代谢成分22个,原型成分主要为黄酮类及苯丙酸类,在大鼠体内多发生甲基化、硫酸化与葡萄糖醛酸化等反应.结论:初步确定了大鼠灌胃蓝盆花乙醇提取物后的入血成分,为该药材进一步的体内代谢研究奠定了基础.

本文综述分析文献报道的文冠木及蒙药复方古日古木-7(G-7)主要成分的药代动力学性质等数据,探讨水煎剂和散剂(或甲醇提取物)可吸收成分的差异及原理.G-7含红花、石膏、麻黄、紫花地丁、诃子、蓝盆花、木通.其中诃子含有大量多酚成分,有抗丙肝病毒蛋白酶等活性.给药G-7后诃子主要成分的血药浓度-时间曲线下面积(AUC0 ～ 10h)比单独给药诃子时明显增加.没食子酸、诃子裂酸、诃黎勒酸的AUC0 ～10h分别增加了2.6、10.3、3.0倍,说明G-7中其他药材可增加诃子主要活性成分的吸收.给大鼠灌胃G-7甲醇提取物后,极性较小的鞣花酸的AUC0 ～ 10h＞没食子酸,而灌胃水煎剂时极性大的没食子酸的AUC0～10h＞鞣花酸.文冠木不能被溶剂提取出的大分子鞣质可被胃液降解成其组成单元——表儿茶素;灌胃文冠木全粉时表儿茶素的AUC0～ 10h和最大血药浓度(Cmax)明显增加,分别达到灌胃其提取物时的1.1和1.2倍.甲醇提取物(或中药全粉的散剂)给药后,亲脂性及不可提取成分的体内吸收较多,因此,民族药散剂的体内药效物质与水煎剂有所不同,这可能是有些药材在民族医药与中医药中用途不同的科学原理;这些结果也提示,民族药散剂的主要质量控制指标成分也会与汤剂有所不同.

目的 基于灰色关联度法探究蒙药蓝盆花保肝活性成分.方法 以Wistar大鼠为供体,制备灌胃给药蓝盆花醇提物后9个时间点含药血清,采用高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨率质谱(HPLC-Q-Exactive-MS)分析不同时间点13个成分峰面积,采用MTT法检测不同时间点含药血清对H2O2致HL-7702肝细胞氧化损伤模型存活率的影响.通过灰色关联度法分析不同时间点含药血清中各成分峰面积,即各成分相对含有量与相应细胞存活率的相关性.结果 入血的13个原型成分与保肝活性关联度均大于0.75,说明这些成分均具有不同程度的保肝活性,其中关联度大于0.8的成分有3,5-二咖啡酰基奎宁酸、对香豆酸、香叶木素、芹菜素、对羟基苯甲酸,提示这些成分可能表现出相对较高的保肝活性.结论 该研究借助灰色关联度法,从体内代谢同时兼顾药效的角度寻找保肝活性成分,从蓝盆花含药血清中筛选到5个潜在的具有较高活性的保肝药效成分,该方法有助于快速准确地发现蒙药蓝盆花药效成分(群),为深入蓝盆花的体内代谢研究奠定基础.

为了进一步阐明蓝盆花Scabiosa comosa的药效和网络药理学机制,探讨其关键靶点和相关通路,明确其抗肝纤维化的作用机制,将Wistar大鼠分为空白组(blank group),四氯化碳诱导肝纤维化(HF)的模型组(model group),蓝盆花低剂量组(low-dose group)、中剂量组(medium-dose group)和高剂量组(high-dose group).对肝组织进行苏木素-伊红染色法(HE)和Masson染色在显微镜下进行观察.将Wistar大鼠分为空白组(blank group)和蓝盆花给药组,7 d后腹主动脉取血,将不同剂量的含药血清作用于肝星状细胞-T6(hepatic stellate cell-T6,HSC-T6).采用流式技术检测蓝盆花含药血清对HSC-T6的凋亡率.对蓝盆花进行超高效液相色谱-飞行时间质谱法(UHPLC-TOF-MS)测定及成分分析.在SwissTargetPrediction数据库、GeneCards数据库分别获取蓝盆花靶点和肝纤维化靶点,取交集获得抗肝纤维化作用靶点;通过STRING数据库进行蛋白互作分析;利用Metascape平台进行GO功能和KEGG通路分析.筛选排名靠前的磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinosital 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶 B(protein kinase B,AKT)和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated kinase-like protein,MAPK)信号通路中的PI3K、AKT、p-AKT、p38、p-p38靶点进行验证.通过蛋白免疫印迹法(Western blot)验证蓝盆花抗肝纤维化的作用机制.通过HE和Masson染色观察到结缔组织增生减少,纤维化程度降低;蓝盆花含药血清随着浓度的增加可以明显促进HSC-T6凋亡;通过UHPLC-TOF-MS技术共鉴定出化学成分76个,其中黄酮类、生物碱类、萜类、酚类、脂肪酸是药物的主要成分.通过预测得出,蓝盆花抗肝纤维靶点63个,GO富集分析共涉及生物过程(biological process,BP)、细胞组分(cell components,CC)、分子功能(molecular function,MF)3 个方面,京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集结果显示 PI3K/AKT、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、RAS 相关蛋白 1(RAS-associated protein 1,Rap1)、低氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor1,HIF-1)、肉瘤基因(resistance to audiogenic seizures,Ras)、MAPK 等是显著通路.选取排名靠前的PI3K/AKT、MAPK信号通路上的关键靶点进行Western blot分子生物学验证.Western blot结果提示,在肝组织中,与模型组比较,蓝盆花可以使肝组织α-SMA、collagen Ⅰ、PI3K、AKT、p-AKT、p38、p-p38蛋白表达量下降.在HSC-T6中,与空白组相比,蓝盆花低、中、高剂量组α-SMA、collagen Ⅰ、PI3K、AKT、p-AKT、p38、p-p38蛋白表达量显著降低.该研究主要通过药效学实验、基于UHPLC-TOF-MS的网络药理学分析和分子生物学实验表明,蓝盆花抗肝纤维化作用显著,作用机制可能通过参与调控PI3K/AKT信号通路和MAPK信号通路中的PI3K、AKT、MAPK14(p38)等关键靶点来发挥作用.

目的 研究蓝盆花提取物化学成分和抗氧化活性.方法 UPLC-ESI-QTOF-MSE分析采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相0.1％甲酸-乙腈,梯度洗脱;电喷雾离子源;负离子模式.以DPPH、ABTS自由基及氧自由基吸收能力(ORAC)为指标,测定70％甲醇、70％乙醇、70％丙酮、水提物抗氧化活性.福林酚法测定总多酚含量.结果 在蓝盆花提取物中鉴定出38个化合物.70％ 丙酮提取物抗氧化活性最强,对DPPH、ABTS自由基的IC50值分别为9.02、81.5μg/mL,ORAC值为87.5μmol/(L·mg),总酚含量最高,达302.5 mg/g.结论 蓝盆花含有丰富的酚类成分,具有明显的抗氧化性能,70％丙酮是该药材最佳提取溶剂.