目的 探究蕲蛇醇提液治疗大鼠骨关节炎(OA)的药效及可能的作用机制.方法 30只SD大鼠随机分为正常组、模型组、蕲蛇醇提组,每组10只,除正常组外均采用碘乙酸(MIA)关节腔注射法建立OA疼痛模型.造模7 d后,蕲蛇醇提组大鼠膝关节腔注射0.2 mL蕲蛇醇提液(0.6 g/kg),正常组和模型组大鼠注射等体积0.9％氯化钠注射液,1周1次,连续4周.于给药前和给药4周后测量大鼠机械痛和热痛阈值,通过疼痛行为学评估、组织病理学观察、免疫组化分析、Tunel原位末端凋亡染色和Western blot,评价蕲蛇醇提液对OA大鼠的体内疗效,探索其潜在的作用机制.结果 相比正常组,模型组大鼠关节组织表现出软骨退变、软骨细胞数量减少、胶原蛋白大量破坏、基质紊乱的病理状态.相比模型组,蕲蛇醇提液组大鼠病理状态改善,机械痛和热痛的痛阈值显著回升(P＜0.01),国际骨关节炎研究协会(OARSI)病理评分显著降低(P＜0.01).免疫组化结果显示,蕲蛇醇提组大鼠关节中Ⅱ型胶原(CoI2)阳性率升高,基质金属蛋白酶13(MMP-13)阳性率降低.Tunel检测结果表明,蕲蛇醇提组细胞凋亡率降低(P＜0.01).Western blot结果显示,蕲蛇醇提组MMP-13和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)及磷酸化p65蛋白相对表达量显著下降(P＜0.05).结论 蕲蛇醇提液通过调控PARP/NF-κB通路抑制细胞凋亡,促进软骨代谢平衡,缓解关节疼痛,修复软骨损伤.

目的:建立药用蛇及其水提物的DNA微型条形码鉴别方法.方法:通过比对药用蛇及常见11种混伪品的16S rRNA序列,建立约220 bp的蛇类DNA微型条形码,并与16S rRNA标准条形码比较,对药用蛇原料及水提物进行测序鉴定.采用MEGA-X软件分析遗传距离并以邻接法(NJ)构建系统发育树.结果:DNA微型条形码引物对药用蛇原料及水提物的扩增率为100％,鉴定率为100％.药用蛇及其混伪品的种内平均遗传距离均小于种间平均遗传距离,且各物种在NJ系统发育树中具有良好的单系性,并与16S rRNA标准条形码原料的鉴定结果一致.结论:该研究建立的蛇类DNA微型条形码可有效实现药用蛇原料及水提物等制品的物种鉴别,为保障蛇类原料、临床汤剂及配方颗粒等药品的安全性和有效性提供了技术支撑.

目的:利用DNA条形码线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因鉴别蕲蛇、乌梢蛇、金钱白花蛇及其混伪品共 32 种蛇类.方法:收集蕲蛇、乌梢蛇、金钱白花蛇及其混伪品,对样品DNA进行聚合酶链式反应(PCR)扩增,扩增产物电泳后进行双向测序.应用CodonCodeAligner 11.0.1 软件对峰图质量进行比对、拼接,利用MEGA 11.0 软件对各物种碱基进行分析,构建邻接(NJ)系统聚类树并计算遗传距离.结果:NJ系统聚类树显示,蕲蛇、乌梢蛇、金钱白花蛇及其混伪品共 32种均独立聚为一支,眼镜蛇科与蝰科聚为一支,并与游蛇科并列聚类.游蛇科黄环林蛇、颈棱蛇与眼镜蛇科聚为一支,游蛇科赤链华游蛇、环纹华游蛇、草腹链蛇与蝰科聚为一支,锦蛇属玉斑锦蛇、黑眉锦蛇、百花锦蛇未聚为一支.结论:利用DNA条形码COⅠ基因能够准确鉴定蕲蛇、乌梢蛇、金钱白花蛇及其混伪品共 32种蛇类,赤链华游蛇、环纹华游蛇、草腹链蛇、黄环林蛇、颈棱蛇、玉斑锦蛇、百花锦蛇、黑眉锦蛇、宽吻水蛇、铅色水蛇、中国沼蛇、渔游蛇的种属归类有待进一步研究.

重金属与有害元素的毒性与其形态直接相关.本文建立了基于HPLC-ICP-MS的动物药中汞、砷形态分析方法,在此基础上检测了31种动物药(含2015版《中国药典》项下29个品种)中不同形态汞、砷的残留量.结果发现,不同形态汞、砷的LOQ为0.1～0.65μtg·kg-1,回收率为86.9％～116.6％,RSD为1.49％～4.23％.31种动物药共87个批次均检测到Hg2+,含量为2.39～6567 μg·kg-1;12种动物药共33个批次检测到MeHg,含量为2.83～319.7 μg·kg-1;所有的动物药样品中均未检测到EtHg.31种动物药批次中不同砷形态的检出率分别为:As(Ⅲ):96.77％,As(V):100％,一甲基砷(MMA):45.16％,二甲基砷(DMA):90.32％,砷甜菜碱(AsB):93.55％,砷胆碱(AsC):22.58％.根据不同形态毒性强弱,Hg残留高风险的品种为:蕲蛇、金钱白花蛇、乌梢蛇、蜈蚣;As残留高风险的品种为:地龙、蕲蛇、乌梢蛇、九香虫.本研究可为动物药中重金属风险评估与限量标准制修订提供重要参考.

目的 研究蕲蛇水提液对大鼠骨性关节炎(osteoarthritis,OA)的药效作用.方法 将SD大鼠随机分为正常组、模型组、蕲蛇组,每组10只,除正常组外均采用碘乙酸关节腔注射法(50 μL)建立OA疼痛模型.造模48 h后,蕲蛇组大鼠关节腔注射蕲蛇水提液(100 μg·mL-1),模型组大鼠注射等量生理盐水,1周1次,连续4周.每周测量大鼠足耐压痛、热痛阈的数值变化,观察大鼠膝关节的疼痛改善情况;4周后取关节进行病理切片SO染色,观察膝关节的组织病理改变.培养大鼠原代软骨细胞,以CCK-8法评价蕲蛇对软骨细胞的增殖作用.结果 OA大鼠造模成功.与模型组相比,蕲蛇组压痛和热痛的痛阈值显著回升(P＜0.01);软骨基本恢复正常,软骨细胞和软骨基质接近正常水平,仅有少量肥大软骨细胞;Mankin评分显著降低(P＜0.01);软骨细胞活力显著升高(P＜0.01),各项指标基本到达正常水平.结论 蕲蛇水提液可显著改善OA大鼠关节疼痛,并修复软骨损伤,其机制与促进软骨细胞增殖有关.

目的:基于电子鼻技术对中药蕲蛇药材及其不同饮片规格的挥发性成分进行分析,探讨中药炮制对蕲蛇矫正不良气味的物质基础,以期诠释古人炮制意图,为蕲蛇饮片炮制规范化奠定基础.方法:样品在超快速气相色谱电子鼻HeraclesII上进行测定分析,用主成分分析法(PCA)进行数据处理,通过AroChemBase数据库对化合物进行定性,并用峰面积进行归一化定量,测定蕲蛇药材及其不同饮片规格的挥发性成分.结果:蕲蛇药材、蕲蛇、蕲蛇肉及酒蕲蛇中分别检测出7种、12种、12种和11种挥发性物质,其共有成分有6种.其中二甲基硫醚的相对含量均最高,蕲蛇药材54.22％、蕲蛇89.45％、蕲蛇肉73.27％、酒蕲蛇88.89％.二硫化碳相对含量:蕲蛇药材(10.12％)＞蕲蛇肉(3.33％)＞蕲蛇(2.69％),其在酒蕲蛇中未检出;己醛相对含量:蕲蛇药材(2.57％)＞蕲蛇肉(0.61％)＞蕲蛇(0.36％)＞酒蕲蛇(0.25％).蕲蛇三种饮片均另检出3-甲基-1-丁醇、异戊酸乙酯、香茅醛、乙酸苯乙酯、L-香芹酮等5种偏香味物质.结论:二甲基硫醚可能为蕲蛇特异气味的主要物质基础,而二硫化碳、己醛可能为蕲蛇腥臭等不良气味的物质基础.蕲蛇炮制以后气味改善可能与二硫化碳、己醛等成分的降低及3-甲基-1-丁醇、异戊酸乙酯、香茅醛、乙酸苯乙酯、L-香芹酮等5种偏香味物质的出现有关,为蕲蛇炮制矫味提供了科学依据.

蛇类药材在我国已有上千年的药用历史,历代本草多有记载.蛇类药材具有祛风、通络、止痉等功效,在风湿痹证方面具有良好的治疗效果.该文从名称、产地、性状特征、品质评价、功效五个方面对乌梢蛇和蕲蛇的本草记载进行梳理,旨在对其源流和历史沿革进行考证,以期为这两种蛇类药材的应用提供参考和指导.

目的:对中药蕲蛇不同部位及不同饮片规格中氨基酸进行测定和比较分析,以期诠释古人炮制意图.方法:用高效液相测定样品中氨基酸含量,流动相:A:0.05 mol·L-1乙酸钠(pH6.4)-(体积分数)0.1％二甲基甲酰胺,B:水-乙腈(1:1),流动相比例:B相:11 min 20％→30 min 30％→35 min 55％→40 min 60％→42 min 95％,流速:1 mL·min-1,柱温:25℃;进样量:10 μL.结果:蕲蛇不同部位及不同饮片规格均含有17种氨基酸,其中谷氨酸、赖氨酸、甘氨酸、天冬氨酸等含量均较高,胱氨酸等含量均最少.不同部位总氨基酸:蕲蛇肉(52.56％)＞蕲蛇鳞(44.85％)＞蕲蛇尾(44.43％)＞蕲蛇骨(42.69％)＞蕲蛇头(42.08％)＞蕲蛇药材(40.84％);必需氨基酸:蕲蛇肉(18.73％)＞蕲蛇鳞(15.72％)＞蕲蛇骨(14.92％)＞蕲蛇尾(13.57％)＞蕲蛇药材(13.45％)＞蕲蛇头(13.43％);蕲蛇酒炙后总氨基酸降低5.43％,必需氨基酸降低1.65％,除缬氨酸含量略显升高0.11％,其余均呈下降趋势,其中赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸和苏氨酸含量分别降低0.54％、0.25％、0.16％、0.10％、0.07％.结论:蕲蛇不同部位及酒炙后氨基酸种类相同,但含量存在差异.蕲蛇肉氨基酸类活性物质含量最高,蕲蛇酒炙后具有不良气味氨基酸含量降低,为古人的炮制意图提供了科学依据.

裘昌林主任中医师为第四批全国老中医药专家学术经验继承工作指导老师,从事神经内科临床工作40余年,学验俱丰,笔者有幸跟诊学习,受益良多.现将裘师治疗三叉神经痛验案一则介绍如下.患者陈某某,女,61岁.2016年5月4日初诊.患者2016年3月下旬以来,反复出现右面颌部疼痛,每次发作情况类似,均呈抽搐样疼痛,痛势剧烈,每次发作持续约数秒钟至3分钟,说话、进食或洗脸时易诱发疼痛,怕张嘴.2016年4月底疼痛进一步加重,在外院查三叉神经磁共振提示右侧三叉神经根部上方与小血管关系密切.予服用卡马西平片0.1/次,3次/天,服药后疼痛有所减轻但仍较剧烈.诊见:口苦,大便10日未解,右三叉神经痛第一第二支痛觉过敏.舌质偏红,右侧舌苔黄腻,脉弦细.中医诊断:头痛(肝经湿热证);西医诊断:三叉神经痛.治法:清利肝胆,搜风通络止痛.处方:炒白芍、川芎、生石膏(先煎)、郁李仁各30g,黄芩、生地黄、炒枳实、厚朴、豨莶草各15g,柴胡、当归、焦山栀、乌梢蛇各12g,地龙、蝉衣、甘草各9g,龙胆草、全蝎各6g,蜂房5g,细辛3g.7剂.每日1剂,水煎分2次服.并嘱续服弥可保片每次1片,1天3次.二诊:言语时右侧面颌掣痛仍有发作,但张嘴而不进食时已无疼痛,口苦得减,更衣不畅.舌红、苔微黄腻,脉弦细.前方去豨莶草,加泽泻12g,乌梢蛇改为蕲蛇6g.7剂.

目的:探究针灸联合蕲蛇酶注射液治疗血栓闭塞性脉管炎的临床价值,为丰富临床方法提供参考依据.方法:选取2015年2月至2018年6月黑龙江中医药大学附属第二医院收治的血栓闭塞性脉管炎患者100例作为研究对象,采用随机数字表法随机分为对照组和观察组,每组50例.对照组给予常规处理同时采用蕲蛇酶注射液治疗,观察组在对照组治疗的基础上加用针灸治疗.2组患者均同时治疗4周,观察2组患者治疗前、治疗2周后、治疗4周后的疗效和血液流变学等指标变化情况.结果:2组患者治疗前肢体发凉、静息痛、间歇性跛行、肤色异常、高切血黏度、低切血黏度、血浆比黏度、红细胞聚集指数、IgA、IgG、IgM比较,差异均无统计学意义(P>0.05).治疗2周、4周后,2组患者上述指标均较治疗前显著改善,且观察组上述指标均明显优于对照组(P<0.05).治疗4周后观察组临床治愈率、总有效率显著优于对照组(P<0.05).结论:针灸联合蕲蛇酶注射液能通过促进血液循环,提高机体免疫力,改善血栓闭塞性脉管炎的临床症状,从而提高疗效,可作为该疾病常规治疗手段.