目前已有多种影像学检查可用于肌肉骨骼感染的诊断。X光片作为常规检查，即便有时不能提供诊断性信息，但可提供感兴趣区的解剖概况，利于后续影像学方法的选择和诊断。MRI的灵敏度很高，可提供详细的解剖细节。骨显像可不受基础病变的影响，准确诊断骨髓炎。 67Ga主要用于脊柱骨髓炎的诊断。体外标记白细胞显像作为一种放射性核素检查方法，可用于糖尿病足骨髓炎和人工关节感染等复杂性骨髓炎的诊断，但不能用于诊断脊柱骨髓炎。抗粒细胞抗体和抗体片段具有一定的局限性，且不能广泛供应。 111In-生物素可用于脊柱骨髓炎的诊断。放射性标记抗菌肽泛素合成片段是一种有前景的特异性感染显像剂。 18F-脱氧葡萄糖(FDG)可用于脊柱骨髓炎的诊断，但其在糖尿病足骨髓炎和人工关节感染诊断方面的价值尚不明确。初步研究表明， 68Ga或可用于肌肉骨骼感染的诊断。 124I-fialuridine最初被认为可用作特异性感染显像剂，但随后的研究结果令人失望。PET/CT和SPECT/CT显像融合了解剖成像和功能显像，彻底改变了诊断影像学。这2种融合显像系统可提高诊断的准确性，并影响患者治疗方案的选择，从而重新定义了诊断学组在疑似或确诊感染和炎性反应患者中的价值。

评估一种重组抗菌肽与溶菌酶融合蛋白凝胶促进CO 2激光烧灼色素痣后创面愈合的安全性和有效性。2021年12月至2022年5月，浙江省人民医院整形外科就诊色素痣患者36例，男7例、女29例，年龄24~43(34.6±6.5)岁。采用自身半面对照试验，CO 2激光治疗色素痣后，右面部为试验组，用重组抗菌肽与溶菌酶融合蛋白凝胶含湿性缓释贴；左面部为对照组，创面不用药，保持干燥环境下自然愈合。于术后1、7、14、30、60、90 d随访观察两侧创面上皮化时间、红斑、色素沉着、平整度情况；治疗前后用VISIA检测仪拍照检测红斑、色素沉着指数、上皮化、平整度等参数，通过问卷调查患者对创面修复的满意度。试验侧痊愈29例、有效7例；对照侧痊愈15例、显效7例、有效7例、好转7例。试验侧痊愈比例高于对照侧，差异有统计学意义( P<0.05)，患者满意度更高。重组抗菌肽与溶菌酶融合蛋白凝胶可有效促进激光术后创面愈合，和自然愈合相比，术后外观更平整、患者满意度更高，可用于激光烧灼色素痣的创面修复。

糖尿病手部感染可导致坏疽、截肢,甚至死亡,截肢率远高于糖尿病足.本文报道1例牙签伤致2型糖尿病手部感染患者,手掌见长约8 cm不规则创口,手背见长约3、6、3 cm的3个纵行创口,符合截肢指征.在传统治疗的基础上,创面均匀喷洒重组溶菌酶-抗菌肽融合蛋白喷剂,1次/d.治疗后,患者创面愈合,避免了截肢.重组溶菌酶-抗菌肽融合蛋白应用于糖尿病手部感染是一种安全有效的治疗手段,可使部分患者免除截肢.

1 病例资料1.1 一般资料患者,男,39岁,于2016年7月7日发生车祸,左下肢撞伤,伤后即感疼痛剧烈,出血活跃,伴左下肢活动受限,紧急送往当地医院,查看病情并简单包扎处理,7 h后转诊至北京朝阳中西医结合急诊抢救中心.入院检查见左小腿中部内侧、外侧两处不规则伤口,创缘不整齐,皮下组织外露,深及肌层,创面污染严重,左足背大面积皮肤和软组织缺损,部分肌腱断裂伴缺损,关节脱位明显,压痛明显,左小腿及左足感觉减退,左小腿后外侧、足外侧缘及足根部感觉消失,足背动脉及胫后动脉搏动良好,左足各趾及踝关节活动受限,膝、髋关节活动正常.X线片见左腓骨中部骨折,未见位移,足第2、3、4跖趾关节脱位,第4、5跖跗关节脱位,余各骨未见明显骨质结构异常.凝血4项:纤维蛋白原1.46 g/L↓,凝血酶时间21.80 s↑.血中总蛋白50.8 g/L↓,白蛋白35.9 g/L↓,球蛋白14.9 g/L↓,葡萄糖2.80 mmol/L↓.白细胞13.95×109/L↑,中性粒细胞百分比90.10%↑,淋巴细胞百分比5.40%↓,红细胞3.19×1012/L↓.血红蛋白106.0 g/L↓.细菌培养结果为铜绿假单胞菌感染.

Cactus是昆虫NF-κB信号通路的核转录抑制因子(Inhibitor of nuclear transcription factor,IκB),可通过蛋白质间的相互作用与Toll信号通路中核转录因子(Nuclear transcription factor,NF-κB) Dorsal及Dif结合,从而调控抗菌肽基因的表达.为阐明Cactus在小菜蛾Toll信号通路中的功能,本研究利用RT-PCR结合RACE技术获得了小菜蛾Cactus基因的cDNA全长序列,命名为PxCactus(GenBank登录号:KY828920),其cDNA全长为1 868 bp,开放阅读框(Open reading frame,ORF)序列1 053 bp,编码350 aa.实时荧光定量PCR (qRT-PCR)对PxCactus的时空表达差异性检测表明,PxCactus基闪在小菜蛾不同的发育阶段都有表达,其中2龄幼虫表达量最低,4龄幼虫表达量最高;PxCactus在健康的4龄幼虫不同组织都有表达,其中在脂肪体中的表达量显著高于其它组织;在脂肪体中PxCactus的表达可以被Bacilhus thuringiensis和Serratia marcescens强烈诱导表达,而Metarhizium anisopliae抑制了PxCactus的表达.为了获得PxCactus的多克隆抗体,本实验构建了原核表达质粒pGEX-4T-PxCactus,并在大肠杆菌BL21 (DE3)中高效表达了融合蛋白GST-PxCactus,利用GST亲和柱纯化了融合蛋白,并免疫日本大耳兔制备了PxCactus多克隆抗体anti-PxCactus.ELISA和Western blot检测结果表明anti-PxCactus和PxCactus蛋白呈高效结合反应,表明已经成功制备的多克隆抗体;并利用Western blot检测到了小菜蛾脂肪体组织中的Cactus蛋白的表达.本研究成功克隆PxCactus基因及制备其多克隆抗体,为下一步研究PxCactus调控Toll信号传导,从而调控抗菌肽的表达奠定了分子基础.

目的 研究钛合金种植体表面加载抗菌肽涂层对骨结合的影响.方法 以微弧氧化(MAO)种植体为A组,微弧氧化-硅烷种植体为B组,微弧氧化-硅烷-抗菌肽Pac525种植体为C组,植入兔下颌骨内2周、4周、8周,采用激光共聚焦显微镜,扭力实验,扫描电镜(SEM)和能谱(EDS)等方法检测种植体与骨界面结合情况.结果 激光共聚焦显微镜,扭力实验显示C组优于B组和A组,B组优于A组,并具有统计学意义,扫描电镜及元素分析显示8周形成的宽大的骨融合带明显优于2周、4周的窄融合带,而4周骨融合带中活跃的元素分布明显优于2周.结论 经微弧氧化处理后的钛种植体通过硅烷偶联方式加载0.75 mg/ml的抗菌肽Pac525涂层可以促进骨的结合,达到增强种植体初期稳定性的效果.

目的:在毕赤酵母SMD1168中表达融合抗茵肽,并检测其体外抑菌活性.方法:本实验从实验室先前构建的重组质粒pVAX1-RHKJT中克隆出已构建好的融合抗茵肽RHKJT基因片段,将RHKJT基因片段插入至pGAPZaA真核表达质粒中,通过PCR和测序验证,构建pGAPZα-RHKJT重组真核表达质粒,将线性化的pGAPZα-RHKJT电转化至毕赤酵母SMD1168中获得重组酵母SMDpG-RHKJT,并通过PCR和RT-PCR验证,对重组毕赤酵母SMDpG-RHKJT进行发酵,并收集发酵上清液进行体外生物活性测定.结果:成功获得重组酵母SMDpG-RHKJT菌株,重组酵母发酵上清液对大肠杆菌标准茵、大肠杆菌耐药菌、沙门氏茵标准茵、金黄色葡萄球菌标准菌、金黄色葡萄球菌耐药菌、肺炎链球茵标准菌均具有显著的抑茵活性.结论:重组酵母表达的融合抗菌肽具有较广的抗茵谱和较高的抑菌活性,具有良好的潜在应用前景.

目的 通过融合牛乳铁蛋白肽基因(bovine lactoferricin B,LfcinB)与红色荧光蛋白(mApple)基因,构建以mApple为报告基因的酵母表达载体,融合表达重组蛋白LfcinB-mApple,并进行活性检测.方法 取含LfcinB和mApple基因的pYES2-α-LfcinB-G13、pYES2-α-mApple-DP-AP质粒,分别经PCR扩增后连接形成片段LfcinB-mApple,插入质粒pYES2-α(质粒pYES2-α-LfcinB-G 13经双酶切所得)中,将构建的重组表达质粒pYES2-α-LfcinB-mApple转入酿酒酵母菌株W303,半乳糖诱导表达.管碟法检测表达的LfcinB-mApple对大肠埃希菌DH5α、金黄色葡萄球菌的抑菌活性;激光共聚焦检测红色荧光蛋白荧光的发射.结果 重组表达质粒pYES2-α-LfcinB-mApple经酶切鉴定和测序证明构建正确;表达的重组LfcinB-mApple对大肠埃希菌DH5α、金黄色葡萄球菌均有明显抑菌活性;重组酵母细胞内观察到红色荧光.结论 重组酿酒酵母成功分泌表达了具有生物活性的LfcinB-mApple,对进一步研究LfcinB的生物功能及大规模生产提供了条件.

为了开发经济实用的新型免疫调节剂,以2A自剪切技术构建重组毕赤酵母Pichiapaaoris共同表达猪白细胞介素-2(IL-2)和融合抗菌肽基因,然后以重组基因工程酵母菌饲喂ICR小鼠,以实时荧光定量PCR、ELISA和流式细胞计数评估其对小鼠免疫力和生长的影响.实验结果显示,处理组(融合抗菌肽重组酵母菌、IL-2和融合抗菌肽重组酵母菌)小鼠的生长明显优于对照组(空质粒酵母菌)(P＜0.05),且血清IgG、IgG1和IgG2a含量显著升高(P ＜0.05);TLR1、TLR4、TLR6、TLR9、IL-7、IL-15、IL-23、CD62L、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、CRP4和CAMP基因的表达水平显著增加(P＜0.05).同时,处理组小鼠血液白细胞Th和Tc细胞明显增多(P＜0.05),免疫力和存活率均明显高于对照组(P＜0.05).重组酵母菌能有效增强小鼠的先天和获得性免疫力,促进生长,可进一步开发成安全有效的免疫调节生物制剂,改善动物的生长和免疫力.

利用毕赤酵母菌株表达家蝇抗菌肽domesticin基因并检测其抑菌活性.克隆家蝇domesticin基因与pPIC9k质粒相连,构建重组表达载体pPIC9K-domesticin,将其电击转化入毕赤酵母KM71中.甲醇诱导后利用Tricine-SDS-PAGE及Western Blot检测融合蛋白的表达,通过最小抑菌浓度测定表达产物的抑菌活性.结果显示家蝇抗菌肽Domesticin在毕赤酵母中成功表达,抑菌实验表明Domesticin对多种细菌具有抑制作用.Domesticin是一种对受试革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有抑菌活性的广谱新型抗菌肽,有望成为新一代抗菌剂.