目的:通过体外细胞模型，探讨蠲痹汤对骨关节炎（OA）的作用机制。方法:将ATDC5细胞分为4组：正常组、OA组、蠲痹汤组和Fer-1组。OA组加入10 ng/ml白细胞介素（IL）-1β诱导炎症杜尔伯科改良伊格尔（DMEM）培养基；蠲痹汤组加入IL-1β＋蠲痹汤诱导炎症DMEM培养基；Fer-1组加入IL-1β＋Fer-1诱导炎症DMEM培养基。进行蛋白质印迹法（Western blot）试验检测软骨细胞的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、环氧化酶-2（COX-2），Collagen Ⅱ、Aggrecan、基质金属蛋白酶13（MMP-13）、p53、ACSL4、SLC7A11和GPX-4的表达，使用细胞免疫荧光染色检测GPX-4的表达。利用化学发光法检测软骨细胞的代谢产物丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH）、Fe 2＋、线粒体内铁的含量。多组比较采用单因素方差分析。 结果:Fer-1组和蠲痹汤组的TNF-α（3.282±0.261、2.255±0.253）、iNOS（5.046±0.478、3.443±0.039）、COX-2（3.484±0.333、2.450±0.467）蛋白相对表达水平低于IL-1β组（4.384±0.601、6.863±0.637、4.812±0.496），差异有统计学意义（ t＝3.848、7.432、5.579、10.500、4.289、7.629， P<0.05）。Fer-1组和蠲痹汤组的MMP-13（2.738±0.224、4.276±0.663）、p53（3.364±0.898、4.289±0.936）、ACSL4（2.897±0.767、2.776±0.594）蛋白相对表达水平低于IL-1β组（5.779±0.018、7.413±1.635、6.077±0.847），差异有统计学意义（ t＝10.640、5.258、4.752、3.666、6.048、6.279， P<0.05）。Fer-1组和蠲痹汤组的Collagen Ⅱ（0.752±0.143、0.609±0.073）、Aggrecan（0.663±0.139、0.570±0.022）、SLC7A11（0.623±0.037、0.400±0.034）、GPX-4（0.686±0.041、0.537±0.065）蛋白相对表达水平高于IL-1β组（0.298±0.049、0.268±0.154、0.097±0.021、0.163±0.063），差异有统计学意义（ t＝4.661、3.895、4.631、3.538、23.700、13.660、12.890、9.226， P<0.05）。Fer-1组和蠲痹汤组的GPX-4（15.476±2.519、12.133±0.703）荧光强度高于IL-1β组（5.141±0.153），差异有统计学意义（ t＝8.117、5.491， P<0.05）。Fer-1组和蠲痹汤组的线粒体内铁（9.689±2.680、11.043±1.818）荧光强度低于IL-1β组（16.604±3.262），差异有统计学意义（ t＝3.675、2.955， P<0.05）。Fer-1组和蠲痹汤组的MDA[（8.755±0.390）、（10.915±0.379） nmol/ml]、Fe 2＋[（4.200±0.041）、（5.189±0.083） nmol]含量低IL-1β组[（13.130±0.430） nmol/ml、（7.109±0.071） nmol]，差异有统计学意义（ t＝14.960、7.573、59.230、39.090， P<0.05）。Fer-1组和蠲痹汤组的GSH[（7.215±0.382）、（6.988±1.246） μmol/g prot]含量高于IL-1β组[（4.826±0.426） μmol/g prot]，差异有统计学意义（ t＝4.240、3.838， P<0.05）。 结论:蠲痹汤通过调控SLC7A11-GSH-GPX4轴抑制软骨细胞铁死亡减轻炎性反应和细胞外基质降解。

目的:探讨蠲痹方含药血清对绝经后膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KO A)大鼠软骨细胞自噬的影响及其作用机制.方法:①绝经后KOA动物模型的建造和蠲痹方含药血清的制备.采用摘取大鼠卵巢,并切断膝关节内侧副韧带、前交叉韧带,摘除膝关节内侧半月板的方法,建造绝经后KOA大鼠模型.造模成功后,对模型大鼠进行蠲痹方浓缩液灌胃,制备蠲痹方含药血清.②大鼠软骨细胞的提取.分别取正常大鼠和模型大鼠的膝关节软骨分离、提取软骨细胞.③蠲痹方含药血清最佳作用浓度筛选.将模型大鼠软骨细胞分为模型组及1.25％、2.5％、5％、10％、20％含药血清组6组,除模型组外,其余各组分别加入相应体积分数的蠲痹方含药血清干预24 h.检测各组软骨细胞的活力,筛选蠲痹方含药血清最佳作用浓度.④蠲痹方含药血清对大鼠软骨细胞G蛋白耦联受体30(G protein-coupled receptor 30,GPR30)表达影响的检测.将模型大鼠软骨细胞分为模型组及1.25％、2.5％、5％、10％含药血清组,并取正常大鼠软骨细胞设为空白组.除模型组和空白组外,其他各组软骨细胞用相应体积分数的蠲痹方含药血清干预24 h.检测各组大鼠软骨细胞GPR30的相对表达量.⑤蠲痹方含药血清对大鼠软骨细胞自噬相关蛋白表达和 AMP 活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路影响的检测.将模型大鼠软骨细胞分为模型组、含药血清组、含药血清+Compound C组、Compound C组,并取正常大鼠软骨细胞设为空白组.除模型组和空白组外,含药血清组、含药血清+Compound C组、Compound C组分别用10％蠲痹方含药血清、10％蠲痹方含药血清+Compound C及Compound C干预24 h.检测各组软骨细胞中自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3β(microtu-bule-associated protein light chain 3 beta,MAPLC3β)、Beclin-1、p62,及 AMPK/mTOR 信号通路相关蛋白磷酸化 AMP 活化蛋白激酶(phosphorylated AMP-activated protein kinase,p-AMPK)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapam-ycin,p-mTOR)的相对表达量.结果:①动物模型鉴定结果.造模8周后,可见造模大鼠膝关节表面软骨毛糙或缺损,关节间隙变窄,滑膜增生,绝经后KOA大鼠模型造模成功.②软骨细胞鉴定结果.甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定结果显示,所提取的细胞符合软骨细胞特征.③蠲痹方含药血清最佳作用浓度筛选结果.5％、10％、20％含药血清组细胞活力均高于1.25％、2.5％含药血清组和模型组(LSD-t=6.767,P=0.003,LSD-t=7.666,P=0.002,LSD-t=5.091,P=0.007;LSD-t=5.080,P=0.007,LSD-t=6.690,P=0.003,LSD-t=3.433,P=0.027;LSD-t=7.590,P=0.002,LSD-t=8.200,P=0.001,LSD-t=6.031,P=0.004);10％含药血清组细胞活力高于5％含药血清组和20％含药血清组(LSD-t=3.204,P=0.033,LSD-t=4.671,P=0.010).④蠲痹方含药血清对大鼠软骨细胞GPR30表达影响的检测结果.模型组GPR30相对表达量低于空白组及5％、10％含药血清组(LSD-t=5.695,P=0.005,LSD-t=5.400,P=0.006,LSD-t=9.006,P=0.001),5％、10％含药血清组 GPR30 相对表达量均高于1.25％含药血清组(LSD-t=2.782,P=0.049,LSD-t=4.473,P=0.011),10％含药血清组GPR30相对表达量高于2.5％含药血清组(LSD-t=4.544,P=0.011).⑤蠲痹方含药血清对大鼠软骨细胞自噬相关蛋白表达影响的检测结果.模型组、含药血清+Compound C 组、Compound C 组 MAPLC3β 相对表达量均低于空白组、含药血清组(LSD-t=6.855,P=0.002,LSD-t=8.675,P=0.001;LSD-t=5.096,P=0.007,LSD-t=5.931,P=0.004;LSD-t=5.560,P=0.005,LSD-t=5.354,P=0.006);模型组、Compound C 组 MAPLC3β 相对表达量均低于含药血清+Compound C 组(LSD-t=4.627,P=0.010,LSD-t=8.677,P=0.001).模型组、Com-pound C组Beclin-1相对表达量低于空白组、含药血清组、含药血清+Compound C(LSD-t=12.912,P=0.000,LSD-t=7.401,P=0.002,LSD-t=5.360,P=0.006;LSD-t=2.950,P=0.042,LSD-t=5.484,P=0.005,LSD-t=3.903,P=0.018);含药血清+Com-pound C组Beclin-1相对表达量低于空白组(LSD-t=26.840,P=0.000).含药血清组、空白组p62相对表达量低于模型组、含药血清+Compound C 组、Compound C 组(LSD-t=3.925,P=0.017,LSD-t=3.985,P=0.019,LSD-t=0.016,P=0.001;LSD-t=3.149,P=0.035,LSD-t=5.094,P=0.007,LSD-t=8.740,P=0.001),含药血清+Compound C 组 p62 相对表达量低于 Compound C组(LSD-t=3.455,P=0.026).⑥蠲痹方含药血清对大鼠软骨细胞AMPK/mTOR信号通路影响的检测结果.含药血清组p-AMPK相对表达量高于模型组、Compound C 组(LSD-t=3.623,P=0.022,LSD-t=6.537,P=0.003),空白组 p-AMPK 相对表达量高于模型组、含药血清+Compound C 组、Compound C 组(LSD-t=4.149,P=0.014,LSD-t=2.791,P=0.049,LSD-t=5.734,P=0.004),含药血清+Compound C组p-AMPK相对表达量高于Compound C组(LSD-t=5.958,P=0.004).空白组、含药血清组、含药血清+Compound C 组 p-mTOR 相对表达量均低于模型组(LSD-t=8.722,P=0.001,LSD-t=8.849,P=0.001,LSD-t=5.558,P=0.005),含药血清组、空白组p-mTOR相对表达量均低于含药血清+Compound C组、Compound C组(LSD-t=4.201,P=0.014,LSD-t=10.030,P=0.001;LSD-t=4.879,P=0.008,LSD-t=9.782,P=0.001),含药血清+Compound C 组 p-mTOR 相对表达量低于Compound C组(LSD-t=6.934,P=0.002).结论:蠲痹方含药血清作用于绝经后KOA大鼠软骨细胞,可增加细胞活力,并通过上调MAPLC3β、Beclin-1的表达和抑制p62的表达增强细胞自噬能力;其作用机制可能与促进GPR30表达,上调AMPK磷酸化水平,下调mTOR磷酸化水平,激活GPR30和AMPK/mTOR信号通路有关.

基于网络药理学和细胞功能实验研究国医大师经验方蠲痹强骨方(JBQGF)治疗类风湿关节炎(RA)的潜在分子作用机制.通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、中医药百科全书数据库(ETCM)等获取JBQGF的主要活性成分和作用靶点,对核心靶点进行功能富集分析以及信号通路分析,采用Cytoscape 3.6.0 构建JBQGF的"活性成分-靶点-信号通路"的可视化网络.通过筛选获得JBQGF潜在作用通路 9 条,主要包括G蛋白偶联受体信号通路、酪氨酸激酶受体的信号传导通路等.结合课题组前期通过单细胞测序发现FGFR1 信号通路在RA活动期滑膜成纤维细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)中高度活化,通过细胞及动物实验证实抑制成纤维细胞生长因子受体 1(fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1)信号通路可以明显减轻CIA大鼠关节炎症及关节破坏.随后聚焦于酪氨酸激酶受体信号传导通路,对其进一步靶基因分析发现FG-FR1 可能是JBQGF治疗RA的潜在靶点.通过Western blot实验、Transwell侵袭实验以及血管翳骨片侵蚀实验初步验证了JBQGF抑制FGFR1 的磷酸化而发挥生物学效应,进而抑制基质金属蛋白酶 2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)和NF-κB配体受体激活因子(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)从而抑制RA成纤维细胞的侵袭,抑制血管翳的骨片侵蚀效应,为进一步通过网络药理学方法寻找治疗RA潜在的靶点和中医药治疗药物提供了思路.

骨关节炎属中医学“骨痹”范畴,从肾虚络痹辨治每获良效.本病的病机特点为肾虚血亏、经脉痹阻;肾虚血亏,筋骨失养是其病理基础;邪侵骨损,经脉痹阻是发病的关键.治宜补肾养血、蠲痹通络,自拟骨痹方加减施治.临证强调寓补于通,以平补为要;重在平补肝肾、填精养血,祛邪蠲痹而不伤正.

目的 观察关节镜手术联合蠲痹胶囊对膝骨性关节炎(KOA)患者关节液中一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)的影响及可能作用机理.方法 将72例膝骨性关节炎患者按随机数字表法分为治疗组和对照组,各36例.对照组行关节镜手术治疗,治疗组在对照组基础上联合蠲痹胶囊口服治疗,观察患者术前与术后1周、4周的膝关节功能WOMAC评分、疼痛VAS评分以及膝关节液中NO、SOD表达含量.结果 2组术后1周、4周的VAS评分、WOMAC评分与术前相比有显著差异(P<0.05),且组间差异具有统计学意义(P<0.05).2组术后1周NO含量均明显减少,且组间比较有差异(P<0.05),SOD含量降低不显著,组间无明显差异(P>0.05);术后4周,治疗组NO含量仍在下降,对照组NO含量逐渐升高,治疗组SOD含量显著升高,对照组变化不显著,2组相比有明显差异(P<0.05).结论 蠲痹胶囊联合关节镜手术能够明显降低KOA患者关节内NO的表达含量,中长期持续增强SOD活性,能够改善关节内环境,提高临床疗效.

[目的]介绍黄桂成教授从络病论治膝骨关节炎的辨证特点与用药经验.[方法]通过跟随黄桂成教授侍诊抄方,整理医案、临证揣摩,总结黄桂成教授从络病角度论治膝骨关节炎的经验,并附验案一则加以佐证.[结果]黄桂成教授认为筋骨由络脉充养,络脉不通是膝骨关节炎的病机本质,临证对于膝骨关节炎的辨证立足络病理论,从发病因素、病邪新旧、阴阳表里、寒热虚实、气病血病等方面着手,治疗上提倡“以通为用”,并善于运用辛味药、虫类药、藤类药、补益药等药通络蠲痹,临床疗效突出.所举医案患者辨为肝肾亏虚、寒湿阻络证,黄教授从“络”论治,以补益肝肾、温经通络为法,注重通络药与其他药物的灵活运用,经治后患者多年痼疾告愈.[结论]黄桂成教授诊疗膝骨关节炎,从“络”论治,强调辨证与用药的统一,思路清晰,特色突出,疗效明显,值得深入研究和推广.

目的 探讨蠲痹汤(JBT)对膝骨关节炎(KOA)小鼠模型淋巴管回流功能及关节病理退变的影响.方法 将120只C57BL小鼠随机分成JBT,莫比可(Mobic)与PBS组.小鼠右膝接受内侧半月板失稳(Destabilization of medial meniscus,DMM)手术以诱导KOA模型,左膝作为假手术对照.使用近红外光谱检测系统评估关节淋巴管回流情况;ABHO染色评估关节软骨的面积及OARSI评分;免疫组织化学染色观察膝关节II型胶原含量及软骨细胞退变指标蛋白聚糖降解产物(Nitege)的积累.结果 与PBS、Mobic组比较,JBT组小鼠膝关节的ICG清除率在术后4周和8周明显增强,OARSI评分较低;JBT组关节软骨中Nitege的表达低于PBS组,但是II型胶原表达高于PBS组.结论 JBT可以促进早期KOA小鼠膝关节淋巴管回流功能,并且延缓KOA的病理进程.蠲痹汤是一种有效治疗膝骨关节炎的中医药经典方剂,其疗效机制可能是通过上调关节淋巴回流功能实现的.

目的:观察加味除湿蠲痹汤联合椎弓根椎体截骨术治疗强直性脊柱炎后凸畸形湿热痹阻证的临床疗效.方法:90例患者被随机分为对照组和观察组,各45例.对照组给予椎弓根椎体截骨术+雷公藤多苷,观察组给予椎弓根椎体截骨术+加昧除湿蠲痹汤,疗程均为6个月.分别观察两组巴氏强直性脊柱炎病情活动指数(BASDAI),活动度衡量指数(BASMI),影像学指标,中医证候,血清促炎因子,抑炎因子,骨代谢指标[骨特异性碱性磷酸酶(BALP),抗酒石酸酸性磷酸酶异构体-5b(TRACP-5b),骨形态发生蛋白-2(BMP-2),骨钙素(BGP)],骨化相关蛋白[骨形态发生蛋白-7(BMP-7),Dickkopf相关蛋白-1(DKK-1),基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2),骨硬化蛋白(SOST)].比较两组临床疗效,随访至少12个月复发率及安全性指标.结果:观察组总有效率97.73％(43/44),高于对照组的80,95％(34/42) (x2=5.172,P＜0.05).治疗后与对照组比较,观察组BASDAI,BASMI,影像学指标,中医证候,促炎因子,TRACP-5b,BMP-7,TIMP-2水平明显降低(P＜0.05),抑炎因子,BALP,BMP-2,BGP,DKK-1,SOST水平明显升高(P＜0.05).随访至少12个月,观察组复发率4.65％(2/43),低于对照组的26.47％(9/34) (x2=4.261,P＜0.05).两组术后并发症发生率比较差异无统计学意义;观察组不良反应发生率2.27％(1/44),低于对照组的38.64％(17/44) (x2=5.763,P＜0.05).结论:加味除湿蠲痹汤联合椎弓根椎体截骨术治疗强直性脊柱炎后凸畸形湿热痹阻证疗效明显.

运用频率学网状Meta分析评价中成药治疗强直性脊柱炎(AS)的有效性及安全性.计算机检索中国知网(CNKI)、万方(Wanfang)、维普(VIP)、中国生物医学文献数据库(CBM)、PubMed、EMbase、Cochrane Library数据库,自建库至2021年1月收录的中成药治疗AS的随机对照试验(RCTs),用Cochrane偏倚风险评估工具对纳入文献进行质量评价,用RevMan 5.3、Stata/MP 15.1进行分析.最终纳入55项RCTs,12种中成药.网状Meta分析结果显示,在提升治疗AS总有效率方面,排名前3的干预措施为痹祺胶囊+常规西药、益肾蠲痹丸+常规西药、腰痹通胶囊+常规西药;降低血沉(ESR)方面,排名前3的干预措施为益肾蠲痹丸+常规西药、仙灵骨葆胶囊+常规西药、复方玄驹胶囊+常规西药;降低C-反应蛋白(CRP)方面,排名前3的干预措施为痹祺胶囊+常规西药、仙灵骨葆胶囊+常规西药、复方玄驹胶囊+常规西药;安全性方面,不良反应较少的前3种干预措施为白芍总苷胶囊+常规西药、益肾蠲痹丸+常规西药、尪痹片+常规西药.结果提示,中成药联合常规西药治疗可有效改善AS患者关节疼痛症状,降低急时相炎症指标,安全性高,但所纳入的研究方法学质量偏低,故该结论仍需更多高质量研究予以验证.

赵俐黎主任认为,强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)第一阶段为疾病的早期,病在足太阳膀胱经和督脉,治疗以除痹止痛为主,发汗通络为辅,方药采用羌活胜湿汤、大秦艽汤加麻黄、桂枝和虫类药物等;针灸采用针刺、督灸、刺络拔罐等,选用督脉、夹脊穴和足太阳膀胱经穴等.第二阶段为疾病的进展期,病在三阳经和督脉,治疗以通补为主,温补为辅,方药采用蠲痹汤、五虫四藤汤等;针灸采用火龙灸、温经通痹灸结合筋骨针、刺络拔罐等,选用足太阳、足少阳和足阳明经等腧穴.第三阶段为疾病的后期,疾病由经络传入脏腑,由三阳传入三阴,为三阴病证,治疗以温补为主,兼顾止痛,方药采用右归丸、独活寄生汤等;针灸采用督灸、天灸等,除选用督脉、足太阳膀胱经腧穴外,还可根据疾病累及的脏腑、经络使用相关腧穴.