目的:探讨谷氨酰胺对经烧伤大鼠血清（以下简称烧伤血清）干预的大鼠心肌细胞的作用及其细胞信号机制。方法:采用实验研究方法。取10只7~8个月龄雌雄各半Wistar大鼠制备正常大鼠血清（以下简称正常血清），另取20只7~8个月龄雌雄各半Wistar大鼠造成30%体表总面积Ⅲ度烧伤后制备烧伤血清，从180只1~3 d龄雌雄不拘Wistar大鼠心尖组织中分离培养原代心肌细胞用于后续实验。按随机数字表法（分组方法下同）将细胞分为正常血清组、烧伤血清组，加入相应血清培养。分别于培养1、3、6、9、12 h，采用锥虫蓝实验检测细胞存活率。将细胞分为单纯烧伤血清组、烧伤血清+4 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+8 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+16 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+20 mmol/L谷氨酰胺组，采用单纯烧伤血清或烧伤血清+相应终物质的量浓度谷氨酰胺处理，培养前实验筛选出的干预时间，同前检测细胞存活率。将细胞分为正常血清组、单纯烧伤血清组、烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+16 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+20 mmol/L谷氨酰胺组，同前处理后采用蛋白质印迹法检测培养30 min哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1（mTORC1）、p70核糖体蛋白S6激酶（p70 S6K）和真核翻译起始因子4E结合蛋白1（4E-BP1）磷酸化水平。将细胞分为正常血清组、单纯烧伤血清组、烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺+25 ng/mL雷帕霉素组，行相应处理后，分别于培养1、3、6 h，采用免疫荧光法检测热休克蛋白70（HSP70）和金属硫蛋白（MT）表达并观测微管形态。各组各时间点各指标样本数均为10。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD- t检验、LSD检验及Bonferroni校正。 结果:培养1、3、6、9、12 h，烧伤血清组细胞存活率均明显低于正常血清组（ t=4.950、16.752、35.484、34.428、27.781， P<0.01）。与组内培养1 h比，烧伤血清组培养3、6、9、12 h细胞存活率明显降低（ P<0.05）；与组内培养3 h比较，烧伤血清组培养6、9、12 h细胞存活率明显降低（ P<0.05）；与组内培养6、9 h比较，烧伤血清组培养12 h细胞存活率明显降低（ P<0.05）；烧伤血清组培养6、9 h细胞存活率比较，差异无统计学意义（ P>0.05）。因此选择培养6 h作为后续烧伤血清干预时间。培养6 h，与单纯烧伤血清组比较，烧伤血清+4 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+8 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+16 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+20 mmol/L谷氨酰胺组细胞存活率均明显升高（ P<0.01）。烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组与烧伤血清+16 mmol/L谷氨酰胺组细胞存活率相近（ P>0.05），烧伤血清+16 mmol/L谷氨酰胺组与烧伤血清+20 mmol/L谷氨酰胺组细胞存活率相近（ P>0.05）。因此选择12、16、20 mmol/L作为后续谷氨酰胺的干预浓度。培养30 min，正常血清组、单纯烧伤血清组、烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+16 mmol/L谷氨酰胺组、烧伤血清+20 mmol/L谷氨酰胺组细胞mTORC1、p70 S6K、4E-BP1磷酸化水平分别为1.001±0.042、0.510±0.024、0.876±0.022、0.836±0.074、0.856±0.041，1.00±0.11、0.38±0.09、0.95±0.13、0.96±0.13、0.89±0.24，1.00±0.07、0.29±0.08、0.87±0.27、0.68±0.08、0.60±0.21。与正常血清组比较，其余4个烧伤血清组细胞mTORC1、p70 S6K、4E-BP1磷酸化水平均明显降低（ P<0.01） 。与单纯烧伤血清组比较，其余3个烧伤血清组细胞mTORC1、p70 S6K、4E-BP1磷酸化水平均明显升高（ P<0.01）。烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组细胞4E-BP1磷酸化水平明显高于烧伤血清+16 mmol/L谷氨酰胺组和烧伤血清+20 mmol/L谷氨酰胺组（ P<0.05）。单纯烧伤血清组细胞培养1 h MT表达明显低于正常血清组（ P<0.05），其余时间点MT表达明显高于正常血清组（ P<0.01）；培养1、3、6 h，单纯烧伤血清组细胞HSP70表达明显高于正常血清组（ P<0.05），烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组细胞HSP70和MT表达均明显高于单纯烧伤血清组（ P<0.05），烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺+25 ng/mL雷帕霉素组细胞HSP70和MT表达均明显低于烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组（ P<0.01）。正常血清组细胞培养1、3、6 h微管结构完整，呈网格排列，染色均匀。单纯烧伤血清组细胞培养1 h部分微管出现断裂，部分网格排列不齐；培养3 h靠近细胞核微管结构清晰，细胞核远端微管模糊不清；培养6 h微管结构模糊不清。烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺组细胞培养各时间点微管破坏程度较单纯烧伤血清组轻。烧伤血清+12 mmol/L谷氨酰胺+25 ng/mL雷帕霉素组细胞培养各时间点微管形态与单纯烧伤血清组相近。 结论:烧伤血清可导致大鼠心肌细胞受损，细胞存活率明显下降。谷氨酰胺通过调控mTOR/p70 S6K/4E-BP1信号通路，促进心肌细胞HSP70和MT表达，稳定微管结构，从而发挥其细胞保护作用。

目的:探讨甘氨酸对经烧伤大鼠血清（以下简称烧伤血清）干预的大鼠心肌细胞的作用及其机制。方法:采用实验研究方法。取30只7~8周龄雌雄各半Wistar大鼠，其中10只用于制备正常大鼠血清（以下简称正常血清），将另20只造成30%体表总面积Ⅲ度烧伤后制备烧伤血清；从180只1~3 d龄雌雄不拘Wistar大鼠心尖组织中分离培养原代心肌细胞用于后续实验。按随机数字表法（分组方法下同）将细胞分为用相应血清处理的正常血清组、烧伤血清组，于处理1、3、6、9、12 h进行锥虫蓝染色检测细胞存活率；将细胞分为用烧伤血清处理6 h后常规培养30 min的单纯烧伤血清组和用烧伤血清处理6 h后加相应终物质的量浓度甘氨酸培养30 min的0.4 mmol/L甘氨酸组、0.8 mmol/L甘氨酸组、1.2 mmol/L甘氨酸组、1.6 mmol/L甘氨酸组、2.0 mmol/L甘氨酸组，即干预6.5 h，同前检测细胞存活率。将细胞分为正常血清组、单纯烧伤血清组、0.8 mmol/L甘氨酸组、1.2 mmol/L甘氨酸组、1.6 mmol/L甘氨酸组，分别同前干预6.5 h，采用高效液相色谱法检测腺苷一磷酸（AMP）和ATP含量并计算AMP/ATP比值，采用蛋白质印迹法检测磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1（p-mTORC1）、磷酸化p70核糖体蛋白S6激酶（p-p70 S6K）、磷酸化真核翻译起始因子4E结合蛋白1（p-4E-BP1）、磷酸化AMP活化蛋白激酶（p-AMPK）蛋白表达。将细胞分为同前干预的正常血清组、单纯烧伤血清组、0.8 mmol/L甘氨酸组和用烧伤血清处理后加2种试剂培养的0.8 mmol/L甘氨酸+25 ng/mL雷帕霉素组，于处理1、3、6 h行相应培养30 min，即干预1.5、3.5、6.5 h，采用免疫荧光法检测热休克蛋白70（HSP70）、金属硫蛋白（MT）和微管蛋白表达并观察干预6.5 h微管形态。各时间点样本数均为10。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD- t检验、LSD检验及Bonferroni校正。 结果:处理1、3、6、9、12 h，烧伤血清组细胞存活率均明显低于正常血清组（ t值分别为4.96、16.83、35.51、34.33、27.88， P<0.05）。在烧伤血清组中，处理3、6、9、12 h细胞存活率均较处理1 h明显降低（ P<0.05），处理6、9、12 h细胞存活率均较处理3 h明显降低（ P<0.05），处理6 h细胞存活率与处理9 h相近（ P>0.05）但明显高于处理12 h（ P<0.05）；选择处理6 h作为后续烧伤血清干预时间。干预6.5 h，与单纯烧伤血清组比较，各甘氨酸组细胞存活率均明显升高（ P<0.05）。0.8 mmol/L甘氨酸组细胞存活率最高，选择0.8、1.2、1.6 mmol/L作为后续甘氨酸的干预浓度。干预6.5 h，单纯烧伤血清组细胞AMP/ATP比值较正常血清组、1.2 mmol/L甘氨酸组、1.6 mmol/L甘氨酸组明显升高（ P值均<0.05），1.6 mmol/L甘氨酸组细胞AMP/ATP比值较0.8 mmol/L甘氨酸组明显降低（ P<0.05）。干预6.5 h，正常血清组、单纯烧伤血清组、0.8 mmol/L 甘氨酸组、1.2 mmol/L 甘氨酸组、1.6 mmol/L甘氨酸组细胞p-mTORC1、p-p70 S6K、p-4E-BP1蛋白表达水平分别为1.001±0.037、0.368±0.020、1.153±0.019、1.128±0.062、1.028±0.037，0.96±0.07、0.63±0.12、1.17±0.13、1.13±0.16、1.11±0.11，0.98±0.06、0.45±0.08、1.13±0.05、0.77±0.12、0.51±0.13。与单纯烧伤血清组比较，正常血清组与各甘氨酸组细胞p-mTORC1、p-p70 S6K和p-4E-BP1蛋白表达均明显升高（ P<0.05），p-AMPK蛋白表达均明显降低（ P<0.05）；与0.8 mmol/L甘氨酸组比较，1.2 mmol/L甘氨酸组细胞p-4E-BP1蛋白表达以及1.6 mmol/L甘氨酸组细胞p-mTORC1与p-4E-BP1蛋白表达均明显降低（ P<0.05）；与1.2 mmol/L甘氨酸组比较，1.6 mmol/L甘氨酸组细胞p-mTORC1、p-4E-BP1蛋白表达均明显降低（ P<0.05），p-AMPK蛋白表达明显升高（ P<0.05）。与正常血清组比较，单纯烧伤血清组细胞干预1.5、3.5、6.5 h微管蛋白表达均明显降低（ P<0.05），干预1.5、3.5 h HSP70表达和干预3.5、6.5 h MT表达均明显升高（ P<0.05）；单纯烧伤血清组与0.8 mmol/L甘氨酸+25 ng/mL雷帕霉素组细胞干预1.5、3.5、6.5 h HSP70、MT表达以及干预1.5、3.5 h微管蛋白表达均明显低于0.8 mmol/L甘氨酸组（ P<0.05）。干预6.5 h，与正常血清组比较，单纯烧伤血清组细胞微管结构紊乱；0.8 mmol/L甘氨酸组细胞边界较单纯烧伤血清组清晰，微管结构近核部位排列整齐；与0.8 mmol/L甘氨酸组比较，0.8 mmol/L甘氨酸+25 ng/mL雷帕霉素组细胞边界不清，微管结构紊乱。 结论:烧伤血清可导致大鼠心肌细胞受损，甘氨酸可通过AMP活化蛋白激酶显著上调哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/p70核糖体蛋白S6激酶/真核翻译起始因子4E结合蛋白1信号通路，促进心肌细胞保护性蛋白HSP70、MT和微管蛋白合成，稳定微管结构，实现心肌细胞保护作用。

目的:探讨17β-雌二醇(E2)对白细胞介素1-β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的抑制作用。方法:酶消化法获得软骨细胞，并将细胞分为5组，正常组(含有10%胎牛血清的培养基)；IL-1β组(10 ng/ml的IL-1β)；1×10 －9 mol/L组(10 ng/ml的IL-1β+1×10 －9 mol/L E2)；1×10 －8 mol/L组(10 ng/ml的IL-1β+1×10 －8 mol/L E2)；1×10 －7 mol/L组(10 ng/ml的IL-1β+1×10 －7 mol/L E2)。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力，膜联蛋白V(Annexin V)-碘化丙锭(PI)流式双染法检测细胞凋亡情况，酶联免疫吸附法(ELISA)法检测前列腺素E2(PGE2)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)、硫酸软骨素846(CS846)表达，蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中环氧化酶-2(COX-2)、B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)，基质金属蛋白酶-3(MMP-3)，MMP-13表达及核因子κB(NF-κB)信号通路激活情况。组间比较采用单因素方差分析。 结果:1×10 －9、1×10 －8、1×10 －7 mol/L组细胞活力、bcl-2表达量高于IL-1β组(0.53±0.05、0.61±0.06、0.69±0.06比0.78±0.07， t＝6.254， P<0.01)，(0.36±0.04、0.68±0.07、1.23±0.12比0.30±0.03， t＝5.210， P<0.05)，1×10 －9、1×10 －8、1×10 －7 mol/L组细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、PGE2含量、COMP含量、CS846含量、COX-2表达量、MMP-13表达量及p-NF-κB p65低于IL-1β组[(6.52±0.66)%、(13.26±1.43)%、18.54±1.85)%比(23.59±2.54)%， t＝6.324， P<0.01]、[(4.23±0.41)%、(6.87±0.69)%、(10.51±1.06)%比(15.84±1.58)%， t＝6.746， P<0.01]、[(23.69±2.80)、(36.23±3.62)、(48.21±4.82) ng/L比(59.82±5.98) ng/L， t＝5.326， P<0.01]、[(0.20±0.02)、(0.35±0.03)、(0.48±0.05) μg/L比(0.62±0.06) μg/L， t＝6.329， P<0.01]、[(0.35±0.03)、(0.48±0.05)、(0.65±0.03) ng/L比(0.78±0.08) ng/L， t＝6.534， P<0.01]、[(0.12±0.01)、(0.04±0.04)、(0.42±0.04)比(1.02±0.10)， t＝6.359， P<0.01]、[(0.25±0.02)、(0.30±0.03)、(0.65±0.07)比(1.02±0.13)， t＝5.984， P<0.01]、[(0.32±0.03)、(0.42±0.04)、(0.97±0.09)比(1.29±0.13)， t＝5.364， P<0.01]，1×10 －8、1×10 －7 mol/L组bax及MMP-3表达量低于IL-1β组[(0.76±0.07)、(0.43±0.04)比(1.36±0.14)， t＝6.547， P<0.01]、[(0.55±0.05)、(0.32±0.03)比(1.03±0.11)， t＝5.621， P<0.01]。 结论:17β-雌二醇能显著的抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及细胞外基质降解。

目的:探讨黄芪总黄酮(total flavonoids of astragalus，TFA)对硫代乙酰胺诱导大鼠肝纤维化及核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)信号通路的影响及其保护肝纤维化的可能作用机制。方法:根据随机数字法将78只大鼠分为正常组、模型组、TFA低剂量组、TFA中剂量组、TFA高剂量组、阳性药物组，每组13只。全自动生化分析仪测定血清门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase，AST)、谷丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase，ALT)水平。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)测定羟脯氨酸(hydroxyproline，Hyp)、Ⅲ型前胶原氨基端肽(procollagen type III aminoterminal propeptide，PⅢNP)、Ⅰ型胶原(collagen type I，Col-Ⅰ)、IV型胶原(collagen type IV，Col-Ⅳ)水平。伊红-苏木素(hematoxylin-eosin，HE)染色和Masson染色测定肝组织病理学变化。Western blot测定各组大鼠肝组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha，TNF-α)、细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinase，TIMP)蛋白水平。S-P免疫组化测定肝组织NF-κB P50、NF-κB P65蛋白表达。结果:与模型组相比，TFA各剂量组大鼠体重增长量明显增加，肝指数明显降低，差异均有统计学意义[ (131.50±27.90)g比(142.44±23.32)g比(155.65±22.88)g比(156.06±15.83)g，(6.28±0.53)%比(5.59±0.72)%比(5.55±0.52)%比(5.13±0.77)%, F值分别为23.66和46.41， P值均<0.05]。与模型组比较，TFA各剂量组大鼠血清AST、ALT水平明显降低，血清Hyp、PIIINP、Col-I、Col-IV含量明显降低，差异均有统计学意义[AST(U/L)：(270.35±28.63)比(217.58±20.52)比(188.27±40.50)比(183.65±27.38)，ALT：(432.30±39.24)比(294.36±47.49)比(290.30±49.41)比(267.78±45.34)，Hyp(μg/L)：(12.51±0.46)比(5.67±0.97)比(5.39±0.56)比(4.67±0.74)，PIIINP(μg/L): (23.79±2.94)比(21.58±2.83)比(18.84±1.68)比(16.50±2.04)，Col-I(μg/L): (825.32±43.97)比(771.37±37.60)比(734.43±45.50)比(740.02±42.95)，Col-IV(μg/L): (25.39±3.27)比(7.66±2.88)比(6.17±1.99)比(6.40±1.94)， F值分别为72.13、55.21、280.67、27.14、14.78和157.08， P值均<0.05]。HE染色和Masson染色显示，模型组大鼠肝小叶结构紊乱，汇管区坏死、肝细胞增多、炎症细胞增多，成纤维细胞大量增生，有假小叶形成；阳性药物组和TFA各剂量组大鼠肝组织病理损伤较模型组明显减轻。与模型组比较，TFA组大鼠肝组织TNF-α、ICAM-1、TIMP蛋白水平明显降低，MMP-9蛋白水平明显升高，差异均有统计学意义[(0.75±0.13)比(0.48±0.09)，(0.72±0.11)比(0.49±0.10)，(0.36±0.05)比(0.19±0.03)，(0.34±0.06)比(0.45±0.03)， F值分别为39.89、49.03和104.88， P值均<0.05]。模型组大鼠肝组织中NF-κB P50、NF-κB P65表达量明显增加，表现为棕黄色或棕褐色颗粒，TFA组大鼠肝组织NF-κB P50、NF-κB P65蛋白表达明显低于模型组，差异均有统计学意义[(0.37±0.04)比(0.25±0.03)，(0.35±0.03)比(0.23±0.02)， F值分别为251.23和329.33， P值均<0.05]。 结论:TFA对肝纤维化具有保护作用，其机制可能与TFA可通过抑制NF-κB信号通路激活抑制肝组织炎症反应有关。

目的:探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征（ALI/ARDS）中的作用及可能的发病机制。方法:①体内实验：将24只SPF级野生C57BL/6雄性小鼠随机分为正常对照组、ALI/ARDS模型组、丙酮酸乙酯（EP）治疗组和EP对照组，每组6只。采用腹腔注射20 mg/kg LPS制备ALI/ARDS模型，正常对照组和EP对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水；之后EP治疗组和EP对照组小鼠分别腹腔注射40 mg/kg HMGB1抑制剂EP。6 h后处死小鼠取肺组织，采用免疫荧光技术检测小鼠肺组织硫酸乙酰肝素（HS）、多配体蛋白聚糖-1（SDC-1）、乙酰肝素酶（HPA）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达。取小鼠眼眶血，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清HMGB1含量。②体外实验：将人脐静脉内皮细胞（HUVECs）随机分为正常对照组、HUVECs损伤组（1 mg/L LPS处理6 h）、HMGB1组（1 μmol/L重组HMGB1处理6 h）、HMGB1+EP组（重组HMGB1处理1 h后加入1 μmol/L EP处理6 h）、LPS+EP组（LPS处理1 h后加入1 μmol/L EP处理6 h）和EP组（1 μmol/L EP处理6 h）。采用免疫荧光技术检测内皮细胞HS、SDC-1、HPA和MMP-9的表达。结果:①体内实验：光镜下显示，LPS制模后肺泡间隔增厚，肺泡间隙有大量炎症细胞浸润。与ALI/ARDS模型组相比，EP治疗组小鼠肺组织HS和SDC-1表达量均明显升高〔HS（荧光强度）：0.80±0.20比0.53±0.02，SDC-1（荧光强度）：0.72±0.02比0.51±0.01，均 P<0.05〕，HPA和MMP-9表达量均明显降低〔HPA（荧光强度）：2.36±0.05比3.00±0.04，MMP-9（荧光强度）：2.55±0.13比3.26±0.05，均 P<0.05〕；EP对照组上述指标表达量均无明显变化。与ALI/ARDS模型组相比，EP治疗组血清HMGB1含量明显降低（μg/L：131.88±16.67比341.13±22.47， P<0.05）；EP对照组无明显变化。②体外实验：与HMGB1组相比，HMGB1+EP组内皮细胞HS和SDC-1表达量均明显升高〔HS（荧光强度）：0.83±0.07比0.56±0.03，SDC-1（荧光强度）：0.80±0.01比0.61±0.01，均 P<0.05〕，HPA和MMP-9表达量均明显降低〔HPA（荧光强度）：1.30±0.02比2.29±0.05，MMP-9（荧光强度）：1.55±0.04比2.50±0.06，均 P<0.05〕；EP组HS、SDC-1、HPA和MMP-9表达量均无明显变化。 结论:HMGB1参与LPS所致内皮细胞多糖包被的损伤，导致肺通透性增加，抑制HMGB1可减轻肺损伤。

目的:建立高效的人肠三叶因子（ITF）重组表达及纯化策略，观察重组人ITF（rhITF）对烧伤小鼠肠黏膜损伤与修复的作用并探讨其机制。方法:采用实验研究方法。采用新型酵母表达载体pGAPZαA和酵母菌X33重组表达ITF，并通过金属螯合亲和层析与阴、阳离子交换层析法纯化蛋白，行非还原十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）及蛋白质印迹法鉴定rhITF。rhITF与胃蛋白酶溶液、胰蛋白酶溶液按体积比1∶1混合，分别作用0.5、1.0、1.5、2.0 h和1.0、2.0、4.0 h后行非还原SDS-PAGE，分析rhITF的稳定性。按随机数字表法将105只6~8周龄BALB/c雄性小鼠分为假伤组（30只）、单纯烧伤组（45只）、烧伤+rhITF组（30只）。将单纯烧伤组和烧伤+rhITF组小鼠背部造成30%体表总面积Ⅲ度烧伤，假伤组小鼠模拟致假伤，烧伤+rhITF组小鼠伤后灌胃1 mg/kg rhITF，其余2组小鼠伤后给予等量生理盐水。伤后24 h，取15只单纯烧伤组小鼠，制备烧伤血清，用于细胞实验。伤后3、5、7 d，每组各取10只小鼠处死后取小肠组织，苏木精-伊红染色观察肠黏膜病理变化，分光光度法和酶联免疫吸附测定法测定肠组织二胺氧化酶（DAO）及乳酸脱氢酶（LDH）活性。取3批人结直肠腺癌HT-29细胞，分为阴性对照组、25 μg/mL rhITF组、50 μg/mL rhITF组（样本数为3），正常对照组、烧伤血清组、烧伤血清+rhITF组（样本数为3），CK869抑制剂组、CK666抑制剂组和溶剂对照组（样本数为2），分别进行相应处理，Transwell实验观察培养12 h后细胞移行。另取2批HT-29细胞，每批细胞均分为正常对照组、烧伤血清组和烧伤血清+rhITF组（样本数均为6），培养24 h后，蛋白质印迹法检测细胞腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化AMPK（p-AMPK）、Ras相关C3肉毒杆菌毒素底物1（Rac1）及肌动蛋白相关蛋白2/3（Arp2/3）复合亚基1B（ARPC1B）蛋白表达，活化磁珠下拉实验检测细胞Rac1活性。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、SNK检验。结果:每升发酵液获得rhITF 82.35 mg，蛋白纯度高达98%，且具有良好的抗原特异性。rhITF在胃蛋白酶和胰蛋白酶溶液中较稳定，与胰蛋白酶溶液作用2.0 h后仍有45%残余，与胃蛋白酶溶液作用4.0 h后仍有90%残余。假伤组小鼠伤后各时间点肠黏膜未见充血、水肿，单纯烧伤组小鼠伤后各时间点肠黏膜主要病理表现为充血、水肿、糜烂及出血。烧伤+rhITF组小鼠伤后3、5 d肠黏膜主要以充血、水肿为主，伤后7 d肠黏膜水肿和充血减轻。与单纯烧伤组比较，假伤组、烧伤+rhITF组小鼠伤后3、5、7 d肠组织DAO和LDH活性显著升高（ P<0.05或 P<0.01）。培养12 h后，25 μg/mL rhITF组细胞移行数为（58±12）个，显著多于阴性对照组的（16±5）个（ P<0.01），显著少于50 μg/mL rhITF组的（123±9）个（ P<0.05）。培养12 h后，烧伤血清组细胞移行数为（60±13）个，显著少于正常对照组的（143±11）个和烧伤血清+rhITF组的（138±8）个（ P<0.05）。培养12 h后，溶剂对照组细胞移行数为（155±9）个，明显多于CK666抑制剂组的（33±5）个、CK869抑制剂组的（28±5）个（ P<0.01）。培养24 h后，烧伤血清组细胞AMPK、Rac1蛋白表达量与正常对照组、烧伤血清+rhITF组相近（ P>0.05），p-AMPK蛋白表达量明显高于正常对照组、烧伤血清+rhITF组（ P<0.05或 P<0.01），ARPC1B蛋白表达量明显低于正常对照组、烧伤血清+rhITF组（ P<0.05）。培养24 h后，烧伤血清组细胞Rac1活性明显低于正常对照组、烧伤血清+rhITF组（ P<0.05或 P<0.01）。 结论:本研究获得的rhITF具有较高的纯度和超强的稳定性，能耐受极端pH和蛋白酶水解，减轻烧伤小鼠肠黏膜损伤。rhITF能通过抑制AMPK磷酸化维持Rac1-Arp2/3活性，促进肠上皮细胞移行，加速肠黏膜修复。

目的 探讨血清金属硫蛋白1H(MT1H)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)对骨肉瘤(OS)患儿免疫靶向治疗疗效的评估价值.方法 选取52例OS患儿,均采取a干扰素联合贝伐珠单抗治疗,治疗前、治疗12周后检测OS患儿的血清MT1H、MIF水平.记录OS患儿的治疗效果,将完全缓解和部分缓解患儿纳入有效组,疾病稳定和疾病进展患儿纳入无效组.比较有效组和无效组患儿的临床特征,采用Logistic回归模型分析OS患儿免疫靶向治疗疗效的影响因素.结果 治疗12周后,OS患儿血清MT1H、MIF水平均明显低于治疗前,差异均有统计学意义(P＜0.01).52例患儿中,治疗有效35例,治疗无效17例.有效组患儿治疗后碱性磷酸酶(ALP)、MT1H、MIF水平均低于无效组,差异均有统计学意义(P＜0.05).多因素Logistic回归分析结果显示,治疗后ALP、MT1H、MIF高水平均是OS患儿免疫靶向治疗疗效的独立危险因素(P＜0.05).结论 血清MT1H和MIF水平对OS患儿免疫靶向治疗疗效具有重要的评估价值,可为临床治疗方案的制订提供一定依据.

目的 探究硫酸氨基葡萄糖联合美洛昔康对膝骨关节炎患者血清成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)水平及膝关节运动功能的影响.方法 选择2021 年6 月—2023 年6 月就诊的膝骨关节炎114例,以随机数字表法分为联合组和美洛昔康组各57 例.美洛昔康组予美洛昔康片治疗,联合组在美洛昔康组基础上加用硫酸氨基葡萄糖胶囊治疗,均治疗6 周后观察疗效,比较2 组治疗前、治疗6 周后膝关节运动功能、炎性因子、生长因子水平及治疗期间安全性.结果 治疗6 周后,联合组总有效率为91.23%(52/57)高于美洛昔康组的 73.68%(42/57)(P＜0.05).治疗6 周后,2 组5 次坐立试验、2.4m起立行走试验所需时间短于治疗前,且联合组短于美洛昔康组(P＜0.05,P＜0.01);西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数评分及血清前列腺素E2、白细胞介素-17、基质金属蛋白酶-3 水平低于治疗前,且联合组低于美洛昔康组(P＜0.05,P＜0.01).治疗6 周后,2 组血清FGF-2、TGF-β、IGF-1 水平均高于治疗前,且联合组高于美洛昔康组(P＜0.05,P＜0.01).2 组治疗期间总不良反应发生率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 硫酸氨基葡萄糖联合美洛昔康可有效升高膝骨关节炎患者血清FGF-2、TGF-β、IGF-1 水平,延缓软骨退行性病变,控制机体炎症反应,进而有效改善患者膝关节运动功能,疗效显著,安全性良好.

目的 探讨三乌胶丸治疗寒湿痹阻证膝骨关节炎的疗效.方法 按照随机数表法将304例膝骨关节炎患者分为对照组和研究组,各152例.对照组给予美洛昔康片、硫酸氨基葡萄糖片治疗,研究组在对照组基础上加用三乌胶丸治疗,均治疗28d.比较2组治疗28d后的疗效,治疗前和治疗28 d后的中医症状、膝关节功能、疼痛情况、骨代谢指标、血清基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、Smad-1水平及治疗期间的安全性.结果 研究组治疗28 d后的总有效率(93.42％,142/152)高于对照组(78.95％,120/152)(P＜0.05).治疗28 d后,2组中医症状、西安大略麦克马斯特大学骨关节炎指数(Western Ontario and McMaster University Osteoarthritis Index,WOAMC)、视觉模拟评分法(visual analog scale,VAS)评分及血清 MMP-1、MMP-3 水平与治疗前比较降低,研究组低于对照组(P＜0.05);血清骨特异性碱性磷酸酶(bone-specific alkaline phosphatase,BALP)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、骨钙素(bone gla-protein,BGP)、Smad-1 水平升高,研究组高于对照组(P＜0.05).研究组治疗期间不良反应总发生率低于对照组(P＜0.05).结论 三乌胶丸可调节寒湿痹阻证膝骨关节炎患者血清MMP-1、MMP-3、Smad-1及骨代谢指标水平,促进软骨修复,改善患者中医症状、膝关节功能,减轻疼痛程度,提高疗效和安全性.

目的 探讨血清可溶性肿瘤坏死因子受体P55(sTNFR-P55)、金属硫蛋白1E(MT1E)对雌激素受体(ER)阳性乳腺癌根治术病人临床转归的影响.方法 2017年2月～2018年3月在本院治疗的ER阳性乳腺癌根治术病人146例,依据术后临床转归情况分为复发转移组和未复发转移组,比较两组病人的临床资料、血清sTNFR-P55、MT1E水平.采用多因素Logistic回归分析影响ER阳性乳腺癌根治术病人临床转归的相关因素.制作受试者工作特征(ROC)曲线,以曲线下面积(AUC)分析血清sTNFR-P55、MT1E及两者联合对ER阳性乳腺癌根治术病人临床转归的预测价值.结果 截止随访结束,146例ER阳性乳腺癌根治术病人共有32例发生复发转移.复发转移组肿瘤直径、肿瘤坏死因子-α、糖类抗原125(CA125)、细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)、癌胚抗原(CEA)、肿瘤分期为Ⅲ期占比、血清sTNFR-P55、MT1E水平均高于未复发转移组(P＜0.05).多因素 Logistic 回归分析显示,CYFRA21-1(OR=2.768,95％CI 1.107～6.920)、CEA(OR=2.751,95％CI 1.101～6.879)、肿瘤分期为 Ⅲ期(OR=3.611,95％CI 1.444～9.029)、sTNFR-P55(OR=3.343,95％CI 1.337～8.361)及 MT1E(OR=3.267,95％CI 1.307～8.169)均为影响ER阳性乳腺癌根治术病人临床转归的相关因素(P＜0.05).ROC曲线分析结果显示,血清sTNFR-P55、MT1E及两者联合对ER阳性乳腺癌根治术病人临床转归预测的灵敏度分别为 78.12％(95％CI 59.56～90.06)、75.00％(95％CI 56.25～87.87)、71.88％(95％CI 53.02～85.60),特异度分别为 63.16％(95％CI 53.56～71.85)、75.44％(95％CI 66.32～82.80)、96.49％(95％CI 90.73～98.87),AUC 分别为 0.723(95％CI 0.642～0.793)、0.760(95％CI 0.682～0.827)、0.880(95％CI 0.816～0.928).结论 血清 sTNFR-P55、MT1E 与 ER 阳性乳腺癌根治术病人临床转归有关,且血清sTNFR-P55、MT1E两者联合对ER阳性乳腺癌根治术病人临床转归预测效能较高.