采用超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)技术同时测定正常大鼠和糖尿病模型大鼠血浆中补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚、补骨脂查尔酮、补骨脂二氢黄酮甲醚、补骨脂宁、补骨脂甲素、补骨脂乙素、新补骨脂异黄酮、巴库查尔酮及corylifol A 11种有效成分,以阐明补骨脂香豆素类、黄酮类及单萜酚类在正常和糖尿病模型大鼠体内的药代动力学特征.以高糖高脂饲料结合每2d注射一次1％链脲佐菌素诱导2型糖尿病(T2DM)大鼠模型,灌胃给予补骨脂后采集不同时间点血浆,血浆样品经乙酸乙酯沉淀蛋白,以UHPLC-MS/MS测定血浆中补骨脂11种成分的血药浓度,采用DAS 3.0软件计算药动学参数.结果显示,雌、雄性T2DM大鼠灌胃给予补骨脂,补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚、补骨脂二氢黄酮甲醚等8种受试成分的药动学行为与正常大鼠存在显著性差异.其中香豆素类成分补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂宁在雌性与雄性T2DM大鼠体内均出现入血暴露水平降低,但黄酮类成分如补骨脂二氢黄酮甲醚、corylifol A、巴库查尔酮以及单萜酚类成分补骨脂酚在雌性T2DM大鼠体内的暴露减少,而在雄性患病大鼠体内暴露增多,提示补骨脂在临床用药时针对不同性别患者应合理调整服用剂量.

背景与目的 探索来源于传统中药补骨脂和淫羊藿中治疗肝癌的有效成分,或者两种中药中协同治疗肝癌的有效成分,以期为补骨脂和淫羊藿在治疗肝癌中的临床应用提供科学依据.方法 本研究以淫羊藿和补骨脂所含化学成分为研究对象,采用细胞增殖及毒性试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测人肝癌HepG2细胞活力,构建药物浓度-细胞活力响应曲线,分析这些成分对HepG2细胞活力的影响,并结合协同效应指数明确上述成分对肝癌细胞的协同抑制作用及强弱关系.结果 CCK-8测定结果显示,补骨脂中补骨脂甲素、新补骨脂异黄酮、补骨脂定、异补骨脂二氢黄酮、补骨脂酚、补骨脂乙素、补骨脂二氢黄酮甲醚对HepG2细胞活力具有显著抑制作用,其中补骨脂甲素呈显著剂量-效应关系;淫羊藿中只有淫羊藿次苷II对HepG2细胞活力具有显著抑制作用,提示这8种成分是潜在抑制肝癌细胞活力的有效成分.随后,我们以补骨脂甲素为主要药效成分,筛选与其联用协同抑制肝癌细胞活力的有效成分.协同效应指数结果显示,7种补骨脂成分(补骨脂二氢黄酮甲醚、补骨脂苷、补骨脂乙素、异补骨脂二氢黄酮、新补骨脂异黄酮、补骨脂酚和补骨脂定)和8种淫羊藿成分(淫羊藿苷、淫羊藿素、朝藿定A1、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷A、淫羊藿次苷Ⅰ和淫羊藿次苷II)与补骨脂甲素联用后,对HepG2细胞活力均具有协同抑制作用,其中淫羊藿次苷II或补骨脂定呈剂量依赖,淫羊藿次苷II的协同效应指数最大(q = 2.69),其次是补骨脂定(q = 2.6).结论 淫羊藿和补骨脂中均含有抑制肝癌细胞活力的有效成分,补骨脂和淫羊藿中成分可以不同强度协同补骨脂甲素抑制肝癌细胞活力.本研究可为淫羊藿和补骨脂配伍治疗肝癌的物质基础提供科学依据.

目的 采用高内涵技术筛选补骨脂潜在肝毒性成分及其可能的作用机制.方法 采用CCK-8法测定补骨脂中异补骨脂二氢黄酮、补骨脂二氢黄酮甲醚、补骨脂二氢黄酮、异补骨脂查尔酮、4'-O-甲基补骨脂查尔酮、补骨脂宁、补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂定、补骨脂酚10 种成分的IC50 值.在相同浓度药物处理HepG 2细胞 24 h后,进行高内涵检测,通过阳性细胞的平均荧光强度评价各组细胞活性氧、还原型谷胱甘肽、线粒体膜电位及线粒体超氧化物水平4个指标的变化情况,初步筛选补骨脂中主要肝毒性成分.结果 CCK-8细胞活力实验结果显示,异补骨脂二氢黄酮、补骨脂二氢黄酮甲醚、补骨脂二氢黄酮、异补骨脂查尔酮、4'-O-甲基补骨脂查尔酮、补骨脂宁、异补骨脂素、补骨脂定、补骨脂酚对HepG 2细胞的IC50 值分别为52.69、42.72、83.63、42.29、57.43、110.80、1 420.00、23.58和25.34 μmol·L-1.高内涵结果显示,在20 μmol·L-1 浓度下,补骨脂二氢黄酮甲醚、补骨脂二氢黄酮、异补骨脂查尔酮、补骨脂定和补骨脂酚可显著提高细胞内活性氧水平;异补骨脂查尔酮、4'-O-甲基补骨脂查尔酮、补骨脂宁、异补骨脂素、补骨脂定和补骨脂酚均可导致细胞中还原型谷胱甘肽水平保护性升高;异补骨脂查尔酮、补骨脂定和补骨脂酚均显著降低线粒体膜电位,造成线粒体超氧化物累积.结论 异补骨脂查尔酮、补骨脂定和补骨脂酚是补骨脂中造成线粒体功能损伤的主要成分,具有潜在的肝脏毒性,其具体作用机制有待进一步研究.

补骨脂二氢黄酮甲醚是来源于豆科补骨脂属植物补骨脂Psoralea corylifolia L.干燥成熟果实的二氢黄酮类成分,具有抗肿瘤、抗病毒、抗糖尿病、抗炎及神经保护等药理活性,有着良好的临床应用潜力.随着临床上对补骨脂用药安全的不断关注,补骨脂二氢黄酮甲醚已被证实会造成肝细胞损伤.本文综述了近 20年来关于补骨脂二氢黄酮甲醚的药理活性及肝毒性研究概况,为补骨脂二氢黄酮甲醚的后续研究和临床应用提供参考.

目的 利用HepaRG细胞,探讨补骨脂二氢黄酮甲醚毒性剂量及其毒性作用机制.方法 MTT法确定毒性及剂量.以浓度为6.25、12.5、25 μmol·L-1的补骨脂二氢黄酮甲醚作用于细胞24 h后,首先利用Hoechst 33342/PI及LDH的方法检测细胞死亡,并检测凋亡相关蛋白 Bax、Bcl-2、caspase-3活性.通过检测线粒体膜电位、ATP含量、线粒体膜通道开放孔开放性及细胞色素C的含量,观察其对线粒体损伤的影响.结果 补骨脂二氢黄酮甲醚给药24 h后,凋亡蛋白Bax/Bcl-2比例、caspase-3活性随药物浓度增大而增加,在6.25~25 μmol·L-1时,其凋亡率呈现明显的剂量依赖性,但在25 μmol·L-1时细胞以坏死为主.作用24 h后线粒体损伤相关指标明显加剧.结论 补骨脂二氢黄酮甲醚作用于HepaRG细胞后通过损伤线粒体诱导细胞凋亡和坏死.

目的 探讨盐炙对青娥丸中主要成分溶出的影响.方法 采用HPLC法测定了青娥丸生品、清炒品、盐润品、盐炙品中15种指标性成分含有量.结果 补骨脂酚经过炮制后含有量均呈显著性降低.与青娥丸生品相比,清炒后补骨脂苷、异补骨脂苷含有量显著升高,京尼平苷酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷含有量无显著变化,其他成分含有量均下降;盐水闷润后,补骨脂苷和异补骨脂苷含有量下降,补骨脂素与异补骨脂素含有量显著升高;盐炙后补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂二氢黄酮、补骨脂二氢黄酮甲醚含有量明显下降,补骨脂苷、异补骨脂苷、异补骨脂二氢黄酮含有量明显升高,其他成分无显著性变化.结论 该方法准确稳定,重复性好,可用于青娥丸的质量控制.

目的 优化补骨脂酒制工艺.方法 以烘制温度、加热时间、黄酒量为影响因素,补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂甲素、补骨脂乙素、补骨脂宁、补骨脂定、补骨脂酚、补骨脂二氢黄酮甲醚含有量的综合评分为评价指标,Box-Behnken设计优化酒制工艺.结果 最佳条件为每100 g补骨脂中加入17g黄酒,169℃下加热烘制9 min,补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂甲素、补骨脂乙素、补骨脂宁、补骨脂定、补骨脂酚、补骨脂二氢黄酮甲醚含有量分别为0.381％、0.395％、0.470％、0.877％、0.344％、0.626％、8.041％、0.915％,综合评分86.21.结论 该方法稳定可靠,可用于酒制补骨脂.

目的 研究补骨脂二氢黄酮甲醚在大鼠体内的组织分布.方法 通过超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法,分析采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1mm×100 mm,1.8 μm);流动相0.05％甲酸-乙腈,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温30℃;ESI离子源;正离子模式.大鼠灌胃给予补骨脂二氢黄酮甲醚(70 mg/kg)后,于不同时间点(0.083、0.25、0.5、1、4h)测定其在心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、小肠中的组织浓度.结果 各组织中均检测到补骨脂二氢黄酮甲醚,其组织浓度依次为胃＞小肠＞肝＞肺＞肾＞脾＞心＞脑,除胃、小肠(0.25 h)外其他组织在0.5h达到最高浓度.结论 该方法简便、稳定、可靠,可用于补骨脂二氢黄酮甲醚的体内分析.

目的:建立三七药酒HPLC指纹图谱,为三七药酒质量评价提供检测方法.方法:采用HPLC方法建立三七药酒的指纹图谱.采用Welch Ultimate XB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5-Micron),以乙腈(A)-0.05％乙酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0～24 min,14％A→20％A;24～40 min,20％A→45％A;40～50min,45％A→55％A;50～70 min,55％A→65％A;70～75 min,65％A→90％A;75～90 min,90％A),流速1mL·min-1,检测波长240 nm,柱温25℃.运用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”对不同季节生产的21个批次的三七药酒进行相似度评价;采用LC-MS对共有峰进行鉴定.结果:建立了三七药酒HPLC指纹图谱,标定了18个共有峰,并结合LC-MS结果,确定了13个峰对应的化合物:原巴西苏木素B、阿魏酸、淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂定、藁本内酯、补骨脂乙素、补骨脂二氢黄酮甲醚、补骨脂酚、11-羰基-β-乙酰乳香酸.21批样品相似度在0.994～0.999之间.结论:本文建立的三七药酒指纹图谱对三七药酒质量评价具有指导意义.

目的:探讨补骨脂二氢黄酮甲醚调控 γδT细胞消减胃癌SGC-7901程度.方法:获取人外周血中单个核细胞,体外扩增 γδT细胞,不同浓度BVC诱导 γδT细胞、SGC-7901细胞24 h、48 h和72 h,CCK-8检测BVC对 γδT细胞增殖率、SGC-7901抑制率影响;流式细胞术测 γδT细胞GZMB、PF、CD107a产生量;LDH法测 γδT细胞消减SGC-7901程度.结果:体外扩增8 d,γδT细胞比例由3.54％增至85.34％.与对照组比较,BVC诱导24 h,浓度10～80 nmol/L促进 γδT细胞增殖(P<0.05).BVC诱导48 h、72 h,浓度5～80 nmol/L促进 γδT细胞增殖(P<0.05).同样浓度,72 hγδT细胞增殖率最大.BVC作用肿瘤细胞24 h、48 h、72 h,浓度160～640 nmol/L SGC-7901生长抑制率高于对照组(P<0.05),浓度10～40 nmol/L,GZMB、PF、CD107a表达高于对照组(P<0.05).BVC诱导 γδT细胞72 h,一定浓度该T细胞消减SGC-7901程度随浓度增高而增高,浓度40 nmol/L消减程度最大,后呈下降趋势.结论:BVC适宜浓度促进 γδT细胞增殖,抑制SGC-7901生长,加强 γδT细胞消减SGC-7901程度,机制考虑:PF、GZMB、CD107a表达提高增强 γδT细胞消减能力.