目的 构建人源R-spondin 2(roof plate-specific spondin 2,RSPO2)的真核表达载体,表达、纯化融合蛋白RSPO2-Fu-Fc,用3C蛋白酶切除Fc结构域后,检测RSPO2-Fu的生物学活性.方法 基于生物信息学方法分析人源RSPO2蛋白的理化性质和结构,筛选获得可在溶液中稳定存在的RSPO2截短蛋白RSPO2-Fu.将编码RSPO2-Fu蛋白的基因亚克隆至pCMV-Fc载体后,将质粒pCMV-RSPO2-Fu-Fc瞬时转染入HEK293F细胞中表达72 h,通过Protein A层析柱纯化融合蛋白RSPO2-Fu-Fc,用3C蛋白酶切去Fc结构域,分子筛进一步提纯获得RSPO2-Fu蛋白.最后,通过M50 Super 8 × TOPFlash检测RSPO2-Fu蛋白的生物学活性.结果 生物信息学分析结果显示,RSPO2全长有243个氨基酸,相对分子质量为28 300,等电点为9.42,为亲水性不稳定蛋白,RSPO2-Fu截短蛋白在溶液中的稳定性得到了极大提高;重组表达质粒pCMV-RSPO2-Fu-Fc经菌落PCR及测序证明构建正确;获得了纯度达95％的RSPO2-Fu蛋白;生物学活性检测结果显示,RSPO2-Fu的EC5.值为1.5× 10-12 mol/L.结论 对RSPO2蛋白适当截短后,可获得稳定表达的RSPO2-Fu蛋白,其对Wnt信号通路有明显激活作用,为Wnt信号通路中RSPO2相关生物学研究提供了更好的参考.

目的 通过生物信息学分析,寻找与银屑病发病密切相关的特征基因,并探寻中药复方对其作用机理.方法 利用中药系统药理学数据库(TCMSP)对健脾解毒汤的药物作用靶点进行研究.通过OMIM数据库、GeneCard数据库以及GEO数据库筛选银屑病的病理靶点;使用R包对基因进行功能注释;从NCBI GEO公共数据库下载银屑病数据集GSE13355的基因表达数据;通过Cytoscape建立"活性成分-靶点"网络;采用WGCNA方法,寻找协同表达的基因模块;利用WGCNA-R包构建数据集中基因的共表达网络;采用CIBER-SORT算法推断22种免疫浸润细胞的相对比例,并进行Pearson相关性分析;通过miRcode数据库获得关键基因相关的miRNA.统计分析采用R语言(version4.2.1)进行.结果 最终得到对应药物靶点共132个,将药物靶点与疾病靶点取交集,得43个交集靶点.GO和KEGG富集分析主要涉及cellular response to chemical stress、response to oxidative stress、gland development、HIF-1、Th17 cell differentiation、PI3K-Akt等信号通路.WGC-NA分析共检测到8个基因模块,其中black模块相关性绝对值最高,将black模块中筛选后得到的912个基因与43个交集靶点取交集,结果显示,ABCC1、BIRC5、PCNA这3个基因均有交集,关键基因与多种免疫细胞显著相关.对关键基因和铁死亡相关基因进行相关性分析,关键靶点的表达水平和铁死亡相关基因的表达水平显著相关.结论 ABCC1、BIRC5、PCNA、AIFM2、BECN1和GPX4在银屑病中具有重要的生物学功能,为今后的新药研发奠定基础.

维生素D(vitamin D)是一种脂溶性的开环固醇类物质[1]。维生素D2(多骨化醇)和维生素D3(胆钙化醇或骨化二醇[25-羟维生素D3，25(OH)D]，骨化三醇[1，25-二羟维生素D3，1，25(OH)2D])是维生素D的两种主要形式[2]。维生素D2主要来自植物和真菌，维生素D3主要存在于动物中，或是皮肤经过紫外线照射下自然合成。维生素D的功能包括调节人体钙、磷的稳态和控制骨代谢。维生素D缺乏会影响骨骼健康，还会导致多种慢性疾病，这些疾病通常伴随着炎症增加和免疫系统失调，如糖尿病、哮喘和类风湿性关节炎[3]。维生素D的生物活性形式是1，25-二羟基维生素D[1，25(OH)2D]，也被称为"D激素"或"活性维生素D"[1],通过与维生素D受体(vitamin D receptor, VDR)结合并直接调节维生素D靶组织(如肠道、肾脏和骨骼)中的基因表达来发挥作用[4]。根据《维生素D及其类似物临床应用共识》，维生素D摄入不足者的的治疗剂量为：0～1岁400～1 000 IU/d；2～18岁600～1 000 IU/d；19～50岁1 500～2 000 IU/d；50岁以上1 600～2 000 IU/d[1]。

目的 基于乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)诱导表达系统制备呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial vi-rus,RSV)口服疫苗,并对其免疫原性进行分析.方法 将构建的质粒pUC57-Pre F与pNZ8149分别经Nco Ⅰ和Kpn Ⅰ双酶切,酶切产物经T4 DNA连接酶连接后获得重组质粒pNZ8149-Pre F,电转化至感受态L.lactis NZ3900,经乳糖培养基筛选获得非分泌型重组L.lactis NZ3900/pNZ8149-Pre F,以nisin A为诱导剂诱导表达,经Western blot和免疫荧光标记对其表达产物进行分析;将雌性BALB/c小鼠随机分为PBS、L.lactis NZ3900/pNZ8149、L.lactis NZ3900/pNZ8149-Pre F组,15只/组,每只口服500 μL,于第1、2天进行初次免疫,第16、17天进行加强免疫,第14和28天经小鼠下颌取血并分离脾脏细胞,ELSIA法检测重组L.lactis NZ3900/pNZ8149-Pre F诱导的体液和黏膜免疫应答水平,ELISpot法检测重组L.lactis NZ3900/pNZ8149-Pre F诱导的细胞免疫应答水平.结果 重组L.lactis NZ3900/pNZ8149-Pre F经PCR及测序鉴定,证明构建正确;抗原蛋白Pre F特异性地表达在L.lactis NZ3900中,相对分子质量约 50 000;初次免疫后第 14 和 28天,与 PBS 和L.lactis NZ3900/pNZ8149组相比,L.lactis NZ3900/pNZ8149-Pre F组小鼠血清Pre F-特异性IgG抗体效价、肠洗液中特异性分泌型IgA抗体以及脾脏细胞中IFNγ和IL-4分泌水平均明显升高,且差异均有统计学意义(t=-30.268～-3.087,P均＜0.05).结论 基于L.lactis诱导表达系统构建的RSV 口服疫苗具有较强的免疫原性,为研发RSV黏膜疫苗提供了参考,也为开发其他病毒或细菌口服疫苗提供了新的研究策略及方法.

卵巢癌(OC)在女性生殖系统肿瘤中致死率最高,治疗多选择手术切除加辅助化疗,然而易出现耐药性,导致患者预后差.miRNA-7在卵巢癌细胞中低表达,通过靶向表皮生长因子受体(EGFR)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路发挥抗肿瘤作用.本综述介绍miRNA-7-EGFR/ERK通路在卵巢癌治疗中的作用,为卵巢癌的治疗提供新的思路.

免疫细胞定向迁移是机体免疫应答发生与完成的必备环节。趋化因子在其受体介导下，控制免疫细胞在循环系统与组织器官间定向迁移。若趋化因子及其受体的表达与功能出现异常，将直接影响免疫细胞的定向迁移，致使其不能在正确的位置行使正确的功能。因此，以趋化因子及其受体分子为生物治疗靶点，通过激活或抑制该信号通路，调控免疫系统功能行使的各个环节，有望成为控制与治疗相关疾病的新突破。CC趋化因子配体2[chemokine (C-C motif) ligand 2，CCL2]也称为单核细胞趋化蛋白1（monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1），其受体为CC趋化因子受体2[chemokine (C-C motif) receptor 2，CCR2]，是趋化因子CC亚家族中的重要成员，对于免疫细胞具有趋化活性，可调节其迁移与浸润。CCL2是一个多功能的细胞因子，参与多种疾病的发生发展，包括心力衰竭[1]、冠状动脉粥样硬化性心脏病[2]、高血压[3]、动脉粥样硬化、高脂血症、糖尿病、肿瘤、自身免疫性疾病、神经系统疾病等。本研究结合既往文献报道，主要就CCL2在心血管疾病中的研究进展作一综述。

目的 探讨中药活性成分异鼠李素(isorhamnetin,ISO)对结肠癌肝转移和肿瘤外泌体分泌的干预作用,并进一步揭示其潜在作用机制.方法 使用CCK-8法检测ISO对小鼠结肠癌细胞MC38细胞增殖的影响.使用NanoSight-NS300系统检测ISO对MC38细胞外泌体释放的影响.通过实时荧光定量检测系统(quantitative PCR detecting system,qPCR)检测ISO对MC38细胞对中性鞘磷脂酶-2(neutral sphingomyelinase 2,nSMase2)、Rab27a等外泌体生成、分泌相关基因表达的影响.将12只C57BL/6小鼠随机分为对照组、MC38-外泌体组、ISO组、阳性对照组(外泌体抑制剂GW4869组),造模4周后检测小鼠肝脏转移灶数量及肝脏重量.通过qPCR检测肝转移灶中nSMase2、Rab27a等外泌体生成、分泌相关基因的表达情况.结果 ISO能够抑制MC38细胞增殖,且在20 μmol/L浓度以下时,抑制率低于10％,为无毒剂量;ISO能够减少MC38细胞外泌体的分泌,且具有时间依赖性(P＜0.05);ISO能够抑制MC38细胞中外泌体生成相关基因nSMase2 mRNA的表达(P＜0.001),而对外泌体分泌相关基因表达无明显抑制作用.与对照组比较,ISO组小鼠的肝脏重量明显降低(P＜0.05),转移瘤数目明显减少;ISO能明显抑制小鼠结肠癌肝转移灶中外泌体生成相关基因nSMase2 mRNA的表达(P＜0.001).结论 ISO可能通过nSMase2依赖途径抑制小鼠结肠癌细胞外泌体生成,进而抑制结肠癌肝转移.

目的:探讨循环上皮细胞采样针（CellCollector）体内循环肿瘤细胞（CTC）捕获系统在乳腺癌患者中疗效监测和临床意义。方法:回顾性分析2018年1月至2022年12月110例乳腺癌患者的临床资料，根据CTC检测结果（阈值为1个）将乳腺癌患者分成CTC阴性组（n=34例）和CTC阳性组（n=76例）。采用SPSS 23.0软件分析数据。符合正态分布的计量数据采用（）表示，组间比较采用独立样本t检验；计数资料以[例（%）]表示，组间比较采用χ2检验或Fisher确切概率法；相关性分析采用Spearman法。P<0.05为差异有统计学意义。结果:乳腺癌不同临床特征中，基线阳性CTC检出率在不同分子分型（LuminalA、LuminalB、TNBC、HER-2阳性）、HR（阳性、阴性组）、Ki-67（高、中、低组）中，差异显著，P值分别为0.021、0.043、0.041，均具有统计学意义。结论:CellCollector体内CTC捕获技术在乳腺癌患者中检出率较高，检出率与乳腺癌分子分型、HR分型、ki67表达水平相关，为CTC识别高复发风险人群预测预后提供了依据。

目的:观察C57BL/6N(Crb1rd8/rd8)小鼠早期视网膜变性以及小胶质细胞的活化情况.方法:取雄性SPF级C57BL/6N小鼠15只、C57BL/6J小鼠15只,正常饲养.分别在入组时,入组4、8、12 wk,使用Micron-Ⅲ小动物视网膜影像系统进行双眼彩色眼底照相检查计算病变数量、病变面积.观察结束后处死小鼠,摘取右侧眼球制备视网膜组织切片,进行HE染色后光镜下观察视网膜组织形态;采用免疫组织化学染色分析两组小鼠视网膜CX3CR1的表达水平及位置.摘取左侧眼球分离视网膜,使用Western-Blot检测CD86、CD206的表达情况,使用电化学发光法测定视网膜中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-4、IL-10炎性因子含量水平.结果:眼底彩照结果显示在入组4、8、12 wk,C57BL/6N组眼底病变数量均较入组时显著增加,与C57BL/6J组同时间点变化量比较均有差异(均P＜0.05);眼底病变面积变化量两组间入组12 wk有差异(P＜0.05),各组内变化量比较均无差异(均P＞0.05);视网膜组织HE染色示:C57BL/6N组视网膜结构异常,细胞排列疏松、紊乱,光感受器层向视网膜内侧明显的玻璃膜疣样凸起,C57BL/6J组视网膜结构清晰,细胞排列有序,无明显异常;免疫组化结果示:C57BL/6N组视网膜中CX3CR1高表达于神经节细胞层、内外丛状层、感光细胞层及病灶处位置,平均光密度为 0.285±0.056,C57BL/6J 组为 0.189±0.084(P＜0.05);Western-Blot 结果显示:与 C57BL/6J 组相比,C57BL/6N组视网膜CD86、CD206蛋白有不同程度升高,两组CD86蛋白表达有差异(P＜0.05);细胞因子检测结果显示:C57BL/6N 组 IL-1β、TNF-α 水平显著高于 C57BL/6J 组,而IL-10含量则明显较低(均P＜0.05).结论:C57BL/6N(Crb1rd8/rd8)小鼠视网膜变性进展缓慢,随年龄呈进行性加重,病灶部位视网膜结构紊乱,伴有以M1型极化为主的小胶质细胞浸润.

目的 探讨乳腺癌患者在新辅助化疗(NAC)前后雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人类表皮生长因子受体2(Her-2)和增殖相关抗原(Ki-67)的变化与新辅助疗效相关性.方法 收集2020年1月1日-2021年12月31日于蚌埠医科大学附属第一医院接受新辅助化疗的100例乳腺癌患者的资料,最终有80例患者纳入研究.NAC方案采用蒽环类联合紫杉类方案,Her-2阳性型患者NAC方案为多西他赛+卡铂+曲妥珠单抗+帕妥珠单抗(TCbHP).NAC结束后所有患者均行乳腺癌手术治疗,对术后肿瘤残留样本进行免疫组织化学检测,并记录相关指标的表达变化.根据Miller-Payne系统分级及术后病理结果,将患者分为病理完全缓解组(pCR)和非病理完全缓解组(non-pCR).采用x2检验和多因素logistic回归模型分析non-pCR组ER、PR、Her-2以及Ki-67在化疗前后的表达差异,并分析分子的表达变化是否与患者疗效相关.结果 在NAC前后ER、PR、Her-2和Ki-67变化率分别为2.50％、7.50％、10.00％和40.00％.NAC前后Ki-67(P=0.011)表达变化比较差异有统计学意义,而ER(P=0.737)、PR(P=0.581)、Her-2(P=0.108)表达变化比较差异均无统计学意义.此外,多因素分析表明,Ki-67高表达是新辅助化疗临床疗效的独立预测因子(P＜0.05).结论 NAC治疗可能会影响Ki-67表达水平,而ER、PR和Her-2未发生明显变化.NAC后Ki-67表达水平降低的患者可能有更好的疗效.