维持正常的房水流出(AHO)是眼内细胞健康和视力稳定至关重要的因素。AHO的损伤可导致眼压升高、神经损伤并伴随青光眼的发生。了解AHO能更好地指导青光眼手术，促进AHO靶向药物的研发，进而改善AHO的功能。AHO通道造影是一种与荧光素眼底血管造影类似的、应用荧光素或吲哚菁绿辅助显影AHO的眼前节造影技术，但其成像的是房水的排出轨迹而不是血流的运动。将造影剂引入前房，经房水循环，追踪造影剂的运动轨迹，捕捉围绕角膜缘360° AHO图像信息，可获得实时、动态的AHO影像资料。研究者先后研究了不同物种离体眼球的AHO特点，实时观察了非人灵长类动物活体眼球AHO的动态变化，并在此基础上，进一步研究了人活体眼球房水引流的运动轨迹及变化特点。AHO通道造影技术作为一种AHO功能评估的新工具，为AHO功能研究提供了新方法，但其作为一种侵入性的检查方法，研究过程中存在很多限制因素。为了更好地理解该技术，本文就AHO通道造影技术的发生和发展及现状进行综述。

由于角蛋白结构稳定,富含角蛋白的角类动物药提取溶解步骤复杂,严重制约了检测效率及通量,该文通过简化角类样品前处理步骤,优化主要角类动物药的特征肽检测方法,提升角类动物药专属性鉴别效率.分别对经/未经碘乙酰胺(IAA)处理的角类动物药特征肽类进行分析,优化特征肽的离子对条件,并比较经/未经IAA处理的特征肽的保留时间、响应值等数据;采用直接酶解与提取总蛋白后酶解2 种前处理方法制备角类动物药样品,基于特征肽保留时间、离子响应值等比较不同方法对羚羊角、水牛角、山羊角及牦牛角样品中特征肽检测的影响.结果表明待测角类样品经直接酶解的简化工艺处理后,均可检测到未经IAA处理的特征肽信息,且与IAA处理后的特征肽相比,其保留时间后移,质谱响应稍有降低;未经IAA处理的特征肽专属性良好,不影响角类动物药的专属性鉴别.综上,可采用直接酶解的工艺处理角类样品,省略蛋白质提取、二硫苏糖醇、IAA试剂处理步骤,显著提高前处理效率,且不影响角类动物药的专属性鉴别,为角类动物药质量研究及标准提升提供了思路与策略.

目的 建立角类动物药材的DNA提取方法,使提取的DNA质量满足PCR及测序要求,同时可用于陈旧动物角类样品的DNA提取.方法 为避免取骨塞部位用EDTA脱钙造成DNA提取不完全或DNA被破坏,取角质层部位,采用二硫苏糖醇(DTT)结合化学试剂盒中的细胞裂解液及蛋白酶K处理角质层样本,其余按试剂盒操作提取DNA.考察了取样量、DTT用量对角质部位DNA质量的影响.结果 确定了取样量为25 mg,DTT用量为20μL,角质细胞裂解完全,所有样品的DNA质量均可满足PCR要求.结论 建立的DNA提取方法,提取DNA完全,可标准化操作,可应用于多种动物角的提取.

整理国内外常用的睡眠剥夺模型建立方法,并探讨其在中医药改善睡眠研究中的应用,为从中医药角度建立新型且更可靠的睡眠剥夺模型做好理论基础.查阅近15年内睡眠剥夺模型建立及应用的相关文献,归纳总结国内外主要的睡眠剥夺模型及其原理和优缺点并给出模型的改进方法,并结合其在中医药改善睡眠相关研究中的应用,比较模型在中医证型方面中各自的不同之处.结果表明啮齿类动物睡眠剥夺模型主要有水平台剥夺模型、应激剥夺模型、强迫运动剥夺模型、化学刺激剥夺模型、轻柔刺激剥夺模型等;果蝇睡眠剥夺模型主要有机械剥夺模型、夜间重复光照剥夺模型、基因修饰法等;中医药改善睡眠研究中的睡眠剥夺动物模型主要包括阴虚失眠模型、肝郁失眠模型、心肾不交失眠模型等.不同动物睡眠剥夺模型有各自优缺点,在进行中医药改善睡眠研究时需根据具体情况灵活选择,其与中医证型结合方面有待完善;现有的睡眠剥夺模型大多在准确性和稳定性方面均有欠缺,影响实验结果的可靠性;睡眠剥夺模型致力于结合基本模型与中医失眠证型表现,而睡眠剥夺模型在中医药方面的应用尚不十分广泛,建立符合中医药研究思路的睡眠剥夺模型应是中医药改善睡眠研究中的重点.

应用SDS-PAGE与LC-MS/MS技术对羚羊角与山羊角中蛋白质类成分进行鉴定分析研究.采用胶内酶切制备羚羊角与山羊角酶解肽段,通过nano LC-LTQ/Orbitrap MS鉴定蛋白质类成分,从羚羊角中鉴定了101个蛋白质,山羊角中鉴定了140个蛋白质;羚羊角中共含有43个角蛋白(KRT)及角蛋白相关蛋白(KAP),占总蛋白数量的42.6％,山羊角中KRT与KAP共52个,占总蛋白数量的37.1％.羚羊角与山羊角比较结果表明,两者共性成分是以角蛋白为主的分子结构相关蛋白质,两者在蛋白质种类构成方面具有相似性.该文研究为羚羊角与山羊角系统物质基础研究提供测定方法与实验数据,对角类动物药的功效物质基础研究、质量标准研究等具有指导意义.

目的 测定山羊角提取液及大鼠血浆中游离巯基(-SH)与总-SH的含量,探讨山羊角对大鼠体内-SH干预情况.方法 采用Ellman法测定山羊角提取液中游离-SH与总-SH的含量;大鼠连续灌胃给予山羊角提取物后,测定大鼠血浆中游离一SH和总-SH的水平;大鼠灌胃7d给予山羊角提取物后,连续测定给药后大鼠血浆中游离-SH含量随时间变化情况.结果 山羊角提取液中的游离-SH含量介于3.96～5.08 mmol/L,总-SH的含量介于4.52～5.94 mmol/L;连续给予大鼠山羊角提取液后,第4天始,大鼠血浆中游离-SH与总-SH水平相较于正常大鼠显著提升(P＜0.01),而阿司匹林对大鼠血浆中的游离-SH与总-SH水平无影响;口服给予大剂量山羊角后30 min,大鼠血浆中游离-SH含量即达最大值(10.16士1.18)mmol/L,8h后大鼠血浆中游离-SH含量基本降至正常大鼠水平.结论 山羊角提取液中含有丰富的-SH,且口服山羊角后血浆游离-SH与总-SH水平均显著提升,提示山羊角中含SH基团的一类成分可能为山羊角重要功效物质基础,为角类动物药功效物质基础及效应特点研究提供借鉴与思路.

采用荧光衍生法测定不同品种、不同产地角类中药中游离巯基(-SH)的含量.以三(2-羧乙基)膦为二硫键的还原剂,7-氟苯唑-2-氧-1,3二唑-4-磺酸铵为-SH衍生化试剂,在最大激发波长为375 nm,发射波长为510 nm的条件下,采用荧光法测定角类药材水提液中游离-SH含量.结果表明,在最优的衍生化条件下,不同角类中药提取物中均测定出游离-SH,其中山羊角提取液中游离-SH的含量最高,其次是牦牛角与水牛角,麋鹿角中含量最低.该文提出一种关于角类中药物质基础的观点:即提取物中含-SH类成分可能为角质类动物药的重要物质基础,围绕此观点,建立了准确、灵敏、快速的测定游离-SH的方法,可为角类中药的质量评价以及功效物质基础研究提供一定的借鉴与方法依据.

目的:筛选与动物药功能主治相关活性组分,探讨其传统热炮制加工机理,验证肽键热振荡理论.方法:以4类动物药为代表,包括虫类、胶类、角类、贝壳类,对动物药连续用石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水超声提取,得到4个不同极性溶媒提取物,对其进行系统活性对比研究.进一步将动物药水提液经超滤技术分为＞ 10 kDa、3 ～ 10 kDa、1～3 kDa、＜1 kDa组分.以相关活性指标,筛选活性组分;对炮制前后动物药＜1 kDa组分的活性及寡肽收率进行对比研究;以动物药蛋白＞ 10 kDa部分为底物进行酶解,以相关活性指标对天然和酶解＜1 kDa组分进行对比研究.结果:动物药各极性溶媒提取物活性最强的为水提取物,水提取物各组分中＜1 kDa或1～3 kDa的小肽段活性明显强于蛋白、多肽部位,因此确定动物药＜1 kDa或1～3 kDa的小肽段为活性组分;炮制品的寡肽含量高于生品;酶解＜1 kDa组分活性略低于天然＜1 kDa组分,但酶解寡肽的寡肽收率远高于天然寡肽.结论:确定了＜1 kDa或1～3 kDa的小肽段组分为动物药的药效物质基础;动物药经炮制之后,由于肽键的断裂,生成了更多的小分子寡肽类成分,进而可以发挥更强活性;进一步阐明了动物药热炮制机理,验证了课题组提出的肽键热振荡理论;此外,由蛋白酶解得到更多的活性寡肽,解决了天然寡肽收率较低难于产业化的问题,为动物药小肽段类物质开发应用提供了可靠的依据.

黑素广泛存在于真菌、细菌、植物、昆虫以及哺乳类动物的皮肤和眼色素膜等组织中.人皮肤中的黑素主要由位于表皮基底层的黑素细胞合成并输送至周围角质形成细胞,其目的是使皮肤获得光保护功能.近年来的研究表明位于皮肤外组织中的黑素还具有多种生物活性,如抗氧化、药物吸附与金属离子螯合、免疫调节与佐剂样作用以及抗辐射等.该文对黑素分子非光保护作用的生物活性研究进展作一综述.

埃博拉病毒是一种感染人类和非灵长类动物(non-human primates,NHPs)且会引起病毒性出血热,以发热为特征的急性系统性疾病、凝血障碍、爆发性休克和死亡的烈性病毒[1-3].有文献提示,该病始于1976年,至今已有数次大流行[4],因人类尚未发明治疗埃博拉出血热的特效药和疫苗[5],其高传染性、高致死性已被世界卫生组织列为对人类危害最严重的病毒之一[6].埃博拉病毒虽未在我国流行,但已引起我国政府和社会的高度重视并开展了相关方面的研究.医学科学的发展表明,生物学医学知识的提出从某种角度上讲就是有效的疫苗,对于未来从事疾病相关工作的医学生,对埃博拉病毒的知晓程度尤为重要.为进一步扩大宣传,开展防控教育提供依据,本文于2017年11月在上海市某医学院校开展了对埃博拉病毒认知、态度及行为等问题的问卷调查.