目的:探讨角膜接触镜相关角膜缘干细胞功能障碍（CL-iLSCD）的临床特征及治疗。方法:回顾性病例系列研究。纳入于2018年10月至2022年9月在复旦大学附属眼耳鼻喉科医院角膜病门诊确诊为CL-iLSCD并接受药物治疗和随访的17例患者（25只眼）的资料，其中男性3例，女性14例，年龄为（36.4±6.9）岁。采用裂隙灯显微镜结合荧光素染色观察角膜和角膜缘尤其是上皮病变范围，眼前节相干光层析成像术测量中央角膜上皮厚度，活体激光共聚焦显微镜测量角膜上皮基底细胞密度和角膜神经纤维长度，记录患者的临床表现、诊疗经过、转归和相关因素等。结果:所纳入的患者有4~30年软性角膜接触镜戴镜史，中位数为10年；每日戴镜时间为（10.5±2.5）h。88.0%（22/25）的患眼有视力下降、眼部不适或疼痛、眼红和畏光等症状。常见体征为角膜上皮梳齿状和（或）漩涡状迟发性荧光素染色，上方角膜缘（11~1点钟方位）受累最多（25/25，100.0%），并伴随中央角膜上皮厚度、上皮基底细胞密度和神经纤维长度降低等活体影像学表现异常。结合影像学参数综合等级评估为轻度、中度和重度角膜缘干细胞功能障碍的各为5、11和8只眼。80.0%（20/25）的患眼曾发生误诊。停戴角膜接触镜并给予以人工泪液和糖皮质激素为基础的药物治疗后，所有患眼的症状和体征改善明显，其中13只眼治愈，12只眼好转。结论:CL-iLSCD的症状缺乏特异性，且早期体征较为隐匿。停戴角膜接触镜和药物治疗是目前该病有效的治疗方案。

目的:观察亲属活体角膜缘移植治疗严重角膜缘干细胞缺乏的临床效果。方法:回顾性自身对照研究。纳入同济大学附属同济医院眼科2015年1月至2017年3月因热及化学烧伤造成的严重角膜缘干细胞缺乏13例(17眼)，获取适量其直系血亲或亲兄弟姐妹的角膜缘组织移植至受眼，术后随访22~26(24.12±1.31)个月。结果:17眼中14眼(82.35%)手术成功。末次随访视力(logMAR，BCVA)为0.7(0.6，1.1)，优于术前视力1.8(1.6，2.0)( Z＝-3.636， P<0.001)，末次随访眼表评分为3(2，4)分，优于术前6(5.5，11.5)分( Z＝-3.638， P<0.001)。供眼及受眼均未出现严重的眼部并发症。 结论:亲属活体角膜缘移植治疗严重角膜缘干细胞缺乏安全、有效。

近年来，随着糖尿病发病率的逐年升高，糖尿病角膜病变逐渐引起临床医生的重视。糖尿病角膜病变主要表现为角膜上皮愈合延迟、角膜水肿、角膜敏感性下降、神经营养性角膜溃疡等。糖尿病角膜病变的发病机制很多，包括异常代谢产物蓄积、炎症反应、氧化应激、神经营养因子的缺乏、角膜缘干细胞异常等。目前国内外大部分关于糖尿病角膜病变的研究主要集中在上皮损伤修复和神经功能的改变，病理机制主要是炎症反应和细胞凋亡。核因子-κB(NF-κB)是重要的转录调控因子，参与调控炎性因子、趋化因子、凋亡相关基因、生长因子等靶基因的表达。已有大量研究报道，NF-κB信号通路参与糖尿病角膜上皮的慢性炎症和上皮细胞凋亡的调控，同时也参与调控糖尿病周围神经病变，而糖尿病角膜神经病变属于糖尿病周围神经病变。NF-κB信号通路与糖尿病角膜病变的发生和发展过程密切相关，本文主要就其作用机制进行综述。

角膜缘微环境细胞(LNCs)是位于角膜缘、与角膜缘上皮干细胞(LESCs)紧密相连的一类间充质干细胞，能同时表达间充质标志物和多种胚胎干细胞标志物，对调节LESCs的静息、自我更新以及分化状态起着重要作用。近年研究表明，LNCs可通过胶原酶消化法、上皮块消化法、中性蛋白酶－胶原酶消化法以及组织块培养法进行体外分离培养，通过3D Matrigel共培养、Transwell共培养可研究LNCs与LESCs之间的相互作用关系。LNCs与LESCs可通过SDF-1/CXCR4、Notch、BMP、Wnt、Sonic Hedgehog、KIT/AKT等多种信号通路以及神经生长因子、角质形成细胞因子、胰岛素样生长因子等多种细胞因子相互作用。LNCs现已成为角膜上皮组织工程、眼表重建以及角膜再生等研究中的一大热点。本文就LNCs的研究背景、体外分离培养方法、与LESCs的相互作用机制及其应用前景等进行综述。

目的:探讨聚乙二醇水凝胶膜(PHFs)是否能作为角膜上皮细胞(CECs)体外扩增的载体以及其能否用于角膜缘干细胞缺乏症(LSCD)的治疗。方法:利用癸二酰氯、聚氧乙基甘油醚、聚已酸内酯二醇人工合成PHFs，检测其厚度、透光度和机械拉伸性能。取清洁级新西兰大白兔4只，培养原代角膜缘上皮细胞，荧光显微镜下观察培养细胞中角蛋白标志物AE1/AE3和干细胞标志物p63的表达；将细胞分为阴性对照组、阳性对照组和PHFs+CECs组，其中将阴性对照组细胞直接种植在培养皿底，加入普通细胞培养液，将阳性对照组细胞种植在培养皿后加入含有100 μmol/L H 2O 2的普通细胞培养液，将PHF+CECs组细胞种植在铺有PHFs的培养皿中用普通细胞培养液培养，各组培养24 h。采用MTT和TUNEL染色法分别观察3个组细胞增生和细胞凋亡情况。采用随机数字表法将清洁级新西兰大白兔15只分为对照组、PHFs组和PHFs+CECs组，每组5只。其中对照组造模后不给予任何处置；PHFs组将空PHFs膜置于LSCD实验兔角膜表面；PHFs+CECs组为将CECs传代后种植于PHFs上构建组织工程移植片后将移植片置于LSCD兔模型的角膜表面。采用荧光素染色法检测各组实验兔角膜缺损面积大小并评分；采用苏木精－伊红染色法检测各组实验兔角膜上皮组织学特点。 结果:PHFs厚度不超过150 μm，能承受约6 MPa的拉力，在400~700 nm可见光范围内透过率>99%。角膜缘原代培养的大多数细胞AE1/AE3染色和p63染色阳性。MTT实验结果显示，PHFs+CECs组、阴性对照组和阳性对照组 A490值分别为0.59±0.01、0.65±0.07和0.06±0.04，总体比较差异有统计学意义( F＝12.25， P<0.05)，其中PHFs+CECs组和阴性对照组 A490值明显大于阳性对照组，差异有统计学意义(均 P<0.05)。TUNEL检测结果显示，PHFs+CECs组、阴性对照组和阳性对照组TUNEL阳性细胞率总体比较差异有统计学意义( F＝13.45， P<0.05)，其中PHFs+CECs组和阴性对照组TUNEL阳性细胞率明显低于阳性对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。荧光素染色结果显示，随着术后时间的延长，各组角膜荧光素钠染色评分均降低，对照组、PHFs组和PHFs+CECs组角膜荧光素钠染色评分依次降低。苏木精－伊红染色结果显示，对照组存在较少形状不规则的角膜上皮细胞，PHFs组一些区域出现单层稀疏的角膜上皮细胞；PHFs+CECs组角膜上皮覆盖范围最大，细胞层数增加到3~5层，形态较规则，排列较紧密。 结论:PHFs韧性强、透光度高且能够体外扩增角膜上皮，适合做角膜上皮移植片，并能促进LSCD兔模型角膜上皮的修复。

角膜缘干细胞缺乏（LSCD）是由于角膜缘干细胞数量或功能异常导致的角膜上皮稳态失衡，其症状缺乏特异性，且裂隙灯检查难以与其他眼表疾病鉴别。印迹细胞学实验室检查只能在一定范围内进行定性诊断。近年来，出现了新型影像学检查，为LSCD的诊断和分期带来了新的曙光。本文归纳总结了多种检查方法，包括眼前节光学相干层析成像术观察角膜上皮厚度和角膜缘Vogt栅栏状结构、眼前节相干光层析血管成像术检测角膜新生血管、角膜活体共聚焦显微镜测量角膜上皮厚度、基底细胞密度和基底膜下神经，以及全场/频域光学相干层析成像术在LSCD诊断方面的应用。旨在为LSCD的临床诊疗及相关研究奠定基础。

诱导多能干细胞定向分化为角膜上皮细胞(CECs)用于角膜缘干细胞缺乏症(LSCD)的治疗,具有广阔的前景.目前,这方面研究已经取得诸多成果,但也存在诱导效率不高或诱导时间过长的问题.本文总结了将多能干细胞诱导分化为角膜上皮细胞的方法及诱导信号分子,分析了角膜上皮样细胞的临床应用前景,为重建眼表提供高增殖能力的种子细胞和最终临床应用提供参考和指导.

背景:角膜炎、化学伤、创伤和其他疾病往往导致角膜组织不可逆的损伤,留下纤维瘢痕进而最终导致视力下降甚至视力丧失.角膜移植是唯一的治疗途径,但供体的缺乏限制了其应用,此外其他替代材料制备复杂且价格昂贵.丝素蛋白和壳聚糖是组织工程领域常用的材料,制备成生物支架的技术已日趋成熟,得到了广泛应用,但在角膜修复领域尚处于起步阶段.目的:系统分析丝素蛋白/壳聚糖支架材料应用于角膜修复领域的相关文献,为进一步研究和促进其修复角膜时的临床应用提出新方向和理论支持.方法:以“丝素蛋白,壳聚糖,角膜,角膜修复材料”为中文关键词,以“silk fibroin,chitosan,cornea,keratoprosthesis,scaffold”为英文关键词检索CNKI,万方以及PubMed数据库有关角膜修复材料的相关文献,追踪以丝素蛋白/壳聚糖作为修复材料在角膜组织工程领域的发展过程,并分析其应用现状及前景.结果与结论:初步检索178篇文献,最终纳入52篇符合标准的文献进行综述.①丝素蛋白/壳聚糖支架作为缺损角膜的修复体,细胞毒性低,生物相容性良好;②丝素蛋白/壳聚糖支架为角膜细胞提供了适宜的细胞外环境,有利于角膜细胞的水电解质交换;③ABCG2蛋白的检出,提示支架为角膜缘干细胞的增殖提供了可能;④大量的动物模型实验表明该支架几乎不会引起角膜细胞的炎症反应,这对于维持角膜组织的透明性有重要意义;⑤由于供体角膜的缺乏,寻找新型的人工材料修复损伤角膜是角膜移植领域的发展方向,而丝素蛋白壳/聚糖支架具有巨大的潜力,值得深入研究.

目的 探讨兔骨髓间充质干细胞(BMSC)移植到兔角膜缘干细胞完全缺乏模型后是否能分化成角膜上皮细胞.方法 3～5月龄清洁级日本大耳白兔24只,采用全周角膜缘板层切除术加中央角膜上皮刮除术建立兔右眼角膜缘干细胞完全缺乏模型,4周后观察眼表形态,行苏木素-伊红(HE)染色、过碘酸-雪夫(PAS)染色及DAPI染色鉴定模型成功与否,选取成功模型18只(36只眼),应用随机数字表法分为对照组(18只兔左眼)、模型组、羊膜组、羊膜加BMSC组,后3组每组6只(兔右眼).取第三代(P3)兔BMSC,以去上皮羊膜为载体培养观察,待细胞铺满羊膜达90％以上时进行移植手术,于移植术后12周观察兔右眼表形态,行HE染色观察角膜结构,免疫荧光检测兔BMSC分化方向.结果 建模后4周有21只兔右眼眼表形态评分达到7分及7分以上,行HE染色、PAS染色、DAPI染色,结果显示角膜缘及角膜上皮细胞层被清除,浅基质层大量炎症细胞浸润及新生血管形成,可见杯状细胞形成,说明模型构建成功.移植术后12周照相观察眼表形态,与自身兔左眼角膜相比,模型组兔右眼角膜混浊,有大量新生血管,羊膜组右眼角膜轻度混浊,有少量新生血管,羊膜加BMSC组兔右眼角膜透明,未见新生血管;HE染色显示羊膜加BMSC组角膜结构修复完整,免疫荧光检测到羊膜加BMSC组有角膜分化的特异性标记因子CK3+ 12表达,而羊膜组未见表达.结论 兔BMSC移植到兔角膜缘干细胞完全缺乏模型后,在体内能够分化成角膜上皮细胞或角膜样上皮细胞,恢复眼表结构及功能.

角膜不完全的修复和过度的愈合均能导致严重的并发症.本文归纳了目前应用干细胞治疗角膜损伤的新方法,总结整理了角膜干细胞缺乏治疗的发展进程,为今后的临床治疗提供依据,指出了目前研究面临的问题和挑战.