目的:探讨解聚素-金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloteinase 17，ADAM17)-短发卡RNA(short hairpin RNA，shRNA)转染骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell，BMSC)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用。方法:设计4个针对ADAM17以重组慢病毒为载体的shRNA序列(ADAM17-hsa-297，ADAM17-hsa-1508，ADAM17-hsa-1658，ADAM17-hsa-1864)及1个阴性对照(LV10-NC)，应用qPCR的方法筛选抑制率最佳的ADAM17-shRNA，实验分为3个组，即转染组、无意义序列组和对照组，按常规步骤提取RNA，进行逆转录以及扩增。用qPCR方法检测混合培养后ADAM17mRNA基因的表达，用MMT法测定人乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力并进行统计学分析。结果:对照组、无意义序列组和转染组24 h的吸光度值分别是0.270±0.040、0.250±0.035和0.185±0.080，组间比较差异有统计学意义( F＝3.854， P＝0.045)，对照组与无意义序列组比较差异无统计学意义( P>0.05)，对照组与转染组比较差异有统计学意义( P<0.05)，无意义序列组与转染组差异无统计学意义( P>0.05)；对照组、无意义序列组和转染组48 h的吸光度值分别是0.500±0.057、0.494±0.086和0.311±0.007，组间比较差异有统计学意义( F＝19.42， P<0.001)，转染组与对照组、无意义序列组比较差异均有统计学意义( P均<0.05)，对照组与无意义序列组比较差异无统计学意义( P>0.05)；对照组、无意义序列组和转染组72 h的吸光度值分别是0.720±0.150、0.713±0.174和0.558±0.071，组间比较差异无统计学意义( F＝2.61， P＝0.106)。 结论:ADAM17-shRNA转染的BMSC可以抑制24 h和48 h人乳腺癌MCF-7细胞的增殖，同时72 h人乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力有下降趋势。

为了进一步解析鱼类在高原低氧环境下的适应性进化机制,确定相关基因KLF17是否在红细胞发育过程中发挥功能.将高原裂腹鱼亚科鱼类的代表物种——花斑裸鲤(Gymnocypris eckloni)作为实验对象,以实验室前期花斑裸鲤全基因组测序数据为基础,鉴定出红细胞发育相关基因KLF17启动子序列,以其启动子DNA为诱饵,对花斑裸鲤肾脏组织蛋白进行筛选,采用LC-MS/MS技术对候选结合蛋白进行鉴定分析,并进行生物信息学分析.结果表明,在花斑裸鲤肾脏组织中共筛选到576个与KLF17启动子区域特异性结合的蛋白,去除未能鉴定到的蛋白,共有306个候选结合蛋白,其中包括真核翻译起始因子2、细胞色素P450酶、转铁蛋白、含I型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶、丙酮酸脱氢酶、红细胞膜蛋白带4.1蛋白等与红细胞或造血相关的蛋白.GO功能富集分析表明,这些候选结合蛋白涉及多种生物学功能,包括参与细胞生长、细胞周期、免疫反应、信号传导、核酸与转录因子结合等过程.KEGG通路分析表明,以上蛋白参与多条信号通路,包括氨基酸代谢通路、细胞凋亡信号通路、PPAR信号通路、Hippo信号通路、细胞色素P450代谢信号通路、HIF-1信号通路及神经营养因子信号通路等.研究筛选出的KLF17启动子候选结合蛋白主要有参与红细胞发育相关的真核翻译起始因子2、细胞色素P450酶、转铁蛋白等,经过功能分析发现它们参与HIF-1信号通路,通过调控血红素、珠蛋白基因表达、铁代谢、血管生成、糖酵解等途径激发红细胞的生成与发育,提示KLF17在转录水平上参与调控红细胞中血红素、铁和珠蛋白间的相互作用,为红细胞分化机制研究提供重要信息.同时,转铁蛋白作为参与铁和氧调节的交叉调控因子,它能够促进血液中铁的运输和增强血氧的结合能力,使得机体在低氧环境中长期生存,这也揭示了花斑裸鲤的低氧适应机制与HIF-1下游的转铁蛋白有关.研究可对下一步验证该蛋白与KLF17的互作机制提供研究基础,为解析高原土著鱼类造血系统发育和低氧环境适应性进化的分子机制提供科学数据.

目的 应用 MCF-7人乳腺癌裸小鼠移植瘤模型,探讨解聚素金属蛋白酶17(ADAM17)-shRNA对裸小鼠乳腺癌移植瘤的影响.方法 ADAM17 -shRNA慢病毒转染MCF-7细胞,将30只裸小鼠随机分为3组:转染组接种转染ADAM17-shRNA的MCF-7乳腺癌细胞、空载体组接种转染空载体的MCF-7乳腺癌细胞,对照组接种正常MCF-7细胞,3组细胞悬液0.2 mL(1×107)/只分别皮下注射在裸小鼠右侧鼷部.第26天裸鼠全部处死.HE观察3组的形态变化,免疫组织化学法检测ADAM17、Ki-67蛋白在3组瘤体组织中的表达情况,Western Blot检测ADAM17蛋白在3组瘤体中的表达水平.结果 转染组、空载体组、对照组移植瘤体积分别为(238.95 ±17.24)、(610.48 ±15.96)、(604.50 ±15.14)mm3,空载体组与对照组的移植瘤体积差异无统计学意义(P>0.05),转染组移植瘤体积明显低于对照组及空载体组,差异有统计学意义(P<0.05).转染组与对照组及空载体组相比较,移植瘤组织局部可见大片坏死区、坏死区细胞崩解、细胞结构消失等情况有显著改善.ADAM17蛋白在胞浆阳性表达,转染组移植瘤染色指数评分为2.45 ±0.44,其与对照组(7.26 ±0.25)和空载体组(7.09 ±0.18)比较,差异有统计学意义(P<0.05);Ki-67蛋白在胞核阳性表达,转染组瘤染色指数评分为3.54 ±0.26,其与对照组(9.28 ±0.45)和空载体组(8.92 ±0.41)比较,差异有统计学意义(P<0.05).空载体组与对照组ADAM17蛋白的表达水平差异无统计学意义(P>0.05),转染组ADAM17蛋白的表达水平明显低于对照组及空载体组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 转染AD-AM17-shRNA的人MCF-7乳腺癌细胞在裸小鼠体内的生长受到了显著抑制.

目的 观察转染解聚素-金属蛋白酶17-短发夹RNA(ADAM17-shRNA)的MCF-7乳腺癌细胞在裸鼠体内的生长效果并探索其作用机制.方法 将30只裸鼠随机分为转染组(接种转染ADAM17-shRNA的MCF-7乳腺癌细胞)、空载体组(接种转染shNC的MCF-7乳腺癌细胞)及对照组(接种正常MCF-7细胞).分别在各组裸鼠右侧鼷部皮下种植细胞悬液0.2 ml/只,观察各组荷瘤裸鼠的生长状态、饮食及体重变化.第28天处死裸鼠并取出移植瘤.采用HE染色观察组织学形态;Western blot检测肿瘤局部ADAM17、磷酸化表皮细胞生长因子受体(p-EGFR)、表皮细胞生长因子受体(EGFR)、磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)及细胞外调节蛋白激酶(ERK)的表达.结果 对照组、空载体组及转染组移植瘤最终体积分别为(639.821±15.429)、(643.350±15.543)和(240.233±10.536)mm3,3组不同时间点瘤体体积比较有差异(P <0.05);不同组别瘤体体积比较有差异(P <0.05).HE染色结果显示,移植瘤组织呈乳腺浸润性导管癌特征,对照组与空载体组无明显差异,转染组较对照组、空载体组坏死多.转染组肿瘤组织中ADAM17、EGFR、p-EGFR、Akt、p-Akt、ERK及p-ERK的蛋白表达水平低于对照组和空载体组(P <0.05).结论 ADAM17-shRNA可有效抑制MCF-7乳腺癌细胞裸鼠移植瘤的生长.EGFR-PI3K-Akt和EGFR-MEK-ERK信号传导通路参与ADAM17-shRNA的抑制作用.

目的 研究靶向沉默解聚素-金属蛋白酶-17(ADAM17)基因对人甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法 取人甲状腺乳头状癌K1细胞,分为空白对照组、无意义序列组、转染组,转染组、无意义序列组分别用整合有ADAM17-shRNA、无意义序列-shRNA的慢病毒转染,空白对照组加入等量PBS液.采用RT-PCR方法 检测各组ADAM17 mRNA相对表达量,Western blotting法测定ADAM17蛋白相对表达量,MTT法评估细胞增殖能力,流式细胞仪测定细胞周期,Transwell迁移和侵袭实验观察细胞的迁移及侵袭能力.结果 与空白对照组、无意义序列组对比,转染组ADAM17 mRNA及蛋白的相对表达量均降低(P均<0.05);转染组在培养24、48、72 h时的细胞增殖OD值均低于空白对照组、无意义序列组(P均<0.05);与空白对照组和无意义序列组比较,转染组细胞周期中G0/G1期细胞所占百分比升高(P均<0.05);与空白对照组、无意义序列组相比,转染组Transwell迁移及侵袭实验穿膜细胞数目减少(P均<0.05).结论 靶向沉默ADAM17基因可抑制K1细胞增殖、迁移及侵袭.

目的 探讨解聚素-金属蛋白酶17(ADAM17)与表皮生长因子受体(EGFR)在人食管鳞状细胞癌(ESC)组织中的表达及其与患者临床病理特征的关系.方法 选择2013年1月至2017年12月合肥市第三人民医院66例ESC患者术后病理组织石蜡标本,采用免疫组织化学法检测66例ESC组织及33例癌旁组织中ADAM17与EGFR蛋白的表达,分析二者与临床病理特征的关系,采用Kendall法分析二者表达的相关性.结果 ESC组织中ADAM17与EGFR蛋白的阳性表达率均高于癌旁组织[68.2％(45/66)比33.3％(11/33),x2=10.874,P=0.001;66.7 ％(44/66)比39.4％(13/33),x2=6.699,P=0.01].ADAM17蛋白、EGFR蛋白的表达与ESC病理TNM分期、浸润深度及有无淋巴结转移有关(x2值分别为4.797、4.890、6.089;8.790、8.766、10.154,均P＜0.05).ADAM17蛋白的表达与EGFR蛋白表达呈正相关(rs=0.368,P＜ 0.05).结论 ADAM17和EGFR在人ESC组织中呈高表达,且二者在肿瘤发生、发展中存在相互作用.二者联合检测可能有助于ESC转移程度的判断及预后评价.

目的 探讨沉默解聚素-金属蛋白酶17(ADAM17)基因的表达对HT29结肠癌细胞增殖和凋亡的抑制作用及其可能机制.方法 将HT29结肠癌细胞分为干扰组、阴性对照组和空白对照组,干扰组细胞转染重组慢病毒载体以沉默ADAM17基因的表达,阴性对照组细胞转染阴性对照重组慢病毒载体,空白对照组细胞加入等量的PBS溶液.采用实时荧光定量PCR法(real-time PCR)检测ADAM17 mRNA的表达,采用Western blot法检测ADAM17、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase3)、磷酸化蛋白激酶B(P-Akt)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(P-GSK3β)及糖原合成酶激酶-3β(GSK3β)蛋白的表达,采用3-(4, 5-二甲基噻唑-2)-2, 5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞增殖能力的变化,采用Annexin-V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡情况.结果 与阴性对照组和空白对照组比较,干扰组细胞中ADAM17 mRNA及其蛋白的表达水平均较低,同时点(培养24、48及72 h)的吸光度值(A值)也较低,细胞凋亡率较高,caspase3蛋白的表达水平较高,P-Akt和P-GSK3β 蛋白的表达水平均较低,差异均有统计学意义(P<0.05). 结论 ADAM17基因沉默可能通过抑制Akt/GSK3β 通路的激活,发挥抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用.

目的 探讨利用裸鼠乳腺癌荷瘤模型转染解聚素-金属蛋白酶17 (ADAM17)-shRNA的骨髓间充质干细胞(BMSCs)对乳腺癌移植瘤的抑制效果.方法 将人乳腺癌细胞(MCF-7)接种于30支裸鼠皮下,14 d后乳腺癌荷瘤裸鼠模型成功构建.随机分为:转染组(注射1×106/ml转染ADAM17-shRNA的BMSCs)、BMSCs组(注射1×106/ml BM-SCs)和对照组(注射空白PBS).采用贴壁筛选法分离、培养3周龄雄性SD大鼠的BMSCs,利用慢病毒介导将AD-AM17-shRNA转染第3代培养的BMSCs,将其通过尾静脉注射给各组荷瘤裸小鼠(0.1 ml/次)3d重复一次,共5次,观察各组裸小鼠肿瘤的生长状况.抑瘤实验16 d后处死裸鼠,HE染色法观察各组瘤体的形态结构,免疫组化法检测各组瘤体ADAM17、表皮细胞生长因子受体(EGFR)和细胞增殖核抗原(Ki-67)的表达.结果 转染组、BMSCs组、对照组裸鼠瘤体体积分别为(375.09±20.72)、(768.85±35.55)、(783.75±27.30) mm3,转染组相较于对照组移植瘤体积缩小,差异有统计学意义(P＜ 0.05),而BMSCs组差异无统计学意义.HE染色镜下可见,与对照组相比转染组可见瘤体组织大片坏死区域、坏死区域细胞崩解、细胞结构消失,而BMSCs组与对照组差异无统计学意义.转染组ADAM17、EGFR、Ki-67蛋白与对照组相比表达均降低,差异有统计学意义(P＜0.05);BMSCs组和对照组相比较,差异无统计学意义.结论 ADAM17-shRNA通过BMSCs介导可靶向归巢至裸鼠乳腺癌移植瘤并发挥抑制裸鼠乳腺癌ADAM17、EG-FR和Ki-67表达的作用.

目的 检测ADAM17在锯齿状结直肠癌组织和正常组织中的表达,初步探讨ADAM17在锯齿状癌变途径中的作用机制.方法 回顾性分析2016年4月至2018年4月期间我院行结肠镜或手术所取得的病理标本120例,其中结直肠癌组织60例,正常结直肠黏膜组织60例,采用RT-PCR和免疫组化法检测ADAM17在结直肠癌及正常结直肠黏膜组织中的表达情况,分析ADAM17在结直肠癌组织中的表达和临床病理特征之间的关系.结果 在结直肠癌组织中ADAM17表达的阳性率为75.0％(45/60),在正常黏膜组织中ADAM17的阳性率为21.7％(13/60),差异具有统计学意义(P<0.001).ADAM17主要表达在细胞内和基底外侧质膜上.在正常结肠黏膜中,ADAM 17在隐窝上皮细胞、血管、黏膜肌和固有肌细胞中表达.结直肠癌组织中ADAM17的相对表达量显著高于正常黏膜组织(0.65±0.2和0.29±0.1,P<0.001).ADAM17在结直肠癌组织中的表达水平与肿瘤浸润深度(P<0.001)、 血管侵犯(P=0.001)、淋巴侵犯(P=0.001)、远处转移(P=0.001)相关.结论 ADAM17在结直肠癌中高表达,并与肿瘤的浸润深度、血管侵犯、淋巴转移以及远处转移密切相关.表明ADAM17可能是结直肠癌的一个有前途的治疗靶点和预测性生物标记物.

目的:研究宫腔粘连组织中叉头框F2(FoxF2)表达与基质金属蛋白酶(MMPs)、解聚素金属蛋白酶(ADAMs)、转化生长因子-β1 (TGF-β1)通路的相关性.方法:选择在我院接受宫腔镜手术治疗且经术后病理诊断为宫腔粘连的患者作为IUA组、另取同期在我院接受手术切除子宫且经术后病理诊断为子宫肌瘤的患者作为对照组,收集IUA组的宫腔粘连组织及对照组的正常内膜组织,测定FoxF2及MMPs、ADAMs相关分子、TGF-β1通路分子的表达量.结果:IUA组宫腔粘连组织中FoxF2、AD-AM15、ADAM17、TIMP1、TGF-β1、Smad2、Smad3、CTGF的mRNA表达量与对照组比较显著升高,MMP9的mRNA表达量与对照组比较显著降低;IUA组患者宫腔粘连组织中FoxF2的mRNA表达量与MMP9的mRNA表达量呈负相关,与ADAM15、ADAM17、TIMP1、TGF-β1、Smad2、Smad3、CT-GF的mRNA表达量呈正相关.结论:宫腔粘连组织中FoxF2的高表达能够抑制蛋白酶活性、增强TGF-β1通路功能.