目的:观察益景汤拮抗高糖诱导的体外血-视网膜内屏障(iBRB)模型基底膜(BM)损害及机制.方法:分离、培养大鼠内皮细胞(ECs)和视网膜微血管周细胞(RMPs)构建体外iBRB模型,随机分成低糖组、高糖组、米诺环素组、益景汤组,分别予25 mmol/L葡萄糖、60 mmol/L葡萄糖、60 mmol/L葡萄糖+10 μg/mL米诺环素、60 mmol/L葡萄糖+10％益景汤含药血清干预,各组干预12 h后终止孵育.采用Western blot法检测各组BM相关蛋白[Ⅳ型胶原(collagen Ⅳ,C Ⅳ)、层黏连蛋白(laminin,LN)]及 MMPs/TIMPs 相关蛋白(MMP-2、MMP-3、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2)的表达.结果:与低糖组相比,高糖组、米诺环素组、益景汤组C Ⅳ蛋白表达增加,高糖组、米诺环素组LN蛋白表达增加(均P＜0.05).益景汤及米诺环素能够抑制高糖诱导的C Ⅳ、LN蛋白表达增加,益景汤组、米诺环素组与高糖组相比具有差异(均P＜0.05).与低糖组相比,高糖组、米诺环素组MMP-2、MMP-3、MMP-9 蛋白表达增加(均 P＜0.05).益景汤能够抑制高糖诱导的MMP-2、MMP-3、MMP-9蛋白表达增加,益景汤组与高糖组相比具有差异(均P＜0.05).低糖组、高糖组、米诺环素组、益景汤组各组之间TIMP-1、TIMP-2表达未见明显差异(均P＞0.05).结论:益景汤可能通过调控MMP-2、MMP-3、MMP-9、C Ⅳ、LN的表达,干预高糖介导的BM重塑,抑制iBRB的损害,从而干预DR.

目的:研究X射线照射后胰腺癌细胞上皮间质转化的发生特点，探究线粒体功能障碍及其诱导的转化生长因子β1(TGF-β1)表达增加在上皮间质转化中的作用。方法:采用6 MV X射线多次(2 Gy×20次或4 Gy×10次)照射胰腺癌细胞株PATU1 988 t,利用transwell小室检测细胞迁移性，采用实时荧光定量方法检测上皮间质转化(EMT)相关因子E-cadherin、Vimentin、N-cadherin和MMPs家族(MMP2、MMP9)及线粒体复合体I的关键亚基及TGF-β1的转录水平变化。应用线粒体氧化磷酸化解偶联剂碳酰氰基-对-氯苯腙(CCCP)破坏线粒体膜电位，检测复合体亚基、TGF-β1含量及EMT相关分子的变化。应用小干扰RNA抑制TGF-β1的表达后，检测上皮间质转化及迁移变化。结果:多次照射后，存活肿瘤细胞迁移数增加( t＝21.90、35.64， P<0.05),上皮间质转化增强，表现为上皮间质转化分子E-cadherin表达下降( t＝8.37、6.77， P<0.05)，N-cadherin( t＝4.42、4.77， P<0.05)、Vimentin( t＝4.57、3.02， P<0.05)、MMP2( t＝7.27、26.08， P<0.05)和MMP9( t＝13.26、7.29， P<0.05)表达均增加，TGF-β1( t＝90.49、35.17， P<0.05)的含量也增加。沉默TGF-β1后细胞上皮间质转化及迁移性下降( t＝38.66、11.54， P<0.05)。细胞发生线粒体功能障碍，具体表现为线粒体膜电位( t＝6.94、29.71， P<0.05)和复合体相关亚基的表达量下降；加入CCCP破坏线粒体膜电位后( t＝16.51， P<0.05)，复合体亚基含量下降，TGF-β1的表达量增加( t＝47.93， P<0.05)，上皮间质转化增强。 结论:辐射破坏了线粒体功能，进而激活了TGF-β1的表达，诱导胰腺癌细胞发生上皮间质转化，迁移性增强。

基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)是一大类锌依赖性内肽酶家族，主要由结缔组织合成，可降解细胞外基质(extracellular matrix，ECM)和基底膜，影响正常组织的再生和重建，参与恶性肿瘤的病理过程。基质金属蛋白酶-7(matrix metalloproteinase-7，MMP-7)是该家族中结构最小的成员，在身体的多个组织中均有表达，如甲状腺、乳腺、肺部、消化道、生殖系统、肝胆系统等。近年来，MMP-7在肝胆疾病中的作用越来越受到关注，研究发现MMP-7不仅在肝胆恶性肿瘤的生长、转移和侵袭过程中高表达；在肝脏纤维化、胆道闭锁等疾病中也异常升高，甚至可以作为胆道闭锁早期诊断的生物学标志物。

中药通过干预人肺腺癌A549细胞发挥抗肿瘤作用，主要包括通过影响PI3K/Akt等通路激活或抑制下游靶蛋白Bcl-2、Bax或形成RIP1/RIP3/MLKL复合小体，从而诱导肺腺癌A549细胞凋亡；使细胞生长期阻滞，从而抑制肺腺癌A549细胞增殖；通过影响MMPs通路、STAT3通路和调控上皮间充质转化相关因子，从而抑制A549细胞侵袭和转移；抑制或激活相关蛋白表达或影响相关信号通路，从而逆转肺癌A549/DDP细胞株对顺铂和紫杉醇的耐药性。

目的:探索基于显微注射方法构建胶质母细胞瘤(GBM)融合大脑类器官模型的可行性，观察该模型肿瘤组织对替莫唑胺(TMZ)的敏感性。方法:GBM组织和脑肿瘤旁组织标本(定义为正常脑组织)来源于中南大学湘雅医院神经外科行手术治疗的患者。采用绿色荧光蛋白(GFP)标记过的人诱导多能干细胞株(hiPSCs)培养24 d构建大脑类器官模型，通过免疫荧光染色方法检测蛋白标志物的表达，评估模型是否成功建立。采用显微注射方法将用红色荧光染料标记过的患者来源的GBM单细胞或U-251 MG细胞株注射到培养约30 d的大脑类器官中，构建GBM融合大脑类器官模型。采用免疫荧光染色法、HE染色等方法观察GBM细胞在大脑类器官中的增殖及浸润情况。采用免疫荧光染色法检测GBM融合大脑类器官中肿瘤细胞基质金属蛋白酶类(MMPs)及BrdU的表达情况，采用HE染色观察形态及结构变化。将10 μmol/L TMZ加入GBM融合大脑类器官模型及GBM肿瘤类组织中培养48 h，采用免疫荧光染色法检测两种模型中Caspase-3的表达。结果:(1)hiPSCs培养至第24天，形成具有明确芽和分层边缘的块状组织样结构；免疫荧光染色显示，该结构阳性表达前脑、脑室样结构、前额叶皮质及海马的标志蛋白FOXG1、N-cadherin、Auts2及Frizzled 9，以及星形胶质细胞标志蛋白胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元标志蛋白TUJ1。(2)荧光显微镜下及HE染色均显示肿瘤细胞在大脑类器官内快速增殖，呈浸润性生长。免疫荧光检测显示，与大脑类器官比较，GBM融合大脑类器官的肿瘤细胞中，MMP2和MMP13的表达明显增加，Fibronectin、MMP3及MMP9的表达明显减弱，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，MMP10的表达差异无统计学意义( P>0.05)；GFAP和BrdU的表达水平均增高(均 P<0.05)。(3)TMZ处理48 h后，免疫荧光染色显示，GBM类肿瘤组织中Caspase-3的表达明显高于GBM融合大脑类器官。 结论:采用显微注射方法能够成功构建GBM融合大脑类器官模型。该模型中的肿瘤组织对TMZ的敏感性低于GBM肿瘤类组织。

目的:探讨缺血预处理对2型糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法:雄性SD大鼠42只随机分为六组：假手术组(CC组)、缺血再灌注组(CI组)、缺血预处理组(CIPC组)、糖尿病假手术组(DC组)、糖尿病缺血再灌注组(DI组)、糖尿病缺血预处理组(DIPC组)。高脂高糖饮食复合腹腔注射链脲佐菌素的方法制备2型糖尿病模型；结扎左冠状动脉前降支30 min再灌注2 h制备心肌缺血再灌注损伤模型；预处理组于缺血前30 min，反复三次缺血5 min，再灌注5 min操作后，再行缺血再灌注处理。光镜下观察心肌细胞形态学改变，酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)法检测血清肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)-α、白细胞介素(interleukin，IL)-6水平，Western blot检测心肌组织基质金属蛋白酶(matrix metallo proteinase，MMP)-2、MMP-9表达水平。结果:与DC组相比，再灌注后DI组血清TNF-α、IL-6水平升高[(213.81±8.73)比(114.66±7.07)，(175.25±7.72)比(89.77±6.42)， t值分别为23.25、17.78， P值均<0.05]，与CC组相比，再灌注后CI组血清TNF-α、IL-6水平升高[(153.59±6.68)比 (84.56±6.54)；(158.64±6.18)比 (75.15±4.08)， t值分别为19.54、29.83， P值均<0.05 ]。与DC组相比，再灌注后DI组心肌MMP-2、MMP-9表达升高[(1.50±0.07)比(0.28±0.05)；(1.85±0.14)比(0.33±0.08)， t值分别为36.46、27.68， P值均<0.05]，与CC组相比，再灌注后CI组心肌MMP-2、MMP-9表达升高[(1.44±0.08)比(0.14±0.05)；(1.45±0.08)比(0.19±0.09), t值分别为37.52、24.94， P值均<0.05]。与DI组相比，再灌注后DIPC组血清TNF-α、IL-6水平降低[(140.14±7.24)比(213.81±8.73)；(129.60±7.48)比(175.25±7.72)， t值分别为17.19、6.81， P值均<0.05]；与CI组相比，再灌注后CIPC组血清TNF-α、IL-6水平降低[(112.36±5.36)比(153.59±6.68)；(92.64±6.58)比(158.64±6.18)， t值分别为12.74、19.34，P值均<0.05]。与DI组相比，再灌注后DIPC组心肌MMP-2、MMP-9表达降低[(0.94±0.06)比(1.50±0.07)；(0.97±0.08)比(1.85±0.14)， t值分别为8.89、10.52，P值均<0.05]，与CI组相比，再灌注后CIPC组心肌MMP-2、MMP-9表达降低[(1.06±0.08)比(1.44±0.08)；(0.99±0.08)比(1.45±0.08)， t值分别为16.07、14.44， P值均<0.05]。与非糖尿病组大鼠相比，糖尿病组大鼠在基础水平的TNF-α、IL-6、MMP-2和MMP-9差异均无统计学意义( P>0.05)。 结论:缺血预处理减轻正常大鼠和糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤，其机制与抑制MMPs表达及减轻炎症反应有关。

目的:探讨托法替布联合来氟米特治疗RA的临床疗效及其对患者血清Janus激酶（JAK）/信号转导和转录激活因子（STAT）信号通路相关蛋白和MMPs水平的影响。方法:本研究为前瞻性病例对照研究。筛选2020年3月至2021年9月我院收治的80例RA患者纳入研究。按随机数字表法分成观察组40例与对照组40例。观察组采取托法替布联合来氟米特治疗，对照组单用来氟米特治疗。连续治疗12周后观察2组疗效。比较治疗前后2组典型临床表现[关节疼痛视觉模拟量表（VAS）评分、压痛关节数、肿胀关节数、晨僵时间]、DAS28评分、36项健康调查简表（SF-36）总分及血清JAK3、STAT3、IL-6、IL-17、MMPs水平；并统计2组药物不良反应情况。统计学处理采用 χ2检验、配对样本 t检验、独立样本 t检验、Fisher确切概率法。 结果:治疗4、8、12周后，观察组ACR20达标率分别为37.5%（15/40），62.5%（25/40），80.0%（32/40），均高于同期对照组[17.5%（7/40）、37.5%（15/40）、57.5%（23/40）； χ2=4.01， P=0.045， χ2=5.00， P=0.025， χ2=4.71， P=0.030]。治疗8、12周后，观察组ACR50达标率分别为35.0% （14/40）、47.5%（19/40），均高于同期对照组[15.0%（6/40），20.0%（8/40）； χ2=4.27， P=0.039， χ2=6.76， P=0.009]。治疗后，观察组关节疼痛VAS评分、压痛关节数、肿胀关节数、DAS28评分、SF-36总分均低于对照组（ t=5.55， P<0.001； t=9.98， P<0.001； t=11.77， P<0.001； t=4.50， P<0.001； t=5.28， P<0.001），晨僵时间均短于对照组（ t=4.76， P<0.001）。治疗后，观察组血清JAK3、STAT3、IL-6、IL-17、MMP-3、MMP-9及MMP-13水平分别为（2 354±476）pg/ml，（1.04±0.17）ng/ml，（12.4±2.8）pg/ml，（30±5）pg/ml，（65±14）μg/L，（76±12）μg/L，（11.5±1.8）μg/L，均低于对照组[（2715±584）pg/ml，（1.22±0.29）ng/ml，（16.8±3.6）pg/ml，（40±7）pg/ml，（98±15）μg/L，（123±20）μg/L，（14.9±2.8）μg/L， t=3.03， P<0.05； t=3.39， P<0.05； t=6.10， P<0.05； t=7.35， P<0.05； t=10.17， P<0.05； t=12.74， P<0.05； t=6.46， P<0.05]。观察组不良反应率[35.0%（14/40）]较对照组[27.5%（11/40）]差异无统计学意义（ χ2=0.52， P=0.469）。 结论:托法替布联合来氟米特治疗RA的总体疗效满意，是改善患者临床表现、疾病活动度及生活质量的安全有效途径，其作用可能与其显著下调血清JAK/STAT信号通路相关蛋白和MMPs的表达水平有关。

川崎病是一种急性全身性中小血管炎性综合征，是儿童后天性心脏病的主要原因，最易累及冠状动脉，可以导致如冠状动脉扩张、冠状动脉瘤和急性心肌梗死等严重并发症。目前关于川崎病的发病原因及致病机制尚无准确定论，本文将围绕传染性病原体、环境因素、免疫失调和遗传倾向等方面阐述川崎病的病因，并围绕免疫系统异常活化、炎性细胞因子表达上调、金属基质蛋白酶活性提高、血管内皮损伤/血管内皮功能紊乱等方面综述川崎病的致病机制。

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)H19对滋养细胞中基质金属蛋白酶(MMPs)和金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)表达谱的影响。方法:在人早孕期绒毛外滋养细胞系HTR-8中过表达H19或干扰H19的表达，采用PCR及qPCR检测MMP和TIMP家族成员的mRNA表达水平。采用Western blot和明胶酶谱技术检测MMP蛋白表达水平及MMP蛋白活性。结果:PCR和qPCR结果显示，过表达H19可上调滋养细胞MMP-2及MMP-9 mRNA表达水平(均 P<0.05)、下调TIMP-3 mRNA表达水平( P<0.05)；而干扰H19表达则下调滋养细胞MMP-2及MMP-9 mRNA表达水平(均 P<0.05)、上调TIMP-3 mRNA表达水平( P<0.05)。Western blot结果显示，过表达H19可上调MMP-2蛋白表达水平( P<0.05)、下调TIMP-3蛋白表达水平(均 P<0.05)；而干扰H19表达则下调MMP-2蛋白表达水平( P<0.05)、上调TIMP-3蛋白表达水平( P<0.05)。明胶酶谱分析结果显示，过表达H19会增强滋养细胞MMP-2蛋白活性，而干扰H19表达会减弱滋养细胞MMP-2蛋白活性。 结论:H19调控滋养细胞MMP-2/TIMP3表达水平及MMP-2蛋白活性。

腰腿痛正成为当今影响人们生活质量的重要因素，每年因腰腿痛所带来的社会损失巨大。腰椎间盘突出症（lumbar disc herniation，LDH）是导致腰腿疼痛的主要疾病之一，目前生物医学界对其发生机制尚存争议。炎症因子是由组织细胞分泌的参与介导炎症反应的各种细胞因子，大量实验研究均表明椎间盘退变（intervertebral disc degeneration，IDD）与髓核突出后刺激机体产生的炎症因子、退变相关基因的表达和下游表达产物有关。IL-1、IL-6、TNF-α、MMPs、TGF-β等作为主要的炎症因子成为研究者关注的热点。细胞信号转导通路是炎症因子参与调节细胞内各种生化反应的主要途径，炎症因子通过与不同蛋白之间发生相互作用，激活或抑制不同的信号通路，从而实现调控细胞周期、调节基因表达、诱导免疫炎症反应及细胞凋亡等功能。对各炎症因子在机体中的作用以及相关分子信号通路转导途径的研究将有助于我们认识和理解LDH的发生机制，也将为临床腰椎退行性疾病的诊断和治疗提供理论技术支持与安全有效的治疗方案。既往研究大多只关注某一细胞因子或信号通路对椎间盘退变的影响，但不同炎症因子及其介导的信号通路之间往往通过特殊的途径相互影响、相互串扰，形成一张复杂而精密的信号转导调控网络，共同调节机体中各种生理及病理过程，并且疾病的发生往往伴随着多因素的作用，研究单一信号网络对疾病的影响无法全面解释疾病的成因和相关临床表现。因此，阐明各炎症因子在腰椎退行性病变中所发挥的作用，探索分析各因子间通过何种方式相互调节将为了解腰椎退变的机制及今后探索防治LDH的新方法提供思路。