大面积烧伤可诱发复杂的免疫反应，严重影响患者预后。中性粒细胞作为天然免疫的重要效应细胞，其在患者烧伤休克阶段的功能作用尚不十分清楚。该研究观察到，烧伤休克患者血液循环中的中性粒细胞计数和百分比（中性粒细胞占白细胞总数的比值）明显增加，进一步采用免疫荧光成像技术在烧伤患者或动物模型中观察到中性粒细胞的细胞核存在左移现象。通过琼脂糖迁移模型评估中性粒细胞的趋化功能，显示其趋化能力在烧伤患者早期即出现明显下降，这种下降与细菌内毒素激活P2RX1介导中性粒细胞趋化停止信号有关。进一步研究观察到，从烧伤休克患者血液中分离出来的中性粒细胞释放了更多的抗菌蛋白，但抗菌蛋白并非是通过中性粒细胞胞外诱捕网（NET）途径产生的，而主要是通过中性粒细胞脱颗粒的胞吐作用来实现的。同时，烧伤患者中性粒细胞通过产生活性氧自由基和NET进行抗菌的能力明显减弱。此外，中性粒细胞释放肝素结合蛋白及中性粒细胞表面P2RX1表达增加促进了血管渗漏的发生。因此，针对以中性粒细胞为代表的免疫系统早期干预和调节将有利于重度烧伤患者的治疗。

目的:探讨传统中药光甘草定对脓毒症肺损伤中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps, NETs）形成及细胞焦亡影响。方法:将24只雄性Wistar大鼠，按照随机数字表法分为3组：脓毒症组采用盲肠结扎穿孔术（cecalligation and puncture, CLP）建立脓毒症大鼠模型；光甘草定组（CLP+GLA）行CLP及光甘草定灌胃（30 mg/kg）；假手术组（Sham）行盲肠探查术，仅进行盲肠翻动后关腹。12 h后留取血浆、肺泡灌洗液及肺组织标本检测。测定肺泡灌洗液蛋白含量；测定肺组织湿重/干重（W/D）比值；用苏木精-伊红（HE）染色后观察肺组织病理学改变；用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血浆中NETs标志物MPO-DNA复合物水平、焦亡相关炎症因子IL-18、IL-1β的表达水平；Western blot技术检测大鼠肺组织Caspase-1及Cleaved-caspase-1焦亡蛋白的变化。结果:脓毒症组肺泡灌洗液总蛋白浓度较假手术组明显升高（ P<0. 01），光甘草定组肺泡灌洗液总蛋白浓度较脓毒症组下降（ P<0. 05）。脓毒症组肺水肿程度明显加重，光甘草定组较脓毒症组肺水肿减轻。光镜下观察肺组织病理结果显示：假手术组小鼠肺组织结构正常，肺泡清晰；脓毒症组肺泡壁广泛增厚，炎性细胞明显浸润；光甘草定组较脓毒症组肺组织损伤明显减轻。ELISA显示:脓毒症组血浆中NETs标志物MPO-DNA复合物水平和炎症因子IL-18、IL-1β含量较假手术组明显升高（ P<0.001），光甘草定组NETs标志物MPO-DNA复合物水平和炎症因子IL-18、IL-1β炎症因子表达水平较脓毒症组均显著降低(MPO-DNA： P<0.01；IL-18、IL-1β： P<0.05)。Western blot技术结果显示:与假手术组大鼠相比，脓毒症组大鼠肺组织中Caspase-1及Cleaved-caspase-1蛋白阳性信号表达增强；光甘草定组肺组织Caspase-1阳性细胞分布与假手术组相似,Cleaved-caspase-1阳性信号表达高于假手术组。 结论:光甘草定通过抑制NETs生成及细胞焦亡，有效减轻肺部炎症,发挥对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用。

目的:探讨脓毒症血栓形成的炎症环境中血清来源C5a补体能否激活多型核中性粒细胞（polymorphonuclear neutrophils，PMNs）释放中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps，NETs），以及干扰素-λ1/白介素29（interferon-λ1/interleukin 29，IFN-λ1/IL-29）是否具有抑制NETs相关凝血酶生成的作用。方法:健康志愿者和脓毒症患者的外周血样分别来自2018—2019年苏州大学附属第二医院门诊和住院部，体外研究脓毒症患者血清C5a刺激的健康志愿者外周血分离的PMNs细胞，IL-29和抗CD88单抗作为NETs释放调节因子，免疫荧光分析（immunofluorescence, IF）PMNs上NETs的释放水平，免疫印迹技术（immuno blot，IB）评估PMNs上组织因子（tissue factor，TF）的表达，荧光光谱法（fluorescence spectroscopy，FS）测定上清液中循环DNA水平，酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）测定凝血酶-抗凝血酶（thrombin-antithrombin，TAT）复合物水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析，以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:以脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs释放的NETs表达水平（20.5±3.7）%为对照组，IL-29和抗CD88单抗抑制了脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs上TF表达的NETs释放，采用IF技术测定的表达水平分别为（5.0±1.5）%、（7.3±3.1）%，差异均有统计学意义（ q=9.23和8.73，均 P<0.01）。IL-29和抗CD88单抗抑制了脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs上TF水平，IB测定的TF表达水平分别为（0.52±0.03）%、（0.57±0.02）%，与脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs的TF表达水平（0.81±0.03）%进行比较，差异均有统计学意义（ q=3.44和3.21，均 P<0.05）。IL-29和抗CD88单抗降低了NETs相关的TAT复合物的水平，分别为（3.3±0.4）ng/mL、（4.6±0.7）ng/mL，与脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs释放的NETs相关的TAT复合物水平（7.8±0.7）ng/mL比较，差异均有统计学意义（ q=6.77和5.27，均 P<0.01）。 结论:脓毒症患者血清来源的C5a诱导健康志愿者PMNs内TF的累积和表达TF的NETs释放，血清C5a促进了NETs依赖性凝血酶的生成。IL-29具有抑制C5a诱导的NETs释放及其相关的凝血酶生成。

目的:探讨抗磷脂综合征(APS)血栓形成的炎症环境中自噬是否参与多型核中性粒细胞(PMNs)释放中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)，以及IFN-λ1(IL-29)是否具有抑制NETs相关凝血酶生成的作用。方法:体外研究活动期APS患者血清刺激健康志愿者外周血分离的PMNs，IL-29和3-甲基腺嘌呤(3-MA)作为NETs释放和自噬的调节因子，通过免疫荧光技术(IFT)和流式细胞术(FCM)评估NETs的表达，Western blot检测自噬相关蛋白的表达，酶联免疫吸附试验(ELISA)测定凝血酶-抗凝血酶(TAT)复合物水平。结果:将APS患者血清刺激健康人PMNs释放的NETs作为对照组，其免疫荧光技术检测表达水平为(22.8±3.1)%，流式细胞术分析表达水平为(10.1±2.7)%。IL-29和3-MA抑制了APS患者血清刺激的健康人PMNs上NETs的释放，免疫荧光技术检测表达水平分别为(5.3±2.2)%和(4.9±2.4)%，流式细胞术分析的表达水平分别为(2.1±1.3)%和(2.7±1.4)%，与对照组相比差异均有统计学意义( q＝9.89、10.67、11.74、9.61， P均<0.01)。IL-29抑制了APS患者血清刺激的健康人PMNs上LC3B的表达，促进了p62的表达，与APS患者血清刺激的健康人PMNs中自噬相关蛋白的表达水平相比，差异均有统计学意义[LC3B/GAPDH：(0.28±0.03)% vs(0.77±0.06)%， q＝8.65；p62/GAPDH：(0.63±0.05)% vs(0.33±0.03)%， q＝4.78； P均<0.01]。IL-29和3-MA降低了NETs相关TAT复合物的水平，与APS患者血清刺激健康人PMNs释放的NETs相关TAT复合物水平比较，差异均有统计学意义[(3.1±0.5)ng/ml和(4.7±0.4) ng/ml vs(7.6±0.6) ng/ml， q＝6.34和5.15， P均<0.01]。 结论:自噬机制参与了APS血栓形成患者血清刺激的健康人PMNs中NETs的释放以及随后的凝血级联激活，IL-29通过抑制自噬减少NETs的生成以及其相关凝血酶的产生。

目的:探讨中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps，NETs）对人羊膜上皮细胞增殖和凋亡的影响。方法:取正常妊娠足月择期剖宫产孕妇术前外周血，体外提取中性粒细胞并诱导生成NETs。体外培养人羊膜上皮细胞（WISH细胞）并分为4组：（1）对照组：不经过任何处理；（2）NETs组：用NETs（500 ng/ml）刺激WISH细胞；（3）NETs+SB203580（p38激酶抑制剂）组：用SB203580（5 μmol/L）预处理WISH细胞30 min后加入NETs（500 ng/ml）；（4）SB203580组：只加入SB203580。处理48 h后，分别通过细胞增殖实验、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）检测实验和流式细胞技术检测各组细胞增殖比率、细胞上清LDH水平和细胞凋亡率。4组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD -t检验。 结果:（1）细胞增殖情况：NETs组细胞增殖比率低于对照组［（9.379±0.775）%与（36.560±1.208）%，LSD -t=20.78， P<0.001］；NETs+SB203580组WISH细胞增殖比率［（27.920±0.926）%］高于NETs组（LSD -t=14.18， P<0.001）。（2）LDH：NETs组细胞上清LDH水平高于对照组（1.518±0.038与0.274±0.004，LSD -t=44.25， P<0.05），NETs+SB203580组LDH水平（0.857±0.009）低于NETs组（LSD -t=23.51， P<0.001）。（3）细胞凋亡情况：NETs组细胞凋亡率较对照组增加［（14.290±0.141）%与（10.110±0.044）%，LSD -t=21.76， P<0.001］；NETs+SB203580组［（10.500±0.218）%］细胞凋亡率低于NETs组（LSD -t=19.70， P<0.001）。 结论:NETs可能通过p38/丝裂原活化蛋白激酶信号通路抑制人羊膜上皮细胞的增殖，并促进其凋亡。

目的:通过多组学联合生物信息方式分析探索外泌体介导的多发性肌炎/皮肌炎（PM/DM）的潜在发生机制，为PM/DM提供诊断新靶标和治疗新思路。方法:收集2021年1月至2023年6月来自无锡市第二人民医院的PM/DM患者及健康体检者的血清外泌体样本，基于HiSeq高通量测序技术和同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）定量蛋白组学技术对PM/DM组与健康对照组血清外泌体中的微RNA（miRNA）和蛋白组分开展测序分析，并使用R语言进行limma差异分析，基因本体（GO）、京都基因和基因组百科全书（KEGG）、基因富集分析（GSEA）功能分析及免疫相关性分析，筛选核心基因并建立miRNA-靶基因-转录因子共表达分子网络。最后使用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）对核心基因进行实验验证。统计学方法以 t检验进行数据分析，并绘制受试者工作特征（ROC）曲线评价核心基因的检验效能。 结果:初步筛选出42个上调差异蛋白，61个下调差异蛋白，以及22个上调差异miRNA，19个下调miRNA，最终确定7个核心基因，13个关联差异miRNA以及4个转录因子。根据功能分析认为核心基因组织蛋白酶G（CTSG）、髓过氧化物酶（MPO）、组蛋白H1-5涉及的中性粒细胞胞外诱捕网的形成、NF-κB通路等炎症相关途径在外泌体介导的PM/DM发生机制中起重要作用。肥大细胞、未成熟树突状细胞、自然杀伤细胞、调节性T细胞、辅助性T细胞2等免疫细胞在疾病的血清外泌体中表达程度较高。健康对照和PM/DM组MPO[（1.08 ±0.47）和（2.05 ±0.62）， t=-3.50， P=0.004]、CTSG[（1.11 ±0.51）和（2.27 ±1.10）， t=-2.72， P=0.022]、H1-5[（1.03 ±0.25）和（1.81 ±0.73）， t=-2.89， P=0.019]相对表达量比较差异具有统计学意义，ROC曲线中，MPO[AUC（95% CI）=0.92（0.78，1）]、CTSG[AUC（95% CI）=0.81（0.59，1）、H1-5[AUC（95% CI）=0.84（0.64，1）]表明3个核心基因精度良好。 结论:本研究鉴定了PM/DM血清外泌体中的关键差异分子，并构建了miRNA-靶基因-转录因子的调控网络，确定了PM/DM通过血清外泌体介导的致病机制是经由中性粒细胞胞外诱捕网的形成、NF-κB通路这两大关键通路实现的，CTSG、MPO、H1-5为其通路中的核心基因，并明确了与其相关miRNA及转录因子，这些因子或可成为PM/DM诊断和治疗的潜在靶点和生物标志物。

实蝇分布范围广泛,寄主种类多样,危害十分严重,经济损失巨大,对其防治的时间紧迫性与经济重要性与日俱增.检验检疫及农业、物理、化学和生物防治都是常见的实蝇害虫防治方法.能够刺激实蝇行为反应的引诱剂作为一种高效环保的害虫防治策略在实蝇防治体系中占有重要地位.按照不同分类标准,实蝇引诱剂既可以分为性诱剂、食诱剂和植物源诱剂;又可以分为雄性实蝇引诱剂和雌(双)性实蝇引诱剂.其中,雄性实蝇引诱剂特异性强、效果显著.1960年首次报道雄性实蝇引诱剂4-(4-乙酰氧基苯基)-2-丁酮(诱蝇酮)对实蝇的显著吸引效果以来,它一直被用于监测和诱捕靶标实蝇.应用于调查监测时,诱蝇酮可以与多种类型的诱芯与诱捕器一起使用,实现效能最大化.诱蝇酮不仅可以单独使用引诱实蝇,而且可以与其他诱剂与菌液等混配使用.而且,诱蝇酮在发挥其基础引诱功能的同时,还会影响靶标实蝇的行为和生理以及非靶标昆虫的生存.因此,本文重点从调查监测、引诱灭杀、吸引取食、对非靶标昆虫影响等方面对诱蝇酮在实蝇害虫防治中的研究和应用进展进行综述,并对实蝇害虫诱饵站引诱防治与害虫自动测报的发展,诱捕的影响因素与引诱剂在害虫综合防治中的作用等做出合理展望,以期为实蝇害虫引诱技术的研究提供理论基础.

目的 探究中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carci-noma,OSCC)中的表达及作用.方法 通过免疫检测技术对OSCC组织中NETs的表达情况进行了确认,随后对不同NETs表达水平患者的临床病理特征及预后进行了分析.通过密度梯度离心法分离健康人外周血中性粒细胞并使用佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导NETs生成,将其与OSCC细胞共培养后,通过CCK-8 细胞增殖实验检测OSCC细胞增殖能力的变化,通过Transwell细胞迁移实验和细胞划痕实验检测OSCC细胞迁移能力的变化;通过蛋白免疫印迹实验(Western blotting,WB)检测NETs对OSCC上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程的调控.结果 NETs在OSCC中的表达水平高于正常组织(P＜0.001),NETs高表达患者较NETs低表达患者预后更差(P＜0.05),NETs表达水平与OSCC患者的临床分级、浸润和复发程度相关(P＜0.05).NETs可促进Cal27 和HN6 细胞的增殖和迁移能力(P＜0.05),抑制了上皮标志物的蛋白表达,并促进了间充质标志物的蛋白表达(P＜0.05),这些作用可被NETs抑制剂DNaseⅠ逆转.结论 NETs在OSCC中高表达,其可通过影响上皮间充质转化促进OSCC细胞的增殖和迁移,并影响OSCC患者预后.

目的 探讨不同浓度葡萄糖溶液对白纹伊蚊和淡色库蚊的蚊幼存活率,以及诱蚊、诱卵效果的影响,为基于糖饵剂的灭蚊技术研发提供支持.方法 取白瓷碗分别加入100 mL 3%、5%、8%、10%和15%的葡萄糖溶液,每碗投放10只白纹伊蚊或淡色库蚊Ⅳ龄蚊幼,第2、4、6、24、48、72 h观察蚊幼存活情况.饲养笼内投放饱血白纹伊蚊和淡色库蚊雌蚊各50只,四角各放置盛有5%、8%和15%葡萄糖溶液的产卵杯各1个,观察72h总产卵数.在模拟房内投放饱血和饥饿白纹伊蚊、淡色库蚊雌蚊各100只,盛有5%和8%浓度葡萄糖溶液和粘虫板制成的黑色简易灭蚊桶各1个,观察6 d后成蚊数和蚊卵数.以上试验均重复3次,以去氯自来水为对照.结果 随着葡萄糖溶液浓度增加,白纹伊蚊和淡色库蚊蚊幼的72h矫正死亡率升高,高于5%的葡萄糖溶液不适宜蚊幼存活.诱卵结果显示,随着葡萄糖溶液浓度增加,对白蚊伊蚊诱卵效果下降;5%和8%葡萄糖溶液组诱卵效果相似,白纹伊蚊卵平均数分别为686.67枚和682.33枚,淡色库蚊卵筏平均数分别为3.00块和2.33块.模拟房内,对照组、5%和8%葡萄糖溶液组诱捕成蚊平均数分别为93.33、105.00和130.33只,8%葡萄糖溶液组诱蚊效果强于对照组(F=3.283,P=0.030);白纹伊蚊蚊卵平均数(蚊卵数+蚊幼数)分别为70.33、55.33和63.00只,差异有统计学意义(H=6.761,P=0.034).结论 5%及以上浓度的葡萄糖溶液可有效抑制白纹伊蚊和淡色库蚊蚊幼存活,且具备较好的诱蚊效果及一定的诱卵效果.

旨在优选体外诱导中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)形成的条件,以建立相对稳定的实验技术平台.通过比较不同条件,包括大鼠和小鼠等常用的实验动物,利用percoll密度梯度离心法分离骨髓中性粒细胞、外周血中性粒细胞等多种细胞来源,采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和佛波醇 12-肉豆蔻酸酯 13-乙酸酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)不同诱导剂体外诱导,通过MPO/CitH3/DAPI免疫荧光标记法以及细胞培养上清游离DNA(cell free DNA,cfDNA)含量检测综合评价,筛选体外诱导NETs形成的优选条件;在上述平台选择基础上,进一步通过给予中药有效单体川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)进行验证,综合评估优选的体外NETs诱导条件的稳定性.结果显示,包被多聚赖氨酸可一定程度促进小鼠骨髓中性粒细胞NETs形成.LPS和PMA均可显著促进小鼠骨髓中性粒细胞MPO、CitH3 蛋白表达,并提高大鼠外周血中性粒细胞培养上清中cfDNA含量;且与LPS相比,PMA诱导cfDNA水平升高更显著(P<0.05).与PMA共孵育后小鼠骨髓中性粒细胞、大鼠骨髓中性粒细胞和大鼠外周血中性粒细胞中MPO、CitH3 蛋白表达均显著升高,以大鼠外周血中性粒细胞升高最明显.TMP可以显著下调PMA诱导的大鼠外周血中性粒细胞中MPO、CitH3 和NE蛋白的表达.综上,PMA诱导大鼠外周血中性粒细胞是体外诱导NETs形成的较优条件.该研究为基于NETs的体外研究提供优选平台,并为以调控NETs为靶标的中药作用研究提供前期基础.