目的:研究VPS26在高脂环境中对大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSC）成骨、成脂分化作用的机制，探讨VPS26对高脂大鼠种植体骨结合和裸鼠异位成骨的影响。方法:普通成骨诱导液（成骨组）和高脂成骨诱导液（高脂组）培养BMSC，高脂组促进或抑制VPS26的表达，检测成骨和成脂相关基因的表达。细胞诱导第7、14天后行碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）和油红O染色；成骨组细胞采用免疫荧光染色和免疫共沉淀方法检测VPS26与β-联蛋白（β-catenin）的结合，双荧光素酶报告实验检测萤火虫荧光值/海肾荧光值（以下简称TOP/FOP）比值。取18只雄性12周龄高脂血症Wista大鼠（体质量为160~200 g），于其双侧股骨干骺端植入种植体，分为3组，每组6只，分别注射VPS26过表达慢病毒（LV-VPS26组）、阴性对照慢病毒（LV-nc组）和生理盐水（空白对照组），种植体及周围骨组织行显微CT分析和HE、油红O染色评估种植体骨结合和股骨脂滴形成。20只雌性6周龄裸鼠（体质量为30~40 g）均分为5组，每组4只，于背部皮下分别植入不转染和转染了LV-VPS26、LV-nc、shVPS26、shscr慢病毒的成骨组BMSC，取样观察异位成骨。结果:过表达VPS26后高脂组BMSC中ALP的mRNA表达水平（1.56±0.09）显著高于阴性对照（1.01±0.03）（ t=10.09， P<0.001），过氧化物酶增殖物活化受体-γ（peroxisome proliferator-activated receptor-γ，PPAR-γ）和脂肪酸结合蛋白4（fatty acid-binding protein4，FABP4）的mRNA表达水平则显著低于阴性对照（ t=6.44， P<0.001； t=10.01， P<0.001）。蛋白质印迹法结果显示过表达VPS26后高脂组BMSC中ALP、Runt相关转录因子2的蛋白表达较阴性对照增强，PPAR-γ、FABP4则减弱，高脂组骨髓间充质干细胞ALP活性在过表达VPS26后更强，脂滴的形成较阴性对照更弱，数量更少。免疫荧光染色、免疫共沉淀和双荧光素酶报告实验结果显示VPS26与β-catenin存在共定位和相互作用，且TOP/FOP比值显著上升43.10%（ t=-3.17， P=0.034）。VPS26过表达后高脂大鼠种植体骨结合增强而脂滴数量下降，HE染色结果显示VPS26过表达后裸鼠皮下支架周围组织骨量增多。 结论:VPS26通过Wnt/β-catenin通路激活BMSC成骨分化且抑制成脂分化，具有促进高脂大鼠种植体骨结合和裸鼠异位成骨的作用。

目的:从蛋白质类泛素化修饰角度解析亚低温对神经干细胞（neural stem cells，NSCs）的保护机制，为新生儿缺氧缺血性脑病（hypoxic ischemic encephalopathy，HIE）的亚低温治疗提供科学依据。方法:原代分离培养小鼠NSCs，分为对照组、缺氧组、亚低温组、缺氧+亚低温组并予相应处理，Western Blot法检测小泛素相关修饰蛋白2/3（small ubiquitin-related modifier 2/3，SUMO2/3）、低氧诱导因子1 α（hypoxia inducible factor 1 α，HIF-1α）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1 α（peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1 α，PGC-1α）和八聚体结合转录因子4（octamer-binding transcription factor 4，Oct4）的蛋白水平；比较NSCs克隆球直径变化，酶联免疫吸附法检测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）含量，流式细胞术检测细胞凋亡率，免疫荧光法检测NSCs向神经元细胞分化情况。结果:与对照组相比，缺氧组NSCs中SUMO2/3、HIF-1α和PGC-1α的蛋白水平分别升高至1.33、2.26和2.40倍，亚低温组NSCs中SUMO2/3和PGC-1α的蛋白表达水平分别升高至1.52倍和6.36倍，差异均有统计学意义（ P<0.05）；与缺氧组相比，缺氧+亚低温组NSCs中SUMO2/3、HIF-1α、PGC-1α和Oct4的蛋白表达水平分别升高至1.44、1.40、3.30和1.59倍，差异均有统计学意义（ P<0.05）。缺氧组、亚低温组、缺氧+亚低温组细胞克隆球直径明显小于对照组，缺氧+亚低温组细胞克隆球直径明显小于缺氧组，差异均有统计学意义（ P<0.05）。亚低温组与对照组LDH水平比较差异无统计学意义（ P>0.05），缺氧+亚低温组LDH水平明显低于缺氧组（ P<0.05）。亚低温组细胞死亡率与对照组比较差异无统计学意义（ P>0.05），缺氧+亚低温组细胞死亡率明显低于缺氧组（ P<0.05）。与对照组相比，缺氧组和亚低温组巢蛋白表达水平均有所升高，但神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE）水平明显下降（ P<0.05）；与缺氧组和亚低温组相比，缺氧+亚低温组巢蛋白表达水平进一步增强，同时NSE表达水平进一步下降（ P<0.05）。 结论:亚低温可能通过强化蛋白质的SUMO化修饰方式增加NSCs对缺氧的耐受，进一步为亚低温治疗HIE提供了理论依据。

目的:探讨转录因子激活增强子结合蛋白4(TFAP4)在胃癌中的表达及对预后的影响，并观察TFAP4在胃癌细胞迁移和侵袭过程中发挥的作用。方法:通过生物信息学分析，获取TFAP4在胃癌中的表达及在胃癌患者的预后中所起到的作用。采用Transwell小室法及划痕实验检测TFAP4对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。应用蛋白质印迹法(Western blot)检测敲低TFAP4后上皮-间充质转化(EMT)相关通路蛋白的表达变化。对独立样本采用 t检验。 结果:基因表达谱交互分析(GEPIA2)网站对胃癌组织的RNA测序(RNA-seq)数据进行分析，结果显示TFAP4在胃癌组织中高表达( t＝32.070， P<0.01)，差异有统计学意义。生存分析(KM-PLOTTER)网站对TFAP4进行生物信息学分析，TFAP4为胃癌预后的危险因素。划痕实验结果显示，敲低TFAP4的实验组在划痕48 h后相较于对照组迁移距离更短。Transwell实验结果显示，敲低TFAP4的实验组在24 h内穿膜细胞数量显著低于对照组[(83.000±3.786)个比(186.700±4.055)个， t＝18.690， P<0.05]，差异有统计学意义。Western blot结果显示，敲低TFAP4的表达后，上皮间充质转化(EMT)通路相关蛋白N-钙黏蛋白及基质金属蛋白酶(MMP)-2的表达水平随之降低。 结论:TFAP4在胃癌中高表达，和不良预后呈正相关，具有促进胃癌细胞迁移和侵袭的作用。

目的:探讨阿司匹林（aspirin，ASP）对高脂血症诱导的足细胞内质网应激的影响及可能机制。方法:培养足细胞分为4组：对照组、ASP（100 μg/ml）组、ox-LDL（100 μg/ml）组和ASP+ox-LDL组，在6 h、12 h、24 h、48 h以实时定量PCR法检测蛋白激酶R样内质网激酶（protein kinase R-1ike endoplasmic reticulum kinase，PERK）、真核细胞起始因子2α（eukaryotic translation initiation factor 2α，eIF2α）、活化转录因子4（activating transcription factor-4，ATF4)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CAAT/enhancer binding protein homologous protein，CHOP）的表达；在24 h时以Western印迹法检测磷酸化（p）-PERK、p-eIF2α的表达；在12 h时以Western印迹法检测ATF4的表达。结果:在足细胞培养24 h时，ox-LDL组和ASP+ox-LDL组PERK、eIF2α的表达水平达高峰，在12 h时，该两组ATF4、CHOP的表达水平达高峰。在足细胞培养6 h、12 h、24 h、48 h时，与对照组比较，ox-LDL组PERK、eIF2α、ATF4、CHOP的表达水平明显较高（均 P<0.05）；与ox-LDL组比较，ASP+ox-LDL组上述各指标表达明显较低（均 P<0.05）。在足细胞培养24 h时，与对照组比较，ox-LDL组p-PERK、p-eIF2α的表达水平明显较高（均 P<0.05）；与ox-LDL组比较，ASP+ox-LDL组p-PERK、p-eIF2α的表达水平明显较低（均 P<0.05）。在足细胞分组培养12 h时，各组ATF4蛋白水平的表达与mRNA表达相似。ASP组与对照组间上述各项指标表达差异无统计学意义。 结论:高脂血症可能通过诱导PERK和eIF2α的磷酸化、激活ATF4转录及诱导CHOP高表达，引起足细胞内质网应激，而阿司匹林可能部分阻断了PERK通路，进而可能对足细胞具有保护作用。

目的:探讨转录因子激活增强子结合蛋白4(TFAP4)在胃癌中对LINC01235表达的调控作用。方法:通过生物信息学分析，获取TFAP4可在胃癌中调控的LINC01235。采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测在胃癌细胞中敲低TFAP4后LINC01235的表达变化。应用染色质免疫共沉淀(ChIP)法验证TFAP4可以结合LINC01235的启动子区域调控其转录。采取双荧光素酶报告实验计算相对荧光活性验证启动子区域的单核苷酸多态性(SNP) rs34667091可以促进转录。对独立样本采用 t检验。 结果:肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中胃癌RNA-seq数据进行分析，可见LINC01235的高表达与不良预后明显相关( P<0.01)。JASPAR网站预测TFAP4可以调控LINC01235的表达。在胃癌细胞系中敲低TFAP4的表达后，LINC01235的表达水平随之降低。ChIP实验结果显示，与阴性对照组IgG比较，TFAP4与LINC01235的启动子区域结合富集百分比较高(0.000 299±2.129e-005比0.001 249±1.985e-005， t＝32.640， P<0.01)，差异有统计学意义。双荧光素酶报告实验结果显示，与正常对照组比较，LINC01235启动子区域的SNPs缺失后，TFAP4与启动子区域结合的相对荧光活性降低(1.000±0.207比0.341±0.031， t＝3.151， P<0.05；1.000±0.156比0.157±0.042， t＝5.221， P<0.05)，差异均有统计学意义。 结论:LINC01235的表达水平在胃癌中和不良预后呈正相关，TFAP4可以调控LINC01235的转录，LINC01235的启动子区域的SNP rs34667091可作为增强子。

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)细胞中信号转导与转录激活因子3(STAT3)与DNA结合蛋白B6(DNAJB6)的关系及铁死亡对NSCLC生物学行为的影响。方法:采用细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞增殖试验和细胞划痕实验对非小细胞肺癌细胞系A549和H1650进行细胞增殖能力检测。通过慢病毒转染A549和H1650细胞系，检测NSCLC细胞的迁移和侵袭能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测NSCLC细胞系A549和H1650各项靶蛋白的表达，组间比较采用 t检验，多组比较采用方差分析。 结果:Western blot结果显示在膜上约80 kDa处，肿瘤组织蛋白条带较正常相邻组织颜色更深( P<0.01)。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析结果显示，肿瘤组织中STAT3/DNAJB6 mRNA与GAPDH mRNA的比值高于正常相邻组织(1.184±0.168比0.378±0.136)差异有统计学意义( P<0.01)。CCK-8实验结果，在24、48、72、96 h时，STAT3组的NSCLC细胞系A549增殖率比相应对照组高[(1.000±0.011)%、(2.338±0.021)%、(3.324±0.010)%、(4.270±0.008)%比(1.00±0.012)%、(1.789±0.010)%、(2.891±0.060)%、(3.761±0.017)%]，差异有统计学意义( P<0.01)；NSCLC细胞系H1650增殖率比相应对照组高[(1.000±0.008)%、(1.706±0.020)%、(2.956±0.096)%、(3.755±0.015)%比(1.000±0.004)%、(1.484±0.004)%、(2.336±0.008)%、(3.074±0.107)%]，差异有统计学意义( P<0.01)。细胞划痕实验结果：过表达STAT3后，NSCLC细胞系A549和H1650增殖能力均显著增强( P<0.01)。病毒转染A549和H1650细胞系结果：过表达STAT3后NSCLC细胞的迁移和侵袭能力增强( P<0.01)。Western blot结果：DNAJB6表达减少，铁死亡相关蛋白xCT和GPX4表达增加(表达水平与铁死亡呈负相关， P<0.01)。 结论:过表达STAT3可抑制癌细胞铁死亡。

目的:观察甲基化转移酶Wilms肿瘤蛋白1相关蛋白（WTAP）在缺氧/复氧（H/R）诱导的心肌细胞损伤中的调节作用及其分子机制。方法:①实验一：将H9C2心肌细胞分为空白对照组和H/R模型组。采用H/R诱导H9C2细胞建立心肌缺血/再灌注（I/R）损伤模型；空白对照组不进行处理。采用N6-甲基腺苷（m6A）RNA甲基化测定试剂盒检测m6A水平；分别采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测甲基化转移酶〔WTAP、甲基转移酶样蛋白（METTL3、METTL14）〕的基因和蛋白表达水平。②实验二：将H9C2心肌细胞分为空白对照组、H/R+sh-NC组、H/R+sh-WTAP组。H/R+sh-WTAP组转染sh-WTAP以敲降WTAP表达，其余各组制模方法同实验一。转染48 h后，采用流式细胞术检测细胞凋亡率；采用Western blotting检测WTAP、活化天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）、活化多聚二磷酸腺苷酸核糖聚合酶（PARP）、转录激活因子4（ATF4）、蛋白激酶RNA样内质网激酶（PERK）、磷酸化PERK（p-PERK）和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的蛋白表达水平；采用免疫荧光染色观察ATF4阳性表达情况。③实验三：将H9C2心肌细胞分为空白对照组、H/R+sh-NC组、H/R+sh-WTAP和H/R+sh-WTAP+ATF4组。H/R+sh-WTAP+ATF4组用过表达质粒ATF4转染H9C2心肌细胞，其余各组制模方法同实验二。采用流式细胞术检测细胞凋亡率；采用Western blotting检测ATF4、CHOP、活化caspase-3和活化PARP的蛋白表达水平。结果:①实验一：H/R模型组m6A甲基化水平较空白对照组显著上调。RT-qPCR检测结果显示，H/R模型组METTL3、METTL14和WTAP基因表达水平均较空白对照组显著上调，以WTAP上调最显著；Western blotting检测结果呈相同趋势。提示甲基化转移酶WTAP的表达水平在H/R诱导的心肌细胞中显著上调。②实验二：H/R+sh-WTAP组细胞凋亡水平较H/R+sh-NC组明显减少〔（14.16±1.58）%比（24.51±2.38）%， P<0.05〕。Western blotting检测结果显示，H/R+sh-WTAP组WTAP、活化caspase-3、活化PARP、p-PERK、ATF4和CHOP的蛋白表达水平均较H/R+sh-NC组显著下调。荧光显微镜下显示，H/R+sh-WTAP组ATF4阳性信号较H/R+sh-NC组显著减弱〔（19.36±1.81）%比（32.83±2.69）%， P<0.01〕。提示敲降WTAP可抑制H/R诱导的心肌细胞凋亡和内质网应激。③实验三：H/R+sh-WTAP+ATF4组细胞凋亡水平较H/R+sh-WTAP组显著增加〔（26.61±2.76）%比（17.14±0.87）%， P<0.05〕。Western blotting检测结果显示，H/R+sh-WTAP+ATF4组ATF4、CHOP、活化caspase-3和活化PARP的蛋白表达水平较H/R+sh-WTAP组显著上调。提示过表达ATF4可逆转sh-WTAP对H/R诱导的心肌细胞中内质网应激和细胞凋亡的抑制作用。 结论:甲基化转移酶WTAP可调节ATF4表达，介导细胞凋亡和内质网应激，促进H/R诱导的心肌细胞损伤。

目的:研究转录激活因子6（ATF6）与需肌醇酶1-X-框结合蛋白1（IRE1-XBP1）在氧糖剥夺/复氧（OGD/R）损伤小鼠海马神经元（HT22）细胞中的交互作用。方法:复制OGD/R损伤HT22细胞模型，观察OGD/R后不同时间点（0、3、6、12、24 h）内质网应激（ERS）、细胞活性和凋亡的变化。将对数生长期的HT22细胞分为空白对照组、对照+ATF6激动剂AA147组、对照+IRE1抑制剂4μ8c组、OGD/R模型组、OGD/R+AA147组、OGD/R+4μ8c组（AA147组和4μ8c组于全程添加10 μmol/L AA147或16 μmol/L 4μ8c）。采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测各组HT22细胞ERS相关蛋白〔葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、磷酸化需肌醇酶1（p-IRE1）、磷酸化真核细胞翻译起始因子2α（p-eIF2α）〕以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）、活化caspase-3的表达；采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测ERS相关基因以及ATF6〔同型半胱氨酸内质网应激泛素样结构域1（Herpud1）、蛋白二硫键异构酶家族成员4（Pdia4）、Lin-12样抑制子/增强子（Sel1L）〕和剪接型X-框结合蛋白1〔XBP1s，包括DnaJ热休克蛋白成员B9（Erdj4）、Sec24相关基因家族成员D（Sec24d）、信号受体序列3（Ssr3）〕介导的转录反应相关基因的mRNA表达；采用细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK-8）检测细胞活性；采用免疫荧光法检测活化caspase-3表达。结果:与空白对照组比较，ERS相关蛋白p-IRE1和p-eIF2α的蛋白表达量分别在OGD/R 12 h、OGD/R 3 h升高（p-IRE1/β-actin：2.09±0.10比1.00±0.00，p-eIF2α/β-actin：1.39±0.11比1.00±0.00，均 P<0.01），ERS相关基因ATF6、XBP1s、非剪接型X-框结合蛋白1（XBP1u）、转录激活因子4（ATF4）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的mRNA表达量在OGD/R后不同时间点也明显升高，表明ERS在OGD/R作用的HT22细胞中被激活。与OGD/R模型组比较，OGD/R+AA147组p-IRE1蛋白表达量无改变，但XBP1s和XBP1u的mRNA表达量明显下降〔XBP1s（2 -ΔΔCt）：0.76（0.71，0.92）比1.13（1.03，1.29），XBP1u（2 -ΔΔCt）：0.29±0.05比0.52±0.04，均 P<0.01〕，而XBP1s介导的转录反应相关基因表达量无明显改变。与OGD/R模型组比较，在使用4μ8c后短链ATF6（sATF6）和GRP78的蛋白表达量无明显改变，ATF6介导的转录反应相关基因的mRNA也无明显改变。提示ATF6的激活能抑制XBP1s和XBP1u的mRNA表达，但ATF6与XBP1s介导的转录反应无交互作用。与空白对照组比较，HT22细胞活性在OGD/R 3 h时显著降低〔（44.64±5.12）%比（99.13±5.76）%， P<0.01〕，凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值和活化caspase-3/caspase-3比值分别在OGD/R 3 h和OGD/R 0 h显著升高（Bax/Bcl-2比值：6.15±1.65比1.00±0.00，活化caspase-3/caspase-3比值：17.48±2.75比1.00±0.00，均 P<0.01），表明凋亡在OGD/R作用的HT22细胞中被激活。与OGD/R模型组比较，OGD/R+AA147组细胞活性显著下降〔（36.52±17.78）%比（69.90±9.43）%， P<0.01〕，Bax/Bcl-2比值和活化caspase-3/caspase-3比值明显升高（Bax/Bcl-2比值：2.06±0.31比1.10±0.25，活化caspase-3/caspase-3比值：3.35±0.59比0.55±0.09，均 P<0.01）。 结论:在OGD/R损伤HT22细胞中，ATF6和XBP1s介导的转录反应无明显交互作用，但AA147激活的ATF6能抑制XBP1s和XBP1u的mRNA表达并促进应激HT22细胞中死亡的发生。

目的:探索异体毛乳头细胞（DPC）对小鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响及其机制。方法:该研究为实验研究。利用显微解剖结合胶原酶消化法自5只6周龄雄性C57BL/6J小鼠触须毛囊中提取DPC并成功鉴定。将18只8周龄雄性C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分为磷酸盐缓冲液（PBS）组及DPC组（每组9只小鼠），在所有小鼠背部创建全层皮肤缺损创面模型。分别于伤后2、4、6 d，通过创面周围皮下注射给予DPC组小鼠含1×10 6个第4代DPC的细胞悬液100 μL、PBS组小鼠等体积的PBS。伤后3、7、10、14 d，观察2组小鼠创面愈合情况及毛发生长情况并测量创面剩余面积；另测量2组小鼠伤后14 d创面毛发覆盖面积。伤后14 d，收集2组小鼠创面组织标本，行苏木精-伊红染色观察新生毛囊情况并计数，行Masson染色观察真皮层胶原沉积情况并测量胶原沉积面积，采用免疫荧光法检测Wnt/β连环蛋白信号通路相关分子β连环蛋白、淋巴增强结合因子1（Lef1）的蛋白表达，分别采用蛋白质印迹法和实时荧光定量反转录PCR法检测β连环蛋白、Lef1的蛋白和mRNA表达。各实验样本数均为3。 结果:与PBS组相比，DPC组小鼠伤后各时间点创面再上皮化速度加快，且在伤后10、14 d可见更多毛发生长。伤后7、10、14 d，DPC组小鼠创面剩余面积分别为（13.92±2.90）、（3.69±1.78）、（1.09±0.14）mm 2，分别明显小于PBS组的（26.19±2.06）、（10.84±3.59）、（6.75±2.11）mm 2（ t值分别为5.85、3.09、4.63， P值均<0.05）。伤后14 d，DPC组小鼠创面毛发覆盖面积为（62±7）mm 2，明显大于PBS组的（35±6）mm 2（ t=2.89， P<0.05）。伤后14 d，与PBS组比较，DPC组小鼠创面组织中新生毛囊数量明显增多（ t=5.43， P<0.05），真皮层胶原沉积面积明显缩小（ t=3.56， P<0.05）。伤后14 d，免疫荧光法和蛋白质印迹法检测均显示，DPC组小鼠创面组织中β连环蛋白（ t值分别为5.49、4.25， P值均<0.05）和Lef1（ t值分别为7.50、11.54， P值均<0.05）的蛋白表达均明显高于PBS组；DPC组小鼠创面组织中β连环蛋白和Lef1的mRNA表达均明显高于PBS组（ t值分别为7.68、9.67， P<0.05）。 结论:DPC通过激活Wnt/β连环蛋白信号通路加快小鼠全层皮肤缺损创面再上皮化，并促进创面愈合过程中的毛囊再生。

目的:探讨辅助性T细胞9(Th9)细胞和白细胞介素9(IL-9)在胃癌患者中的水平，评估Th9/IL-9对胃癌患者抗肿瘤免疫应答的调控作用。方法:纳入2018年10月至2019年8月在新乡医学院第一附属医院行手术治疗的胃癌患者34例，同期健康体检者20例。采集外周血，分离血浆和外周血单个核细胞(PBMCs)，从手术切除的胃癌组织分离肿瘤浸润性淋巴细胞(TILs)和自体胃癌细胞，分选PBMCs和TILs中的CD4 + T细胞、CD8 + T细胞和CD4 +CCR4 -CCR6 -CXCR3 -细胞。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆IL-9水平，流式细胞术检测PBMCs和TILs中CD3 +CD4 +IL-9 +Th9细胞比例，实时荧光定量聚合酶链反应检测IL-9和转录因子富嘌呤核酸结合蛋白1(PU.1) mRNA的相对表达量。以重组人IL-9刺激胃癌患者PBMCs和TILs，采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖，Western blot法检测信号转导和转录激活因子3(STAT3)和STAT6磷酸化，ELISA法检测细胞因子分泌。以重组人IL-9刺激胃癌患者TILs分选的CD8 + T细胞，建立CD8 + T细胞与自体胃癌细胞的直接接触与间接接触共培养系统，通过检测乳酸脱氢酶(LDH)水平计算靶细胞死亡比例，ELISA法检测γ-干扰素(γ-IFN)和肿瘤坏死因子(TNF-α)水平。CD4 +CCR4 -CCR6 -CXCR3 -细胞、CD8 + T细胞与自体胃癌细胞共培养，加入抗IL-9中和抗体，检测靶细胞死亡比例。 结果:对照组PBMCs和胃癌组PBMCs中CD3 +CD4 +IL-9 +Th9细胞比例分别为(1.21±0.25)%和(1.14±0.19)%，差异无统计学意义( P＝0.280)。胃癌组TILs中CD3 +CD4 +IL-9 +Th9细胞比例为(2.30±0.55)%，高于对照组PBMCs和胃癌组PBMCs(均 P<0.001)。对照组和胃癌组血浆IL-9水平分别为(5.04±1.51)ng/ml和(4.93±1.25)ng/ml，差异无统计学意义( P＝0.787)。对照组PBMCs和胃癌组PBMCs中IL-9 mRNA相对表达量分别为1.33±0.39和1.36±0.27，差异无统计学意义( P＝0.691)。胃癌组TILs中IL-9 mRNA相对表达量为2.90±0.75，高于对照组PBMCs( P<0.001)和胃癌组PBMCs( P<0.001)。对照组和胃癌组PBMCs中PU.1 mRNA相对表达量分别为1.21±0.12和1.20±0.11，差异无统计学意义( t＝0.21， P＝0.833)。胃癌组TILs中PU.1 mRNA相对表达量为2.81±0.65，高于对照组PBMCs( P<0.001)和胃癌组PBMCs( P<0.001)。重组人IL-9对胃癌患者PBMCs和TILs的增殖无明显影响(均 P>0.05)，但可提高STAT6的磷酸化水平，促进TILs分泌γ-IFN、IL-17和IL-22(均 P<0.05)。在直接接触共培养系统中，IL-9刺激使肿瘤浸润性CD8 + T细胞诱导的自体胃癌细胞死亡比例增加[(20.62±2.27)%比(16.08±2.61)%， P<0.01)]。在间接接触共培养系统中，IL-9刺激并未增加CD8 + T细胞诱导自体胃癌细胞死亡比例[(5.21±0.70)%比(5.31±1.22)%， P＝0.998]。但在两种共培养系统中，IL-9刺激后γ-IFN分泌水平均增加[直接接触共培养系统：(100.40±12.05)pg/ml比(76.45±8.56)pg/ml；间接接触共培养系统：(78.00±9.98)pg/ml比(42.09±10.71)pg/ml； P<0.01]，TNF-α分泌水平均无明显变化(均 P>0.05)。在直接接触共培养系统中，CD4 + CCR4 - CCR6 - CXCR3 -细胞+CD8 + T细胞+胃癌细胞组的靶细胞死亡比例为(22.01±3.05)%，γ-IFN水平为(104.5±12.84)pg/ml，均高于CD8 + T细胞+胃癌细胞组[分别为(16.08±2.61)%和(76.45±8.56)pg/ml，均 P<0.01]，但CD4 + CCR4 - CCR6 - CXCR3 -细胞+CD8 + T细胞+胃癌细胞+抗IL-9中和抗体组的靶细胞死亡比例为(14.47±3.14)%，γ-IFN水平为(70.45±19.43)pg/ml，均低于CD4 +CCR4 -CCR6 -CXCR3 -细胞+CD8 + T细胞+胃癌细胞组(均 P<0.01)。 结论:肿瘤浸润性Th9细胞及其分泌的IL-9可促进胃癌患者CD8 + T细胞活性，增强抗肿瘤免疫应答。