蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans或黑眶蟾蜍B.melanostictus耳后腺及皮肤腺的干燥分泌物.目前商品蟾酥质量问题突出,混伪、掺假现象普遍存在.亟需构建科学完善的质量控制方法,以提升蟾酥药材、饮片及其中成药制剂的质量控制水平,保障临床用药安全有效.该研究采用高效液相色谱法建立蟾酥药材的特征图谱,采用一测多评法(QAMS)测定5种主要蟾毒配基的含量.通过不同批次市售蟾酥样品的分析,建立了以五羟色胺、日蟾毒它灵、沙蟾毒精、嚏根草配基、远华蟾毒精、蟾毒它灵、华蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基和脂蟾毒配基为特征峰的对照特征图谱;建立了以华蟾酥毒基为内参物,同步测定蟾酥药材中5种蟾毒配基含量的一测多评法,并对相对校正因子(RCF)的耐用性和系统适用性进行了系统研究.华蟾酥毒基对日蟾毒它灵、蟾毒它灵、蟾毒灵和脂蟾毒配基的RCF分别为1.05,0.895,1.09,0.913.建立的特征图谱和QAMS法,可以有效控制蟾酥药材的质量,为2020年版《中国药典》蟾酥药材质量标准的完善与提高提供参考.

目的 建立六神丸的HPLC-UV/ELSD指纹图谱分析方法,对六神丸中主要特征峰进行归属并进行指认.方法 采用HPLC法,色谱柱为Kromasil C18(250mm×4.6 mm,5μm);乙腈-0.05％三氟乙酸水溶液作为流动相,进行梯度洗脱;紫外检测器(UV)参数:检测波长为296 nm;蒸发光散射检测器(ELSD)参数:漂移管温度为70℃,喷雾器为冷却模式,氮气压力为25psi;进样量20μL;体积流量为1 mL/min.通过《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》,建立14批六神丸指纹图谱的共有模式,计算其相似度,并对共有峰进行药材的归属以及成分进行指认.结果 分别建立了六神丸HPLC-UV及HPLC-ELSD的指纹图谱,及其共有模式,指认出HPLC-UV指纹图谱共有峰14个,14批六神丸制剂相似度为0.940～0.988,指认出HPLC-ELSD指纹图谱共有峰13个,14批六神丸制荆相似度为0.968～0.998.确认了和蟾蜍他灵、沙蟾毒精、远华蟾毒精、蟾毒它灵、华蟾毒它灵、蟾毒灵、胆酸、鹅去氧胆酸、去氧胆酸.结论 首次建立了六神丸HPLC-UV/ELSD指纹图谱分析方法,该法操作准确、简单,重复性好、精密度高,可用于分析六神丸中化学成分信息,为六神九质量控制提供了可靠的科学依据.

目的:建立同时测定六神丸中6个蟾蜍二烯内酯类成分含量的一测多评法(QAMS),并验证其准确性和可行性.方法:采用高效液相色谱法,使用Waters Xbridge C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.2％磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1 mL· min-1,柱温30℃,检测波长296 nm.以华蟾酥毒基为内参物,建立其与远华蟾毒精、蟾毒它灵、华蟾毒它灵、蟾毒灵、脂蟾毒配基5个成分的相对校正因子(RCF),并进行含量计算,实现一测多评;同时采用外标法(ESM)测定六神丸中蟾酥的6个成分的含量,比较一测多评法计算值与外标法实测值的差异.结果:在一定线性范围内,华蟾酥毒基与远华蟾毒精、蟾毒它灵、华蟾毒它灵、蟾毒灵、脂蟾毒配基的RCF值分别为0.897、0.965、1.023、0.844、0.964,且在不同实验条件下重现性良好(RSD＜5.0％),一测多评法测得15批样品中华蟾酥毒基、远华蟾毒精、蟾毒它灵、华蟾毒它灵、蟾毒灵、脂蟾毒配基的含量范围分别为2.26～9.27 mg·g-1、0.95～2.06 mg·g-1、1.12～2.50 mg·g-1、1.83～3.48 mg·g-1、1.10～2.81mg· g-1、0.90～3.65 mg·g-1,与外标法实测值无显著性差异.结论:所建立的同时测定六神丸中的6个蟾蜍二烯内酯类化合物的一测多评法准确可靠,可用于六神丸中多个成分的定量分析质量评价.

目的:建立六神丸高效液相色谱法HPLC指纹图谱,测定和蟾蜍它灵、远华蟾毒精、华蟾毒它灵、蟾毒灵、脂蟾毒配基、华蟾酥毒基的含量,为控制六神丸质量提供依据.方法:通过HPLC法建立六神丸指纹图谱,采用Waters Xbridge C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.5％磷酸水溶液,梯度洗脱;流速为1 mL· min-1;检测波长为204 nm;柱温35℃.采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对15批六神丸样品进行分析,同时测定6种指标成分含量.结果:建立了六神丸的指纹图谱,在204 nm检测波长下标定了22个共有峰,指纹图谱相似度均＞0.90.所建立的6个指标成分同步测定的方法,各成分在各自质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系(r2≥0.999 4),且平均回收率在95.23％ ～ 102.25％,RSD均＜3.0％.结论:该研究所建立的六神丸指纹图谱和含量测定的方法简便、精密度、稳定性、重复性良好,能更全面反映六神丸的质量,可用于六神丸的质量控制.

目的 建立蟾酥原浆HPLC指纹图谱及原浆中8种成分含量测定方法,对不同产地蟾酥原浆进行成分含量差异比较,同时进行质量评价.方法 以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,检测波长296 nm,体积流量1.2 mL/min,柱温30℃,进样量10μL;建立蟾酥原浆指纹图谱,测定8个成分含量,对结果进行聚类分析和主成分分析.结果 18批样品指纹图谱中有12个共有峰,各样品相似度有所差异,8个成分在各自范围内线性关系良好(r2≥0.9995),精密度、重复性RSD＜0.5％,在30h内稳定性较好(RSD＜0.7％),日蟾毒它灵、沙蟾毒精、远华蟾蜍精、蟾毒它灵、华蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基和脂蟾毒配基回收率平均值分别为103.7％、103.0％、102.9％、103.0％、103.9％、100.3％、103.4％、103.2％,且RSD均小于1.2％,8个成分含量测定结果及聚类分析和主成分分析结果可知不同产地原浆质量有所差异.结论 该方法简便可靠,为蟾酥原浆质量把控提供一定依据及参考.

目的 建立HPLC法同时测定华佗救心丸(蟾酥、人工牛黄、冰片等)中华蟾酥毒基、酯蟾毒配基、日蟾毒它灵、蟾毒灵、沙蟾毒精、蟾毒它灵、远华蟾毒精、华蟾毒它灵的含有量.方法 该药物甲醇提取液的分析采用Thermo Scientific C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量0.6 mL/min;柱温30℃;检测波长296 nm.结果 8种蟾蜍二烯内酯在各自范围线性关系良好(r≥0.999 5),平均加样回收率95.07％ ～ 102.59％,RSD 1.42％～2.81％.结论 该方法快速、简便、稳定,可用于华佗救心丸的质量控制.

目的 调研不同产地中华大蟾蜍浆液有效成分含量差异,分析蟾酥药材的区域特征性.方法 采用HPLC测定不同产地的蟾蜍浆液中7种主要活性成分含量,并采用层次聚类分析和雷达图探究样本的产地规律.结果 不同产地蟾酥浆液中蟾毒配基类成分含量差异显著,华蟾酥毒基和酯蟾毒配基为华东地区蟾酥原料的主导成分,2种成分含量之和在6.95％～11.15％,而华中和西南地区2种成分含量之和在0.17％～4.17％;远华蟾蜍精和华蟾毒它灵为华中和西南地区的主导成分,2种成分含量之和在5.66％～11.37％,而华东地区2种成分含量之和在1.22％～2.26％.结论 蟾酥原料质量主要受产地因素影响,该调研结果为完善蟾酥药材的质量控制提供参考.

众所周知,中药成分复杂,多指标质量评价是今后趋势之一.但是,指标成分的选择及其代表性研究,往往是个棘手的难题.该文探索蟾蜍毒液中多种蟾毒配基含量的内在联系,寻找更加合理的蟾酥质控指标.该研究随机选取全国17个产地的样本,建立7种蟾毒配基含量数据库;然后,采用Spearman分析和PCA方法研究成分间的相关性,再用逐步回归分析建立总含量预测模型.研究发现,华蟾酥毒基、蟾毒灵和远华蟾蜍精之和与所测蟾毒配基总含量存在着相关性.据此推测,以这3种成分作为蟾酥质控指标,与现有的华蟾酥毒基和酯蟾毒配基质控指标相比,更能反映蟾毒配基的整体含量.这一发现有助于蟾酥质量标准的修改.

目的 建立一测多评法同时测定蟾皮中华蟾酥毒基、日蟾毒它灵、蟾毒它灵、蟾毒灵、酯蟾毒配基、远华蟾蜍精、伪异沙蟾毒精的含量.方法 该药材甲醇提取液的分析采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.1％甲酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长296 nm.以华蟾酥毒基为内标,计算其他6种蟾毒内酯的相对校正因子,测定其含量.结果 7种蟾毒内酯在各自范围内线性关系良好(r≥0.9990),平均加样回收率97.61％～100.83％,RSD 1.15％～2.69％,一测多评法与外标法所得结果接近.结论 该方法准确可靠,可用于蟾皮的质量控制.

目的 采用网络药理学方法和分子对接技术,探讨蟾酥中主要蟾毒配基类化合物抗恶性肿瘤作用的潜在分子机制.方法 通过文献检索筛选出蟾酥主要抗恶性肿瘤活性成分,在SwissTargetPrediction数据库中获得对应成分的预测靶点.通过GeneCards? 数据库获得恶性肿瘤的全部靶点.将药物与疾病的主要靶点通过韦恩图取交集以获得共同靶点(即蟾酥抗恶性肿瘤的关键靶点),运用STRING数据库构建关键靶点的蛋白-蛋白互相作用(PPI)网络,根据度值获得核心靶点.利用DAVID数据库对关键靶点进行生物功能和通路富集分析.最后运用AutoDock 3.7软件对核心靶点与存在靶点的主要活性成分进行分子对接及可视化.结果 筛选出活性成分8个(蟾毒灵、蟾毒它灵、华蟾毒它灵、华蟾酥毒基、远华蟾蜍精、日蟾蜍他灵、酯蟾毒配基、沙蟾毒精)及恶性肿瘤相关靶点500个,取交集后获得关键靶点41个.构建PPI网络并获得10个核心靶点(cyclin D1、AKT1、PIK3CA、MAPK1、EGFR、JAK2、MDM2、AR、MAPK8、MTOR).富集分析结果表明:关键靶点可能主要在核质、细胞质基质、细胞核中,通过参与蛋白质自我磷酸化、酪氨酸肽基磷酸化等进程,作用于癌症信号通路、癌症中心碳代谢、PI3 K/AKT信号通路、Ras信号通路等20条关键信号通路,从而发挥抗恶性肿瘤的作用.分子对接结果显示,配体中酯蟾毒配基、沙蟾毒精、远华蟾毒精与受体对接效果最好;核心靶点中MAPK1、EGFR、cyclin D1与配体对接效果较好.结论 蟾酥中主要蟾毒配基类化合物有酯蟾毒配基、沙蟾毒精、远华蟾毒精等,它们作用于MAPK1、EGFR、cyclin D1等关键蛋白,主要在核质、细胞质基质、细胞核中参与蛋白质自我磷酸化、酪氨酸肽基磷酸化等进程作用于癌症通路信号、癌症中心碳代谢、PI3 K/AKT信号通路、Ras信号通路等关键信号通路,从而共同发挥抗恶性肿瘤的作用.