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中华大蟾蜍细胞色素P450还原酶基因克隆、表达与功能鉴定
编辑人员丨2024/4/13
目的:从中华大蟾蜍(Bufo gargarizans Cantor)肝脏组织中克隆细胞色素P450还原酶基因(BgCPR,GenBank登录号:OQ572435)进行生物信息学分析,并进行功能验证.方法:基于中华大蟾蜍转录组数据库挖掘BgCPR基因序列,使用SnapGene软件设计BgCPR基因两端特异性引物,以蟾蜍肝脏组织总RNA逆转录成的cDNA为模板进行PCR扩增.利用生物信息学分析BgCPR蛋白理化性质、空间结构并构建系统进化树;基于CRISPR/Cas9基因编辑系统将蟾蜍BgCPR基因表达框经同源重组整合进入酿酒酵母基因组,利用聚乙二醇法制备转化子微粒体,验证其对细胞色素C的还原功能.结果:克隆得到全长2 043 bp的BgCPR基因cDNA,编码680个氨基酸,相对分子质量77 852 Da.结构预测显示,BgCPR蛋白为非分泌蛋白;有一段跨膜螺旋区,位于蛋白的第24~46位氨基酸之间;亚细胞定位预测显示该蛋白定位于内质网上.采用体外酶活实验证明其具有传递电子功能.结论:本研究克隆得到中华大蟾蜍BgCPR基因,并构建了表达具有生物活性的BgCPR的酿酒酵母工程细胞,为进一步研究蟾蜍CYP450基因功能乃至解析蟾蜍二烯内酯类化合物的生物合成途径奠定了基础.
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编辑人员丨2024/4/13
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蟾毒它灵诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展
编辑人员丨2023/8/6
蟾毒它灵是从蟾酥中提取的化合物,属于蟾蜍二烯酸内酯,它不仅有抗心律失常、强心、抗菌、局部麻醉、解热、利尿等作用,并且对许多实体肿瘤和非实体肿瘤也有很好的抑制作用.蟾毒它灵诱导肿瘤细胞凋亡的机制主要与线粒体途径、死亡受体途径及内质网应激有关,本文就蟾毒它灵诱导肿瘤细胞凋亡分子机制的研究现状进行综述.
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编辑人员丨2023/8/6
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一测多评法测定六神丸中的6个蟾蜍二烯内酯类化合物
编辑人员丨2023/8/6
目的:建立同时测定六神丸中6个蟾蜍二烯内酯类成分含量的一测多评法(QAMS),并验证其准确性和可行性.方法:采用高效液相色谱法,使用Waters Xbridge C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1 mL· min-1,柱温30℃,检测波长296 nm.以华蟾酥毒基为内参物,建立其与远华蟾毒精、蟾毒它灵、华蟾毒它灵、蟾毒灵、脂蟾毒配基5个成分的相对校正因子(RCF),并进行含量计算,实现一测多评;同时采用外标法(ESM)测定六神丸中蟾酥的6个成分的含量,比较一测多评法计算值与外标法实测值的差异.结果:在一定线性范围内,华蟾酥毒基与远华蟾毒精、蟾毒它灵、华蟾毒它灵、蟾毒灵、脂蟾毒配基的RCF值分别为0.897、0.965、1.023、0.844、0.964,且在不同实验条件下重现性良好(RSD<5.0%),一测多评法测得15批样品中华蟾酥毒基、远华蟾毒精、蟾毒它灵、华蟾毒它灵、蟾毒灵、脂蟾毒配基的含量范围分别为2.26~9.27 mg·g-1、0.95~2.06 mg·g-1、1.12~2.50 mg·g-1、1.83~3.48 mg·g-1、1.10~2.81mg· g-1、0.90~3.65 mg·g-1,与外标法实测值无显著性差异.结论:所建立的同时测定六神丸中的6个蟾蜍二烯内酯类化合物的一测多评法准确可靠,可用于六神丸中多个成分的定量分析质量评价.
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编辑人员丨2023/8/6
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HPLC法同时测定华佗救心丸中8种蟾蜍二烯内酯
编辑人员丨2023/8/5
目的 建立HPLC法同时测定华佗救心丸(蟾酥、人工牛黄、冰片等)中华蟾酥毒基、酯蟾毒配基、日蟾毒它灵、蟾毒灵、沙蟾毒精、蟾毒它灵、远华蟾毒精、华蟾毒它灵的含有量.方法 该药物甲醇提取液的分析采用Thermo Scientific C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量0.6 mL/min;柱温30℃;检测波长296 nm.结果 8种蟾蜍二烯内酯在各自范围线性关系良好(r≥0.999 5),平均加样回收率95.07% ~ 102.59%,RSD 1.42%~2.81%.结论 该方法快速、简便、稳定,可用于华佗救心丸的质量控制.
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编辑人员丨2023/8/5
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HPLC-Q-Orbitrap-MS法分析大鼠血浆中六神丸醇提物的入血成分及其代谢产物
编辑人员丨2023/8/5
目的:应用高效液相色谱一静电场轨道阱高分辨质谱(HPLC-Q-Orbitrap-MS)技术对六神丸醇提物在大鼠血浆中的入血极性成分及其代谢产物进行分析.方法:采用乙腈沉淀蛋白法进行样品前处理,在C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)上,以乙腈-0.2%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,在电喷雾正负离子同时采集的模式下分别获得六神丸乙醇提取物、空白血浆和含药血浆样品的液相色谱-质谱信息.结果:通过质谱数据、对照品比对,初步鉴定了9个原型入血成分和19个代谢产物,其中蟾蜍二烯内酯类成分以去乙酰化、羟基化和异构化代谢产物为主,胆酸类成分以与甘氨酸结合产物为主,同时存在脱氧和羟基化产物.另发现血浆中的6种氨基酸在给药后含量显著增加.结论:本研究建立的HPLC-Q-Orbitrap-MS分析方法能有效地鉴别六神丸醇提物在体内的极性代谢成分群,为六神丸醇提取物的抗肝癌药效物质及其作用机制研究提供科学依据.
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编辑人员丨2023/8/5
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UPLC-ESI-QTOF/MSE结合UNIFI快速分析华蟾素注射液化学成分
编辑人员丨2023/8/5
采用超高效液相色谱-电喷雾离子源-四级杆飞行时间质谱(UPLC-ESI-QTOF/MS)结合UNIFI天然产物信息平台快速分析华蟾素注射液化学成分.利用QTOF/MS非信息依赖扫描的MSE模式采集复杂组分质谱信息,将采集的质谱数据文件和自建化学成分库导入UNIFI,进行智能匹配,随后使用MassLynx工作站逐个核对.本实验共辨识76个化学成分,其中蟾蜍二烯羟酸内酯类36个、生物碱类12个(包括1种新成分)、小分子肽类13个、有机酸类7个、酰胺类4个、甾醇类2个、其他类2个.本方法能快速分离、分析华蟾素注射液复杂组分,为该制剂的毒-效成分及质量控制研究奠定了基础.
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编辑人员丨2023/8/5
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华蟾素注射液心脏毒性评价
编辑人员丨2023/8/5
目的:华蟾素注射液作为一种传统中药注射剂,已在临床使用40多年,已有临床报道显示其可能诱导心血管不良反应.故而本实验的目的为评价华蟾素注射液心脏毒性.方法:本实验为通过SpragueDawley (SD)大鼠连续2周静脉注射给予华蟾素注射液,探索华蟾素注射液对心脏的毒性作用.本实验初次设3个组,包括溶剂对照组(0 g·kg-1,0.9%氯化钠注射液)和华蟾素注射液组(剂量分别为1和5 g·kg-1),给药容量为10 mL·kg-1.实验每组10只动物,雌雄各半.补充设计SD大鼠连续1周静脉注射给予华蟾素注射液.设2个组,包括溶剂对照组(0 g·kg-1,0.9%氯化钠注射液)和华蟾素注射液组(剂量为10g·kg-1),给药容量为20 mL·kg-1.实验每组10只动物,雌雄各半.实验期间评估以下指标:死亡或濒死、临床征状、心肌损伤指标[心肌钙蛋白I (cardiac troponin Ⅰ,cTn-Ⅰ)、肌酸磷化脢-同功脢MB(creatine kinase isoenzymes MB,CK-MB)、天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase,AST)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)]、大体解剖、脏器重量以及组织病理学检查.结果:实验期间,各剂量组动物均未见死亡或濒死.1,5和10 g·kg-1组雌雄动物临床征状、脏器重量、心肌损伤指标(CK-MB,AST,LDH,CRP)大体解剖以及组织病理学检查均未见与受试物相关的改变异常.与溶剂对照组相比,仅5和10 g·kg-1组cTn-Ⅰ出现与受试物相关的异常改变,cTn-Ⅰ在给药后1.5和/或3h升高,且至24 h已经基本恢复.结论:本实验结果证实了华蟾素注射液具有心脏毒性,其次为临床上监测华蟾素注射液的心脏毒性提供了可参考的监测时间点和监测生物标志物.
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编辑人员丨2023/8/5
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中华大蟾蜍毒液中蟾毒配基类成分的相关性研究
编辑人员丨2023/8/5
众所周知,中药成分复杂,多指标质量评价是今后趋势之一.但是,指标成分的选择及其代表性研究,往往是个棘手的难题.该文探索蟾蜍毒液中多种蟾毒配基含量的内在联系,寻找更加合理的蟾酥质控指标.该研究随机选取全国17个产地的样本,建立7种蟾毒配基含量数据库;然后,采用Spearman分析和PCA方法研究成分间的相关性,再用逐步回归分析建立总含量预测模型.研究发现,华蟾酥毒基、蟾毒灵和远华蟾蜍精之和与所测蟾毒配基总含量存在着相关性.据此推测,以这3种成分作为蟾酥质控指标,与现有的华蟾酥毒基和酯蟾毒配基质控指标相比,更能反映蟾毒配基的整体含量.这一发现有助于蟾酥质量标准的修改.
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编辑人员丨2023/8/5
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一测多评法测定心可宁胶囊中6种蟾蜍二烯内酯类化合物
编辑人员丨2023/8/5
目的 建立一测多评法同时测定心可宁胶囊中6种蟾蜍二烯内酯类化合物的含量,并验证此方法在心可宁胶囊中应用的可行性和准确性.方法 以华蟾酥毒基为内参物,建立日蟾毒它灵、沙蟾毒精、蟾毒它灵、蟾毒灵和脂蟾毒配基与华蟾酥毒基的相对校正因子.分别采用外标法和一测多评法测定心可宁胶囊中6种蟾蜍二烯内酯类化合物的含量,比较2种方法的结果差异,验证一测多评法的可行性和准确性.结果 日蟾毒它灵、沙蟾毒精、蟾毒它灵、蟾毒灵和脂蟾毒配基与华蟾酥毒基的相对校正因子分别为1.06,0.862,0.897,1.09,0.915;2种方法结果无显著差异.结论 以华蟾酥毒基为内参物建立的相对校正因子重现性好,一测多评法可用于心可宁胶囊中多个蟾蜍二烯内酯类成分的质量评价.
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编辑人员丨2023/8/5
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蟾皮化学成分和药理活性的研究进展
编辑人员丨2023/8/5
蟾皮为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufobufogargarizans或黑眶蟾蜍B.melanosticus的干燥全皮,己纳入壮药名录.作为一种民族药,常用于满族、回族和朝鲜族的民间药方,具有清热解毒和利水消肿之功效.目前己从蟾皮中发现100多个化合物,包括蟾蜍二烯羟酸内酯类、吲哚生物碱类、蟾蜍环酰胺类以及甾体类等成分.随着国内外药理学研究的不断深入,蟾皮单体成分呈现诸多药理作用,如抗肿瘤、抗炎、免疫调节、抗乙肝病毒、强心等,并且对特异的药物代谢酶具有较高的敏感性.通过查阅近20年来的国内外文献,对蟾皮的化学成分、药理活性、单体成分与药物代谢酶的相互作用等方面进行综述,以期为蟾皮更好的开发和应用提供参考.
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编辑人员丨2023/8/5
