目的:探讨上皮细胞黏附分子（EpCAM）靶向的核酸适体药物偶连物（SYL3C-MMAE）对人胃上皮细胞GES-1（以下简称GES-1细胞）以及人胃癌细胞AGS、MKN45（以下简称AGS、MKN45细胞）的亲和力以及毒性。方法:采用实验研究方法。采用免疫组织化学染色检测胃癌组织中EpCAM的表达水平；采用实时荧光定量聚合酶链式反应法（PCR）检测胃癌组织中EpCAM的mRNA表达水平；应用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测GES-1、AGS、MKN45细胞中EpCAM蛋白的表达水平；通过流式细胞仪检测SYL3C对3种细胞的亲和力；通过巯基的SYL3C序列马来酰亚胺反应合成SYL3C-MMAE；采用CCK8法检测药物对细胞的毒性；碘化丙啶法检测药物处理后细胞周期情况。观察指标：（1）EpCAM在胃癌中的表达情况。（2）靶向EpCAM的抗体与SYL3C对相关细胞系的亲和力。（3）药物合成情况。（4）药物毒性检测以及细胞周期抑制情况。正态分布的计量资料以 x±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用最小显著差异法检验；方差不齐者采用Welch' t检验。偏态分布的计量资料以 M（IQR）表示，组间比较采用配对秩和检验。计数资料以绝对数表示，组间比较采用配对 χ2检验。 结果:（1）EpCAM在胃癌中的表达情况。组织芯片免疫组织化学染色检测结果显示：35对胃癌及其癌旁组织（正常组织）中，胃癌组织EpCAM阳性率为82.9%（29/35），正常组织EpCAM阳性率为22.9%（8/35），两者比较，差异有统计学意义（ P<0.05）。实时荧光定量PCR检测结果显示：12对胃癌组织及其癌旁组织中EpCAM的mRNA相对表达水平分别为1.23（4.13）和4.04（1.72），两组比较，差异有统计学意义（ Z=-2.67， P<0.05）。Western blot检测结果显示：以AGS细胞中EpCAM蛋白表达量为标准，GES-1、AGS、MKN45细胞中，EpCAM蛋白的相对表达量分别为0、1.00、0.27。（2）靶向EpCAM的抗体与SYL3C对相关细胞系的亲和力。流式细胞仪检测结果显示：EpCAM抗体以及SYL3C均对AGS以及MKN45细胞有较好的亲和力，而对于GES-1细胞则没有亲和力。（3）药物合成情况。SYL3C与单甲基奥瑞他汀E（VcMMAE）连接合成质谱检测结果显示：合成完成后的药物原液于16 355分子量位置出现强峰，符合SYL3C-MMAE复合物的预期分子量，提示SYL3C-MMAE合成成功。（4）药物毒性检测以及细胞周期抑制情况。CCK8法检测细胞活力结果显示：VcMMAE对GES-1、AGS、MKN45细胞半抑制浓度（IC 50）分别为123.00、30.48、51.83 nmol/L。SYL3C-MMAE对于上述3种细胞的IC 50分别为241.80、20.66、27.64 nmol/L。PI法检测细胞周期结果显示：VcMMAE与SYL3C-MMAE均能引起GES-1、AGS、MKN45细胞的细胞周期发生G2/M期阻滞。 结论:SYL3C-MMAE对于胃癌细胞有较好的亲和力，与VcMMAE比较，其在高效抑制胃癌细胞的同时对正常细胞的影响显著减轻。

核酸适配体(aptamer)是1种可以和不同靶标(包括小分子、离子、病毒、细胞等)高特异性、高亲和力结合的单链DNA或RNA。该文主要介绍核酸适配体在核医学领域的研究进展，包括在SPECT和PET显像领域的研究。随着核医学相关设备和核素标记技术的发展，核酸适配体将在核医学领域中具有更广阔的应用前景。

目的:筛选血管炎性标志物脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）的DNA适体，并建立以非标记核酸适体-纳米金为探针的可视化检测方法。方法:方法学建立。通过磁珠固定SELEX技术经孵育结合、ssDNA分离、PCR扩增、单链回收的8轮循环筛选Lp-PLA2适体，利用表面等离子体共振技术和流式细胞术验证适体的亲和力和特异性，并通过计算机软件模拟适体二级结构及其与靶蛋白的三维分子对接。随后制备适体-纳米金复合物，利用靶标竞争结合导致纳米金溶液在盐诱导下凝聚引起颜色变化，分光光度计检测溶液的吸光度检测靶标浓度，建立样品溶液中Lp-PLA2浓度与吸光度的线性关系。结果:筛选获得3条高亲和力、强特异性的Lp-PLA2核酸适体B76-2、B76-4及B76-5，解离常数分别为1.07、1.26及1.75 nmol/L；并成功基于B76-2适体构建纳米金比色传感方法，其线性范围和检测限分别是20~500 ng/ml和78 ng/ml，反应时间30 min，可特异性区分靶标与其他血栓标志物如凝血酶和髓过氧化物酶。结论:利用核酸适体-纳米金显色实现了简单、快速、特异的Lp-PLA2可视化检测。

目的:探究不同体位下物理振动排石机(EPVL)对结石性肾绞痛患者的治疗效果。方法:选取2020年5月至2021年5月在本院接受治疗的150例结石性肾绞痛患者，随机分为甲、乙、丙组并分别实施仰卧位、侧卧位、杂交位进行EPVL治疗，每组各50例。比较三组患者的结石排出情况、并发症发生率以及疼痛缓解情况。结果:与乙、丙组比较，甲组患者治疗后7、14 d的结石排除率明显更高( P<0.05)。与甲、乙组比较，丙组的复发率明显更低( P<0.05)。三组术后并发症发生率比较，差异无统计学意义( P>0.05)。与甲、丙组比较，乙组的疼痛缓解程度更佳，且疼痛缓解时间更短( P<0.05)。 结论:EPVL治疗结石性肾绞痛患者的优势显著，能够缓解患者的不适症状，同时不同的体位对患者的治疗效果也有一定影响，治疗中可就患者结石情况以及治疗需求选择合适体位。

目的:探讨系列性体位干预策略对纠正异常胎方位的临床效果，为临床开展体位管理、促进自然分娩提供依据。方法:采用随机对照试验方法，便利抽样选择2022年3—10月在浙江大学医学院附属妇产科医院经B超明确为单胎头位异常胎方位的足月妊娠初产妇196例为研究对象，采用随机数字表法分为对照组106例和研究组90例。对照组进行常规护理，孕妇自愿选择舒适体位待产分娩；研究组在常规护理的基础上采用超声引导下系列性体位干预策略于第一、二产程指导孕妇进行体位管理。比较2组孕妇胎头下降角度、胎头旋转角度、宫口开全和胎儿娩出时胎方位情况及分娩结局。结果:最终纳入分析190例，对照组105例，研究组85例。经阴道分娩研究组76例，对照组95例；研究组宫口开全时枕前位占比73.68%（56/76）、胎头旋转角度64.55（37.90，85.55）°，高于对照组的45.26%（43/95）、33.00（14.00，60.00）°，研究组宫口开全时大脑中线角为57.10（38.50，75.80）°，小于对照组的80.00（52.50，90.30）°，2组比较差异均有统计学意义（ χ2 = 14.14， Z = 4.17、- 3.74，均 P<0.01）。研究组第一产程、总产程时长分别为522.50（413.00，695.00）、611.00（488.00，812.00）min，低于对照组的620.00（450.00，795.00）、700.00（539.00，904.00）min，差异均有统计学意义（ Z = - 2.34、- 2.03，均 P<0.05）。 结论:产程中运用超声引导下系列性体位干预策略可有效、安全改善异常胎方位、缩短第一产程时长，但未发现对改善分娩结局有明显效果。

成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关基因(Cas)系统是古菌和细菌适应性免疫系统,最初被发现用来进行基因编辑,近年其特异识别和切割特性以及可编程性使其在核酸和非核酸靶标检测中崭露头角.目前基于CRISPR/Cas系统的核酸检测系统主要与核酸扩增技术如PCR、链置换扩增(SDA)、滚环扩增(RCA)和EXPAR等恒温扩增技术结合,以提高灵敏度;多项研究也在尝试开发基于CRISPR/Cas的无预扩增核酸检测系统;另外也有研究尝试通过生物祖体(包括适体、DNAzymes和抗原-抗体反应)特异性识别靶物质实现非核酸信号转换为核酸信号,实现基于CRISPR/Cas的蛋白质、小分子、细胞等非核酸物质的检测.但仍存在一些挑战,其中目标中痕量原始浓度的信号转换和放大是分析系统的关键挑战;其他挑战包括CRISPR/Cas存在一定背景活性,CRISPR RNA和单链DNA/单链RNA信号报告序列有降解风险等.随着技术的逐渐成熟,CRISPR/Cas系统将在生物靶标检测中发挥更大作用.本文就CRISPR/Cas系统在核酸检测这一领域的最新发展方向作一述评.

目的 制备核酸适体(58 个碱基)与一甲基澳瑞他汀 E(MMAE)或依喜替康 DX8951 的偶联物,评价其体外抗胃癌细胞活性.方法 以不同取代羧酸为起始原料经酰胺缩合、取代等反应制得连接子 4a～4d,通过连接子 4a～4d,将 MMAE 或DX8951 与核酸适体偶联制得核酸适体偶联药物 1a～1f、7a～7f,制得化合物经质谱、核磁等确证结构;以人胃癌细胞 SUN-5 为阳性细胞,利用 CCK8 试剂盒测定细胞增殖及存活率,以分析核酸适体偶联药物的细胞增殖抑制活性.结果 合成了连接子 4 个,核酸适体偶联药物 12 个,细胞增殖抑制活性结果表明 1a～1f、7a～7f 均具有细胞增殖抑制活性,其中 1a～1d、7a、7c～7f 的 IC50 值均在100 nmol/L 以下,具有较强的细胞增殖抑制活性.结论 核酸适体偶联药物具有显著的抑制胃癌细胞增殖能力,与全身毒性的、非靶向性的细胞毒素 MMAE 等相比,更具安全性.

目的 构建人程序性死亡受体配体 1(programmed cell death ligand 1,PD-L1)免疫球蛋白可变区(immunoglo-bulin variable region,IgV)结构域基因酵母双杂交重组诱饵质粒,检测其在酵母中的表达情况,检测PD-L1 IgV蛋白细胞毒性和自我激活,以及PD-L1 IgV与人硫氧还蛋白(human thioredoxin,hTrx)之间的相互作用情况.方法 利用生物信息学方法对人PD-L1进行分析,并根据NCBI GenBank数据库中登录的PD-L1基因编码区序列设计扩增PD-L1 IgV结构域的引物,以pENTER-PD-L1质粒为模板进行PCR扩增,克隆至酵母双杂交诱饵载体pGBKT7.将鉴定正确的重组诱饵质粒及pGBKT7空载体分别转化至Y2HGold酵母细胞,PCR及Western blot法检测PD-L1 IgK基因及蛋白的表达;同时检测PD-L1 IgV蛋白毒性及自我激活效应,并采用滴板法检测诱饵蛋白PD-L1 IgV与hTrx相互作用情况.结果 PD-L1的生物信息学分析结果与相关报道一致;成功构建了重组诱饵质粒pGBKT7-PD-L1 IgV,并获得Y2HGold阳性克隆子,PD-L1 IgV能在其中稳定表达.空载体pGBKT7、重组诱饵质粒pGBKT7-PD-L1 IgK在SD/-Trp、SD/-Trp/X-α-Gal平板上生长良好,菌落大小、数量一致,呈白色,在SD/-Trp/X-α-Gal/AbA平板上两者均不生长,表明PD-L1 IgV蛋白对酵母无毒性且无自我激活效应;滴板法试验结果显示,所有实验组在SD/-Trp/-Leu平板上生长良好,仅阳性对照组可在SD/-Trp/-Leu/X-α-Gal/AbA平板上生长且呈蓝色,表明诱饵蛋白PD-L1 IgV、hTrx不存在自我激活现象,且两者之间也不存在相互作用.结论 成功构建了重组人PD-L1 IgV酵母双杂交诱饵质粒,PD-L1 IgV蛋白对酵母细胞无毒性且无自我激活效应,且与hTrx之间无相互作用.后续可利用hTrx构建肽适体文库,从中筛选可与PD-L1 IgV特异结合的肽适体.

目的:探讨新型安置架下舒适体位护理在侧卧位手术患者中的应用效果.方法:选取 2021 年1 月1 日～2022 年9 月30日收治的 106 例取侧卧位手术治疗的患者作为研究对象,按照手术时间分为对照组和干预组各 53 例,对照组实施传统体位手术室护理,干预组实施新型安置架下舒适体位手术室护理.比较两组临床体征指标、舒适度[采用 Kolcaba 的舒适状况量表(GCQ)]、并发症发生率.结果:安置后,干预组平均动脉压、呼吸道压力、血氧饱和度水平均优于对照组(P<0.01);干预组GCQ中精神、心理、社会文化、生理评分及总分均高于对照组(P<0.01);干预组压力性损伤、上肢麻木、下肢麻木、颈肩痛等并发症总发生率低于对照组(P<0.05).结论:对侧卧位手术患者实施新型安置架下舒适体位护理,有助于提高患者机体舒适程度,减少不良反应.

核酸适体是运用指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligand and by exponential enrichment,SELEX)技术从人工体外合成的随机寡核苷酸序列库中,经过多轮筛选后得到的单链DNA或RNA,具有识别靶标范围广、亲和力高和稳定性好等优势.Cell-SELEX技术是指将整个细胞作为靶标筛选特异性核酸适体的技术,近年来已经广泛应用于肿瘤细胞特异的核酸适体筛选.本研究综述了Cell-SELEX技术的筛选过程以及通过cell-SELEX技术产生的核酸适体在肿瘤标志物、肿瘤靶向治疗和循环肿瘤细胞的识别与检测等方面的应用研究进展.