目的:探讨骨髓源性间充质干细胞(BMSCs)转化为神经干细胞(NSCs)的能力及其联合治疗对脑外伤的治疗作用。方法:将BMSCs(购自江苏无锡莆禾生物)进行培养和传代，再进行神经球诱导实验诱导分化为NSCs，对诱导后的NSCs进行功能鉴定，并检测其是否具有分化为神经细胞的能力。将15只6周龄、体重约为20 g、合格证号为SCXK(苏)2023-0009的C57BL/6J的雄性小鼠随机分成对照组、TBI组和MSCs+NSCs治疗组，并以水迷宫实验来检测小鼠的学习记忆能力。统计学方法应用GraphPad Prism(V8)统计软件分析，应用Student’s t检验和单向方差分析进行组间比较。 结果:BMSCs的特征性抗原，包括CD90、CD44、CD73和CD105，阳性率>95%；但不表达或低表达CD34、CD45和人类白细胞抗原(HLA-DR)，阳性率<5%。诱导分化的神经球细胞高表达CD90，阳性率>90%；并表达神经干细胞特异标志物巢蛋白(Nestin)和醛脱氢酶(LDHA1)，阳性率均超过10%。对NSCs进行荧光定量PCR检测，可见NSCs组Nestin(6.01±0.17比0.97±0.11， t＝43.74， P<0.05)、sry相关的高流动性组-box蛋白-2(Sox2)(7.92±038比0.94±0.08， t＝31.13， P<0.05)、配对框基因6(PAX6)(4.02±0.32比0.94±0.08， t＝16.71， P<0.05)高于MSCs对照组。免疫荧光检测培养第8天和第14天神经球干细胞，结果均显示NESTIN-PE染色阳性。神经球干细胞诱导神经细胞分化后，进行荧光定量PCR检测，结果显示NSCs诱导神经细胞分化后Nestin基因表达和微管蛋白β3(TUBB3)基因表达与BMSCs对照组比较没有改变；Sox2基因表达(2.48±0.49比1.00±0.08， t＝5.18， P<0.05)、少突胶质细胞系转录因子2(OLIG2)基因表达(4.37±0.23比1.01±0.20， t＝19.23， P<0.05)、PAX6基因表达(1.68±0.31比1.01±0.16， t＝3.33， P<0.05)和微管关联蛋白2(MAP2)基因表达(3.13±0.05比1.03±0.31， t＝11.44， P<0.05)与BMSCs对照组比较显著上调；胶质纤维酸性蛋白(GFAP)基因表达与BMSCs对照比较显著下调(0.05±0.02比1.04±0.38， t＝4.50， P<0.05)。水迷宫实验发现BMSCs+NSCs治疗组和TBI组相比潜伏期显著缩短(39.60±0.97比48.64±1.60， t＝10.81，7 d；29.40±0.55比35.00±1.41， t＝8.26，8 d；12.06±1.28比28.36±1.60， t＝17.83，9 d； P<0.05)。 结论:骨髓源性间充质干细胞具有转化为神经干细胞能力，且其联合治疗可减轻小鼠颅脑外伤后认知功能障碍。

目的:测量先天缺牙患者上颌余留切牙牙冠锥形程度，并分析不同基因突变对患者的牙冠锥形程度的影响。方法:回顾性纳入2019年1月至2023年1月就诊于北京大学口腔医学院·口腔医院修复科的85例先天缺牙患者（先天缺牙组），其中男性50例，女性35例，年龄3~57岁，中位年龄19岁。对所有患者进行全外显子组测序分析致病基因突变，并在曲面体层X线片上测量上颌中切牙及侧切牙在切1/3和龈1/3处的牙冠宽度，计算两者的比值得出牙冠锥形程度值，该值越小，代表该牙牙冠形态越类似锥形。根据先天缺牙组患者的年龄及性别匹配，选择2019年1月至2023年1月就诊于北京大学口腔医学院·口腔医院修复科，无牙齿发育异常相关疾病且上颌恒切牙完好的85例其他患者为对照组。对先天缺牙组与对照组的牙冠锥形程度值进行 t检验，使用单因素方差分析比较不同基因突变组的牙冠锥形程度值的差异，使用LSD方法进行各基因组别间的多重比较。 结果:85例先天缺牙组患者共有7种基因突变类型，包括外胚层发育不良A（ectodysplasin A，EDA）（20例）、EDA受体（EDA receptor，EDAR）（8例）、无翅型MMTV整合位点家族成员10A（wingless-type MMTV integration site family，member 10A，WNT10A）（15例）、配对盒9（paired box 9，PAX9）（16例）、Msh同源框1（Msh homeobox 1，MSX1）（10例）、低密度脂蛋白受体相关蛋白6（low-density lipoprotein receptor related protein 6，LRP6）（10例）和骨形态发生蛋白4（bone morphogenetic protein4，BMP4）（6例）。先天缺牙组患者的先天缺牙1~27颗，中位数15颗。先天缺牙组和对照组中左侧与右侧同名牙牙冠锥形程度值差异均无统计学意义（ P>0.05）。先天缺牙组患者上颌中切牙和侧切牙牙冠的锥形程度值（0.95±0.24、0.90±0.22）均显著小于对照组（1.12±0.09、1.13±0.09）（ t=-8.50， P<0.001； t=-11.47， P<0.001）。WNT10A突变患者的侧切牙锥形程度值（0.89±0.18）显著小于中切牙（1.07±0.15）（ t=3.68， P<0.001）。EDA突变患者的中切牙和侧切牙锥形程度值（0.70±0.23、0.57±0.15）均显著小于其他基因突变者（ P<0.05）。 结论:与正常对照相比，本研究纳入的7种不同基因突变的先天缺牙患者的余留上颌中切牙、侧切牙均存在不同程度的锥形牙，其中EDA突变者的上颌中切牙、侧切牙牙冠锥形程度最严重，而WNT10A突变更特异性地影响上颌侧切牙的牙冠锥形程度。

目的:通过比较不同时期大脑类器官脑区分化和神经细胞标志物的改变，分析萝卜硫素对大脑类器官发育的影响及可能机制。方法:使用萝卜硫素处理人诱导多能干细胞分化形成的大脑类器官。实验组为不同浓度（1 μmol/L、2 μmol/L、5 μmol/L）萝卜硫素处理组，对照组为空白对照组，每组20个类器官。采用免疫荧光、苏木精-伊红染色法观察比较萝卜硫素处理后不同时期脑区标志物和神经细胞标志物表达特点；RNA测序分析差异表达基因并进行基因本体论（Gene Ontology，GO）和京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）功能富集分析；实时定量反转录聚合酶链反应（real-time quantitative reverse transcriptase-mediated polymerase chain reaction，qRT-PCR）进一步筛选验证可能参与萝卜硫素促进大脑类器官生长潜在基因或可能的靶点。结果:加入萝卜硫素处理40 d的大脑类器官中性别决定区Y框蛋白2（sex determining region Y-box 2，SOX2）、前脑标志蛋白叉头框G1（forkhead box G1，FOXG1）、前额叶皮质孤独症易感候选基因2（autism susceptibility candidate 2，AUST2）、配对盒基因6（paired box 6，PAX6）表达明显增强；加入萝卜硫素处理70 d大脑类器官中神经元标志蛋白神经元Ⅲ型β-微管蛋白（β-tubulin，TUJ1）、神经元核（neuronal nuclei，NeuN）、微管相关蛋白2（recombinant microtubule associated protein 2，MAP2）、T脑蛋白家族1（T-brain-1，TBR1）等表达增强。RNA测序分析显示，相比于对照组，实验组显著上调基因105个，下调基因512个，共617个。qRT-PCR验证差异表达基因（SFTPC、AKR1C3、CXCR6、PRAP1、TMC8、GPR182、F2RL2、KCNJ10）的转录水平与测序结果基本一致。结论:差异表达基因AKR1C3、KCNJ10可能参与萝卜硫素促进大脑类器官前额发育和神经元分化，这有助于为萝卜硫素改善精神疾病和神经退行性疾病患者的认知和症状提供证据支持。

目的 观察Roy适应模式护理干预对异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)受者自我感受负担(SPB)及中性粒细胞植活时间的影响.方法 选取2017年7月至2018年5月在陆军军医大学新桥医院处于治疗缓解期、行allo-HSCT的100例受者作为研究对象,随机分为观察组和对照组.进入层流仓后,对照组受者采用常规健康教育及心理护理方法,观察组在此基础上进行以Roy适应模式为框架的护理干预.受者进、出层流仓时填写SPB量表.采用成组t检验比较观察组和对照组受者年龄、SPB量表评分和中性粒细胞植活时间,采用配对t检验比较每组受者进、出层流仓时SPB量表评分.采用χ2检验比较两组受者性别、原发病诊断、供受者配型、供受者血缘关系、医疗保险类型和SPB发生率.P<0.05为差异有统计学意义.结果 进入层流仓时,观察组与对照组受者SPB量表评分分别为(31±5)分和(32±4)分,差异无统计学意义(t=0.15,P>0.05).出仓时,观察组受者SPB量表评分为(25±6)分,低于对照组(30±4)分,差异有统计学意义(t=4.66,P<0.05).观察组受者出仓时SPB量表评分低于进仓时,差异有统计学意义(t=5.49,P<0.05);对照组受者进、出层流仓时SPB量表评分差异无统计学意义(t=1.71,P>0.05).进仓时,观察组和对照组受者SPB发生率分别为92％(46/50)、96％(48/50),差异无统计学意义(χ2=0.71,P>0.05).出仓时,观察组受者SPB发生率为74％(37/50),低于对照组94％(47/50),差异有统计学意义(χ2=7.44,P<0.05).观察组受者出仓时SPB发生率低于进仓时,差异有统计学意义(χ2=5.74,P<0.05);对照组受者进、出层流仓时SPB发生率差异无统计学意义(χ2=0.21,P>0.05).观察组受者中性粒细胞植活平均时间[(12.2±2.6)d]显著低于对照组[(17.1±2.7)d],差异有统计学意义(t=9.41,P<0.05).结论 应用Roy适应模式护理干预可改善allo-HSCT受者SPB严重程度,提高适应性,缩短中性粒细胞植活时间,利于疾病恢复.

目的 采用成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9(CRISPR/Cas9)基因编辑技术构建叉头框G1(FOXG1)基因敲除的人胚胎干细胞系,研究FOXG1基因在人胚胎干细胞早期神经诱导过程中的作用.方法 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,通过转染2个向导RNA(gRNA)诱导人胚胎干细胞FOXG1基因的大片段敲除,经单克隆筛选、测序分析和蛋白质印迹分析验证获得FOXG1基因敲除的人胚胎干细胞;通过细胞免疫荧光染色、qRT-PCR检测FOXG1基因敲除前后细胞在早期神经诱导过程中关键标志物配对框基因6(PAX6)、性别决定区Y框蛋白2(SOX2)和正小齿同源物2(OTX2)的表达.结果 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功获得FOXG1基因大片段缺失的人胚胎干细胞,细胞免疫荧光染色、qRT-PCR结果均显示人胚胎干细胞早期神经诱导过程中的关键标志物PAX6、SOX2和OTX2的表达并未受FOXG1缺失的影响.结论 通过2个gRNA共转染可以快捷地诱导人胚胎干细胞FOXG1基因的大片段敲除.FOXG1基因缺失并不影响人胚胎干细胞的早期神经诱导.

目的 探讨恶性心包积液细胞蜡块联合基因检测在明确肿瘤来源及肺腺癌患者个体化治疗中的应用价值.方法 选择50例恶性心包积液标本作为研究对象,制备细胞蜡块,进行苏木素-伊红(HE)染色,同时选择钙网膜蛋白(CR)、间皮细胞(MC)、肾母细胞瘤基因1(WT1)、癌胚抗原M2A单克隆抗体(D2-40)、尾型同源盒转录因子2(CDX2)、绒毛蛋白(villin)、黏蛋白5AC(MUC5AC)、甲状腺转录因子-1(TTF-1)、天冬氨酸肽酶A(nap-sin A)、细胞角蛋白7(CK7)、癌胚抗原(CEA)、神经细胞黏附分子(CD56)、嗜铬粒蛋白A(CgA)、突触素(Syn)、细胞角蛋白5/6(CK5/6)、p63、p40、p16、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(HER2)、GA-TA结合蛋白3(GATA3)、叉头框蛋白A1(FOXA1)、配对盒转录因子8(PAX8)、糖类抗原125(CA125)、广谱细胞角蛋白(p-CK)、上皮细胞膜抗原(EMA)、波形蛋白(vimentin)等抗体进行免疫组化分析.分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析肺腺癌来源的标本中表皮生长因子受体(EGFR)基因突变和棘皮动物微管相关样蛋白4-间变性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因情况.结果 共纳入50例恶性心包积液患者,根据其临床资料、细胞学特征及免疫组化结果分析恶性心包积液的组织来源及类型,结果显示,腺癌40例,鳞状细胞癌5例,小细胞癌4例,恶性间皮瘤l例,腺癌来源:肺30例,乳腺3例,消化道5例,卵巢2例.应用细胞蜡块进行肿瘤基因突变检测,发现30例肺腺癌患者的恶性心包积液细胞蜡块中,EGFR基因突变11例,其中19del突变5例、L858R突变6例,EML4-ALK融合基因1例,其余未见EGFR基因突变及EML4-ALK融合基因.结论 恶性心包积液细胞蜡块联合基因检测可为肿瘤起源及分型提供线索,并有利于肺腺癌个体化治疗方案的制订.

目的 基于癌症基因组图谱(TCGA)数据库,采用生物信息学方法分析乳腺癌组织中高迁移率族蛋白框11(SOX11)的表达变化,观察SOX11与患者临床参数、预后的关系,并分析其参与乳腺癌发生发展的相关调控通路.方法 从TCGA数据库中下载乳腺癌组织中SOX11转录组数据及乳腺癌患者的临床相关资料,使用R程序提取并比较乳腺癌组织和正常乳腺组织中SOX11表达情况,以SOX11表达中位值(5.5423)为界,将897例临床资料完整的乳腺癌患者分为SOX11高表达者459例和SOX11低表达者438例.比较SOX11高、低表达者的临床参数(年龄、Stage分期、T分期、淋巴结转移、M分期)及总体生存期(OS)、无病生存期(DFI)、疾病特异生存期(DSS)、无进展生存期(PFI).构建蛋白质相互作用关系(PPI)网络图,筛选与SOX11互作的核心基因,并对其进行基因本体论(GO)功能和京都基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.结果 乳腺癌组织SOX11表达高于正常乳腺组织,表皮生长因子受体2(Her-2)过表达型、Basal-like型乳腺癌组织SOX11表达均高于Luminal A型、Luminal B型、Normal-like型(P均<0.05).SOX11高表达者年龄≤58岁及T1～T2分期的比例均高于SOX11低表达者,DSS、PFI均低于低表达者(P均<0.05).SOX11高、低表达者的Stage分期、淋巴结转移、M分期比例及OS、DFI比较均无统计学差异(P均>0.05).构建PPI网络后共得到SOX11互作的核心基因313个,主要有配对盒基因6(PAX6)、锌指蛋白2(ZIC2)、转录激活因子3(ATF3)、巯基氧化酶1(QSOX1)、长链非编码RNA-POU3F3等.GO功能分析结果显示,PPI网络中的互作基因主要参与细胞周期、细胞分裂相关的生物过程和功能.KEGG通路富集分析结果显示,PPI网络中的互作基因主要富集到p53、Her-2、FOXO等信号通路.结论 SOX11在乳腺癌组织尤其是Her-2过表达型和Basal-like型乳腺癌组织中表达升高,SOX11高表达可能通过p53、Her-2、FOXO等信号通路促进了乳腺癌的发生发展,并提示患者预后不良.

目的·探究转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGFβ)家族下游的关键转录因子SMAD蛋白(drosophila mothers against decapentaplegic protein)——SMAD2和SMAD3在人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)体外分化过程中的不同作用.方法·在hESC中,通过蛋白质印迹法(Western blotting)检测SMAD2和SMAD3在分化过程中的蛋白表达水平.通过CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9)技术构建SMAD2敲除(SMAD2 knockout,SMAD2KO)和SMAD3敲除(SMAD3 knockout,SMAD3KO)的细胞系.利用免疫荧光染色检测SMAD蛋白丢失对多能性因子八聚体结合转录因子4(octamer-binding transcription factor 4,OCT4)和性别决定区Y框蛋白2(sex determining region Y-box 2,SOX2),神经外胚层(neuroectoderm,NE)标志因子配对盒因子6(paired box 6,PAX6)和性别决定区Y框蛋白1(sex determining region Y-box 1,SOX1)以及中内胚层(mesendoderm,ME)标志因子SOX17的表达影响;同时使用流式细胞术鉴定SMAD2敲除或SMAD3敲除对NE标志因子PAX6以及ME标志因子SOX17、脱中胚蛋白(eomesodermin,EOMES)和C-X-C模体趋化因子受体4(C-X-C motif chemokine receptor 4,CXCR4)表达的影响.在SMAD2KO和SMAD3KO细胞中分别过表达SMAD2和SMAD3质粒,通过Western blotting检测SMAD2和SMAD3蛋白回补的效果,并利用实时定量PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)检测SMAD蛋白回补后对分化过程中的ME关键因子EOMES、叉头框转录因子A2(forkhead box A2,FOXA2)和GSC同源盒(goosecoid homeobox,GSC)表达的影响.结果·虽然SMAD2和SMAD3的蛋白序列较为相似,但是SMAD2才是hESC中主要表达的蛋白因子.免疫荧光染色结果表明,SMAD2敲除和SMAD3敲除并不会影响hESC多能性因子OCT4和SOX2的表达;同时流式细胞术发现,SMAD蛋白的缺失也不会影响NE标志因子PAX6和SOX1的表达.SMAD3敲除对hESC向ME分化没有显著的影响,而SMAD2敲除严重阻碍了hESC表达ME标志因子SOX17、EOMES和CXCR4.通过qRT-PCR检测显示在SMAD2KO细胞中过表达外源性SMAD2可以有效地恢复ME基因EOMES、FOXA2和GSC的表达,而在SMAD3KO细胞中回补SMAD3对这些ME基因的表达无影响.结论·SMAD2和SMAD3在hESC向ME分化过程中的调控作用不同.SMAD2而非SMAD3是决定hESC表达ME基因的关键.

目的 探讨结直肠癌组织中微小RNA-876-5p(miR-876-5p)、配对框基因6(PAX6)mRNA的表达变化及意义.方法 选取86例结直肠癌患者,术中留取部分癌组织和癌旁组织.用RT-qPCR法检测组织中miR-876-5p、PAX6 mRNA表达;用TargetScan数据库预测miR-876-5p与PAX6的关系,用Pearson相关法分析二者的相关性;随访3年,统计患者3年累积生存率,根据结直肠癌组织中miR-876-5p、PAX6 mRNA表达水平将患者分为miR-876-5p高表达组、miR-876-5p低表达组,PAX6 mRNA高表达组、PAX6 mRNA低表达组,比较各组3年累积生存率.结果 结直肠癌组织中miR-876-5p相对表达量低于癌旁组织,PAX6 mRNA相对表达量高于癌旁组织(P均<0.05).经在线网站https://www.targetscan.org/预测,miR-876-5p与PAX6的3'-非翻译区691-697存在结合位点.Pearson相关分析显示,结直肠癌组织中miR-876-5p表达与PAX6 mRNA表达呈负相关(r=-0.754,P<0.05).结直肠癌组织中miR-876-5p、PAX6 mRNA表达与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤最大径无关(P均>0.05).miR-876-5p高表达组3年累积生存率90.48％(38/42)高于miR-876-5p低表达组的68.18％(30/44),PAX6 mRNA高表达组3年累积生存率70.21％(33/47)低于PAX6 mRNA低表达组的89.74％(36/39),比较差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 结直肠癌组织中miR-876-5p高表达、PAX6 mRNA低表达,二者表达变化与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移及预后有关.