目的 以核转录因子-κB/上皮间充质转化(NF-κB/EMT)信号通路为基础,探讨和胃降逆含药血清对胃腺癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 制备不同药物剂量(3,6,12 g/kg)的和胃降逆含药血清,作为含药血清低、中、高剂量组,不含药物的血清作为空白对照组.采用不同药物剂量的和胃降逆含药血清分别干预AGS细胞24,48,72 h后,用CCK-8法观察细胞增殖;DAPI染色法检测细胞凋亡;划痕试验观察细胞迁移;实时定量聚合酶链反应法(RT-qPCR)检测NF-κB、EMT标志物相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)mRNA水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内NF-κB、E-cadherin、Vimentin相关信号通路蛋白的表达.结果 同一时间点,与空白对照组比较,和胃降逆含药血清组细胞活力降低(P＜0.01);同一含药血清剂量组48,72 h与24 h比较细胞活力降低(P＜0.05).干预48 h,与空白对照组比较,不同剂量含药血清组AGS细胞凋亡率剂量依赖性增加(P＜0.05).与空白对照组比较,和胃降逆含药血清组划痕愈合速度均减慢,迁移率降低(P＜0.05);干预24 h,与空白对照组比较,高剂量组细胞迁移降低(P＜0.01),干预48 h,中、高剂量组细胞迁移率降低(P＜0.01).与空白对照组比较,和胃降逆含药血清组AGS细胞中NF-κB、Vimentin的mRNA水平剂量依赖性下调(P＜0.05),E-cadherin的mRNA水平剂量依赖性上调(P＜0.01).与空白对照组比较,和胃降逆含药血清组AGS细胞中NF-κB、Vimentin的蛋白表达剂量依赖性下调,E-cadherin的蛋白表达剂量依赖性上调(P＜0.05).结论 和胃降逆胶囊可能通过抑制NF-κB活化、调控下游EMT相关蛋白的表达介导胃腺癌细胞AGS的迁移和侵袭,进而抑制AGS细胞增殖并促进其凋亡.

目的:探讨恶性血液病患者异基因造血干细胞移植（Allo-HSCT）后股骨头坏死的影响因素。方法:回顾性收集2016年1月至2021年12月中山大学附属第一医院血液内科接受异基因造血干细胞移植后出现股骨头/股骨远端坏死的患者各项临床资料及检查结果，纳入临床资料完整，排除资料缺失或随访时间较短的患者。最终纳入移植前后体重、移植前后血红蛋白、移植后血钙波动情况、移植后膀胱炎、移植物抗宿主病、激素用量等18个可能的影响因素，将性别相同、年龄相近、随访日期相近的患者，按1∶3进行配对logistic回归分析。结果:共纳入40例患者，单因素logistic回归分析：膀胱炎［比值比（OR）=5.967，95%置信区间（CI）（1.209，29.443），P=0.028］、移植后半年应用甲泼尼龙剂量［OR = 2.108，95%CI（1.008，4.408），P=0.048］、移植后血钙极差（即移植后血钙最大值-最小值）［OR=2.377，95%CI（1.127，5.014），P=0.023］有统计学意义；多因素logistic回归分析，仅移植后血钙极差的差异有统计学意义［OR=2.377，95%CI（1.127，5.014），P=0.023］。结论:血钙移植后极差大是白血病患者AIIo-HSCT术后股骨头坏死发生的潜在危险因素。

目的 制备用于周围神经损伤修复的新型合成水凝胶支架材料并评估机械性能及其体外生物相容性.方法 利用聚二甲基硅氧烷(PDMS)制备新型合成水凝胶,万能试验机检测其机械性能,X线能谱仪分析材料元素组成,电镜观察其微观形貌.培养PC12细胞(PC12,中国科学细胞库)并分为对照组(常规培养)和实验组(新型合成水凝胶),细胞计数试剂盒(CCK-8)、细胞免疫荧光、划痕实验、细胞凋亡实验明确新型合成水凝胶对PC12细胞增殖、迁移及凋亡的作用.蛋白质印迹法(Western blot)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、Snail、波形蛋白(Vimentin)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-8、Caspase-3表达量,明确新型合成水凝胶对细胞的黏附作用影响.两组间比较采用非配对t检验.结果 新型合成水凝胶具有良好的拉伸弹性,由初始长度2 cm最大可拉伸至16 cm;元素分析显示材料主要由碳、氧、硅组成;扫描电镜可见新型合成水凝胶具有致密均一网状结构.细胞增殖实验结果显示,PC12细胞对照组吸光度值为1.390±0.154,新型合成水凝胶组为1.093±0.152,差异无统计学意义(t=2.372,P＞0.05).细胞免疫荧光实验结果显示,PC12细胞对照组成熟度为(68.712±2.877)％,新型合成水凝胶组为(74.555±2.412)％,差异无统计学意义(t=2.289,P＞0.05).划痕实验结果显示PC12细胞对照组划痕愈合面积比为(66.576±3.958)％,新型合成水凝胶组为(64.091±2.635)％,差异无统计学意义(t=1.139,P＞0.05).细胞凋亡实验结果显示PC12细胞的凋亡率对照组为(10.360±1.807)％,新型合成水凝胶组为(11.580±1.311)％,差异无统计学意义(t=0.947,P＞0.05).Western blot 结果显示,E-cadherin、Snail、Vimentin、Caspase-8、Caspase-3相对表达量与新型合成水凝胶组分别为0.698±0.040比0.785±0.036、0.646±0.050 比 0.752±0.053、0.759±0.051 比 0.844±0.051、0.772±0.059 比0.836±0.045、0.822±0.024 比 0.822±0.024,差异无统计学意义(t=2.744、2.539、2.039、1.499、1.525,P＞0.05).结论 新型合成水凝胶具有良好的拉伸性和体外生物相容性,可以作为一种周围神经损伤修复的选择方案.

目的 探讨序列相似性家族107成员A(FAM107A)调控缺氧诱导因子3A(H1F3A)对前列腺癌(PCa)迁移、侵袭、凋亡的影响.方法 通过生物信息学技术筛选目的基因并进行分析.体外培养人PCa细胞PC-3,采用反转录病毒稳定转染,采用蛋白质印迹法(Western blot)技术验证HIF3A及DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达量;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;焦磷酸测序检测启动子甲基化程度;细胞功能试验验证对PCa迁移和侵袭的影响.两组间差异表达采用独立样本t检验方法比较.结果 生信分析提示FAM107A基因在PCa组织中表达低于正常前列腺组织(P＜0.01),Gleason评分(GS)越高,FAM107A表达量越低(P＜0.01).划痕实验、Transwell侵袭实验提示过表达 FAM107A会抑制 PCa 细胞的迁移(C4-2:0.337±8.930 比 29.334±2.651,t=-7.260,P＜0.05;PC-3:18.672±10.494 比 52.043±3.512,t=-6.024,P＜0.05)、侵袭(DU145:117.703±12.845 比 242.303±21.401,t=10.273,P＜0.05;PC-3:51.674±9.502 比 139.303±13.394,t=16.025,P＜0.05),促进凋亡(17.180±0.700 比 0.527±0.121,t=40.600,P＜0.05).细胞周期实验表明oe-FAM107A-ENZ组细胞G1期比例高于对照组(80.410±0.786比35.583±0.714,t=73.130,P＜0.05),S 期比例低于对照组(11.233±0.374 比 38.747±1.809,t=25.790,P＜0.05),细胞分裂被阻滞在S期.蛋白免疫印迹实验证明过表达FAM107A组的DNMT1表达量低于对照组(0.277±0.032 比 0.900±0.026,t=25.93,P＜0.05),HIF3A 表达量高于对照组(0.657±0.040 比0.523±0.043,t=4.041,P＜0.05).sh-FAM107A-5-aza 组的 HIF3A 的表达量明显恢复(0.550±0.020比0.427±0.067,t=3.073,P＜0.05).蛋白免疫印迹实验证明过表达FAM107A时E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达量高于对照组(0.773±0.095 比 0.307±0.046,t=7.683,P＜0.05),N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达量低于对照组(0.380±0.060 比 0.733±0.045,t=8.154,P＜0.05),波形蛋白(Vimentin)表达量低于对照组(0.347±0.107 比 0.700±0.040,t=5.361,P＜0.05).结论 FAM107A高表达可抑制HIF3A启动子甲基化促进其表达,进而抑制PCa的迁移、侵袭,是PCa进展的生物标志物.

目的 调查中国各血液透析(hemodialysis,HD)中心患者心血管疾病(cardiovascular dis-ease,CVD)负担及疾病筛查情况,以明确各种CVD的患病率,分析目前HD患者CVD筛查及管理中存在的问题,为未来开展CVD相关的多中心研究提供理论依据.方法 中国医院协会血液净化中心分会制定了关于HD患者心血管疾病筛查及负担的调查问卷,于2024年1月11日—18日通过问卷星对中国(不含港澳台地区)的HD中心的负责人进行问卷推送,调查CVD患病率及疾病筛查情况.结果 共回收186份有效问卷,涵盖19个省、4个自治区和4个直辖市.冠心病和血管钙化是HD患者最常见的CVD类型,分别有55.9%和62.4%的HD中心患病人数比例超过40%;其次为缺血性脑卒中,心房颤动和脑出血的比例相对较低.68.6%的HD中心患者的年死亡率低于10%.在心血管疾病筛查方面:58.6%的HD中心每年为患者进行1次心脏彩色多普勒超声心动图检查,仅有25家(13.4%)每年为患者安排1次侧位腹平片,每年为患者进行1次脉搏波传导速度检查的HD中心只有15家(8.1%),结果提示CVD筛查力度薄弱,血管钙化筛查最易被忽视.患者诊治依从性方面:39.8%的HD中心认为依从性一般或较差,83.3%的医务人员愿意参加CVD负担相关科学研究.结论 本调查结果显示尽管我国HD患者合并CVD的比例较高,尤其是冠心病和血管钙化,但CVD评估方面,众多HD中心未能进行定期疾病筛查,尤其是血管钙化方面筛查最为薄弱,患者诊治依从性不佳.应进一步呼吁加强CVD疾病筛查与管理,对患者加强宣教,医患配合、早诊早治,共同降低HD患者CVD疾病负担.

目的 探讨整合素亚单位α3(ITGA3)对非小细胞肺癌(NSCLC)紫杉醇耐药性的影响及机制.方法 选取行紫杉醇联合顺铂化疗的50例NSCLC患者肿瘤组织及A549/Tax(人肺腺癌紫杉醇耐药性)细胞、人A549细胞株及人胚胎肺成纤维细胞(MRC-5),RT-qPCR法检测组织及细胞中ITGA3基因mRNA表达;以A549/Tax细胞为研究对象,分别转染pcDNA3.1-ITGA3质粒(oe-ITGA3)及pcDNA3.1空载体(oe-NC)、沉默ITGA3小RNA(sh-ITGA3)及阴性对照(sh-NC),标记为oe-ITGA3组、oe-NC组、sh-ITGA3组、sh-NC组,同时以未经处理的A549/Tax细胞为对照组;CCK-8 法检测 24、48 h的OD450 值;Western blotting法检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白[波形蛋白(Vimentin)、钙黏附蛋白E(E-cadherin)、snail]及转化生长因子β(TGF-β)、免疫逃逸蛋白[程序性死亡分子配体1(PD-L1)]表达;RT-qPCR法检测A549/Tax细胞中ITGA3 mRNA表达;Transwell实验检测A549/Tax细胞迁移、侵袭能力.结果 治疗后肿瘤组织中ITGA3 mRNA表达高于治疗前肿瘤组织(P<0.05),A549细胞、A549/Tax细胞中ITGA3 mRNA表达高于MRC-5细胞(P均<0.05).治疗后,NSCLC患者肿瘤组织中Vimentin、snail、TGF-β、PD-L1较治疗前增加,E-cadherin降低(P均<0.05).与对照组、oe-NC组相比,oe-ITGA3组24、48 h的OD450值、细胞迁移、侵袭数目、ITGA3 mRNA、Vimentin、snail、TGF-β、PD-L1表达增加,E-cadherin表达降低(P均<0.05);与对照组、sh-NC组相比,sh-ITGA3组24、48 h OD450 值、细胞迁移、侵袭数目、ITGA3 mRNA、Vimentin、snail、TGF-β、PD-L1表达降低,E-cadherin表达增加(P均<0.05).结论 下调ITGA3表达可抑制NSCLC细胞对紫杉醇的耐药性,其机制可能与抑制TGF-β表达有关.

目的:观察穴位热痛刺激治疗无先兆偏头痛患者的临床疗效及对患者接触性热痛诱发电位(CHEP)、血清中5-羟色胺(5-HT)、β-内啡肽(β-EP)和降钙素基因相关肽(CGRP)水平的影响。方法:采用随机数字表法将120例无先兆偏头痛患者分为观察组及对照组，2组患者均口服西比灵(每次5 mg，每晚1次)，治疗4周为1个疗程；观察组患者在此基础上辅以穴位热痛刺激，取穴包括风池、率谷、阳陵泉、外关、太阳、印堂等，热刺激温度设定为54.5 ℃，各穴位交替刺激，每日治疗1次，治疗4周为1个疗程。于治疗前、治疗1个疗程后对比2组患者偏头痛治疗效果；同时记录患者CHEP潜伏期、波幅，并采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测2组患者血清中5-HT、β-EP及CGRP含量变化。结果:经1个疗程治疗后发现观察组患者总有效率(93.3%)较对照组总有效率(75.0%)明显升高( P<0.05)；治疗后观察组CHEP的N-P波幅[(30.67±2.70)μV]较治疗前及对照组[48.58±4.61)μV]均显著降低( P<0.05)；治疗后观察组血清中5-HT、β-EP含量[分别为(383.30±48.57)pg/ml和(42.35±6.17)pg/ml]均较治疗前及对照组[分别为(316.67±43.71)pg/ml、(30.79±4.63)pg/ml]显著升高( P<0.05)，血清中CGRP含量[(12.75±2.28)pg/ml]均较治疗前及对照组[(21.16±3.17)pg/ml]显著降低( P<0.05)。 结论:穴位热痛刺激能有效缓解无先兆偏头痛患者症状，降低CHEP的N-P波幅，其治疗机制可能与提高患者血清中5-HT、β-EP含量、降低CGRP含量有关。

目的:探究丝氨酸精子发生相关蛋白2(spermatogenesis associated serine rich 2,SPATS2)影响喉 鳞 状 细 胞 癌(larynx squamous cell carcinoma,LSCC)增 殖、迁 移、侵 袭 和 上 皮 间 质 转 化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)发生的分子机制,从而为寻找LSCC筛查、诊断和治疗的潜在靶点提供理论依据.方法:从TCGA数据库中下载LSCC临床及RNA-seq数据并进行整理,从中提取SPATS2的mRNA表达数据,并用R 4.3.1进行分析作图;用R4.3.1进行单基因差异分析后所得基因集进行基因本体分析(gene ontology,GO)和基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA);用CCK8、克隆形成实验、划痕实验、Transwell实验、Western blot验证敲减或过表达SPATS2后细胞的增殖、迁移和侵袭能力,用qRT-PCR检测目的基因mRNA水平变化,并用ImageJ、GraphPad Prism8和IBM SPSS Statistics 25对结果进行定量与统计学分析.结果:通过生信分析发现,LSCC组织中SPATS2的mRNA水平显著高于癌旁组织(P<0.001),且高水平SPATS2不利于患者生存(P=0.021).过表达或敲减SPATS2后,细胞的增殖、迁移、侵袭能力及波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-Cadherin)、NOTCH1、cleaved-NOTCH1的表达水平、NOTCH信号通路下游靶基因的mRNA水平均随之升高或降低.在过表达SPATS2的同时抑制NOTCH信号通路可以逆转由单独过表达SPATS2导致的细胞增殖、迁移、侵袭能力增强和EMT水平升高的结果.结论:SPATS2能够通过影响NOTCH信号通路影响LSCC细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT等恶性表型,进而影响LSCC进展.

目的:本研究旨在探讨乳腺癌多模态超声特征与造血细胞激酶（hematopoietic cell kinase，HCK）和线粒体核糖体蛋白L13（mitochondrial ribosomal protein L13，MRPL13）表达水平的相关性。方法:选择2017年1月至2020年9月于衢州市人民医院就诊并行手术治疗的204例女性乳腺癌患者作为研究对象，术中取乳腺癌组织和癌旁正常组织。术前行常规超声、剪切波弹性成像（shear wave elastography，SWE）和超声造影（contrast-enhanced ultrasonography，CEUS）检查，采用免疫组织化学法检测HCK和MRPL13的表达水平。使用单因素分析和二元Logistic回归分析多模态超声特征和HCK、MRPL13的相关性。结果:乳腺癌组织中的HCK和MRPL 13阳性表达比例均显著高于癌旁组织（ χ2=5.625、7.197； P=0.018、0.007）。常规超声特征中，HCK阳性乳腺癌患者中出现肿块边缘不规整、微钙化和II~III级血流分级的比例显著高于HCK阴性患者（ χ2=7.437、16.684、23.262； P=0.006、<0.001、<0.001）；MRPL13阳性乳腺癌患者中出现肿块最大径≥2 cm、肿块边缘不规整和II~III级血流分级的比例显著高于MRPL13阴性者（ χ2=4.676、11.118、8.389； P=0.031、0.001、0.004）。对于SWE征象，HCK阳性乳腺癌患者出现硬环征的比例显著高于HCK阴性者（ χ2=11.220， P=0.001）；MRPL13阳性乳腺癌患者出现硬环征和黑洞征的比例均显著高于MRPL13阴性者（ χ2=4.482、8.775； P=0.034、0.003）。CEUS特征中，HCK阳性患者出现高增强的比例显著高于HCK阴性者（ χ2=7.356， P=0.007）；MRPL13阳性患者出现高增强和晚消退的比例显著高于MRPL13阴性者（ χ2=9.165、7.631； P=0.002、0.006）。二元Logistic分析结果表明，出现微钙化（ OR=4.619，95% CI=2.657~8.119， P=0.009）、血流分级II~III级（ OR=4.150，95% CI=2.547~7.954， P=0.015）和CEUS表现高增强（ OR=4.150，95% CI=2.547~7.954， P=0.015）是HCK阳性表达的独立危险因素；血流分级II~III级（ OR=4.213，95% CI=3.145~8.557， P=0.012）、出现黑洞征（ OR=5.246，95% CI=2.864~10.378， P<0.001）和CEUS表现高增强（ OR=3.872，95% CI=1.887~6.438， P=0.026）是MRPL13阳性表达的独立危险因素。 结论:乳腺癌多模态超声特征有助于预测HCK和MRPL13的表达水平，从而为乳腺癌的早期诊断、治疗方案的制定及术前无创评估乳腺癌预后提供影像学新思路。

目的:探讨前列腺癌细胞中转化生长因子-β受体Ⅱ环状RNA(circTGFBR2)调节核糖核酸结合蛋白2(PTBP2)/胚胎致死性异常视觉样蛋白1(ELAVL1)激活SMAD2信号途径促进前列腺癌发生发展。方法:利用生物信息学方法，寻找与circTGFBR2结合microRNA以及其他相关蛋白结合位点，以及与PTBP2存在相互作用的RNA结合蛋白。PC3转染pcDNA3.1-circTGFBR2后，实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测circTGFBR2的表达。PC3细胞过表达circTGFBR2同时敲低微小RNA(microRNA，miR)-29b，蛋白质印迹法(Western blot)检测ALK5、SMAD2及p-SMAD2表达。PC3分别转染pcDNA3.1-circTGFBR2及对照质粒后，利用circTGFBR2特异性探针进行pulldown，检测PTBP2与circTGFBR2的相互作用。过表达circTGFBR2与ELAVL1，检测细胞上皮-间充质转化(EMT)的标志基因E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及ZMYM1表达，以及Transwell检测细胞迁移。组间比较应用单因素方差分析。结果:分析结果显示circTGFBR2存在多个miR-29b结合的位点，ALK5(又名TGFBR1)mRNA 3’端非编码区(3’UTR)同样存在miR-29b的结合位点，并证实PTBP2与另一个RNA结合蛋白ELAVL1存在相互作用。用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激PC3细胞发现，circTGFBR2的表达高于对照组(1.83±0.02比1.03±0.02， F＝2 832.200， P<0.01)。PC3分别转染pcDNA3.1-circTGFBR2及对照质粒后，RT-qPCR检测circTGFBR2的表达，可见circTGFBR2组高于对照组(176.41±1.21比1.04±0.02， F＝63 426.15， P<0.01)。应用miR-29b抑制剂或circTGFBR2处理细胞后ALK5的蛋白水平明显高于对照组，应用miR-29b抑制剂同时过表达circTGFBR2后进一步增加ALK5的表达(分别为0.15±0.01、0.48±0.02、0.55±0.01、0.74±0.01， F＝1268.314， P<0.01)，并且SMAD2(分别为1.14±0.02、1.28±0.02、1.42±0.01、1.5±0.25， F＝4.852， P<0.01)和p-SMAD2(分别为0.18±0.02、0.36±0.01、0.65±0.01、0.94±0.02， F＝1663.667， P<0.01)的磷酸化水平也呈相同趋势。Pulldown-MS实验，多个蛋白质能与circTGFBR2结合，并证实PTBP2与circTGFBR2相互作用。与对照组比较，敲低前列腺癌细胞PTBP2或过表达circTGFBR2时，间质标志基因Vimentin表达高于对照组，而上皮样标志基因E-cadherin表达低于对照组，当同时过表达circTGFBR2并敲低PTBP2会逆转上述结果(Vimentin分别为0.22±0.02、0.87±0.02、0.85±0.02、0.6±0.01， F＝1319.52， P<0.01；E-cadherin分别为0.80±0.01、0.45±0.03、0.36±0.02、0.9±0.02， F＝614.919， P<0.01)。当过表达circTGFBR2或高表达ELAVL1时，PTBP2与ELAVL1的相互作用减弱，细胞EMT的标志基因E-cadherin表达低于对照组，Vimentin及ZMYM1表达高于对照组，Transwell检测细胞迁移高于对照组，而当同时高表达ELAVL1及circTGFBR2时，上述趋势会进一步增强(Vimentin分别为0.22±0.02、0.87±0.02、0.85±0.02、0.6±0.01， F＝1 319.52， P<0.01；E-cadherin分别为0.93±0.02、0.76±0.02、0.43±0.02、0.27±0.01， F＝1 108.46， P<0.01；ZMYM1分别为0.24±0.01、0.53±0.02、0.32±0.01、1.04±0.02， F＝2 023.794， P<0.01)。 结论:circTGFBR2通过调节PTBP2/ELAVL1激活SMAD2信号途径促进前列腺癌发生发展。