佐剂(adjuvant)是增强和调节疫苗抗原免疫反应的增强剂,与抗原一起使用能使机体产生更强或更平衡的免疫反应.近年来,重组蛋白疫苗、核酸疫苗等新型疫苗是疫苗的研发热点,尤其是重组蛋白疫苗,通常存在免疫原性弱或辅助性T细胞(helper T cells,Th)1/Th2 免疫反应不平衡等问题,需要添加佐剂以改善疫苗的免疫效果,因而佐剂开发就成为该类疫苗研发的焦点之一.疫苗佐剂种类繁多且机制复杂,主要分为递送类佐剂、免疫激动剂及复合佐剂等.现就已获批的人用疫苗佐剂以及具有潜力的部分新型佐剂从其作用机制和临床或临床前应用等方面作一概述,为人用疫苗佐剂的相关研究提供理论和应用参考.

目的:探讨提前给予脂多糖(LPS)对支气管哮喘(哮喘)预防的作用及相关免疫机制，为哮喘的预防和治疗提供理论依据。方法:提前用LPS处理BALB/c背景6～8周小鼠，然后用卵清蛋白(OVA)联合铝佐剂诱导小鼠哮喘模型，阴性对照组用无菌生理盐水，分为以下4组：LPS给药1次组(LPS1组)，LPS给药2次组(LPS2组)，阴性对照组(NS组)，OVA组。通过肺功能检测气道阻力、肺组织病理染色、支气管肺泡灌洗液分类细胞计数、酶联免疫吸附试验测Th2型细胞因子及白细胞介素6(IL-6)、IL-10，流式细胞术测肺组织调节性T细胞(Treg)比例等方法探索LPS对哮喘有无预防作用。结果:LPS预处理小鼠在OVA诱导后，肺组织苏木精-伊红染色、过碘酸-希夫染色提示炎症减轻，炎细胞浸润减少，肺组织匀浆IL-5、IL-6、IL-13降低，LPS2组IL-10及Treg比例增高，与OVA组比较差异有统计学意义。结论:LPS通过减少Th2型细胞因子及刺激Treg细胞增殖减轻OVA诱导的哮喘炎症反应。

目的:探讨新疆野生荒漠肉苁蓉粗多糖（WCDCP）对卵清白蛋白（OVA）诱导小鼠免疫应答的影响。方法:将42只ICR小鼠按随机数字表法分为7组（每组6只）：9 g/L NaCl组（空白对照组）、WCDCP组（400 μg WCDCP）、OVA组（10 μg OVA）、低剂量WCDCP/OVA组（100 μg WCDCP+10 μg OVA）、中剂量WCDCP/OVA组（400 μg WCDCP+10 μg OVA）、高剂量WCDCP /OVA组（800 μg WCDCP+10 μg OVA）、铝佐剂/OVA组（阳性对照组，200 μg铝佐剂+10 μg OVA）。采用两点注射于小鼠后腿肌内进行免疫，共免疫2次，初次免疫后间隔2周加强免疫1次。分别于初次免疫后7、14、21、28 d称量小鼠体质量，观察小鼠体质量和生长状态变化，并采用间接酶联免疫吸附测定法检测小鼠血清IgG抗体及抗体分型水平。初次免疫后21 d，采用噻唑蓝法检测小鼠脾脏淋巴细胞增殖水平，流式细胞术检测小鼠脾脏和淋巴结中的T细胞亚群比例。结果:初次免疫后7 d，高剂量WCDCP/OVA组的血清IgG抗体水平（0.597 6±0.110 7）明显高于OVA组（0.254 4±0.074 8）（ P<0.05）。初次免疫后28 d，高剂量WCDCP/OVA组的血清IgG、IgG1和IgG2a抗体水平均高于OVA组（0.972 3±0.243 8比0.389 2±0.077 4，1.156 0±0.088 4比0.612 6±0.059 7，1.648 0±0.103 9比0.557 2±0.181 5），差异均具有统计学意义（ P<0.05， P<0.001， P<0.001）。高剂量WCDCP对刀豆蛋白A和脂多糖诱导的脾脏细胞增殖均具有明显的促进作用（ P<0.001， P<0.05）。高剂量WCDCP/OVA组小鼠脾脏中的CD3 +CD8 + T和CD3 +CD4 + T细胞比例明显高于OVA组[（10.83±0.44）%比（6.76 ± 0.58）%，（28.17 ± 1.67）%比（19.17±2.73）%]，差异均具有统计学意义（ P<0.01， P<0.05）。WCDCP对小鼠体质量（均 P>0.05）和生长无影响。 结论:WCDCP可增强OVA抗原的体液免疫反应和细胞免疫反应，且对小鼠生长无不良反应，是一种安全有效的候选疫苗佐剂。

目的:以CpG1826作为疫苗佐剂评价其与铝佐剂对大肠埃希菌表达的新型冠状病毒（SARS-CoV-2）亚单位疫苗免疫原性的协同增强效果。方法:利用大肠埃希菌高效表达SARS-CoV-2亚单位抗原，纯化后加入CpG1826和铝佐剂。将BALB/c小鼠随机分成铝佐剂疫苗组、CpG+铝佐剂疫苗组和空白对照组，每组18只，于0、7和14 d进行腹腔注射免疫。分别于首针免疫后7、14和28 d采血和取脾检测小鼠血清IgG水平、中和抗体水平以及小鼠脾细胞上清中IFN-γ细胞因子水平。结果:在首针免疫28 d后，3组小鼠的IgG、结合抗体抑制率和中和抗体水平差异均有统计学意义（ F=21.440、159.400和8.470， P均<0.05），其中CpG+铝佐剂疫苗组分别为6.91±0.20、（91.01±4.60）%和65.33±51.70，均高于铝佐剂疫苗组（ t=2.892、2.441和2.703， P均<0.05）。在首针免疫7、14和28 d后，3组的特异性IFN-γ的效应T细胞数比较差异有统计学意义（ F=25.360、36.990和660.400， P均<0.01），CpG+铝佐剂疫苗组分别为179.68±69.26、395.58±139.64、563.50±43.79，均高于铝佐剂疫苗组（ t=3.969、5.292和22.310， P均<0.01）。 结论:CpG1826能和铝佐剂协同增强大肠埃希菌表达的SARS-CoV-2亚单位疫苗诱导的体液及细胞免疫应答水平，显著提高其免疫原性，具有较强的临床意义。

目的:评价人工合成CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotide, CpG-ODN)作为佐剂对灭活人腺病毒55型(human adenovirus type 55, HAdV-55)抗原诱导BALB/c小鼠免疫应答的影响。方法:HAdV-55 QS原型株经噬斑纯化构建疫苗候选株种子库，将疫苗候选株扩增产物经0.05% β-丙内酯灭活，纯化后制备成全病毒颗粒抗原。纯化HAdV-55抗原按低剂量组(0.2 mg/ml)和高剂量组(1 mg/ml)分别与CpG-ODN和氢氧化铝佐剂等体积混合，乳化后接种BALB/c小鼠，同时设PBS对照组，间隔21 d加强免疫1次。分别在初次免疫后21 d和35 d采集小鼠静脉血并分离血清，采集末次血清时分离小鼠脾脏淋巴细胞。通过酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)和微量中和试验检测免疫后小鼠血清中HAdV-55特异性IgG抗体和中和抗体水平，酶联免疫斑点法(enzyme linked immunospot assay，ELISpot)检测小鼠分泌IL-4和IFN-γ细胞因子淋巴细胞水平。结果:无论有无佐剂，随着免疫次数和接种剂量的增加，灭活HAdV-55抗原诱导BALB/c小鼠产生的病毒特异性IgG抗体显著升高；而中和抗体只有在加强免疫后才能达到可检测水平，中和抗体几何平均滴度(geometric mean titer，GMT)在1：11~1：23之间；使用不同佐剂对小鼠免疫应答有显著影响，低剂量抗原联合CpG-ODN和氢氧化铝混合佐剂可诱导小鼠产生较高的体液免疫和细胞免疫应答，其特异性IgG抗体和中和抗体水平分别是单独使用氢氧化铝佐剂组小鼠的2.2和1.8倍，分泌IFN-γ淋巴细胞数是其2.3倍。结论:新型CpG-ODN佐剂免疫能显著提高灭活HAdV-55全病毒抗原在BALB/c小鼠体内的免疫原性，同时使细胞免疫应答向偏向Th1型。

目的:初步评价自主构建的结核多组分重组蛋白疫苗EPRHP014免疫原性和保护效果，为研制结核新疫苗、有效防控结核病提供科学基础。方法:选择结核分枝杆菌全长蛋白抗原3种（EsxH、Rv2628和HspX）和经表位预测和优化的表位优势蛋白抗原2种（nPPE18和nPstS1），共5种组分构建蛋白抗原组合物EPRHP014，包括融合表达纯化的多组分蛋白抗原（EPRHP014f）和分别表达纯化单个蛋白构成多组分混合蛋白抗原（EPRHP014m）。EPRHP014f和EPRHP014m分别辅以铝佐剂制备多组分蛋白疫苗，采用卡介苗（BCG）作对照。皮下注射免疫BALB/c小鼠后，采用ELISA法检测血清特异性抗体效价，采用ELISpot和Luminex技术检测多种细胞因子分泌情况，采用结核分枝杆菌体外生长抑制试验观察其免疫保护作用。结果采用 t检验或秩和检验进行统计分析。 结果:EPRHP014m和EPRHP014f免疫小鼠后均能诱导产生高效价的IgG抗体及其亚型IgG1和IgG2a，抗体效价与BCG免疫组小鼠差异无统计学意义（ P>0.05）。EPRHP014f组诱导产生的分泌IFN-γ和IL-4的斑点形成细胞（SFC）数量均高于EPRHP014m组和BCG组（ P<0.05），而EPRHP014m组和BCG组的IFN-γ和IL-4的SFC数量差异无统计学意义（ P>0.05）。EPRHP014m组诱导分泌的GM-CSF、IL-12p70均高于BCG组（ P<0.05），而IL-6和IL-10分泌水平与BCG组的差异无统计学意义（ P>0.05）；EPRHP014f组和BCG组的IL-6、IL-10、IL-12和GM-CSF分泌水平差异无统计学意义（ P>0.05）。EPRHP014m组、EPRHP014f组和BCG组具有明显的体外抑菌作用，差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:EPRHP014f和EPRHP014m免疫后均能诱导小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫应答，且有较强的体外抑制结核分枝杆菌生长的能力，显示抗原组合物EPRHP014具有良好的结核疫苗研发和应用价值。

随着肿瘤免疫疗法的兴起，肿瘤疫苗作为其中一个越来越重要的研究领域，在肿瘤治疗中的应用价值也日益显现。免疫佐剂可增强疫苗的免疫原性、改变免疫应答类型、调节免疫应答强度，还可降低疫苗的使用剂量、提高疫苗安全性，故免疫佐剂在肿瘤免疫疫苗的发展中具有重要意义，对其研究也成为当下的研究热点。归纳了常用免疫佐剂的特点及其作用机制，并对已用于临床的3种传统佐剂（弗氏佐剂、油乳佐剂、铝盐佐剂）和目前研究较多的几种新型佐剂（脂质体、中药佐剂、小分子多肽佐剂、细胞因子佐剂、纳米佐剂）的特性进行了综述。

目的:利用毕赤酵母高效表达新型冠状病毒刺突蛋白受体结合域(receptor binding domain，RBD)，并评估以该RBD蛋白作为抗原所制备的疫苗组合物的免疫原性。方法:选取RBD蛋白并合成对应基因片段，将其构建至pPICZαA质粒，质粒经线性化转化后整合到毕赤酵母基因组中进行重组表达。Western blot和基于BLI(Biolayer Interferometry)技术的定量分析方法对培养上清中RBD蛋白进行检测，筛选能够分泌表达RBD蛋白的单克隆菌株。通过优化发酵工艺，包括培养基的盐浓度调整和诱导条件优化(pH、温度和时间等参数)，实现RBD蛋白的高效表达，并在小鼠体内评估其免疫原性。结果:筛选获得重组RBD蛋白表达效果较好的RBD-X33单克隆菌株。通过优化后的发酵工艺，即采用HBSM培养基、诱导pH为6.5±0.3、诱导温度为22℃、诱导时间持续120 h，实现发酵收获上清中重组RBD的表达量达到240 mg/L。在小鼠免疫原性试验中，采用铝+CpG双佐剂系统吸附重组RBD蛋白的疫苗组合物能够激发小鼠产生2.7×10 6结合抗体滴度和726.8活病毒(野生型)中和抗体滴度。 结论:采用毕赤酵母表达系统能够高效表达重组RBD蛋白，且所表达的RBD蛋白能够有效激发动物产生免疫应答。本研究为基于RBD蛋白的重组新型冠状病毒疫苗的开发提供了参考。

目的:探讨新疆栽培荒漠肉苁蓉醇提物（EECCD）的免疫调节活性。方法:以卵清蛋白（OVA）为抗原，将ICR小鼠分为9 g/L NaCl组（空白对照组）、EECCD组（1 200 μg EECCD）、OVA组（10 μg OVA）、低剂量EECCD/OVA组（400 μg EECCD+10 μg OVA）、中剂量EECCD/OVA组（800 μg EECCD+10 μg OVA）、高剂量EECCD/OVA组（1 200 μg EECCD+10 μg OVA）和铝佐剂（Alum）/OVA组（200 μg Alum+10 μg OVA）。皮下免疫小鼠，初免14 d后加强免疫1次。采用间接酶联免疫吸附测定法检测OVA特异性抗体水平，噻唑蓝法检测脾淋巴细胞增殖水平，流式细胞术检测白细胞介素-4（IL-4）和γ-干扰素（IFN-γ）水平，并检测EECCD对树突状细胞（DCs）共刺激分子的表达和CD4 +CD25 +Foxp3 +调节性T细胞的影响。 结果:EECCD可提高抗体水平，具体表现为：低、中、高剂量EECCD/OVA均提高了OVA特异性IgG抗体滴度，中剂量EECCD/OVA组抗体滴度达25万，与Alum/OVA组相当；中剂量EECCD/OVA明显提高了OVA特异性IgG1水平（ P<0.01），且与Alum/OVA组相比差异无统计学意义（ P>0.05）；中剂量和高剂量EECCD/OVA明显提高了IgG2a水平（均 P<0.01），且中剂量EECCD/OVA组明显高于Alum/OVA组（ P<0.01）。由此筛选出中剂量EECCD为最佳剂量。中剂量EECCD/OVA能明显提高脾淋巴细胞的增殖水平（ P<0.05），促进CD4 + T细胞分泌IL-4和IFN-γ（均 P<0.01），还可明显提高DCs表面分子（CD40、CD80、CD86、MHCⅡ）的表达（均 P<0.05），降低CD4 +CD25 +Foxp3 +调节性T细胞的表达（ P<0.05）。 结论:EECCD具有良好的免疫调节活性，能促进偏向Th1型免疫应答，对疾病的预防和治疗具有潜在的作用。

目的:初步评价新型结核融合型多组分蛋白候选疫苗EPDPA015f和混合型多组分蛋白候选疫苗EPDPA015m的免疫原性和有效性，为研制结核疫苗提供新的抗原组合。方法:将构建和表达的EPDPA015f和EPDPA015m蛋白与铝佐剂混合，采用皮下多点的方式对6周龄BALB/c小鼠进行3次免疫，间隔为10 d，每次50 μg/只。末次免疫10 d后采集血液和脾脏样本。采用酶联免疫吸附试验、多重微球技术、酶联免疫斑点法检测血清抗体滴度、细胞因子分泌水平；采用体外结核分枝杆菌生长抑制试验检测小鼠脾细胞体外抑制结核分枝杆菌生长的能力。多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用 t检验。 结果:EPDPA015f和EPDPA015m均可诱导产生多种高水平的细胞因子和较高滴度的IgG抗体。与佐剂组相比，EPDPA015f组诱导产生Th1(IL-2、TNF-α、IFN-γ)、Th2(IL-4、IL-6、IL-10)、Th17(IL-17)型细胞因子及其他促炎细胞因子(GM-CSF、IL-12)的差异有统计学意义( P均<0.05)；EPDPA015f组诱导产生的IgG抗体滴度高达1∶4×10 6。体外结核分枝杆菌生长抑制试验结果显示，PBS组、佐剂组、EPDPA015f组和EPDPA015m组的菌落数(lgCFU)分别为3.46±0.11、3.51±0.06、2.98±0.09和3.19±0.08；其中EPDPA015f组的菌落数最少，与其他组比较差异均有统计学意义( P<0.001, P<0.001和 P<0.01)。 结论:EPDPA015f引起较为全面且高水平的细胞免疫和体液免疫应答，并表现出较优的体外分枝杆菌抑制能力，具有作为预防型疫苗或加强型疫苗的潜力。