目的:探讨雄蚕益肾方含药血清对H2O2诱导小鼠睾丸间质细胞氧化应激损伤后铁死亡的影响.方法:应用H2O2诱导小鼠TM3 睾丸间质细胞建立氧化应激损伤模型,将诱导成模的TM3 细胞随机分为模型组、雄蚕益肾方组、铁死亡抑制剂 Ferrostatin-1 组、Ferrostatin-1 联合雄蚕益肾方组,分别用空白血清、20%含药血清、2 μmol/L Ferrostatin-1、2 μmol/L Ferrostatin-1+20%含药血清干预,另设置对照组(正常TM3 细胞+空白血清).观察各组细胞形态,检测各组细胞分泌的睾酮、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、铁蛋白重链1(FTH1)、溶质载体家族7 成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶 4(GPX4)、脂肪酸辅酶A连接酶4(FACL4)、总铁离子及亚铁离子含量.结果:与模型组比较,对照组ROS、MDA、FACL4、总铁和亚铁离子表达均显著降低(P<0.05),睾酮、SOD、谷胱甘肽、FTH1、SLC7A11 及GPX4 表达均显著升高(P<0.05);雄蚕益肾方组能显著促进TM3 细胞分泌睾酮并上调TM3 细胞FTH1、SLC7A11、GPX4、GSH和SOD表达(P<0.05),显著下调ROS、MDA、FACL4、总铁离子和亚铁离子表达(P<0.05).结论:H2O2 暴露后可通过氧化应激诱导小鼠TM3 睾丸间质细胞发生铁死亡,雄蚕益肾方可能通过激活SLC7A11/GSH/GPX4 轴拮抗TM3 细胞氧化应激损伤及铁死亡,这可能是雄蚕益肾方治疗男性迟发性性腺功能减退症的潜在作用机制.

目的:探讨雄蚕益肾方对雄性迟发性性腺功能减退症(LOH)大鼠睾丸组织细胞生物钟基因表达的影响.方法:48 只 8 周龄雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,丙酸睾酮组,雄蚕益肾方低、中、高剂量组.模型组,丙酸睾酮组,雄蚕益肾方低、中、高剂量组大鼠腹腔注射480 mg/(kg·d)D-半乳糖(D-gal),连续注射 56d进行LOH造模,正常组大鼠每日腹腔注射相同体积生理盐水.造模成功后,雄蚕益肾方低、中、高剂量组分别给予10.4、20.8、41.6 g/(kg·d)体重剂量的雄蚕益肾方中药汤剂灌胃,每组每日均早、晚各灌胃 1 次;丙酸睾酮组大鼠肌注5.21 mg/(kg·d)体重剂量的丙酸睾酮,每周3 次;正常组和模型组给予相同体积的蒸馏水灌胃;各组均连续操作28d.实验结束后,采血离心取上清液ELISA法检测睾酮(T)水平,取睾丸组织进行RT-qPCR、Western印迹分别检测BMAL1、NR1D1、PER2、CRY1、StAR、CYP11A1 mRNA表达量和蛋白表达水平.结果:模型组大鼠血清睾酮水平、睾丸组织BMAL1、NR1 D1、PER2、CRY1、StAR、CYP11 A1 在mRNA表达量和蛋白表达水平均显著低于正常组(P＜0.05);与模型组相比,丙酸睾酮组、雄蚕益肾方低、中、高剂量组大鼠血清睾酮 显著升高(P＜0.05),雄蚕益肾方高剂量组大鼠睾丸组织StAR mRNA表达量、CYP11A1 mRNA表达量和蛋白表达水平显著升高(P＜0.05),雄蚕益肾方低、中、高剂量组大鼠睾丸组织StAR蛋白表达水平显著升高(P＜0.05),丙酸睾酮组、雄蚕益肾方低、中、高剂量组大鼠睾丸组织BMAL1、NR1 D1 蛋白表达水平及PER2 蛋白表达水平和mRNA表达量显著升高(P＜0.05),雄蚕益肾方中、高剂量组大鼠睾丸组织BMAL1 mRNA表达量、CRY1 蛋白表达水平显著升高(P＜0.05),雄蚕益肾方低、中、高剂量组大鼠睾丸组织NR1D1 mRNA表达量显著升高(P＜0.05),丙酸睾酮组、雄蚕益肾方中、高剂量组大鼠睾丸组织CRY1 mRNA表达量显著升高(P＜0.05).结论:雄蚕益肾方能上调LOH大鼠睾丸组织生物钟基因BMAL1、NR1D1、PER2、CRY1 以及睾酮合成相关基因StAR、CYP11A1 mRNA表达量和蛋白表达水平,同时提高血清睾酮水平,可能是雄蚕益肾方干预LOH的机制之一.

目的 观察雄蚕益肾方联合小剂量睾酮补充治疗男性迟发性性腺功能减退症(late-onset hypogonadism,LOH)的临床疗效.方法 将符合LOH诊断标准的106例患者按随机数字表法分为对照组和试验组各53例,对照组采用常规睾酮补充治疗,试验组服用雄蚕益肾方联合小剂量睾酮补充治疗,疗程均为3个月.比较两组治疗前后的老年男性症状量表(AMS)评分、血清性激素水平及中医证候评分.结果 (1)两组治疗后较治疗前AMS各项症状评分和总分均有显著下降(P<0.05),总睾酮(TT)水平及睾酮分泌指数(TSI)值均显著提高(P<0.05),促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平均下降(P<0.05),且试验组改善效果优于对照组(P<0.05).(2)两组治疗后较治疗前中医症状分级量化评分均显著下降(P<0.05),且试验组下降更为明显(P<0.05);试验组的中医证候改善总有效率达81.1％,明显高于对照组的54.7％(P<0.05).结论 雄蚕益肾方联合小剂量睾酮补充治疗LOH疗效确切.

目的 观察雄蚕益肾方联合小剂量他达拉非治疗男性迟发性性腺功能减退症(LOH)伴男性勃起功能障碍(ED)患者的临床疗效.方法 选取2015年10月至2016年12月湖南中医药大学第一附属医院诊治的106例符合LOH伴ED诊断的男性患者作为研究对象.按随机数字表法分为对照组和试验组各53例.对照组服用正常剂量他达拉非,试验组服用雄蚕益肾方联合小剂量他达拉非,疗程均为1个月.比较组内和组间治疗前后的老年男子症状(AMS)量表评分、国际勃起功能指数(ⅡEF-5)、血清总睾酮(TT)、游离睾酮(FT)水平以及治疗期间不良反应的发生情况.结果 ①试验组治疗后与对照组治疗后比较,AMS评分显著下降,ⅡEF-5评分、血清TT及FT水平显著提高,两组比较具有差异具有统计学意义(P＜0.05).②试验组治疗期间不良反应的发生率明显小于对照组.结论 雄蚕益肾方联合小剂量他达拉非治疗LOH伴ED疗效显著且安全.

目的:探讨雄蚕益肾方对肝郁肾虚阳痿大鼠性腺轴及睾丸P450scc、StAR、NR5A1表达的影响.方法:50只8周龄SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、他达拉非组、疏肝益肾组和雄蚕益肾方低、中、高剂量组,采用氢化可的松注射液肌注加束缚四肢复合造模方法连续14d诱发肝郁肾虚阳痿模型.造模成功后,他达拉非组给予他达拉非片溶液0.52mg·kg-1·d-1灌胃,疏肝益肾组给予疏肝益阳胶囊溶液0.3125g·kg-1·d-1灌胃,雄蚕益肾方低、中、高剂量组给予10.4、20.8、41.6g·kg-1·d-1雄蚕益肾方溶液灌胃,空白组、模型组给予等体积蒸馏水灌胃,各组每日均早、晚各灌胃1次,连续28d.ELISA法测定血清中睾酮(T)、促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)含量,HE染色光镜下观察睾丸微细结构,免疫组化法测定睾丸P450scc、StAR、NR5A1表达情况.结果:与空白组比较,模型组大鼠血清中T含量及睾丸中P450scc、StAR、NR5A1表达均显著降低(P＜0.05).与模型组比较,疏肝益阳组和雄蚕益肾方各剂量组血清T及睾丸中P450scc表达均显著升高(P＜0.05);雄蚕益肾方各剂量组大鼠睾丸中StAR表达均显著升高(P＜0.05),血清FSH水平均显著降低(P＜0.05);雄蚕益肾方高、中剂量组大鼠睾丸中NR5A1表达显著升高(P＜0.05).结论:雄蚕益肾方可调节性腺轴和提高P450scc、StAR、NR5A1表达.