目的 构建1条新的人集成干扰素α(consensus interferon α,cIFNα)序列,并验证其抗病毒效果.方法 综合57条人源IFNα序列,经软件比对分析选出各个位点保守氨基酸偏好性,人工合成新的cIFN序列hIC至pUC-57载体中,与pCK连接,构建真核表达载体pCK-hIC,转染293T细胞表达目的蛋白hIC;于增强型绿色荧光蛋白水疱性口炎病毒(enhanced green fluorescent protein vesicular stomatitis virus,VSV-EGFP)感染 A549 细胞前后用其孵育细胞,经荧光观察、结晶紫染色和流式细胞术体外分析hIC对VSV-EGFP复制的影响,并通过qPCR法验证IFN下游基因的表达.结果 质粒pCK-hIC经双酶切及测序鉴定证明构建正确.表达的hIC蛋白相对分子质量约27 000,能明显降低VSV-EGFP的荧光表达,明显抑制病毒增殖,并可激活IFN刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG15)、2'-5'寡腺苷酸合成酶 1(2'-5'-oligoadenylate synthetase 1,OAS1)、IFN 诱导跨膜蛋白(interferon-inducible transmembrane protein,IFITM)的表达.结论 hIC具有良好的抗病毒效果,为后续研究及开发奠定了基础.

背景:生物反应器内球形体培养是既能维持间充质干细胞干性又能大规模扩增的体外培养方法,明确其对干细胞免疫调节作用的影响有利于指导临床应用.目的:探讨旋转生物反应器内球形体培养对人胎盘间充质干细胞炎症因子分泌的影响.方法:从人胎盘组织中分离培养人胎盘间充质干细胞,分别进行二维培养和旋转生物反应器培养,利用倒置相差显微镜、免疫组化染色和CCK-8实验观察细胞形态与增殖能力,RT-qPCR和流式荧光法检测多种炎症因子基因表达与蛋白分泌量.结果与结论:①旋转生物反应器内培养的人胎盘间充质干细胞聚集成多细胞球形体,数量与体积逐渐增加;②苏木精-伊红染色可见旋转生物反应器内培养4 d的人胎盘间充质干细胞在球形体内分布均匀,形态正常;③免疫组化染色显示球形体内有大量人胎盘间充质干细胞的细胞核Ki-67阳性;④CCK-8实验结果显示,生物反应器内球形体培养的人胎盘间充质干细胞活力显著高于二维培养的细胞;⑤RT-qPCR和流式免疫荧光法检测结果显示,旋转生物反应器内球形体培养的人胎盘间充质干细胞中白细胞介素1β、白细胞介素4、白细胞介素6、白细胞介素8、白细胞介素10、白细胞介素17、肿瘤坏死因子α和干扰素α的基因表达量和蛋白分泌量显著高于二维培养的细胞;⑥结果表明,旋转生物反应器内球形体培养能显著提高人胎盘间充质干细胞分泌多种炎症因子的能力,加强人胎盘间充质干细胞的免疫调节作用.

目的 观察国产聚乙二醇化重组集成干扰素变异体注射液(PegIFN-SA)联合利巴韦林(RBV)治疗慢性丙型病毒性肝炎(CHC)患者时甲状腺功能异常(TD)或甲状腺自身抗体(TAs)产生情况及对疗效影响.方法 前瞻性观察2013年9月至2015年12月于本中心接受国产PegIFN-SA联合RBV治疗的CHC病例45例.试验组患者给予PegIFN-SA皮下注射(1.5μg/kg、1次/周),对照组患者给予聚乙二醇化干扰素α-2a(PegIFN-α-2a)皮下注射(派罗欣180μg、1次/周),两组患者均联合口服利巴韦林(1000~1200 mg/d),HCV基因2、3型患者治疗24周,非HCV基因2、3型患者治疗48周,停药后均随访6个月.在治疗前、治疗后每3个月及停药后6个月监测两组患者甲状腺功能及HCV RNA水平.结果 试验组慢性丙型肝炎患者30例,其中男性14例,女性16例,平均年龄为(36.5±12.0)岁(19~56岁),HCV基因2、3型患者6例,HCV非基因2、3型患者24例.治疗结束停药半年后HCV持续应答率为83.3%(25/30),共13例患者出现TD或TAs,其发生率为43.3%(13/30);9例发生TD患者中4例(44.4%)丙型肝炎复发,高于未出现TD者(1/21,4.8%),差异具有统计学意义(P=0.02).结论 国产PegIFN-SA联合RBV治疗慢性丙型病毒性肝炎患者甲状腺功能异常及抗体阳性较为常见,发生甲状腺功能异常者CHC更易复发.

目的：通过个体化护理干预方法,提高丙型肝炎患者抗病毒治疗的依从性,医患共同努力以获得更加长久和持续的病毒学应答。方法2011年9月—2012年5月将78例参加聚乙二醇化重组集成干扰素变异体( PEG-IFN-SA )临床试验的慢性丙型肝炎受试者随机分为观察组和对照组,每组39例。对照组按研究方案要求正常回访。观察组在给药后4,8,12,24周给予90项症状清单(SCL-90)问卷测试,了解每个患者在治疗过程中出现的社会、家庭、身心健康等方面的问题,针对性地进行护理干预。比较两组患者抗病毒治疗的完成情况和不良反应发生情况。结果观察组按照方案规定完成抗病毒治疗的人数为29例(74.36%),对照组为19例(48.7%),观察组完成率高于对照组,差异有统计学意义(χ2=5.41,P<0.05)。观察组平均完成周数为(32±8)周,对照组平均完成周数为(26±7)周,观察组平均完成周数长于对照组,差异有统计学意义(t=3.52,P<0.05)。观察组流感样症状和易激惹等情绪改变发生率均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)；甲状腺功能异常、眼痛、胃肠道反应、肌肉关节痛等其他不良反应发生率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。研究中共有5例患者有明显焦虑、抑郁症状,均发生在对照组。结论个性化护理干预有效解决了患者对干扰素抗HCV不良反应知识缺乏的问题,有效缓解丙肝患者由于不良反应所带来的负面情绪,减轻了精神异常发生的程度,增加了抗病毒治疗的信心,提高了丙肝患者的依从性和持续应答率。

[目的]探究清感秋饮(QGQY)防治咽炎的作用和可能的机制.[方法]网络药理学方面,借助中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和中医药证候关联数据库(SymMap)筛选QGQY的活性成分,通过TCMSP数据库检索与活性成分相关的作用靶点;通过人类基因数据库(GeneCards)和基因-疾病关联数据库(DisGeNET)获取咽炎相关靶点;取QGQY和咽炎靶点交集,构建蛋白相互作用(PPI)网络,利用注释可视化和集成发现数据库(DAVID)进行基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,预测QGQY抑制咽炎可能的作用靶点和信号通路.实验研究方面,以脂多糖(LPS)诱导的人单核细胞THP-1和小鼠巨噬细胞RAW264.7为炎症细胞模型,用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测QGQY对LPS诱导的THP-1细胞中炎症因子表达的影响;用一氧化氮(NO)试剂盒检测QGQY对LPS诱导的RAW264.7细胞NO释放的影响;通过双荧光素酶报告系统评价QGQY对炎症通路核因子κB(NF-κB)启动子活性的影响.[结果]网络药理学方法共筛选得到QGQY的活性成分191个,对应靶点276个;咽炎相关靶点562个,成分靶点与疾病靶点取交集共获得靶点59个;构建PPI网络,经拓扑及聚类分析后获得QGQY抑制咽炎的关键靶点包括信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)、干扰素诱导蛋白-10(IP-10)等,功能富集分析涉及生物过程、细胞组分、分子功能的GO条目共372个,主要参与药物反应、细胞凋亡、细胞外间隙、酶结合、细胞因子活性等方面,KEGG富集通路得到85条,主要包括TNF、缺氧诱导因子-1(HIF-1)、T细胞受体、NF-κB等炎症信号通路.细胞实验结果显示,QGQY可以显著降低LPS诱导的THP-1细胞中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、核因子κB抑制蛋白α(IKBα)和IP-10的表达以及RAW264.7细胞中NO的生成,还可以抑制TNF-α诱导的NF-κB启动子的活性.[结论]QGQY通过多成分、多靶点、多途径方式抑制咽炎的发生发展,并具有显著的抗炎作用.

目的 观察CRRT联合免疫吸附对重症系统性红斑狼疮患者免疫调节影响.方法 将31例重症SLE患者分为对照组、IA组及CRRT+IA组.所有患者入院后均按指南要求给予糖皮质激素和免疫抑制剂药物治疗.IA组采用在此基础上给予DNA免疫吸附治疗,CRRT+IA组在IA组基础上联合CRRT(连续性静-静脉血液滤过模式CVVH)治疗.疗程为收住风湿免疫科(重症监护病房)后连续3d.抽取治疗前和治疗后第3、7d静脉血,检测血清干扰素(INF)-α、白介素(IL)-6、IL-10浓度;抗核小体抗体、抗双链DNA(dsDNA)抗体水平以及免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、血清补体C3、C4水平.结果 治疗后3组患者的细胞因子浓度、 特异性自身抗体、 免疫球蛋白及补体水平等指标均较前有所好转.IA组抗核小体抗体、 抗双链DNA(dsDNA)抗体、免疫球蛋白IgG水平下降显著(P<0.05);CRRT+IA组较IA组血清干扰素(INF)-α、白介素(IL)-6、IL-10浓度下降显著(P<0.05),治疗7天后免疫球蛋白IgA、IgM水平下降显著(P<0.05)、血清补体C3、C4水平增高明显(P<0.05).结论对于重症系统性红斑狼疮患者,在传统的药物治疗基础上早期应用CRRT联合DNA免疫吸附这种集成血液净化模式治疗,能显著改善患者免疫紊乱状态,调节免疫功能,缓解及控制疾病进展.