目的 基于网络药理学、分子对接和体内实验方法探讨感冒清热片抗肺损伤的作用机制.方法 以中药系统药理学数据库和分析平台(TCM-SP)、Genecards等数据库,筛选感冒清热片治疗肺损伤的潜在作用靶点.采用Cytoscape 3.9.0 软件构建"中药-有效成分-靶点"网络,并用生物信息云平台对潜在作用靶点进行基因本体(GO)功能与京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.建立蛋白互作(PPI)网络,并与"中药-有效成分-靶点"网络进行交集分析,筛选关键靶蛋白.将关键靶蛋白和有效成分进行分子对接.建立肺损伤小鼠模型验证感冒清热片对关键靶标蛋白的作用.结果 共筛选出感冒清热片治疗肺损伤的作用靶点 707 个,对应11 味中药中 107 种化合物.利用构建的"中药-有效成分-靶点"网络发现感冒清热片可能通过豆甾醇、芦丁、金合欢素等有效成分对前列腺素G/H合成酶 1(PTGS1)、雄激素受体(AR)、乙酰胆碱酯酶(ACHE)等作用靶点进行调控.利用PPI网络发现SRC酪氨酸激酶(SRC)、表皮生长因子受体(EGFR)、信号转导因子和转录激活因子 3(STAT3)等核心靶点.通过PPI网络与"中药-有效成分-靶点"网络交集分析,筛选出关键靶标蛋白周期蛋白依赖性激酶 1(CDK1)、CDK2、EGFR、雌激素受体 1(ESR1)和SRC.分子对接研究显示,感冒清热片中的豆甾醇、芦丁、金合欢素分别与CDK1、CDK2、EGFR、ESR1、SRC有较好的结合能力.体内实验发现感冒清热片可剂量依赖性地减轻肺损伤小鼠的肺组织损伤、炎性浸润,降低TNF-α、IL-1β、IL-6 的含量,增强CDK1、CDK2 的表达,降低EGFR、ESR1 和SRC的表达.结论 感冒清热片对肺损伤的治疗作用可能通过其所含的豆甾醇、芦丁、金合欢素等关键活性成分,作用于CDK1、CDK2、EGFR、ESR1、SRC等关键靶标蛋白,调控神经活性配体-受体相互作用、癌症途径、钙信号通路等关键信号通路来实现的.

芒柄花素是一种天然异黄酮类化合物,广泛存在于黄芪、葛根、鸡血藤、红三叶草等中药中,是典型的植物雌激素,能双向调节雌激素活性.现代药理研究表明,芒柄花素可通过雌激素依赖或独立机制发挥多种潜在的药理作用,包括雌激素样作用、抗炎、抗氧化、抗增殖活性等.这种活性成分在多种慢性疾病,如心脑血管疾病、代谢性疾病、骨质疏松、恶性肿瘤、肝肾功能损伤等疾病中也显示出预防和治疗的潜力,主要涉及沉默调节蛋白 1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、PPARγ、核转录因子-κB(NF-κB)、核转录因子红细胞相关因子 2/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)、内皮型一氧化氮合酶/一氧化氮(eNOS/NO)、B淋巴细胞瘤-2 相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)等信号通路的调节.对芒柄花素的多种生物学作用和其所涉及的信号通路进行综述,以期为芒柄花素的基础研究和临床应用提供参考.

目的:探讨雌激素受体α（ERα）、雌激素受体β（ERβ）在中国女性食管鳞状细胞癌（ESCC）中的表达及其与患者临床病理特征、婚育因素的关系和对预后的影响。方法:选取河南省南阳市中心医院2001年1月至2016年12月女性原发性ESCC患者110例。免疫组织化学法（IHC）检测ESCC组织中ERα、ERβ蛋白表达水平。logistic回归分析ERα、ERβ表达与患者婚育因素（经期状态、初潮年龄、初次生育年龄、妊娠次数）及临床病理特征（肿瘤部位、肿瘤浸润深度、有无淋巴结转移、肿瘤分期）的关系；Kaplan-Meier法进行生存分析，并行log-rank检验；Cox比例风险模型进行多因素生存分析。结果:ERα、ERβ蛋白在女性ESCC组织中阳性表达率为37.3%（41/110）、64.5%（71/110）。ERβ表达与肿瘤部位（ χ2=6.999， P=0.030）、肿瘤分期（ χ2=11.097， P<0.01）和妊娠次数（ χ2=6.304， P=0.012）有关。妊娠次数>3次（ HR=2.553，95% CI 1.051～6.203， P=0.039）、ERβ阳性（ HR=2.580，95% CI 1.966～3.386， P<0.01）是患者生存独立保护因素；ERα阳性（ HR=0.530，95% CI 0.384～0.739， P<0.01）、淋巴结转移（ HR=0.663，95% CI 0.512～0.858， P=0.002）是患者生存独立危险因素。 结论:ERα和ERβ表达可预测女性ESCC患者预后。

目的:探讨乳腺导管原位癌（DCIS）X线摄影表现与病理学免疫组织化学分型的关系。方法:回顾性分析2016年1月至2019年10月在青岛大学附属医院经手术病理证实的505例DCIS患者共514个病灶的资料。根据免疫组织化学结果将全部DCIS病灶分为雌激素受体（ER）阳性型（215个病灶）、人表皮生长因子受体2（HER2）阳性型（282个病灶）和三阴性型（17个病灶）。患者术前均接受X线摄影检查，参照乳腺影像报告及数据系统（BI-RADS）标准分析不同分子分型患者的影像学表现，如病变类型，钙化性病变的钙化形态、分布，乳腺构成及BI-RADS分类情况。采用χ2检验或Fisher确切概率法分析不同分子分型DCIS患者影像表现分布的差异，两两比较时检验水准α采用Bonferroni校正法。结果:ER阳性型44.7%（96/215）表现为阴性或非钙化性病变；HER2阳性型41.1%（116/282）表现为钙化伴肿块/非对称致密/结构扭曲；三阴性型82.4%（14/17）为钙化性病变，包括单纯钙化（7/17）和钙化伴肿块/非对称致密/结构扭曲（7/17）。DCIS HER2阳性型与ER阳性型在病变类型方面差异有统计学意义（χ2=13.747， P=0.003）。细线样/细小分支状钙化（34/201）多见于HER2阳性型，无定形钙化（67/119）多见于ER阳性型，差异有统计学意义（χ2=27.498， P<0.001）。团簇状分布钙化（59/119）多见于ER阳性型，线样/段样分布（76/201）多见于HER2阳性型，差异有统计学意义（χ2=13.123， P=0.004）。 结论:DCIS的X线表现与其病理学免疫组化不同分型有一定关系，认识其X线表现有助于为临床个性化治疗和预后提供更多依据。

目的:探讨G蛋白偶联受体30(GPR30)抑制TLR4/NF-κB通路减少蛛网膜下腔出血(SAH)后神经元凋亡的作用及其机制。方法:采用随机分组的方式将SD雄性大鼠随机分为假手术组(Sham组 n＝24，Sham 2组 n＝21)、SAH模型组(SAH组 n＝24，SAH 2组 n＝21)及SAH模型+G1激动剂组(简称G1组， n＝24)。通过颈内动脉穿刺法进行SAH模型的构建。采用Sugawara评分评价大鼠SAH的严重性。SAH后24 h采用Garcia评分和平衡木试验评分评定神经功能缺损程度。成功建模24 h后，称重脑组织湿重和干重，计算脑组织含水率。绘制伊文思蓝标准曲线，评估血脑屏障通透性。采用免疫荧光染色观察各组小胶质细胞活化情况。采用蛋白质免疫印迹法(WB)检测各组GPR30、TLR4及NF-κB蛋白的表达情况；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组外周血TNF-α、IL-1β和IL-6促炎细胞因子的表达情况；采用TUNEL法检测神经元凋亡情况。 结果:与SAH组相比，G1组Sugawara评分降低、平衡木试验评分和Garcia评分升高、脑含水率和伊文思蓝的渗出率均降低(均 P<0.05)。随着时间的变化，Sham 2组GPR30表达量无明显变化( P>0.05)，建模后6、12、24、48和72 h，SAH 2组的GPR30表达量均较Sham 2组高，SAH 2组建模24 h的GPR30表达量最高，而后下降(均 P<0.05)。Sham组、SAH组与G1组三组间比较，GPR30、TLR4和NF-κB表达量的差异均有统计学意义(均 P<0.05)，其中G1组较SAH组TLR4和NF-κB表达量下降(均 P<0.05)。免疫荧光染色结果显示，SAH组小胶质细胞数目较Sham组增多，而G1组较SAH组的小胶质细胞减少。ELISA结果显示，SAH组、Sham组与G1组的TNF-α、IL-1β及IL-6的表达差异均有统计学意义(均 P<0.05)，其中，与SAH组比较，G1组的TNF-α、IL-1β及IL-6的表达均降低(均 P<0.05)。TUNEL法染色结果显示，SAH组的TUNEL阳性细胞数较Sham组增加，而G1组较SAH组的TUNEL阳性细胞数减少。 结论:GPR30活化后可能通过抑制TLR4/NF-κB通路减少SAH后的神经元凋亡，改善SAH后早期脑损伤，保护神经功能。

外阴叶状肿瘤是一种罕见的疾病，目前国内外报道不足20例，其大多数为良性肿瘤。外阴叶状肿瘤的来源有两种假说，一是起源于外阴异位乳腺组织，即“乳房线”学说；二是来源于肛门-生殖器乳腺样腺体，可分泌雌、孕激素，具有分化成良、恶性肿瘤的潜力。本文报道1例16岁青春期女性原发性外阴叶状肿瘤，单侧发病，肿瘤切面为典型叶状肿瘤外观，行外阴肿物剥除术，术后病理检查可见肿瘤表面被覆腺上皮和肌上皮，梭形间质细胞丰富，管内生长呈叶状结构；免疫组化法检测显示腺上皮细胞中雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、转录因子GATA结合蛋白3（GATA3）表达阳性，肌上皮细胞中细胞增殖相关核抗原（Ki-67）、α平滑肌肌动蛋白（SMA）、p63表达阳性，符合良性叶状肿瘤的诊断。通过总结本例患者的临床表现、肿瘤形态、病理检查等情况，以期对外阴叶状肿瘤的发生、发展、诊断及治疗有进一步的认识。

目的:探讨雌激素受体(ESR1)对乳腺癌细胞辐射抗性的影响及分子机制。方法:在雌激素受体阴性乳腺癌细胞中转染ESR1过表达质粒(过表达对照vector组、过表达ESR1 OE组)，在雌激素受体阳性乳腺癌细胞中通过慢病毒转染方法构建稳定敲低ESR1(敲低对照shNC组、敲低shESR1组)的细胞模型，采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)和免疫印迹方法检测自噬相关基因mRNA(ATG5)和蛋白表达水平(LC3B-I、LC3B-II、P62、FIP200、ATG5、ATG7、ATG12、Beclin1、ULK1)；在8 Gy X射线的电离辐射处理下，免疫印迹法检测自噬通量；采用流式细胞术检测细胞死亡；采用集落形成实验检测乳腺癌细胞辐射敏感性(未照射sham组、照射IR组、电离辐射联合铁死亡抑制剂处理Fer-1＋IR组、电离辐射联合凋亡抑制剂处理Z-VAD＋IR组、电离辐射联合自噬抑制剂处理CQ＋IR组)；用台盼蓝染色检测自噬基因敲低和过表达细胞模型以及雌激素受体抑制剂他莫昔芬(TAM)与电离辐射联合治疗下乳腺癌细胞的死亡率(他莫昔芬未处理TAM－组、他莫昔芬处理TAM＋组)。结果:在8 Gy X射线照射后24 h处理条件下，雌激素受体阳性乳腺癌ZR75细胞ESR1的敲低促进细胞死亡( t＝3.49、3.13, P < 0.05)，而雌激素受体阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞ESR1的过表达抑制细胞死亡( t＝4.16、7.48, P < 0.05)；与单纯照射相比，自噬抑制剂氯喹的处理后增加了敲低ESR1的ZR75细胞集落形成数量( t＝8.49, P < 0.05),抑制自噬可以减少沉默ESR1所致的ZR75细胞死亡。在电离辐射处理下，MDA－MB－231细胞过表达ESR1促进了细胞保护性自噬；ZR75细胞敲低ESR1后细胞保护性自噬降低。在ZR75细胞中敲低ATG5发现自噬降低，细胞死亡增加( t＝4.19、6.39, P < 0.05)，而在ZR75中过表达ATG5可以逆转因敲低ESR1导致的细胞死亡增加( t＝1.70、4.65, P < 0.05)。化疗药物他莫昔芬处理雌激素受体阳性乳腺癌细胞ZR75后发现自噬基因ATG5、ATG12的表达下降，自噬抑制，细胞死亡增加( t＝18.70, P < 0.05)，电离辐射处理促进了这一进程( t＝16.82, P < 0.05)。 结论:雌激素受体ESR1通过增加ATG5自噬相关蛋白，促进雌激素受体阳性乳腺癌细胞的保护性自噬，从而导致雌激素受体阳性乳腺癌细胞的辐射抵抗，化疗药物他莫昔芬联合电离辐射治疗增加了雌激素受体阳性乳腺癌细胞的辐射敏感性。

目的:观察雌激素受体α(ERα)在腺性肥大乳房乳腺组织和上皮细胞中的定位和表达，探讨其在腺性乳房肥大症病因学上的意义。方法:对10例腺性乳房肥大症患者和正常体积乳房乳腺上皮细胞进行原代培养，采用免疫组织化学法(IHC)和免疫荧光组织化学法(IFHC)对乳腺组织的病理学特点进行观察，采用蛋白质印迹法(Western blot)检测组织及细胞中ERα蛋白的表达量。组间比较采用单因素方差分析。结果:ERα表达于导管和小叶的腔上皮细胞内，在肌上皮细胞和间质细胞等细胞内几乎不表达，且腺性肥大乳房乳腺组织导管上皮处ERα阳性细胞数多于小叶，两者比例较为恒定(1.7∶1.0)。ERα阳性细胞在腺性肥大乳房和正常体积乳房乳腺组织中的阳性表达率(PER)分别为17.25%和6.13%。腺性肥大乳房组、正常体积乳房组细胞株中的ERα蛋白表达值(PEV)为1.965和1.002。腺性肥大乳房乳腺组织中ERα PER和ERα PEV与正常体积乳房组间差异有统计学意义( P<0.05)，且PER和ERα PEV与乳房肥大的严重程度呈正相关。 结论:ERα在乳腺组织内的表达定位具有特征性。与正常体积乳房乳腺上皮细胞比较，腺性肥大乳房乳腺上皮细胞的ERα PER和ERα PEV均明显增高，且ERα表达情况的高低与乳房肥大的严重程度成正相关。由此推测，腺性乳房肥大症的发生与乳腺组织内ERα的分布特点和上皮细胞内ERα表达增多有密切关。

目的:构建雌激素受体α配体结合域(ERα-LBD)表达载体，优化表达条件得到可溶性ERα-LBD蛋白。方法:在Addgene网站检索关键词ESR(雌激素受体，estrogen receptor)，选择符合条件的质粒载体pcDNA-HA-ER WT(Addgene plasmid # 49498; http：//n2t.net/addgene：49498; RRID：Addgene_49498)，设计引物并扩增得到目的片段ERα-LBD，分别构建蛋白表达载体pET-28a-LBD和pGEX-4T1-LBD，改变诱导温度、异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)浓度以及诱导时间对表达条件优化。待细菌裂解并提取蛋白后进行凝胶电泳，可在细菌上清的泳道中观察到明显的紫色蛋白表达条带，即为可溶性ERα-LBD蛋白。结果:pET-28a-LBD重组质粒未能表达重组蛋白ERα-LBD，重组质粒pGEX-4T1-LBD在Rosetta和BL21(DE3)感受态中以1 mmol/L IPTG诱导仅能得到包涵体；以0.2 mmol/L IPTG 16 ℃过夜诱导培养，则可得到可溶性ERα-LBD蛋白。结论:成功构建ERα-LBD表达载体并优化诱导表达条件，获得可溶性ERα-LBD蛋白。

目的:分析雌激素受体α（ERα）蛋白和BRAF V600E蛋白在甲状腺乳头状癌（PTC）中的表达及其与PTC临床病理因素之间的关系。 方法:采用免疫组化染色的方法检测ERα蛋白和BRAF V600E蛋白在1 105例PTC组织中的表达，分析ERα和BRAF V600E蛋白表达与PTC临床病理因素的关系，以及ERα与BRAF V600E蛋白表达之间的关系。 结果:ERα蛋白阳性表达与男性（χ 2=6.087， P=0.001）、年龄<45岁（χ 2=5.197， P=0.023）及多灶性肿瘤（χ 2=4.446， P=0.035）均有关；BRAF V600E蛋白阳性表达与ERα蛋白阳性（χ 2=6.209， P=0.013）、非桥本甲状腺炎（χ 2=29.388， P<0.001）、无侧方淋巴结转移（χ 2=6.849， P=0.009）及多灶性肿瘤（χ 2=9.596， P=0.035）均有关。 结论:男性、年龄<45岁、多灶性肿瘤及BRAF V600E蛋白阳性的PTC患者更容易出现ERα蛋白阳性表达；BRAF V600E蛋白可能抑制桥本甲状腺炎、肿瘤生长及侧方淋巴结转移的发生，促进多灶性肿瘤的发生。