目的:探讨P-选择素糖蛋白配体-1(PSGL-1)在急性重症胰腺炎发生发展中的作用。方法:取6～8周龄PSGL-1敲除基因小鼠8只(购自中国医学科学院医学实验动物研究所)，C57BL/6小鼠8只(购自北京华阜康生物科技股份有限公司)，随机分为PSGL-1敲除基因对照组、PSGL-1敲除基因造模组、野生型对照组、野生型造模组，采用雨蛙肽(Caerulein)和脂多糖(LPS)联合腹腔注射构建急性重症胰腺炎小鼠模型；蛋白质印迹法(Western blot)检测胰腺组织白细胞介素(IL)-6和IL-1β的表达；苏木精-伊红(HE)染色检测胰腺组织病理损伤程度；免疫组织化学法检测胰腺组织中髓过氧化物酶(MPO)和F4/80的表达。组间比较采用单因素方差分析和LSD- t检验；计数资料采用率值表示，组间比较采用 χ2检验。 结果:野生型小鼠造模组胰腺组织中IL-6(5.32±0.08)、IL-1β(1.54±0.19)的表达高于对照组(1.00±0.15、1.00±0.23)，差异有统计学意义( t＝6.707， P<0.01； t＝5.828， P<0.01)；PSGL-1敲除基因小鼠造模组的胰腺病理损伤(1.2±0.8)低于野生型小鼠造模组(3.4±0.5)，差异有统计学意义( t＝4.914， P<0.01)；PSGL-1敲除基因小鼠造模组胰腺中性粒细胞[(0.12±0.09)个]和单核细胞[(0.18±0.06)个]的浸润低于野生型小鼠造模组[(0.53±0.23)、(0.55±0.03)个]，差异有统计学意义(单核细胞 t＝4.220， P<0.01；中性粒细胞 t＝4.211， P<0.01)；PSGL-1敲除基因小鼠造模组胰腺组织IL-6(0.89±0.20)和IL-1β(2.54±0.17)的表达低于野生型小鼠造模组(5.32±0.08、1.54±0.19)，差异有统计学意义( t＝4.843， P<0.01； t＝3.326， P<0.05)。 结论:PSGL-1可能通过诱导中性粒细胞和单核细胞浸润参与急性重症胰腺炎的发生发展。

目的:探讨拓扑异构酶I抑制剂喜树碱对AP小鼠胰腺腺泡细胞和肺组织的保护机制。方法:18只Balb/C雄性小鼠按照数字表法随机分为对照组、AP组和喜树碱干预组(喜树碱组)。AP组采用腹腔注射雨蛙肽和脂多糖的方法制备AP模型，喜树碱组于制模前腹腔注射50 mg/kg喜树碱，对照组腹腔注射等体积生理盐水。常规行胰腺和肺组织病理学检查。分别采用ELISA法检测血清淀粉酶和脂肪酶水平；荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测胰腺组织炎症因子IL-1、IL-6 mRNA表达量；免疫组织化学法检测胰腺和肺组织CD 45+炎症细胞浸润以及胰腺组织程序性坏死标志蛋白混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)磷酸化水平；TUNEL法检测胰腺组织细胞凋亡指数。 结果:喜树碱组的胰腺组织病理评分、肺组织病理评分、血清淀粉酶和脂肪酶含量分别为(2.30±0.31)分、(2.29±0.34)分、(1742.33±183.51)U/L和(46.90±2.17)U/L，均显著低于AP组的(5.06±0.88)分、(3.40±0.09)分、(2385.33±383.10)U/L和(69.13±9.76)U/L；胰腺组织IL-1、IL-6 mRNA表达量分别为95.79±48.11、255.50±213.32，均显著低于AP组的212.35±80.61、1006.80±509.06；胰腺和肺组织CD 45+细胞数分别为(14.25±5.32)、(29.20±4.44)个/高倍视野，均显著低于AP组的(59.83±13.67)、(58.25±5.91)个/高倍视野。与AP组比较，喜树碱组胰腺组织细胞凋亡指数显著升高[(3.64±1.16)%比(1.92±0.29)%]，磷酸化MLKL蛋白免疫组织化学评分显著降低[(1.75±0.20)分比(4.53±1.28)分]，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。 结论:拓扑异构酶I抑制剂喜树碱可能通过诱导胰腺腺泡细胞凋亡并抑制腺泡细胞坏死重塑AP小鼠腺泡细胞死亡方式，进而减轻胰腺局部损伤及急性胰腺炎相关肺损伤。

目的:探讨益生菌植物乳杆菌WCFS1(LP)灌胃对急性坏死性胰腺炎(ANP)小鼠胰腺及回肠损伤的影响。方法:24只健康雄性小鼠应用广谱抗生素持续灌胃3周以建立肠道无菌鼠，然后随机分为正常对照组(CON组)、ANP模型组(ANP组)、LP灌胃组(LP组)和LP灌胃后再诱导ANP组(LP+ANP组)，每组6只。LP组与LP+ANP组给予1×10 9 CFU/ml、0.2 ml/d的LP灌胃1周，CON组与ANP组以0.2 ml/d无菌磷酸盐缓冲液灌胃1周。采用雨蛙肽(100 μg/kg)腹腔注射10次，每次间隔1 h，第10次注射时腹腔加注脂多糖5 mg/kg的方法构建ANP小鼠模型，2 h后处死小鼠。采用荧光定量PCR法检测小鼠粪便及回肠黏膜中LP数量；取胰腺和回肠组织行病理学检查，观察组织的炎症程度，并行病理学评分；采用酶动力化学法检测血清淀粉酶水平，ELISA法检测血清炎症因子水平及肠通透性指标；荧光定量PCR法检测胰腺与回肠组织炎症因子的表达；免疫荧光组织化学法检测回肠紧密连接蛋白occludin、claudin-1、ZO-1表达量。 结果:LP灌胃后小鼠粪便及回肠黏膜LP水平显著升高，差异有统计学意义(913.30±39.12比2.39±1.39，23.11±0.50比1.38±0.28， P值均<0.05)。CON组、LP组、ANP组、LP+ANP组胰腺病理评分分别为(0.26±0.41)、(0.17±0.26)、(8.55±0.46)、(6.30±0.45)分；血清淀粉酶水平分别为(219.70±19.73)、(217.60±11.30)、(2896.24±98.32)、(1837.13±131.60)U/L，IL-1β水平分别为(0.87±0.28)、(1.4±0.85)、(67.41±6.45)、(36.33±5.65)pg/ml，IL-6分别为(0.74±0.27)、(0.16±0.16)、(280586.12±39163.92)、(107912.75±31283.47)pg/ml，IL-10分别为(35.52±5.27)、(50.99±15.34)、(2008.45±184.83)、(3070.35±403.71)pg/ml；胰腺组织IL-1β mRNA表达量分别为1.42±0.39、0.95±25、20.53±0.50、10.69±1.01，IL-6 mRNA分别为1.31±0.44、0.93±0.02、21.97±1.71、11.54±1.75，IL-10 mRNA分别为0.93±0.14、0.75±0.15、0.99±0.21、1.76±0.19。LP组与CON组差异均无统计学意义，LP+ANP组胰腺病理评分，血清淀粉酶、IL-1β、IL-6水平，胰腺组织IL-1β、IL-6 mRNA表达量均较ANP组显著下降，而血清IL-10水平及胰腺组织IL-10 mRNA表达量较ANP组显著升高，差异有统计学意义( P值均<0.05)。CON组、LP组、ANP组、LP+ANP组回肠病理评分分别为0、0、(3.17±0.41)、(1.67±0.52)分；血清DAO水平分别为(0.03±0.03)、(0.02±0.02)、(0.50±0.05)、(0.49±0.06)ng/ml，LPS水平分别为(2.75±0.35)、(3.74±0.28)、(7.19±0.92)、(5.88±0.38)ng/ml；回肠组织IL-1β mRNA表达量分别为1.21±0.20、1.17±0.09、1.81±0.25、1.63±0.21，IL-6 mRNA分别为1.01±0.29、2.83±0.42、54.45±8.50、16.87±4.42，IL-10 mRNA分别为1.12±0.41、6.09±2.51、11.65±1.47、29.86±2.93。LP组回肠组织IL-10 mRNA表达量较CON组显著升高，其他指标两组差异均无统计学意义。LP+ANP组回肠病理评分、血清LPS水平、回肠组织IL-6 mRNA表达量均较ANP组显著下降，而IL-10 mRNA水平较ANP组显著升高；回肠紧密连接蛋白occludin、claudin-1、ZO-1表达量较ANP组显著增加，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。 结论:LP灌胃可减轻雨蛙肽诱导的ANP小鼠的胰腺及回肠屏障的损伤程度。

目的 探讨大柴胡汤含药血清对胰腺腺泡细胞炎症反应的防治作用及可能机制.方法 HPLC法检测大柴胡汤中指标成分含量;采用雨蛙肽处理AR42J细胞复制急性腺泡细胞炎症模型,采用CCK-8方法检测大柴胡汤含药血清对细胞活力的影响;Western blot方法检测细胞内JAK2、STAT3及NFκB磷酸化程度;ELISA法检测IL-6和TNF-α含量.结果 大柴胡汤中黄芩苷和芍药苷含量分别为13.02 mg/mL、7.19 mg/mL,大柴胡汤含药血清用量不超过20％;大柴胡汤含药血清降低炎性细胞上清液中TNF-α和IL-6含量,降低细胞内JAK2、STAT3及NFκB磷酸化作用,减轻细胞炎症反应;STAT3抑制剂cucurbitacin可减弱大柴胡汤的炎症抑制作用.结论 大柴胡汤含药血清可减轻腺泡细胞急性炎症作用,其机制可能为抑制细胞内JAK2/STAT3信号通路进而降低NFκB活性,减少促炎性细胞因子合成.

背景:急性肺损伤(ALI)是重症急性胰腺炎(SAP)最常见的器官功能障碍.生长抑素类似物奥曲肽是临床上用于治疗急性胰腺炎的常见药物.目的:探讨奥曲肽对SAP小鼠肺损伤的保护机制.方法:第一部分实验小鼠随机分为4组,采用雨蛙肽联合脂多糖诱导SAP模型,造模后24 h、48 h、72 h处死小鼠.HE染色观察胰腺和肺组织病理学评分,检测血清淀粉酶、肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性,应用实时荧光定量PCR法检测肺组织中焦亡相关分子caspase-1、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Gasdermin D(GSDMD)、白细胞介素(IL)-1β、IL-18和炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)mRNA表达,蛋白质印迹法检测肺组织中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、caspase-1、GSDMD和IL-1β蛋白表达.第二部分实验小鼠随机分为对照组、SAP组和奥曲肽组,HE染色观察胰腺和肺组织病理学评分,检测血清淀粉酶和肺组织MPO活性,实时荧光定量PCR法检测肺组织中焦亡相关分子caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18和炎症因子IL-6、TNF-α、HMGB1 mRNA表达,免疫荧光染色法检测肺组织中NLRP3、caspase-1、GSDMD、ASC和IL-1β蛋白表达.结果:第一部分实验中,与对照组相比,SAP组小鼠胰腺和肺组织病理学评分、血清淀粉酶以及MPO活性均显著升高(P均<0.05),肺组织焦亡相关分子caspase-1、ASC、GSDMD、IL-1β、IL-18和炎症因子IL-6、TNF-α、HMGB1 mRNA表达显著升高(P均<0.05),NLRP3、caspase-1、GSDMD和IL-1β蛋白表达显著升高(P均<0.05),其中造模24 h组升高最为明显.第二部分实验中,与SAP组相比,奥曲肽组胰腺和肺组织病理学评分显著降低(P均<0.05);血清淀粉酶显著降低(P<0.05);肺组织焦亡相关分子caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18以及炎症因子IL-6、TNF-α、HMGB1 mRNA表达显著降低(P均<0.05);肺组织中NLRP3、caspase-1、GSDMD、ASC和IL-1β蛋白表达显著降低(P均<0.05).结论:细胞焦亡参与SAP小鼠肺损伤的发生和发展,奥曲肽可能通过抑制焦亡减轻SAP小鼠肺损伤.

目的 探究槐耳清膏对急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)的治疗作用及其潜在机制.方法 体内利用雨蛙肽诱导的小鼠AP模型验证槐耳清膏(简称槐耳)的治疗效果,采用HE染色及免疫组化染色评价小鼠胰腺组织的病理改变、采用透射电镜观察小鼠胰腺的焦亡形态;体外以266-6细胞系作为实验载体验证槐耳对腺泡细胞的保护作用,利用电镜及Western blotting评价腺泡细胞的焦亡水平,利用ROS荧光探针检测腺泡细胞的氧化应激状态.结果 槐耳治疗明显改善了小鼠AP的严重程度,HE染色表现为胰腺内腺泡坏死和炎细胞浸润减少等,同时伴有血清淀粉酶水平下降;而免疫组化染色和Western blotting发现,槐耳治疗有效抑制小鼠胰腺组织内焦亡相关分子NLRP3、GSDMD等的表达;进一步的电镜观察发现槐耳治疗降低炎症状态下小鼠胰腺腺泡细胞的焦亡水平;此外,体外实验发现,槐耳干预能显著降低胰腺腺泡细胞266-6的ROS水平,且ROS介导的腺泡细胞焦亡能被槐耳有效抑制.结论 槐耳能有效减轻AP的严重程度,这一效应是通过抑制ROS介导的胰腺腺泡细胞焦亡所实现的.

目的 通过体外细胞研究探讨线粒体钙单向转运体(MCU)相关钙超载通过调控钙调蛋白(CaM)对雨蛙肽诱导的胰腺导管上皮细胞微丝骨架的影响.方法 使用 10-7 mol/L 雨蛙肽及10-5mol/L MCU抑制剂钌红(RR)干预人胰腺导管上皮细胞(HPDE6-C7)24 h,将细胞分为:Control组、雨蛙肽组、RR组、雨蛙肽+RR组.Western blot法检测细胞内MCU及CaM蛋白表达,荧光探针法检测细胞内游离Ca2+,免疫荧光双标法检测细胞内线粒体Ca2+,微丝染色法观察细胞微丝骨架结构.结果 雨蛙肽组与Control组比较,MCU及CaM蛋白表达、细胞质及线粒体内Ca2+含量升高(P<0.05),细胞微丝骨架破坏;雨蛙肽+RR组与雨蛙肽组比较,MCU及CaM蛋白表达、胞质Ca2+及线粒体内Ca2+含量降低(P<0.05),细胞微丝骨架破坏减轻.结论 MCU相关钙超载可能通过激活CaM促进雨蛙肽诱导的胰腺导管上皮细胞微丝骨架的破坏.

目的 探讨双氯芬酸钠对雨蛙肽诱导小鼠急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)的作用及可能机制.方法 采用C57 BL/6小鼠通过腹腔注射雨蛙肽方法建立AP模型,实验分为正常对照组、AP组、AP+双氯芬酸钠组.AP组小鼠雨蛙肽50μg/kg腹腔注射,1次/h,共7次;AP+双氯芬酸钠组小鼠在雨蛙肽注射前1h腹腔注射15 mg/kg双氯芬酸钠1次;正常对照组腹腔注射相同体积的生理盐水.留取血清采用比色法检测淀粉酶、脂肪酶活性,采用ELISA方法检测白介素(Interleukin,IL)-1、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)及非甾体类抗炎药激活基因-1(NSAIDs activity gene-1,NAG-1)水平,采用RT-PCR及Western Blot方法检测NAG-1mRNA和蛋白表达量;制备胰腺和肺组织匀浆,采用ELISA方法检测IL-1βκ、IL-6、IL-8、TNF-α及NAG-1水平,采用比色法检测髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性,采用RT-PCR和Western Blot方法检测NAG-1mRNA和蛋白表达量;测量胰腺、肺湿重与小鼠体重比;胰腺和肺组织HE染色观察病理学改变.结果 AP组血清淀粉酶及脂肪酶活性、胰腺和肺湿重与小鼠体重比均较正常对照组高(P＜0.05),AP+双氯芬酸钠组较AP组不同程度降低(P＜0.05).AP+双氯芬酸钠组胰腺和肺部病理炎症反应较AP组减轻,病理评分差异具有统计学意义(P＜0.01).AP组血清胰腺和肺匀浆IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平和胰腺和肺匀浆MPO活性均较正常对照组不同程度升高(P＜0.05),AP+双氯芬酸钠组上述指标较AP组不同程度降低(P＜0.05).三组血清中NAG-1表达的差别无统计学意义(P＞0.05).在胰腺和肺组织中,AP组NAG-1水平较正常对照组升高(P＜0.05),AP+双氯芬酸钠组较AP组升高(P＜0.05).在血浆、胰腺和肺组织中,AP组NAG-1mRNA和蛋白表达水平较正常对照组不同程度升高(P＜0.01;P＜0.05),AP+双氯芬酸钠组较AP组不同程度升高(P＜0.01;P＜0.05).结论 双氯芬酸钠可减轻AP小鼠炎症反应及肺损伤程度,机制可能与促进NAG-1表达、抑制炎症介质合成有关.

目的 观察长链非编码RNA (lncRNA)-RGD1566401(lncR-RGD1566401)在大鼠胰腺腺泡细胞(AR42J)中表达及对AR42J凋亡的影响.方法 分别用携带有lncR-RGD1566401目的基因的慢病毒(Lenti-lncRNA)和特异性lncR-RGD1566401抑制剂(lncRNA Smart Silencer)转染AR42J细胞株24h,转染空病毒(Lenti-NC)和特异性IncR-RGD1566401阴性抑制剂作为对照;以100 nmol/L雨蛙肽(Caerulin)体外诱导正常培养AR42J及转染后AR42J的凋亡,药物诱导24 h后运用流式细胞技术(FCM)检测各组AR42J细胞凋亡率,使用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测各组lncR-RGD1566401的表达,采用Western blot检测各组凋亡蛋白活性半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和p53表达量变化.结果 雨蛙肽体外诱导AR42J凋亡的凋亡率[(19.34±0.54)％]较对照组[(7.23±0.33)％]明显升高,lncR-RGD1566401表达量较对照组升高(5.43±0.31)倍,活性Caspase-3和p53表达量明显升高;转染携带有IneR-RGD 1566401目的基因的慢病毒组lncR-RGD1566401表达量较空病毒组升高(8.24±0.22)倍,差异有统计学意义(P=0.006);AR42J凋亡率[(38.20±0.37)％]较空病毒组[(22.60±0.96)％]明显升高,差异有统计学意义(P=0.016);活性Caspase-3和p53表达量明显升高;应用特异性lneR-RGD1566401抑制剂组较阴性对照组lncR-RGD1566401表达量降低(0.54±0.14)倍,差异有统计学意义(P =0.003),AR42J凋亡率[(13.60±0.33)％]较阴性对照组[(19.60±0.46)％]明显降低,差异有统计学意义(P=0.012),活性Caspase-3和p53表达量明显降低.结论 lneR-RGD1566401与大鼠AR42J细胞凋亡相关,上调lncR-RGD1566401的表达能够促进大鼠AR42J细胞凋亡.

目的 研究盐酸小檗碱(BH)对小鼠重症急性胰腺炎的影响,并探讨其潜在的机制.方法 使用雨蛙肽和脂多糖诱导小鼠重症急性胰腺炎.造模后按体质量随机分为模型组、氯高铁血红素组(50 mg·kg-1·d-1,灌胃)、BH组(50 mg·kg-1·d-1,灌胃),另设正常对照组,每组各10只.连续给药7 d后,测定各组小鼠胰腺重量指数.ELISA法测定血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血红素加氧酶-1 (HO-1)、白细胞介素-10(IL-10)、淀粉酶和脂肪酶含量,同时测定胰腺HO-1、CO、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和髓过氧化物酶(MPO)表达水平;对胰腺病理组织进行评分;RT-qPCR检测胰腺TNF-α、IL-6、IL-10和HO-1 mRNA表达水平;Western blot检测胰腺HO-1、IκB-α、核因子κB(NF-κB)p65、Lamin B蛋白表达水平;免疫组织化学检测胰腺NF-κB p65表达水平.结果 与模型组比较,BH组小鼠胰腺重量指数明显降低(P<0.05);血清IL-6、TNF-α、淀粉酶和脂肪酶含量显著降低(P<0.01),HO-1和IL-10含量显著升高(P<0.01);胰腺HO-1、CO和SOD含量显著升高(P<0.01),MDA和MPO含量显著降低(P<0.01);胰腺病理形态评分显著降低(P<0.01);胰腺TNF-α和IL-6 mRNA表达显著降低(P<0.01),IL-10和HO-1 mRNA表达显著升高(P<0.01);HO-1和IκB-α蛋白表达显著升高(P<0.01),NF-κB p65蛋白表达显著降低(P<0.01), NF-κB p65阳性细胞率显著降低(P<0.01).结论 BH可通过激活HO-1活性介导小鼠胰腺炎性损伤和氧化应激损伤,其机制可能与抑制NF-κB活性有关.