目的:探讨甲基转移酶METTL3和LncRNA Pvt-1在周围神经损伤后雪旺细胞增殖和迁移中的作用。方法:体内实验qRT-PCR实验检测周围神经损伤后Pvt-1及METTL3的表达变化，meRIP-seq检测Pvt-1的6-甲基腺嘌呤(m6A)表达变化。体外实验对雪旺细胞分别转染过表达METTL3的质粒和空质粒，并依此将转染后的雪旺细胞分为对照组和METTL3过表达组。EDU染色、CCK8计数及Transwell实验分析METTL3和Pvt-1在雪旺细胞增殖和迁移中的生物学作用。结果:与正常周围神经组织相比，损伤后的远端神经组织中Pvt-1与METTL3的表达水平均明显升高( P<0.05)，Pvt-1的m6A修饰水平也明显升高( P<0.05)，且损伤后不同时间(0、3、7、14 d)的表达水平及甲基化修饰水平的变化趋势一致。在体外实验中，METTL3过表达组细胞中的Pvt-1的表达水平较对照组明显升高( P<0.05)，同时Pvt-1的m6A修饰水平也明显升高( P<0.05)。EDU染色和CCK8结果显示，METTL3过表达组和对照组相比，雪旺细胞的增殖能力明显增强( P<0.05)。Transwell结果显示与对照组相比，METTL3过表达组周围神经损伤后的雪旺细胞穿模数量明显增加( P<0.05)。 结论:METTL3可能通过增强Pvt-1的m6A甲基化修饰，上调Pvt-1的表达进而促进雪旺细胞的增殖和迁移。

目的:探讨miR-152对雪旺细胞(Schwann cells，SCs)迁移作用的影响。方法:构建大鼠坐骨神经损伤模型，分别于损伤后1、4、7、14 d采用qRT-PCR检测miR-152和CAND1基因在损伤神经中的表达情况；Western blot和qRT-PCR检测miR-152和CAND1在SCs中的表达；Transwell法测定SCs迁移能力；以荧光素酶报告基因和RNA免疫沉淀法(RNA binding protein immunoprecipitation，RIP)证实miR-152与CAND1的相关性。结果:损伤神经近端和远端神经组织中miR-152水平显著升高，miR-152的过度表达促进了SCs迁移，而miR-152抑制剂转染的SCs则明显抑制了细胞迁移。结果提示CAND1是miR-152的靶基因，此外miR-152对CAND1的表达具有负调控作用，CAND1表达上调阻断了miR-152介导的促进SCs迁移作用。结论:周围神经损伤后，miR-152可以通过抑制CAND1的表达促进SCs迁移作用。

目的:探讨轴突导向分子Netrin-1对周围神经损伤后有序轴突再生及神经功能恢复的影响。方法:通过划痕实验及Transwell小室迁移实验检测Netrin-1对雪旺细胞(Schwann cells，SCs)迁移能力的影响。取21只健康雄性SD大鼠，随机分为3组，每组7只，即假手术组、周围神经损伤(peripheral nerve injury，PNI)组及Netrin-1治疗组。假手术组坐骨神经游离后不进行处理；PNI组及Netrin-1治疗组坐骨神经挤压后分别行神经内注射PBS及Netrin-1。术后7、14及28 d进行步态分析和坐骨神经功能指数(sciatic nerve function index，SFI)检测。术后28 d处死各组大鼠取右侧坐骨神经，采用HE及Masson染色评估坐骨神经组织病理学变化及轴突排列情况，通过免疫荧光染色分析SCs增殖及轴突再生情况。结果:Netrin-1治疗组SCs划痕愈合率及细胞迁移数均高于空白对照，差异有统计学意义( P<0.05)。术后28 d，Netrin-1治疗组轴突排列较PNI组紧密且有序，损伤所致轴突崩解和空泡化现象较少；Netrin-1治疗组NF200及S100β荧光强度高于PNI组，差异有统计学意义( P<0.05)；术后14及28 d，Netrin-1治疗组SFI高于PNI组，差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:Netrin-1可通过定向SCs迁移介导有序轴突再生加速神经功能恢复。

目的:探讨坐骨神经损伤后长链非编码RNA（LncRNA）差异表达的基因，以及LncRNA MX1对大鼠雪旺细胞迁移、增殖能力的影响。方法:选取10周龄无特定病原体级雄性SD大鼠24只，随机分为0 d（T0）、3 d（T1）、7 d（T2）和14 d（T3）4组，每组6只，建立坐骨神经损伤动物模型。分别于模型建立后第0、3、7、14天取相应组大鼠坐骨神经损伤处的残端组织提取RNA，制备RNA基因芯片进行Heatmap聚类分析，筛选出各个时间点发生差异表达的基因，并选择其中差异表达显著的基因LncRNA MX1。培养iCell-r030大鼠雪旺细胞，分为对照组、Control siRNA组（siRNA组）和LncRNA MX1 siRNA组（siRNA-MX1组），使用相应试剂进行转染。转染后采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测3组雪旺细胞的LncRNA MX1mRNA表达情况，采用Transwell小室检测雪旺细胞的迁移能力，采用5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EDU）实验检测雪旺细胞的增殖能力。结果:各组大鼠均造模成功，实验过程中无大鼠死亡。大鼠损伤坐骨神经组织LncRNA差异基因Heatmap聚类分析的热图显示，与T0组比：T1组共3 066个LncRNA基因发生差异性表达，其中1 634个LncRNA基因表达上调，1 432个LncRNA基因表达下调；T2组共2 498个LncRNA基因发生差异性表达，其中1 634个LncRNA基因表达上调，864个LncRNA基因表达下调；T3组3 567个LncRNA基因发生差异性表达，其中有1 643个LncRNA基因表达上调，1 924个 LncRNA基因表达下调。各组差异表达的LncRNA基因中LncRNA MX1的差异倍数数值较大，差异表达显著。大鼠雪旺细胞qRT-PCR结果显示，转染LncRNA MX1 siRNA后，siRNA-MX1组LncRNA MX1的相对表达量为1.0±0.2，低于对照组的2.3±0.2和siRNA组的2.2±0.2，差异有统计学意义（ F=78.47， P<0.001）；而对照组和siRNA组组间差异无统计学意义（ P>0.05）。迁移、增殖试验结果显示，siRNA-MX1组细胞迁移数量为（24.1±4.2）个、EDU阳性细胞与DAPI阳性细胞的比率为27.5%±2.8%，低于对照组的（50.3±7.8）个、44.1%±7.2%和siRNA组的（49.2±6.2）个、41.8%±7.0%，差异均有统计学意义（ F=93.15、121.26， P值均<0.001）；而对照组和siRNA组间差异均无统计学意义（ P值均>0.05）。 结论:大鼠坐骨神经损伤后LncRNA MX1差异表达显著，下调LncRNA MX1在大鼠雪旺细胞中的表达可显著降低细胞的迁移、增殖能力。

周围神经缺损修复、再生与功能恢复是临床亟待解决的问题,因桥接神经缺损的空腔导管仅具有支撑与隔离的作用,而复合导管能模拟神经再生微环境,具有生物活性,可有效地引导雪旺细胞的迁移和轴突的再生,达到较理想的修复效果和功能恢复.随着组织工程、再生医学和生物材料学以及细胞、分子生物学技术的发展,构建具有仿生性、功能性复合神经导管桥接修复神经长段缺损越来越受到关注.本文就神经导管用于周围神经长段缺损修复的构建策略做以概述.

目的 探索胎盘生长因子(placental growth factor,PLGF)对大鼠坐骨神经离断模型神经远端恢复的影响.方法 实验规定大鼠左肢为实验组,右肢为空白对照组.将大鼠双肢坐骨神经离断后,于实验组外源添加定量PLGF工作液并包以人工神经鞘管维持营养微环境后缝合,对照组则只包饶人工神经鞘管后缝合,分别于手术后1,4,7,15,30 d取出双侧坐骨神经手术处行p75NGFR免疫组化染色及Bungner带计数,对比实验组与对照组的p75NGFR平均光密度值Density(mean)及Bungner带数量,反映雪旺细胞增殖迁移情况.结果 术后1 d和30 d实验组p75NGFR的Density(mean)值明显高于对照组,1 d实验组的Bungner带计数明显高于对照组,差异具有显著性.结论 外源性PLGF可促进大鼠离断坐骨神经远端p75NGFR表达,可促进雪旺细胞成行排列,间接反映出外源性PLGF可促进雪旺细胞增殖及迁移,缩短Bungner带形成时间,增加Bungner带形成数量,证实外源性PLGF对神经损伤修复具有积极作用.

目的 将雪旺细胞(SCs)移植到聚乳酸羟基乙酸(PLGA)多通道支架材料中,观察SCs在支架中的黏附、增殖和迁移,探讨细胞和支架的生物相容性.方法 将SCs种植在PLGA多通道支架中,继续培养7d和14 d,利用钙黄绿素-AM (Calcein-AM)4 μl和胡米胺二聚体(EthD-Ⅲ)试剂盒检测细胞在支架中的活性,活细胞被Calcein-AM染成绿色,死细胞被EthD-Ⅲ染成红色.细胞死亡率由计算EthD-1阳性细胞百分比获得.每组每张切片至少5个区域被照相.最终的细胞死亡率取于3组的平均值.扫描电镜及光镜观察细胞形态和S-100蛋白免疫鉴定细胞的迁移状况.结果 倒置显微镜下显示SCs在多管道支架中于7d表现出良好的黏附能力,增殖14 d达到高峰.Viability/Cytotoxicity Assay Kit检测细胞活性发现7d后支架中细胞死亡率为(1.39±0.46)％.14d后支架中细胞死亡率为(1.43±0.51)％.免疫荧光切片及扫描电镜均显示,SCs不仅在管道壁贴附并生长,并且能在14d迁移到通道之间的空泡结构中.结论 SCs和PLGA多管道支架的三维结构之间具有良好的生物相容性.

目的:研究17β-雌二醇对大鼠RSC96雪旺细胞活性的影响及对SD大鼠坐骨神经横断性损伤的修复作用.方法:配制不同浓度的17β-雌二醇溶液,用CCK-8试剂盒检测雪旺细胞的增殖能力,筛选17β-雌二醇作用的最适浓度;将大鼠雪旺细胞分为对照组(常规培养)和17β-雌二醇组(100 nmol/L),用蛋白印迹法检测细胞雌激素受体的表达;用Transwell实验和划痕实验检测细胞的迁移能力;用qRT-PCR检测脑源性神经营养因子(brain de-rived neurotrophic factor,BDNF)、睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)、胶质细胞源性神经营养因子(glialcellline-derived neurotrophic factor,GDNF)、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和血管内皮生长因子(vas-cular endothelial growth factor,VEGF)等mRNA的表达;雄性SD大鼠经腹腔注射一定浓度的17β-雌二醇溶液,观察其对坐骨神经横断性损伤的修复作用.结果:100 nmol/L 17β-雌二醇溶液细胞增殖能力明显强于其他浓度(P<0.05);与对照组相比,100 nmol/L 17β-雌二醇溶液细胞增殖能力明显增强,雌激素受体表达明显增加,细胞迁移能力显著增强,BDNF、CNTF、GDNF、NGF等mRNA表达明显增加(P均<0.05).同时,17β-雌二醇促进SD大鼠坐骨神经损伤后运动和感觉功能的恢复,延缓腓肠肌的萎缩.结论:17β-雌二醇可能通过与雪旺细胞上雌激素受体结合来发挥一系列的生物学效应,促进外周神经损伤后运动和感觉功能的恢复.

目的 探讨miR-124在大鼠坐骨神经损伤后的表达及对雪旺细胞增殖与迁移的影响. 方法 建立大鼠坐骨神经损伤模型,实时PCR方法检测坐骨神经损伤后0d、1d、3d、7d神经近侧断端miR-124的表达水平.设计合成miR-124模拟物,转染雪旺细胞;MTT实验检测过表达miR-124对雪旺细胞增殖的影响;Transwell实验检测过表达miR-124对雪旺细胞迁移能力的影响. 结果 坐骨神经损伤后,与0d相比,miR-124在1d、3d、7d的表达水平均明显增加(P＜0.01).转染miR-124模拟物能够显著上调雪旺细胞miR-124的表达水平,促进雪旺细胞增殖与迁移(P＜0.01). 结论 miR-124在坐骨神经损伤后表达水平逐渐升高,可能参与坐骨神经损伤后神经再生过程.

目的:外泌体是活细胞分泌的来源于多囊泡体的膜性囊泡,其主要作用包括携带与运输.雪旺细胞是周围神经再生中非常优秀的种子细胞,但其迁移能力较差,影响修复效果.本文旨在探讨外泌体和雪旺细胞共培养是否可以促进雪旺细胞迁移.方法:本实验通过分离纯化人脐带干细胞外泌体和大鼠坐骨神经雪旺细胞并鉴定,随后将其共培养于Transwell小室观察雪旺细胞迁移率.结果:通过人脐带干细胞超高速离心法得到的外泌体高表达干细胞标志物CD44(92.2±3.6％)、CD73(99.1±0.6％),并且低表达单核细胞表面抗原CD14 (0.5±0.06％)以及造血干细胞表面抗原CD34 (0.4±0.07％),外泌体鉴定高表达CD81和CD9;雪旺细胞培养鉴定纯度达(92.3±2.7)％;均符合实验要求.通过Transwell小室实验发现外泌体可以明显促进雪旺细胞的迁移,并且具有一定剂量关系.结论:外泌体可以提高雪旺细胞的迁移能力,从而使雪旺细胞在组织工程领域中的应用产生巨大突破.