目的:探索烧伤患者耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌（CRKP）的质粒携带情况，分析这些质粒与CRKP传播的相关性。方法:采用回顾性观察性研究方法。取从陆军军医大学（第三军医大学）第一附属医院2017年1—12月收治的22例烧伤患者［男20例、女2例，年龄（42±16）岁］临床相关标本中分离保存的26株CRKP，对其进行编号。采用碱裂解法提取菌株质粒，用核酸浓度检测仪测定浓度后行琼脂糖凝胶电泳观察条带情况，并对质粒行大致分型。从各个质粒分型中选取最小编号CRKP携带质粒转化感受态大肠埃希菌TOP10菌株（以下简称TOP10菌株），观察各转化菌株与TOP10菌株涂布含氨苄西林的固体LB培养基并过夜培养后生长情况，计算成功转化比例。取成功转化TOP10菌株的最小编号CRKP携带质粒的转化菌株（以下简称最小成功转化菌株）与相应编号CRKP，提取菌株携带质粒，行琼脂糖凝胶电泳观察条带情况。取前述各成功转化菌株与TOP10菌株，采用药物敏感试验检测菌株对17种临床常用抗生素的耐药性。取最小成功转化菌株携带质粒，使用第二代测序技术进行基因测序，并完成蛋白质编码基因预测、序列比对等生物信息分析，后续根据耐药基因携带情况命名为pKP03-NDM1。根据最小成功转化菌株携带质粒全基因组序列，采用PCR法及琼脂糖凝胶电泳与基因测序检测剩余25株CRKP携带质粒的新德里金属β-内酰胺酶-1（ blaNDM-1）基因携带情况，结合文献分析26株CRKP多位点序列分型中的ST分型。 结果:从26株CRKP中均提取到质粒，质粒质量浓度为19.3~189.8 ng/μL。26株CRKP携带质粒的琼脂糖凝胶电泳均可见2 500 bp以上条带，可大致分为A、B、C、D、E、F型6个型别。过夜培养后，在含氨苄西林的固体LB培养基上，未见A、B、D、E型CRKP携带质粒转化TOP10菌株或单纯TOP10菌株菌落生长，可见3号CRKP携带的C型质粒和15号CRKP携带的F型质粒转化TOP10菌株大量菌落生长（转化菌株被分别命名为TOP10-pKP03、TOP10-pKP15），成功转化比例为1/3。TOP10-pKP03携带质粒琼脂糖凝胶电泳图仅表现为1个条带，大小与3号CRKP携带质粒最大的条带一致。TOP10菌株对所检测的17种临床常用抗生素全敏感；TOP10-pKP03和TOP10-pKP15对青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类抗生素耐药，对单环β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类抗生素以及替加环素敏感。TOP10-pKP03携带质粒全长为41 190 bp，该质粒携带 blaNDM-1、 bleMBL、 T4SS、博来霉素抗性基因且包含接合转移元件、松弛酶等片段，与从大肠埃希菌JN24中提取的质粒pJN24NDM1长度相同且核苷酸相似性为99%。从16株（61.5%）CRKP携带质粒中检测到了 blaNDM-1基因，该16株CRKP的ST型别中，ST11型11株，ST215型、ST260型、ST395型、ST2230型、新ST型各1株；不携带 blaNDM-1基因的10株CRKP的ST型别中，ST11型8株，ST395型、ST2230型各1株。 结论:自烧伤患者CRKP中分离测序了一个高携带率的包含 blaNDM-1基因的质粒pKP03-NDM1，该质粒可能通过介导 blaNDM-1基因在CRKP间以及CRKP和大肠埃希菌间的水平转移，导致耐药性传播。

目的:观察探讨聚嘧啶束结合蛋白相关剪接子（PSF）高表达对糖基化终末产物（AGEs）诱导下人视网微血管内皮细胞（hRMECs）氧化损伤的保护作用及相应分子机制。方法:将hRMECs分为正常组、空载组、PSF组、锌原卟啉（ZnPP）组及PSF+ ZnPP组进行实验。正常组细胞使用含有10％胎牛血清、青霉素/链霉素的DMEM培养基，置于37 °C、95％空气、5% CO 2的密闭恒温培养箱中培养。空载组细胞采用空载慢病毒感染。PSF组细胞采用过表达PSF慢病毒感染。ZnPP组细胞采用ZnPP （10 mol/L）处理2 h。PSF+ZnPP组细胞采用过表达PSF慢病毒感染后，再用ZnPP （10 mol/L）预处理2 h。后四组细胞辅以AGEs刺激，HE、Hoechst33258染色法和流式细胞法观察PSF高表达对细胞损伤的保护作用以及ZnPP对PSF的拮抗作用。采用Western blot检测细胞中血红素氧合酶-1 (HO-1)、磷酸化（p）细胞外调节蛋白激酶（ERK）、核因子2相关因子2 （Nrf2）的蛋白表达。引入ERK通路的特异性拮抗剂U0126，Western blot验证U0126对PSF蛋白所诱导的HO-1表达的逆转作用。 结果:HE染色和Hoechst33258染色结果显示，PSF组受损细胞核数较正常组明显增加，较PSF+ZnPP组明显减少，差异均有统计学意义（ F=27.5、38.7， P<0.05）。流式细胞法结果显示，PSF组细胞产生的ROS较正常组明显增加，较PSF+ZnPP组明显减少，差异有统计学意义（ F=126.4， P<0.05）。Western blot检测结果显示，PSF组HO-1蛋白表达量较正常组、空载组明显增加，差异均有统计学意义（ F=70.1， P<0.05）；AGEs处理30、60、120、240 min时pERK的蛋白表达量与15 min时比较，差异均有统计学意义（ F=474.0， P<0.05）；PSF+/U0126-组HO-1、Nrf2蛋白表达量较PSF-/U0126-组明显增加，PSF+/U0126＋组HO-1、Nrf2蛋白表达量较PSF+/U0126-组明显降低，差异有统计学意义（ F=30.2、489.4， P<0.05 ）。 结论:PSF高表达可以通过活化ERK通路，促进Nrf2转位入核进而诱导HO-1表达，从而保护hRMECs免受AGEs诱导的氧化损伤。

A族β-溶血性链球菌（酿脓链球菌，GAS）对β-内酰胺类抗菌药物敏感。美国临床实验室标准化研究所始终未设定GAS对β-内酰胺类抗菌药物的中介和耐药的折点，并且推荐β-内酰胺类抗菌药物作为治疗GAS感染的一线药物。然而，却有不少报道中出现GAS对β-内酰胺类抗菌药物的中介率、耐药率，且大多来自国内研究和国内主要耐药监测网。回顾国内外GAS对β-内酰胺类抗菌药物所谓“中介”或“耐药”的报道，发现存在诸多疑问，如这些菌株并非真正的“耐药”，而是否真对β-内酰胺类抗菌药物不敏感，而青霉素敏感性降低菌株是否携带青霉素结合蛋白2X突变基因，这些疑问均未得到确切证实。通过本文，以期广大临床医生、药学和微生物学工作者关注GAS及其耐药问题。

目的:总结1例联合氧化磷酸化缺陷症28型(COXPD-28)患儿的临床表现和 SLC25A26基因变异特点，结合文献复习为该病的诊断和遗传咨询提供依据。 方法:回顾性分析2020年10月郑州大学第三附属医院确诊的1例COXPD-28患儿的临床资料，并以"联合氧化磷酸化缺陷症28型、 SLC25A26基因"或"Combined oxidative phosphorylation deficiency 28、 SLC25A26 gene"为检索词查阅国内外数据库，总结COXPD-28的临床特点及 SLC25A26基因变异特点。 结果:1．患儿，女，出生后30 min，足月顺产娩出，因出生后呻吟呼吸入院，主要表现为面色苍白、呻吟呼吸、代谢性酸中毒、乳酸高、丙酮酸升高，给予呼吸支持、青霉素预防感染，病情进行性加重，出现呼吸循环衰竭，入院当天死亡。患儿为 SLC25A26基因的复合杂合突变，第5外显子终止突变c.403G>T致蛋白改变为p.E135，第4外显子非同义变异c.212A>G致蛋白改变为p.Y71C，为首次报道。2.检索中英文文献，共检索到3例COXPD-28患儿，国内尚未见该病例报道。临床特点总结：3例患儿均有呼吸循环衰竭、乳酸升高，丙酮酸升高，肌肉活检多见线粒体复合物Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ下降，共有2种不同突变类型，错义突变3例，剪接突变1例。 结论:COXPD-28是一种常染色体隐性遗传的多系统受累疾病，与线粒体功能障碍有关， SLC25A26基因变异是其致病原因。

目的:探讨深圳地区儿童侵袭性肺炎链球菌病(IPD)的临床特点及分离株的耐药性和血清型。方法:收集2012年1月至2018年12月深圳市儿童医院住院IPD患儿临床资料及药敏试验结果进行回顾性分析，并对留存菌株采用荚膜肿胀试验或聚合酶链反应(PCR)方法进行血清型鉴定。结果:纳入的141例IPD患儿中，以<2岁的婴幼儿居多(86例，61.0%)；99例(70.2%)患儿在秋冬季发病；临床表现包括单纯血流感染62例(45.4%)、化脓性脑膜炎30例(21.3%)、菌血症性肺炎28例(19.9%)、骨关节感染12例(8.5%)、化脓性胸膜炎4例(2.8%)、腹膜炎3例(2.1%)、感染性心内膜炎2例(1.4%)；33例(23.4%)患儿存在基础疾病；混合感染其他病原14例(9.9%)；39例(27.7%)出现并发症。经积极治疗，死亡5例(3.5%)，均为2岁以下病例，且分离株均为多重耐药菌株；未愈自动出院4例(2.8%)，余皆好转。与青霉素敏感肺炎链球菌(PSSP)患儿比较，青霉素不敏感肺炎链球菌(PNSP)患儿合并基础疾病(30.7%比15.4%， χ2＝3.956)、罹患脑膜炎(32.0%比9.2%， χ2＝10.722)及合并多重耐药(86.7%比63.1%， χ2＝10.538)的概率较高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。97株侵袭性肺炎链球菌鉴定了血清型，其中14型、19F型最为多见，各21株(21.6%)，19A型15株(15.5%)，6B型、23F型各13株(13.4%)，3型3株(3.1%)。13价肺炎球菌蛋白多糖结合疫苗(PCV13)的血清型覆盖率为92.8%(90/97株)。 结论:IPD及其死亡多出现在2岁以下患儿，IPD分布有季节差异，临床表现以单纯血流感染最常见。PNSP更容易出现在有基础疾病、罹患脑膜炎的患儿，致病菌株多重耐药可能与不良预后有关。PCV13能覆盖IPD绝大多数血清型。

目的 分析强直性脊柱炎(ankylosing sporidylitis,AS)误诊为腰椎间盘突出症、风湿热(rheumatic fever,RF)的原因及防范措施.方法 回顾分析2021至2023年收治的AS误诊腰椎间盘突出症1例、RF1例的病例资料.结果 1例为31岁男性,因腰背部及右下肢疼痛伴晨僵3个月就诊,腰椎间盘CT检查示L4～5椎间盘轻度突出,初诊为腰椎间盘突出症,后出现低热,查红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、C反应蛋白(C reactive protein,CRP)升高、人白细胞抗原B27阳性,骶髂关节CT示双侧骶髂关节面有虫噬样改变,诊断为AS.1例为16岁青少年,因双踝双膝关节肿痛1年余、加重1月余就诊,因抗链球菌溶血素"O"试验(+),合并有多关节疼痛症状,诊断为RF,予苄星青霉素注射后症状好转停用后再发,后行骶髂关节MRI检查示双侧骶髂关节面局部融合,ESR与CRP升高,综合以上排除RF后诊断AS.误诊时间3个月、14个月.2例确诊后均予柳氮磺胺吡啶、甲氨蝶呤、重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白等治疗后症状消失,随访1～2年病情平稳.结论 部分AS患者初期表现不典型,易误诊;加强对AS及相关疾病的认识、诊断及鉴别诊断能力,仔细采集病史,认真查体,早期行骶髂关节影像学检查及人白细胞抗原B27检测,结合临床表现和其他相关检查结果综合分析病情,可避免本病误诊的发生.

目的 探讨中段尿培养中分离出B群链球菌(GBS)的临床意义和耐药性,旨在为临床尿路感染诊治提供依据.方法 通过实验室信息系统搜索2020年2月—2022年12月南京某医院住院和门诊患者中段尿培养分离出GBS的菌株信息,筛选资料完整者,查阅病例资料、尿常规及药敏试验结果.结果 中段尿培养标本共检出非重复细菌9 081株,其中GBS 425株,占比4.7％,位列第6.剔除资料不完整者,共纳入365例患者进行研究.其中男性169例(46.3％),女性196例(53.7％),平均年龄(55.4±15.2)岁.365例检出GBS的患者来源于17个科室,泌尿外科(237例,64.9％)占比最高.患者基础疾病主要包括高血压病136例,糖尿病95例,泌尿系统结石120例,泌尿系统肿瘤98例;211例患者接受了泌尿系统手术,术前均使用了抗菌药物,205例在术后留置导尿管;9例在妊娠中晚期尿液中检出GBS.GBS菌落计数≤104 CFU/mL占36.4％(133例),104～105 CFU/mL占38.9％(142例),≥105 CFU/mL占24.7％(90例).有尿路感染症状的患者占24.9％(91例),无症状性菌尿患者占75.1％(274例).男性中有尿路感染症状者低于女性(19.5％VS 29.6％,P＜0.05).随着尿培养GBS菌落计数增加,有尿路感染症状的患者比例呈升高趋势(P＜0.05).尿培养送检当日尿常规白细胞、白细胞酯酶、亚硝酸盐阳性比率分别为53.2％、50.1％、3.8％.有症状尿路感染患者中尿潜血、白细胞酯酶、白细胞、尿蛋白的阳性率均高于无症状性菌尿患者(均P＜0.05).未发现GBS对青霉素、氨苄西林、万古霉素、利奈唑胺、替加环素耐药,对左氧氟沙星、莫西沙星耐药率在40％左右,对四环素、克林霉素耐药率＞60％.结论 尿液中分离出GBS在非妊娠成人中比较常见,有尿路感染症状者仅占少数.尿培养、尿常规结果应结合患者临床症状、体征综合判断.尿液中GBS对多种抗菌药物敏感,临床应根据药敏结果合理用药.

目的·探寻鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)在环境中碳青霉烯类药物美罗培南浓度改变时耐药性变化的机制.方法·通过改变鲍曼不动杆菌标准敏感株ATCC19606和临床耐药株AB.2014培养环境中的美罗培南浓度等条件,诱导对美罗培南不同耐药程度的衍生株.测量所得菌株的生长曲线,并提取各菌株的DNA和RNA,采用PCR分析菌株耐药性改变后的碳青霉烯酶基因IMI、KPC、GES-1、IMP、VIM、NDM-1、OXA23、OXA24、OXA51、OXA58的表达情况;通过实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,RT-qPCR)分析不同耐药程度的鲍曼不动杆菌耐药基因,包括OXA51,外排泵基因adeB、adeG、adeJ,孔蛋白基因carO、omp33-36、oprC,青霉素结合蛋白基因ponA的表达水平变化;通过全基因组测序及生物信息学工具分析耐药性改变后菌株的差异基因富集情况的变化.结果·获得了鲍曼不动杆菌ATCC19606与AB.2014对美罗培南不同耐药程度的11个衍生株,最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)为1～128 μg/mL.ATCC 19606及其衍生株的生长速度和峰值随着耐药性的增加而降低,但AB.2014及其衍生株并没有表现出这种趋势.ATCC 19606及其衍生株表达3个碳青霉烯酶基因OXA51、VIM和IMP,AB.2014及其多数衍生株表达4个碳青霉烯酶基因OXA23、OXA51、VIM和IMP,仅AB.2014的一个复敏衍生株出现了 OXA23丢失.RT-qPCR结果显示,仅在ATCC19606及其耐药衍生株中oprC基因的表达量随着耐药性的升高而降低,多数耐药基因的表达水平与菌株的耐药水平变化一致.生物信息学分析提示ATCC 19606不同衍生株之间的差异基因主要富集于铁载体摄取跨膜转运体活性、细胞外膜、细菌分泌系统和群体感应等,而AB.2014不同衍生株之间的差异基因主要富集于细胞外膜、细胞对化学刺激的反应、阿特拉津降解和RNA聚合酶等.结论·碳青霉烯类药物环境压力会引起鲍曼不动杆菌耐药性发生变化,碳青霉烯酶、外排泵、孔蛋白、青霉素结合蛋白多种基因可能同时参与了菌株耐药性的变化;碳青霉烯酶OXA23丢失可能导致耐药鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物复敏.

目的 探讨penA、mtrR基因突变在淋球菌对头孢曲松耐药中的作用.方法 分别选取淋球菌标准菌株(ATCC-49226)、临床头孢曲松敏感菌株(2012-4052、2012-15361)及低敏菌株(2012-5616),体外次抑菌浓度诱导对头孢曲松耐药,提取诱导前原代菌株及诱导后子代耐药菌株的DNA,对penA和mtrR基因进行扩增与测序.结果 菌株2012-5616和ATCC-49226分别在诱导至第26和28代时获得最低抑菌浓度(MIC)≥1 mg/L的耐药菌株,菌株2012-4052和2012-15361分别在诱导至第22和36代时获得MIC≥0.5 mg/L的耐药菌株.penA基因测序结果显示,ATCC-49226菌株诱导后出现A501T和G542S突变位点,另3株菌诱导前后penA基因均未出现新的突变位点;4株突变菌株的青霉素结合蛋白2(PBP2)基因序列型都为ⅩⅧ,未检测到penA镶嵌状结构模式.mtrR基因测序结果显示,2012-5616和ATCC-49226菌株在诱导前后均发生A39T突变,2012-4052菌株诱导后在mtrR编码区发生A39T突变.结论 penA基因中的A501T和G542S突变与mtrR基因发生的A39T突变可能在头孢曲松耐药中发挥作用.

目的 研究小肠结肠炎耶尔森菌β-N-乙酰葡萄糖胺酶(NagZ)的调控机制及AmpD蛋白对AmpCβ-内酰胺酶表达的作用.方法 通过对小肠结肠炎耶尔森菌3个AmpD蛋白同系物(AmpD1～3)基因(ampD1～3)、低分子量青霉素结合蛋白(LMM PBPs)基因(pbp4、pbp5a、pbp5b、pbp7)、NagZ基因(nagZ)以及ampR基因进行敲除或回补,以构建基因突变株,并利用头孢西丁对突变株进行诱导;采用检测头孢硝噻吩水解法测定诱导组和非诱导组突变株AmpCβ-内酰胺酶活性(单位为U),采用luxCDABEreporter系统检测AmpCβ-内酰胺酶启动子活性[单位为相对光单位(RLU)],采用对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷为显色底物测定NagZ酶活性(单位nmol/L).结果 AmpD1蛋白的功能较强,YEΔD1突变株的AmpCβ-内酰胺酶表达量出现上升,诱导组和非诱导组分别为(3.29±1.58)和(4.08±1.75)U.YEΔ5b、YEΔ4Δ5b、YEΔ5aΔ5b和YEΔ5bΔ7突变株AmpCβ-内酰胺酶启动子活性增强,其中YEΔ4Δ5b突变株活性最高,诱导组和非诱导组分别为(106903.16±61910.61)和(205427.45±45352.17)RLU.缺失3种基因的菌株中,YEΔ4Δ5bΔ7突变株AmpCβ-内酰胺酶启动子活性最高,诱导组和非诱导组分别为(304108.04±99274.53)和(531440.21±68891.02)RLU;缺失4种基因的菌株中,YEΔ4Δ5aΔ5bΔ7突变株AmpCβ-内酰胺酶启动子活性最高,诱导组和非诱导组分别为(1013810.99±260955.96)和(1230214.59±205526.79)RLU;敲除nagZ基因后,YEΔD1D2D3ΔZ突变株AmpCβ-内酰胺酶活性未发生明显的变化,而YEΔ4Δ5aΔ5bΔ7ΔZ突变株活性下降明显,诱导组和非诱导组分别为(0.30±0.20)和(0.29±0.21)U,基本降至野生株水平.结论 在肠杆菌科细菌中发现多个AmpD蛋白参与ampC基因的三级调控机制;发现以PBP5b为主,PBP4、PBP5a和PBP7共同参与的ampC基因调控模式;同时还证实了在小肠结肠炎耶尔森菌具有NagZ依赖和非依赖两种ampC基因调控途径.