目的:基于网络药理学预测和动物实验验证探讨白头翁汤对外阴阴道念珠菌病(Vulvovaginal candidiasis,VVC)的治疗作用及机制.方法:通过文献查阅及TCMSP、Gene Cards等数据库收集白头翁汤成分、靶点及VVC疾病靶点,Cityscape 3.6.0软件构建"药物活性成分-靶点-通路"网络;String数据库构建蛋白互作网络.通过DAVID平台进行基因功能(GO)分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;使用AutoDock软件对核心成分及关键靶点进行分子对接.将SPF级KM小鼠采用随机数表法分为正常组,模型组,白头翁汤低、中、高剂量组,氟康唑组(n=12).阴道腔内接种白色念珠菌建立VVC模型.连续给药14 d后,革兰氏染色法和平板计数法观察阴道灌洗液中真菌载量;HE染色观察阴道组织形态改变;ELISA 法检测血清 IL-17、IL-23、IL-1β 的含量;Western blot 法验证主要靶点 TNF-α、HSP90、ESR、STAT3和 IL-23/IL-17 轴核心调控因子ROR-γT蛋白表达.结果:筛选得到白头翁皂苷B4、二氢尼洛替星、黄柏酮、β-谷甾醇、小檗碱为治疗VVC的核心成分;筛选出18个关键作用靶点和75条通路.动物实验结果显示,与模型组比较,白头翁汤给药后可降低阴道内真菌载量和血清炎症因子IL-17、IL-23和IL-1β含量,降低阴道组织内TNF-α、HSP90、ESR、STAT3和ROR-γT蛋白表达,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:白头翁汤通过调控STAT3、TNF-α等靶点以及IL-23/IL-17轴发挥治疗VVC作用.

目的:观察电针对早发性卵巢功能不全(POI)模型大鼠卵巢颗粒细胞自噬的影响,探讨电针改善POI的作用机制.方法:从32只雌性SD大鼠中随机选取8只作为空白组,剩余大鼠作为造模组腹腔注射环磷酰胺15 d(第1天剂量为50 mg/kg,第2天到第15 天剂量为8 mg/kg)建立POI模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、电针组和雌二醇组,每组8 只.电针组大鼠予电针双侧"公孙",连续波,频率2 Hz,电流强度0.1～1 mA,每日1次,每次20 min,共14 d.雌二醇组大鼠予戊酸雌二醇溶液(0.01 mg/mL)灌胃(10 mL/kg),每日1次,共14 d.造模前后采用快速革兰氏染色观察大鼠动情周期变化.干预后,采用HE染色法观察大鼠卵巢组织形态;ELISA法检测大鼠血清卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、抗苗勒管激素(AMH)、抑制素B(INHB)含量;免疫荧光染色法观察大鼠卵巢颗粒细胞p62阳性表达;透射电镜观察大鼠卵巢颗粒细胞结构,并比较自噬小体和自噬溶酶体数量;Western blot法和实时荧光定量PCR法检测大鼠卵巢组织p62、Beclin-1、微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)蛋白和mRNA表达.结果:空白组大鼠阴道涂片结果呈规律的周期变化;造模组大鼠阴道涂片表现为动情周期延长或周期停滞,多处于动情前期或动情间期,卵巢整体萎缩,整体结构紊乱,颗粒细胞减少.与空白组比较,模型组大鼠血清FSH含量升高(P＜0.01),E2、AMH和INHB含量降低(P＜0.01);卵巢颗粒细胞p62 阳性表达减少(P＜0.01);卵巢颗粒细胞明显肿胀,线粒体轻中度肿胀,粗面内质网略显扩张,高尔基体肥大,卵巢自噬小体和自噬溶酶体数量增加(P＜0.01);卵巢组织p62蛋白及mRNA表达降低(P＜0.01),Beclin-1、LC3蛋白表达及mRNA表达升高(P＜0.01).与模型组比较,电针组和雌二醇组大鼠血清FSH含量下降(P＜0.01),E2、AMH和INHB含量升高(P＜0.01);卵巢颗粒细胞p62 阳性表达增加(P＜0.01);卵巢颗粒细胞损伤程度有所缓解,细胞器形态较为完整,卵巢自噬小体和自噬溶酶体数量减少(P＜0.01);卵巢组织p62蛋白和mRNA表达升高(P＜0.01),Beclin-1、LC3 蛋白和mRNA表达降低(P＜0.01).结论:电针"公孙"可通过减少自噬小体和自噬溶酶体数量,上调 p62 表达,下调 Beclin-1、LC3 表达,从而抑制卵巢颗粒细胞自噬,调节大鼠血清FSH、E2、AMH和INHB水平,改善POI卵巢储备功能.

目的 了解该院压疮感染患者标本中分离的金黄色葡萄球菌的人群分布、生物膜形成情况及耐药情况等流行病学特征,为临床提供重要依据.方法 2019年5月至2022年5月该院共收集到与压疮感染相关的金黄色葡萄球菌126株,采用Vitek MS质谱仪进行细菌鉴定,药敏试验采用纸片扩散法(K-B法),按美国临床实验室标准化协会2016-M100的标准进行药敏结果分析,用结晶紫染色法检测金黄色葡萄球菌生物膜并对生物膜形成能力进行判定,生物膜中分别加入葡萄糖和银离子粉末,观察其对生物膜形成的影响.结果 该院共收集到与压疮感染相关的金黄色葡萄球菌126株,各年龄段及各级压疮均有检出.形成生物膜的菌株占73.00％,其中Ⅳ期压疮分离的菌株形成生物膜的菌株比例(81.81％)高于其他分期(Ⅱ、Ⅲ期)分离的菌株(63.33％),差异有统计学意义(P＜0.05);不同生物膜形成能力的菌株对青霉素G、四环素、环丙沙星、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率较高,对替考拉宁、左氧氟沙星的耐药率较低,未检出对万古霉素耐药的革兰阳性菌,不同生物膜级别金黄色葡萄球菌的耐药性比较,差异无统计学意义(P＞0.05);11.10 mmol/L葡萄糖可促进生物膜的形成,10.00 μg/mL银离子抗菌凝胶对生物膜的形成有一定抑制作用.结论 导致Ⅳ期压疮感染的金黄色葡萄球菌生物膜形成的能力较强,生物膜的形成与压疮的分期进程有一定的关系;产生物膜的金黄色葡萄球菌的抗菌药物耐药性与生物膜的级别无明显关系;使用银离子和降低血糖水平对生物膜形成有一定的抑制作用.

目的 研究银翘散对铜绿假单胞菌群感效应分子和生物膜的影响.方法 通过倍比稀释法检测银翘散对铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度;采用CV026 平板显色反应观测铜绿假单胞菌分泌群感效应信号分子;采用革兰染色法观察银翘散对生物膜形态的影响;采用实时荧光定量PCR法分析银翘散对铜绿假单胞菌群感效应基因和生物膜分散基因的表达的影响.结果 银翘散对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度是 500 mg/ml;银翘散对群感效应信号分子的分泌有抑制作用;银翘散可抑制铜绿假单胞菌生物膜的形成;银翘散可下调对群感效应系统基因和铜绿假单胞菌膜分散基因的表达水平.结论 银翘散通过抑制铜绿假单胞菌群感效应系统,达到抗铜绿假单胞菌生物膜作用.

目的 探讨革兰染色对患者阴道分泌物的检验价值.方法 选择2015年4月至2017年4月于诸暨市中心医院进行阴道分泌物检验的阴道炎患者为研究对象,共1 600例.采用生理盐水镜检法和革兰染色法对分泌物进行检验,比较两种检验方法对分泌物病变的检出情况,同时比较两种检验方法的特异性和敏感性.结果 革兰染色法对分泌物病变的检出率为32.50％,生理盐水镜检法的检出率为28.50％,二者差异有统计学意义(P＜0.05).革兰染色法对阴道分泌物检验的准确性、敏感性及特异性分别为95.61％、96.34％、97.87％,均高于生理盐水镜检法,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 阴道分泌物检验是诊断阴道炎最便捷的方法.与常规的生理盐水镜检法相比,革兰染色法具有更高的准确性、特异性和敏感性,对阴道炎的早发现、早治疗具有较高的应用价值.

目的 分析阳性血培养标本,直接涂片结果与培养结果不一致的原因.方法 收集一段时间内(2015年8月-2016年12月)送检的血培养标本,进行分析.实验室出现的涂片结果与培养结果不一致的,对其进行分析总结,找到主要原因和需要注意的关键问题.结果 符合要求的36 608份标本,血培养阳性报警3 975份,阳性率10.86％,113份涂片结果与阳性培养结果不一致,绝对不一致率为2.84％.55例涂片结果为不确定的标本中,凝固酶阴性葡萄球菌、微球菌、棒状杆菌和α-溶血链球菌共有29例,占52.73％.结论 容易误读为阳性球菌的阴性杆菌包括肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、粘质沙雷菌、莫拉菌和鲍曼不动杆菌等.容易误读为阴性杆菌的阳性球菌包括凝固酶阴性葡萄球菌、草绿色链球菌和微球菌.避免将某些阴性杆菌(肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、粘质沙雷菌、莫拉菌和鲍曼不动杆菌等)误读为阳性球菌十分重要.注意革兰染色中脱色步骤的操作,显微镜检查时要注意形态和排列方式不同的阳性细菌.减少危急值的报告错误率,为临床早期诊断与选择抗菌药物治疗,提供准确信息.

目的 探讨铝碳酸镁对H.pylori的抑制作用及其机制.方法 采用哥伦比亚固体培养基和布氏肉汤液体培养基复苏、培养H.pylori国际标准菌株26695,并将其分为空白对照组、H.pylori损伤组和H.pylori联合铝碳酸镁组.用铝碳酸镁处理H.pylori菌液,观察H.pylori的活性变化,革兰染色方法观察H.pylori的形态变化.用考马斯亮蓝染色法检测H.pylori菌体蛋白质表达的改变情况.比较有无铝碳酸镁的情况下,H.pylori对胃黏膜上皮细胞GES-1凋亡的影响,透射电子显微镜和扫描电子显微镜下观察亚细胞结构及H.pylori对细胞的吸附能力.统计学处理采用t检验.结果 铝碳酸镁可抑制H.pylori生长,但H.pylori形态未见明显改变,多种H.pylori菌体蛋白质表达受铝碳酸镁调控.未加铝碳酸镁时,H.pylori大量吸附在GES-1细胞表面,促进GES-1细胞凋亡.与空白对照组比较,加入H.pylori后,GES-1细胞凋亡率增加[(5.52±1.31)％比(28.96±3.14)％)],差异有统计学意义(t=-11.94,P＜0.05).铝碳酸镁可阻止H.pylori对细胞的吸附,抑制H.pylori所致的细胞凋亡.与H.pylori损伤组比较,加用铝碳酸镁后GES-1细胞凋亡率下降[(28.96±3.14)％比(19.38±1.91)％],差异有统计学意义(t=4.52,P＜0.05).结论 铝碳酸镁对H.pylori有一定的体外抑制作用,并对多种菌体蛋白质的表达有调控作用.铝碳酸镁可减弱H.pylori对胃黏膜上皮细胞的吸附作用,保护细胞免受H.pylori损伤.

目的 探讨捏脊法治疗脾虚哮喘的可能作用机制.方法 44只SD大鼠随机分为正常对照组8只,哮喘组、脾虚哮喘组和捏脊脾虚哮喘组各12只.哮喘组以卵蛋白(OVA)致敏和激发方法建立大鼠哮喘模型,脾虚哮喘组和捏脊脾虚哮喘组在小承气汤灌胃致脾虚基础上以OVA致敏和激发方法建立大鼠脾虚哮喘模型,正常对照组与哮喘组以自来水1.5 ml/100g灌胃,轻抚大鼠头部和轻持鼠尾根部而不做捏脊;脾虚哮喘组轻抚大鼠头部和轻持鼠尾根部而不做捏脊;捏脊脾虚哮喘组给予捏脊法干预.以粪便涂片革兰染色法检测肠道菌群状况,以HE染色观察肺组织病理学情况,并测定肺泡灌洗液中炎症细胞总数和嗜酸性粒细胞比例.结果 第44、51、62天时,各组大鼠体重、杆菌/球菌、阳性杆菌/细菌总数差异有统计学意义(P＜0.01).哮喘造模后18、42h,与正常对照组比较,哮喘组、脾虚哮喘组和捏脊脾虚哮喘组炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞比例均明显升高,且脾虚哮喘组显著高于哮喘组和捏脊脾虚哮喘组(P ＜0.05或P＜0.01).与本组哮喘造模后18h比较,哮喘造模后42h时哮喘组、捏脊脾虚哮喘组炎症细胞总数和嗜酸性粒细胞比例均显著下降(P＜0.05或P＜0.01). 结论 捏脊法能有效改善脾虚哮喘大鼠的肠道菌群紊乱及炎症状态,这可能是其防治脾虚哮喘的重要机制之一.

目的 探讨低频超声干预表皮葡萄球菌生物膜(Biofilm,BF)后的变化及中性粒细胞对BF杀菌效应的改变.方法 建立表皮葡萄球菌BF体外模型,采用500 mW/cm2及800 mW/cm2声强的低频脉冲超声进行干预,平板计数及结晶紫实验分别检测不同干预下BF活菌数量及生物总量的改变,将不同声强干预后的BF与兔血分离中性粒细胞体外孵育1小时,采用革兰染色法 、Transwell迁移实验 、流式细胞术分别检测中性粒细胞吞噬 、趋化及呼吸爆发功能.结果 超声干预后表皮葡萄球菌BF活菌总数与干预前差异无统计学意义;结晶紫半定量实验显示低频超声干预下的BF结构变得疏松,且BF生物总量较阴性对照组(1.57±0.11)降低(P<0.05);应用800 mW/cm2比500 mW/cm2生物总量下降更多(1.06±0.09 vs.1.34±0.08,P<0.05);与阴性对照比较,500 mW/cm2、800 mW/cm2干预组中性粒细胞对BF的吞噬功能及趋化作用均增强(P<0.05);阴性对照 、500 mW/cm2及800 mW/cm2干预组中性粒细胞呼吸爆发平均荧光强度为(568±53)、(637±74)和(718±59),提示超声干预效应随着声强增加而增强(P<0.05).结论 低频超声干预表皮葡萄球菌BF后BF结构变得疏松 、生物总量下降,中性粒细胞对干预后BF细菌的吞噬 、趋化及呼吸爆发增强.

翻转课堂是一种颠覆传统的充满活力的全新教学模式,它包含了课前知识获取和课堂知识内化两部分.借力翻转课堂,充分利用信息技术,能真正实现授课时间的重新分配.本文旨在探讨如何有效的将翻转课堂理念引入高职医学微生物检验课程的教学中,发挥其优势,建立翻转课堂教学模型,探究其实施策略,以微生物检验中的重点内容——革兰染色法的教学为实例,融合多种教学方法,以期在信息化环境下,充分实现以学生为主体,教师为主导,强调问题中心、任务驱动、以学为主的教学模式深化改革,真正提高教学成效.