目的:探讨中国汉族人群腓骨肌萎缩症（CMT）致病基因的分布特点，并与2013年北京大学第三医院总结的CMT基因分布数据进行比较，分析8年来CMT基因分布比例的异同。方法:收集2007年1月至2021年3月于北京大学第三医院和中日友好医院诊治的CMT及其相关疾病家系520个，采用多重连接探针扩增技术检测外周髓鞘蛋白22（PMP22）基因重复和缺失突变后，采用二代基因测序包或全外显子组测序技术对上述家系的先证者进行基因检测，对阳性结果采用Sanger一代测序的方法验证。结果:在520个家系中，确定了336个CMT家系的基因诊断，确诊比例从2013年的48.6%（51/105）增加到2021年的64.6%（336/520；χ 2=9.54， P=0.003），其中PMP22基因重复占26.7%（139/520）、缝隙连接蛋白B1（GJB1）基因突变占8.8%（46/520）、线粒体融合蛋白2（MFN2）基因突变占5.0%（26/520）、髓鞘蛋白零（MPZ）基因突变占2.3%（12/520）、PMP22基因点突变占2.1%（11/520）、热休克蛋白B1基因突变占1.9%（10/520）、神经节苷脂诱导分化相关蛋白1（GDAP1）基因突变占1.9%（10/520）、SH3结构域和四三肽重复序列2（SH3TC2）基因突变占1.5%（8/520）、免疫球蛋白mu-DNA结合蛋白2（IGHMBP2）基因突变占1.3%（7/520）、MORC家族CW型锌指2（MORC2）基因突变占1.2%（6/520）、山梨醇脱氢酶（SORD）基因突变占1.0%（5/520），其余非常少见的基因突变家系有16个（16/520，3.1%），未确诊家系184个（184/520，35.4%）。 结论:与2013年相比，影响CMT最常见的3种基因仍然为PMP22、GJB1和MFN2基因，但MPZ基因突变患者的比例与其他基因如SH3TC2、GDAP1基因的差距越来越小。近年新发现的CMT致病基因如MORC2及SORD基因所占比例与IGHMBP2基因接近，应予以重视。二代测序技术提高了CMT的诊断效率，尤其是对于常染色体隐性突变导致的CMT诊断价值很大。

目的:夏科-马里-图斯病/腓骨肌萎缩症（Charcot-Marie-Tooth disease，CMT）是临床和遗传异质性较强的遗传性周围神经病，患病率约为1/2 500。本研究旨在对携带MFN2、BSCL2以及LRSAM1突变中国患者的临床及基因突变特点进行分析。方法:收集2012年12月至2020年3月于解放军总医院神经内科临床诊断为CMT的患者共206例，对其进行病史采集、神经系统体格检查、实验室检查、神经传导检查（nerve conduction studies，NCS）以及高通量核苷酸测序和生物信息学分析。结果:临床诊断为CMT的206例中，MFN2突变10例，男性7例、女性3例，其中2例有阳性家族史，并发现3个未报道突变：c.475-2A>G（剪切突变）；c.687dupA（p.E230Rfs*16）和 c.558dupT（p.S186fs）；BSCL2突变4例：c.461C>G（p.S154W）、c.461C>T（p.S154L）、c.1309G>C（p.A437P）和c.845C>T（p.A282V），其中c.1309G>C（p.A437P）和c.845C>T（p.A282V）为未报道突变；LRSAM1未报道突变2例：c.1930G>T（p.G644C）和c.1178T>A（p.L393Q）。结论:本研究通过对临床诊断为CMT患者进行高通量靶向测序，发现了MFN2、BSCL2和LRSAM1未报道突变，拓展了中国人群CMT这一疾病的基因谱。

目的:探究两色金鸡菊提取物马里苷对高糖诱导的视网膜上皮细胞(ARPE-19)上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation，EMT)的影响。方法:利用高糖诱导ARPE-19细胞建立EMT模型，设control对照组，不通过浓度高糖干预组及马里苷高中低剂量组。CCK-8细胞活性实验观察高糖对细胞的影响。镜下观测细胞形态结构变化。Western blot实验观察间质标志物Fibronectin(纤维连接蛋白FN)以及上皮标志物E-cadherin(E-钙素)的表达情况。结果:随着高糖浓度的依次递增，ARPE-19细胞的凋亡愈加明显，高糖干预24 h对照组[(97.97±1.56)%]与不同浓度高糖干预组[(88.31±3.34)%，(82.54±3.92)%，(77.35±6.14)%，(81.19±3.83)%，(53.17±5.71)%，(40.57±7.37)%，(31.27±8.92)%]相比差异有统计学意义( F＝64.13， P<0.05)；高糖干预48 h对照组[(100.00±2.06)%]与不同浓度高糖干预组[(85.09±7.87)%，(86.54±8.58)%，(74.48±3.21)%，(64.07±8.65)%，(58.64±8.45)%，(25.14±8.88)%，(7.665±7.91)%相比差异有统计学意义( F＝48.83， P<0.05)。伴随着明显的结构形态的改变，ARPE-19细胞中E-钙素表达降低、FN表达升高。高糖干预48 h E-钙素的表达对照组(96.7±1.05)与不同浓度高糖干预组[(87.9±5.46)，(62.71±2.01)，(70.73±6.13)，(67.97±8.05)，(58.41±5.24)]相比差异有统计学意义， F＝24.61， P<0.05)；高糖干预48 h FN的表达对照组(100.00±0.01)与不同浓度高糖干预组(153.10±17.47)，(137.7±25.24)，(152.00±26.00)相比有显著差异， F＝3.088， P<0.05)]。马里苷干预后，上皮标记物E-钙素恢复，间质标志物FN降低，马里苷干预48 h对照组E-钙素的表达量为(0.43±0.08)，与马里苷高中低剂量组[(0.25±0.004)，(0.36±0.01)，(0.38±0.04)，(0.31±0.01)]相比差异有统计学意义( F＝7.865， P值均<0.05))，马里苷干预48 h FN的表达对照组为(102.20±2.10)，与马里苷高中低剂量组[(188.30±13.01)，(95.41±12.50)，(136.10±9.49)，(199.60±19.93)]相比差异有统计学意义( F＝42.31， P<0.05)。 结论:高糖可以促进ARPE-19细胞发生上皮间质转化，造成其纤维化趋势，而马里苷可以改善其纤维化。

本文报道了1例利用微滴式数字聚合酶链反应（droplet digital polymerase chain reaction，ddPCR）技术无创产前检测 MFN2基因变异致胎儿腓骨肌萎缩症的病例。先证者为孕妇配偶，外院基因检测结果为 MFN2基因（NM_014874）c.919A>G（p.K307E）杂合变异，诊断为轴索型腓骨肌萎缩症2A2A型。孕妇孕8周采集外周血提取胎儿游离DNA，采用ddPCR技术进行无创产前检测，检出胎儿携带父源性致病基因变异位点。孕11周采集绒毛进行Sanger测序验证，证实胎儿携带与父亲一致的c.919A>G（p.K307E）杂合变异。由本例提示ddPCR技术也许可以用于无创产前检测孕妇外周血中胎儿游离DNA是否携带父源性致病基因变异。

目的:探讨马里苷对糖尿病小鼠肝脏、胰腺的组织形态以及自噬调节的影响.方法:选择10只db/m小鼠为对照组,按照随机对照原则将另外30只db/db小鼠分为模型组、二甲双胍阳性药组和马里苷给药组,每组10只.各组连续灌胃给药8周,HE染色观察各组小鼠肝脏和胰腺的形态学变化、免疫组化检测小鼠肝脏P62的含量、Western Blotting检测小鼠肝脏自噬相关蛋白LC3Ⅱ/I、P62、ATG5和Beclin1的表达水平.结果:组织形态学显示,二甲双胍和马里苷给药组小鼠肝小叶结构较清晰,肝索排列较紊乱,肝细胞气球样变有所减轻,且胰岛形态较正常,边界比较清晰,胰岛细胞排列有明显改善,胰岛细胞空泡状变性减少.肝脏免疫组化结果显示,模型组小鼠P62表达高于对照组,二甲双胍阳性药组和马里苷给药组使病理状态下P62的表达明显降低.蛋白免疫印迹结果显示,与模型组比较,马里苷和二甲双胍可以显著增加糖尿病小鼠肝脏自噬相关蛋白LC3Ⅱ/I、ATG5和Beclin1的表达(P＜0.05),降低P62的表达(P＜0.05).结论:马里苷可缓解糖尿病所造成的肝脏和胰腺的组织病理损伤;促进糖尿病小鼠肝脏自噬表达增强.

目的 研究马里苷(marein)对糖尿病小鼠心肌纤维化的影响.方法 选取 5～6 周龄 10 只瘦素受体基因缺陷杂合(db/m)雄性小鼠为对照组和 30 只对糖尿病瘦素受体基因缺陷db/db雄性小鼠,db/db雄性小鼠分为:db/db组(db/db,n=10)、二甲双胍(Met)阳性药组(每日灌胃 280 mg/kg,n = 10)和马里苷药物干预组(每日灌胃50 mg/kg,n=10).持续给药 8 周后,HE染色、Masson染色观察心脏形态学改变;免疫组织化学检测波形蛋白(vimentin)的分布及表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌组织 fibronectin、vimentin、转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白的表达.结果 db/db组心肌纤维肥大,二甲双胍组和马里苷组心肌结构损伤有所改善.db/db组小鼠心肌组织胶原纤维表达较db/m组增多(P＜0.01),二甲双胍组和马里苷组心肌组织胶原纤维的表达较db/db组下降(P＜0.01).db/db组相比于对照组心肌组织vimentin的表达明显升高(P＜0.01),二甲双胍组和马里苷组vimentin的表达较db/db组明显降低(P＜0.01).db/db组fibronectin、vimentin、TGF-β1 的表达较db/m组明显升高(P＜0.01),二甲双胍组和马里苷组fibronectin、vimentin、TGF-β1 表达明显下降(P＜0.01).结论 马里苷能够改善糖尿病db/db小鼠心肌组织的纤维化.

目的:探究雪菊性状特征与质量的相关性,为中草药“辨状论质”理论提供论据,同时为雪菊药材标准的建立奠定基础.方法:通过研究不同批次雪菊药材的舌状花性状特征、HPLC图相似度及奥卡宁和马里苷两种主要查尔酮类成分的含量测定,以探寻性状特征与化学成分特征间的关系.结果:不同批次雪菊的舌状花,其红褐色部分所占比例及颜色深浅存在差异;其化学成分的HPLC图谱虽得到较高相似度,但样品中两种主要成分的含量存在明显差异,且其含量与样品性状特征密切相关.结论:雪菊的内在质量与舌状花的性状特征存在相关性.

目的:考察新疆两色金鸡菊模拟茶饮水提取物清除自由基、胰脂肪酶活性抑制能力,并对其成分进行HPLC分析.方法:采用去离子纯净水煎煮两色金鸡菊获得模拟茶饮水提取物.对模拟茶饮水提取物进行DPPH、ABTS+·、·OH和NO·自由基的清除能力考察;同时考察模拟茶饮水提取物对胰脂肪酶活性抑制能力;使用HPLC法分析模拟茶饮水提取物中的主要物质成分.结果:模拟茶饮水提取物对DPPH自由基的清除能力(SC50)为(228.6±4.61) μg·mL-1;对ABTS+·自由基的清除能力(SC50)为(128.4±5.83) μg·mL-1;对·OH自由基的清除能力(SC50)为(22.41±1.13) μg·mL-1;对NO·自由基的清除能力(SC50)为(149.8±11.6) μg·mL-1;对胰脂肪酶活性抑制能力(IC50)为(366.4±8.12) μg·mL-1.经HPLC成分分析,模拟茶饮水提取物主要含有绿原酸、黄诺马苷、栎草亭-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、马里苷、异奥卡宁和奥卡宁等成分.结论:新疆两色金鸡菊模拟茶饮水提取物具有一定的自由基清除能力,同时具有一定的抑制胰脂肪酶活性的能力.

目的 研究两色金鸡菊(CCT)中马里苷(CCT-1)、异奥卡宁-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(CCT-2)和花旗松素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(CCT-3)在大鼠胃肠道内是否发生水解代谢.方法 采用体外孵育法,筛选底物质量浓度、酶质量浓度及孵育时间,再通过测定的苷元质量浓度分析3种黄酮苷在大鼠胃肠道的水解代谢程度.结果 孵育体系中,质量浓度为36μg·m L-1的黄酮苷与蛋白质量浓度为1.5 mg·mL-1的组织提取物孵育45 min,发现CCT-1、CCT-2和CCT-3的水解代谢率在大鼠十二指肠中依次为4.8％,7.1％ 和0％;在空肠中依次为61.8％,35.3％ 和13.7％;在回肠中依次为64.8％,29.7％ 和20.5％;在胃、结肠和盲肠组织提取物中无水解.结论 CCT-1、CCT-2和CCT-3在大鼠小肠中均发生去糖基水解代谢,生成苷元,三者水解程度依次为:CCT-1>CCT-2>CCT-3.此3种黄酮苷及其苷元可能是两色金鸡菊潜在的药效物质基础.

目的 观察两色金鸡菊黄酮类化合物马里苷对高糖损伤人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的作用.方法 取对数生长期的细胞,分为正常对照组(NG)、高糖模型组(HG)及马里苷不同浓度(50、100、200、400 μmol/L)给药组.采用CCK-8法检测细胞活力;ELASA法检测MDA含量及SOD、CAT、GSH-PX活力;Western blot法检测炎性因子VEGF、ICAM-1、MCP-1在HUVEC细胞中的蛋白表达.结果 与NG组比较,及HG组细胞活力明显降低(P＜0.05);MDA含量显著升高(P＜0.05),SOD、CAT、GSH-PX活性降低(P＜0.05);与HG组(50 mmol/L)比较,马里苷药物干预组(50、100、200、400 μmol/L)细胞活性明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05),且随浓度增加细胞活性明显增加.Western blot蛋白印迹结果显示,与NG组比较,HG组VEGF、ICAM-1、MCP-1蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05);与HG组比较,马里苷干预组VEGF、ICAM-1、MCP-1蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 马里苷对高糖损伤的HUVEC细胞具有一定保护作用.