目的:探讨黄芩茎叶黄酮(SSF)对冈田酸(OA)引起的大鼠脑内双螺旋细丝(PHF)异常生成的抑制作用及其对蛋白磷酸酶(PP)的调节机制.方法:雄性SD大鼠,采用侧脑室注射OA(200 ng/kg)建立记忆障碍模型,Morris水迷宫进行记忆障碍模型筛选,取造模成功大鼠每日分别灌胃25、50和100 mg/kg SSF,连续36 d.Western blot法测定大鼠皮层与海马组织中PHF、PP1、PP2A-Cα、PP2A-Cβ、PP2CA和PP2CB的蛋白表达,以银杏叶黄酮作为阳性对照药.结果:与假手术组大鼠相比,模型组大鼠皮层与海马中PHF的蛋白表达明显增加(P<0.01),皮层与海马组织中PP2A-Cα和PP2A-Cβ及海马组织中PP2CB蛋白表达明显降低(P<0.05),皮层中PP2CA和PP2CB的蛋白表达明显增加(P<0.01),皮层中PP1的蛋白表达明显降低(P<0.01).与模型大鼠比较,灌胃25、50和100 mg/kg SSF 36 d不同程度地逆转了OA所致大鼠皮层与海马组织中PHF、PP2A-Cα和PP2A-Cβ及皮层中PP1的蛋白表达异常,对PP2CA和PP2CB蛋白表达无显著性影响,银杏叶黄酮也表现出与SSF相似的结果.结论:SSF能够明显抑制OA引起的大鼠脑内PHF异常生成,该作用可能与SSF调节大脑皮层和海马组织中PP1、PP2A-Cα和PP2A-Cβ的蛋白表达有关,而与调节PP2CA和PP2CB的关系较小.

目的 探究黄芩茎叶黄酮(SSF)对急性脊髓损伤(ASCI)大鼠神经的保护作用,及其潜在的分子作用机制.方法 将大鼠分为假手术组、模型组、甲强龙组、SSF低剂量组、SSF中剂量组、SSF高剂量组,每组12只.采用脊髓运动功能(BBB)评分法评定大鼠脊髓损伤情况,HE染色检测脊髓组织病理学变化,TUNEL检测脊髓损伤组织细胞凋亡率,蛋白质印迹法(Western blotting)检测HMGB1、Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)的表达水平.结果 模型组脊髓坏死严重,出现很多空腔,灰质中神经元结构破坏,细胞核固缩;与模型组相比,甲强龙组和SSF组因坏死形成的空腔减少.甲强龙组和SSF组BBB评分显著高于模型组(P＜0.05);甲强龙组和SSF组脊髓细胞凋亡率以及脊髓组织中HMGB1、TLR4、NF-κB表达水平显著低于模型组(P＜ 0.05);SSF高剂量组BBB评分、脊髓细胞凋亡率以及脊髓组织中HMGB1、TLR4、NF-κB表达水平与甲强龙组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SSF对ASCI大鼠神经具有保护作用,这一作用可能是通过调控HMGB1/TLR4/N F-κB信号通路实现的,为ASCI的临床治疗提供一定的理论基础.

目的 探讨在慢性全脑缺血的状态下,不同浓度的黄芩茎叶黄酮(SSTF)提取物对VD大鼠学习记忆障碍及p-tau、PP2A及GSK3β蛋白表达的影响.方法 BCCAO建立VD模型,WB法检测p-tau、PP2A及GSK3β蛋白的表达.结果 与正常大鼠比较,VD大鼠逃避潜伏期时间延长,穿越平台的次数明显减少,游行距离的百分比明显缩短(P<0.01),提示VD大鼠存在认知功能障碍.给予SSTF100mg/kg干预治疗后,能够明显改善VD大鼠的认知功能障碍.100mg/kgSSTF能够显著降低VD大鼠磷酸化tau蛋白的水平.进一步研究发现SSTF不能改变VD大鼠总GSK3β蛋白的水平,却能显著提高p-GSK3β蛋白的水平.另外,100mg/kgSSTF能够显著改善VD大鼠脑PP2A-sub B蛋白表达的水平.结论 SSTF是通过对p-tau、PP2A及GSK3β等蛋白的调节而起到预防血管性痴呆的作用.

目的 探究黄芩茎叶黄酮通过辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡对病毒性心肌炎(VM)小鼠的保护作用.方法 将BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组(腹腔注射CVB3病毒悬液)、黄芩茎叶黄酮低剂量组和高剂量组(200、400 mg/kg黄芩茎叶黄酮灌胃)、阳性组(腹腔注射1 mg/kg利巴韦林).收集小鼠血液以及心脏组织,酶联免疫法检测肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白T(cTnT)、肌红蛋白(Mb)水平,心肌组织进行HE、Masson染色,细胞流式仪检测小鼠脾脏淋巴液中Th17、Treg;Western blot法测定心脏组织中白细胞介素-17(IL-17)、视黄酸相关孤儿受体(RORrt)、白细胞介素-10(IL-10)、叉头状转录因子-3(Foxp3)表达.结果 与正常组相比,模型组小鼠左室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、左心室舒张期后壁厚度(LVPWDd)、左心室收缩期后壁厚度(LVPWDs)、Treg细胞比例、IL-10、Foxp3蛋白表达降低,左心室舒张期前壁厚度(LVAWd)、左心室收缩期前壁厚度(LVAWs)、左室舒张期内径(LVIDd)、左室收缩期内径(LVIDs)、CK-MB、cTnI、Hb水平、病理学评分、心肌胶原纤维比例、Th17细胞比例、IL-17、RORrt蛋白表达升高(P<0.05).与模型组相比,阳性组、黄芩茎叶黄酮组LVEF、LVFS、LVPWDd、LVPWDs、Treg细胞比例、IL-10、Foxp3蛋白表达升高,LVAWd、LVAWs、LVIDd、LVIDs、CK-MB、cTnI、Hb水平、病理学评分、心肌胶原纤维比例、Th17细胞比例、IL-17、RORrt蛋白表达降低,具有剂量依赖性(P<0.05).结论 黄芩茎叶黄酮能够缓解VM小鼠心功能,降低炎症反应,其作用机制可能是通过影响Th17/Treg细胞免疫平衡.

目的:采用响应面法(Box-Behnken)优化黄芩茎叶对照提取物的纯化工艺,并建立其特征图谱.方法:以黄芩茎叶总黄酮含量为评价指标,单因素试验结合响应面法分析,建立数学模型,优选对照提取物纯化工艺参数,并对制备的黄芩茎叶对照提取物采用高效液相色谱法进行特征图谱研究.结果:采用Design-Expert 10.0.3软件得到黄芩茎叶总黄酮得率与各因素变量的二次多元回归方程为:Y=65.58+l.68A+0.84B+l.55C+0.44D-0.16AB-1.12AC-0.58AD +0.62BC-0.067BD +0.30CD +0.52A2-1.46B2-1.25C2-1.47D2 (P ＜0.05),确定纯化工艺为乙醇浓度为80％,上样流速为1.5 mL·min-1,洗脱体积为5 BV,洗脱流速为4 mL· min-.确定11批黄芩茎叶对照提取物高效液相特征图谱有7个共有峰,样品与对照特征图谱的相似度在0.957 ～0.989.结论:本实验优选的对照提取物纯化工艺稳定、可控,所建立的高效液相特征图谱可为黄芩茎叶对照提取物的研究及应用提供参考.

目的 探讨黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对高甘油三酯血症大鼠血脂的调节作用.方法 将36只SD大鼠适应性饲养1周后随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组以及SSTF低、中、高剂量组.除正常对照组喂食普通饲料外,其他5组均喂食高脂饲料,并同时给予药物干预,其中阳性对照组给予非诺贝特100 mg/kg,SSTF低、中、高剂量组分别给予50、100、200 mg/kg的SSTF.给药前及药物干预6周末眼眶静脉丛取血,测定血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平.结果 给予饲料喂养和药物干预6周后,SSTF低、中、高剂量组大鼠体质量显著低于模型组(P＜0.05),但与正常对照组、阳性药物组相比无显著差异(P＞0.05).SSTF低、中、高剂量组大鼠血清TG、TC、LDL-C水平显著低于模型组(P＜0.05),HDL-C水平显著高于模型组(P＜0.05),但与阳性药物组相比无显著差异(P＞0.05).结论 不同剂量SSTF均能有效控制高甘油三酯血症大鼠体质量的增长,降低高甘油三酯血症大鼠血清TG、TC、LDL-C水平,升高HDL-C水平,说明SSTF具有调血脂作用.

目的 黄芩茎叶总黄酮(SSTF)应用于高甘油三酯血症方面的研究很少,文中以高甘油三酯血症模型大鼠为对象,探讨黄芩茎叶总黄酮对高甘油三酯血症大鼠脂代谢及氧化应激水平的影响.方法 60只SD大鼠随机数字表法分为正常组、模型组、非诺贝特(100 mg/kg)组以及SSTF低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量组.除正常组外,其他5组均喂食高脂饲料建立高甘油三酯血症大鼠模型,并同时给予相应药物干预6周,测量大鼠体重、肝湿重计算肝指数,测定血清TG、TC、HDL-C、LDL-C,肝组织匀浆测定TG、TC、丙二醇、SOD、GSH-PX,HE染色观察肝组织病理形态学变化.结果 与正常组比较,模型组大鼠2、4、6周体重、6周肝指数增加(P<0.05),血清TG、TC、LDL-C水平升高(P<0.05),HDL-C水平降低(P<0.05),模型组大鼠肝组织TG[(1.60± 0.15)mmol/L]较正常组[(0.55± 0.12)mmol/L]升高(P<0.05)、TC[(3.47± 0.36)mmol/L]水平较正常组[(1.36±0.18)mmol/L]升高(P<0.05),丙二醇[(10.29±1.98)nmol/mg]较正常组[(4.81±1.12)nmol/mg]表达增加(P<0.05);SOD[(106.84±24.01)U/mg]、GSH-PX[(9.28±2.08)U/mg]较正常组[(206.72±29.40)、(15.58±1.56)U/mg]表达降低(P<0.05).与模型组比较,非诺贝特组、SST各剂量组大鼠2、4、6周体重及6周肝指数减少(P<0.05),血清TG、TC、LDL-C水平降低(P<0.05),HDL-C水平升高(P<0.05),肝组织TG、TC水平降低(P<0.05),丙二醇表达减少(P<0.05),SOD、GSH-PX表达增加(P<0.05).与非诺贝特组相比,SSTF高剂量组大鼠4、6周体重降低(P<0.05)、6周肝指数减少(P<0.05),血清TG、LDL-C水平降低(P<0.05),HDL-C水平升高(P<0.05);SSTF高剂量组肝组织TG[(0.72±0.14)mmol/L]水平较非诺贝特组(0.86±0.14)mmol/L降低(P<0.05),丙二醇[(5.07±1.31)nmol/mg]较非诺贝特组[(6.21±1.06)nmol/mg]表达减少(P<0.05),SOD[(172.21± 30.21)U/mg]、GSH-PX[(14.62± 2.42)U/mg]表达较非诺贝特组[(142.45 ± 32.02)、(12.52 ± 1.74)U/mg]增加(P<0.05).结论 黄芩茎叶总黄酮具有调节高甘油三酯血症大鼠脂代谢,改善肝病理性损伤的作用,该作用可能与抑制脂质过氧化、减少氧化应激有关.

目的 利用超高效液相色谱(UPLC)对黄芩茎叶中的黄酮类、酚酸类成分进行分析与评价,基于网络药理学和分子对接探讨黄芩茎叶防治新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的潜在作用机制.方法 采用UPLC测定11个产地黄芩茎叶样品中9种黄酮类、3种酚酸类成分的含量,并利用SPSS 19.0对不同产地样品进行主成分分析.利用TCMSP数据库获取上述12种化学成分的作用靶点,使用GeneCards及NCBI数据库获取COVID-19靶点,导入Cytoscape 3.7.0软件建立药物-化学成分-靶点-疾病网络,导入STRING数据库获取靶点PPI网络,导入Bioconductor进行GO功能注释和KEGG通路富集分析.利用AutoDock Vina将化合物与新型冠状病毒(SARS-CoV-2)S蛋白受体结合结构域与血管紧张素转化酶Ⅱ (ACE2)蛋白酶结构域复合物(SARS-CoV-2-S-RBD-ACE2)进行分子对接.结果 不同产地黄芩茎叶中均含有丰富的黄酮类、酚酸类成分,但含量差异较大,野黄芩苷为黄芩茎叶中含量最高的成分,相同产地黄芩茎叶化学成分相似度较高,不同产地黄芩茎叶化学成分相似度较低,表明不同产地黄芩茎叶样品化学成分含量差异可能与产地生态环境诸多生态因子密切相关.网络药理学结果显示黄芩茎叶10种成分可通过干预30个靶点、127条通路发挥防治COVID-19的作用.分子对接结果显示,10种化学成分与SARS-CoV-2-S-RBD-ACE2均有较好的结合活性,其中8种成分的结合活性优于诊疗方案中4种COVID-19治疗药物.结论 研究建立了简单快速、全面可靠分析评价不同产地黄芩茎叶中黄酮类、酚酸类成分的方法,可为黄芩茎叶质量控制、资源综合利用提供思路.黄芩茎叶治疗COVID-19具有多成分、多靶点、多途径的特点,对COVID-19引起的免疫系统紊乱、炎症等具有潜在的防治作用.黄芩茎叶中多种黄酮类、酚酸类成分具有潜在的抗SARS-CoV-2活性及COVID-19治疗作用.黄芩茎叶、黄芩茎叶解毒胶囊和由黄芩茎叶制得的黄芩茶可用于COVID-19的防治中,黄芩茎叶亦可作为原料提取用于治疗COVID-19的活性成分.

目的 优选黄芩茎叶总黄酮制备工艺,为黄芩茎叶资源的合理利用开发提供依据.方法 以黄芩茎叶中8个黄酮类化合物的转移率为指标,采用单因素考察结合正交试验优选黄芩茎叶黄酮的提取工艺;比较酸沉法和大孔树脂法纯化茎叶总黄酮的转移率,并对大孔树脂纯化工艺进行优选.结果 以12倍量40％乙醇热回流提取3次,每次1 h,为最佳提取工艺.提取物的纯化结果显示,大孔树脂法中黄芩茎叶黄酮的总体转移率(92.53％)显著高于酸沉法(76.69％).在pH为1.01时,酸沉法虽然可以使野黄芩苷等化合物转移率达90％以上,但含量丰富的二氢黄酮类化合物异红花素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、红花素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的转移率仅为64.76％、68.57％,而使用大孔树脂法纯化,其转移率均可达90％以上,可以实现各目标成分的高效转移.经优选,0.26 g/mL药液上样,上样量为每10 g HP-20型干树脂上样2.08 g干燥提取物,树脂柱径高比为1:3,4 BV纯水除杂后,以30％乙醇洗脱4 BV,为最佳纯化工艺,所得总黄酮质量分数可达66.03％.结论 建立了稳定且环境友好型黄芩茎叶总黄酮制备工艺,可为黄芩茎叶的进一步开发利用提供参考.

目的:考察不同生长期黄芩茎、叶中化学成分的动态变化规律,探讨黄芩茎、叶最佳采收期.方法:采用超声提取,建立高效液相色谱法对不同生长期黄芩茎、叶中野黄芩苷、黄芩苷、木犀草素、汉黄芩苷4个黄酮类化学成分的含量测定方法,依据测定结果结合聚类分析、主成分分析和正交偏最小二乘判别分析等化学计量学方法以及统计学方法分析其在黄芩生长过程中的动态积累与分布规律.结果:不同生长期黄芩茎、叶中以上4个黄酮类成分含量呈动态变化,大致趋势均为先升高,至5月份到达最大值,后逐渐降低并有微小浮动;在黄芩茎、叶各个生长期中均为野黄芩苷含量最高,且同一时期的野黄芩苷在叶中含量大于茎中含量.研究结果表明黄芩茎、叶最佳采收期应为5月份,此时野黄芩苷含量和4个黄酮类成分总含量均最高.结论:本研究为揭示黄芩茎、叶中4个黄酮类成分的动态积累规律及确定其药材的适宜采收期提供科学依据,同时为黄芩茎、叶的质量控制提供可靠方法.