为探究黄鳝(Monopterus albus)对锌的适宜需求量,以鱼粉和豆粕为蛋白源,鱼油和豆油为脂肪源配制基础实验饲料,以甘氨酸锌(Zn2+≥21％)为锌源在基础饲料中分别添加0、10、20、40、80、160和320 mg/kg的锌,制成7种不同锌水平的饲料(实际锌含量分别为48.24、60.79、70.25、88.04、123.88、204.35和381.65 mg/kg干物质),饲喂初始体重为(23.17±0.04)g的黄鳝60d,以增重率、特定生长率、脊椎骨锌含量和血清碱性磷酸酶活性等指标综合评价黄鳝锌的需求量.结果表明:(1)各组的增重率、特定生长率随饲料锌水平呈先上升后下降趋势,存活率呈下降趋势,60.79组和70.25 mg/kg组黄鳝的增重率和特定生长率较高,381.65 mg/kg组增重率、特定生长率和存活率均最低且显著低于48.24-70.25 mg/kg组,以增重率和特定生长率为评价指标,黄鳝幼鳝对锌的需求量分别为56.85和56.79 mg/kg.(2)随着饲料锌水平的升高,全鱼粗蛋白含量呈先上升后下降趋势,70.25 mg/kg组最高,粗脂肪呈先下降后平缓的趋势,48.24 mg/kg组显著高于其他组,全鱼锌含量升高、锌沉积率呈先上升后下降的趋势,黄鳝脊椎骨、肝脏、皮肤和肾脏中锌含量显著增加,脊椎骨锌含量呈先显著上升后平缓的现象;肌肉中锌含量变化不明显;全鱼铁、锰、铜、骨铁和骨锰含量呈下降趋势,骨磷和骨钙含量呈先上升后下降趋势,以脊椎骨锌含量为评价指标,黄鳝对锌的需求量为81.01 mg/kg.(3)随着饲料锌水平的升高,黄鳝血清碱性磷酸酶活力和白蛋白含量呈先上升后下降的趋势,在88.04 mg/kg组最高且显著高于204.35-381.65 mg/kg组,以血清碱性磷酸酶活力为评价指标,黄鳝幼鳝对锌的需求量为76.73 mg/kg.溶菌酶活力呈先上升后下降的趋势,60.79 mg/kg组显著高于其他组,381.65 mg/kg组血清谷丙转氨酶活性最高且显著高于48.24-70.25 mg/kg组.综合饲料锌水平对黄鳝生长性能、体成分、组织锌沉积和血清生化指标的影响,黄鳝饲料中适宜的锌需求量为56.79-81.01 mg/kg.黄鳝皮肤、脊椎骨和肝脏较肌肉更易沉积锌.

为了培育性状优良、遗传稳定的黄鳝(Monopterus albus)群体,研究探索了人工诱导黄鳝减数分裂雌核发育方法.针对养殖性状优良的深黄大斑鳝进行种质纯合,创制出3个深黄大斑鳝雌核发育群体.流式细胞术和染色体计数分析表明雌核发育黄鳝的细胞DNA含量、染色体数目均与野生型相同.性腺组织学切片观察表明雌核发育黄鳝卵巢发育正常.微卫星多样性分析表明雌核发育黄鳝群体的有效等位基因(Ne)、平均香农指数(I)、平均多态信息指数(PIC)、平均观测杂合度(Ho)及平均期望杂合度(He)等参数均极显著低于野生群体,雌核发育群体的遗传纯合度显著提高.雌核发育群体之间的遗传距离增大,遗传相似系数变小.深黄大斑鳝雌核发育群体为培育性状优良的黄鳝养殖品种提供了育种材料.

试验旨在研究低鱼粉高脂饲料中添加大豆卵磷脂对黄鳝(Monopterus albus)生长、血清生化指标及肠道菌群的影响,为降低黄鳝鱼粉使用量提供依据.以初始体重(20.03±0.01)g黄鳝为研究对象,以含有42％鱼粉、22％豆粕、6％粗脂肪的饲料为正常鱼粉组,另以含有22％鱼粉、52％豆粕和9％粗脂肪的饲料为低鱼粉高脂组,分别在低鱼粉高脂组中添加1％和2％的大豆卵磷脂,进行为期56d的养殖试验,于室外池塘进行网箱养殖,日投喂1次,喂量为黄鳝体重3％—5％.结果表明:(1)与对照组相比,低鱼粉高脂组黄鳝增重率显著降低(P＜0.05),饵料系数与肝体比均显著增加(P＜0.05),但添加2％大豆卵磷脂后黄鳝增重率显著提高(P＜0.05),而饵料系数与肝体比显著降低(P＜0.05);(2)对比正常鱼粉组,低鱼粉高脂饲料组黄鳝血清甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、血氨、尿素氮、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、酸性磷酸酶与免疫球蛋白M含量显著增加(P＜0.05),且碱性磷酸酶活性显著降低(P＜0.05),而添加2％大豆卵磷脂使黄鳝血清的高密度脂蛋白含量与碱性磷酸酶活性显著增加(P＜0.05),低密度脂蛋白、血氨、尿素氮、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、酸性磷酸酶与免疫球蛋白M水平显著下降(P＜0.05);(3)与对照组相比,低鱼粉高脂组黄鳝后肠绒毛高度与杯状细胞显著降低(P＜0.05),而添加2％大豆卵磷脂后黄鳝后肠绒毛高度与杯状细胞数目上升;(4)与对照组相比,低鱼粉高脂组不动杆菌属与考克氏菌属相对丰度上升,而与低鱼粉高脂组相比,添加2％大豆磷脂后黄鳝肠道群落的丰富度与多样性显著增加(P＜0.05),且显著提高了肠道红杆菌属的相对丰度,并显著减少不动杆菌属与考克氏菌属的丰度(P＜0.05).由此得出,在试验条件下,2％大豆卵磷脂可促进脂肪代谢和提高机体免疫性能,并修复肠道组织结构与维持菌群稳态,进而缓解低鱼粉高脂饲料对黄鳝生长的负面影响.

为研究鱼类肌间骨的骨化模式,采用整体骨骼染色方法,对黄鳝(Monopterus albus)和泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)2种处于不同进化地位且游动模式不同的鱼类肌间骨发生发育进行了系统观察.结果显示合鳃鱼目合鳃鱼科且游动模式属于鳗鲡模式的黄鳝在孵出后30d(体长40 mm)时,其头部开始出现椎体小骨;随后依次向尾部骨化,在孵出后55d(体长约100 mm)时,肌间骨相继出现完毕,所有椎体小骨均为"I"形.鲤形目鳅科且游动模式为鲹科模式的泥鳅在孵出后27d(体长17 mm)时,肌间骨开始在尾部出现,包括髓弓小骨和脉弓小骨;随后依次向头部骨化,在孵出后40d(体长35 mm)时,肌间骨全部出现,形态包括"I"、"Y"和"卜"形.此外,研究利用成骨细胞特异性转录因子绿色转基因荧光蛋白(Osterix GFP)斑马鱼品系,通过观察此osterix GFP活体斑马鱼,可发现斑马鱼肌间骨从尾部向头部依次骨化的过程.研究结果揭示鱼类肌间骨的骨化规律与其游动模式密切相关,且肌间骨的形态种类的多态性与其游动模式和体型有一定的关系.

目的 了解广州市部分水产品中颚口线虫第三期幼虫感染情况和流行病学特征,明确危害广州市食品安全的颚口线虫虫种,为本病的防控、保障食品安全提供依据.方法 采用分层随机抽样的调查方法,采集广州市(白云区、从化区、越秀区、增城区)部分市售水产品泥鳅、黄鳝、乌鳢,样品消化后显微镜检筛查颚口线虫幼虫,并通过形态学检查和分子生物学技术对虫种进行鉴定.结果 2016-2017年共采集样品267份,经形态学检查共发现33份样品阳性,总感染率为12.36％.其中黄鳝感染率为19.13％(22/115),泥鳅感染率为9.09％(11/121),乌鳢样品未检出阳性.白云区、从化区和增城区的感染率分别为14.63％、6.82％、17.14％,越秀区未检出.农贸市场和餐饮环节感染率分别为15.12％、7.14％,超市和养殖环节未检出阳性.经分子生物学鉴定,主要有棘颚口线虫和刚刺颚口线虫第三期幼虫两种.结论 广州市市售黄鳝和泥鳅的颚口线虫感染率较高,且黄鳝高于泥鳅;棘颚口线虫和刚刺颚口线虫是危害广州市食品安全的主要颚口线虫虫种.

[目的]在真核毕赤酵母KM体系中表达黄鳝NK-lysin抗菌肽,并检测体外抗菌活性.[方法]利用特定引物扩增黄鳝NK-lyin抗菌肽基因片段,将黄鳝NK-lysin基因片段插入pPIC9K真核表达质粒中,通过PCR与测序验证阳性克隆,成功构建重组黄鳝NK-lysin与pPIC9K真核表达质粒,将线性化的NK-lysin-pPIC9K电击转化到毕赤酵母细胞KM71获得重组酵母KM71-NKlysin,通过PCR验证,对重组酵母进行发酵,并收集酵母上清液同时检测体外抗菌活性.[结果]成功构建重组酵母KM71-NKlysin表达体系,酵母表达体系上清液对迟缓爱德华氏菌、金黄色葡萄球菌、乳酸菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌均有明显抑制作用.[结论]重组表达黄鳝抗菌肽蛋白对水环境大多数细菌具有明显抑菌活性,对于黄鳝疾病预防具有广阔应用前景.

以初始体重(30.00±0.45)g的黄鳝(Monopterus albus)为研究对象,以低鱼粉饲料为对照组,在低鱼粉饲料中分别添加蛋氨酸有效含量为2 g/kg的晶体蛋氨酸(C-Met)、包膜蛋氨酸(E-Met)、蛋氨酸羟基类似物钙盐(MHA-Ca)、蛋氨酸羟基类似物(MHA),研究其在低鱼粉黄鳝饲料中的利用效果,共5个处理组,养殖试验持续10周.结果表明:(1)在低鱼粉饲料中添加蛋氨酸均有提高黄鳝增重率和蛋白质效率比、降低饲料系数的趋势,其中MHA-Ca和MHA组与对照组差异显著(P<0.05).(2)在低鱼粉饲料中添加蛋氨酸均显著提高了肠道胰蛋白酶活力、血清胆汁酸、总胆固醇、总蛋白、尿素氮和血氨含量、肌肉黏附性与胶黏性(P<0.05);添加MHA-Ca和MHA显著提高了肠道淀粉酶活力、血清葡萄糖和高密度脂蛋白胆固醇含量、肝脏谷草转氨酶活力、全鱼粗蛋白含量、肌肉硬度、弹性和咀嚼性(P<0.05),显著降低了黄鳝肝体比与血清谷草转氨酶活力(P<0.05).(3)对照组在摄食6h出现蛋氨酸吸收峰值,C-Met与MHA-Ca组均在摄食后9h出现蛋氨酸吸收峰值,E-Met组在摄食后12h出现蛋氨酸吸收峰值,MHA组分别在摄食后3h和9h出现蛋氨酸峰值.结果表明,在低鱼粉饲料中添加蛋氨酸均能提高黄鳝生长和氨基酸代谢,且MHA-Ca与MHA效果较佳.

白细胞介素1β(IL-1β)在免疫调节和炎症反应中起着重要作用.为了解黄鳝IL-1β基因的功能,以黄鳝肝脏cDNA为模板,PCR扩增IL-1β基因后将其亚克隆至pET28a表达载体中.将序列测定验证过的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性重组菌进行IPTG诱导后Ni2+亲和柱分离纯化获得重组蛋白rIL-1β;用SDS-PAGE电泳和Western Blot检测rIL-1β.按2μg/kg剂量对黄鳝进行腹腔注射rIL-1β,用荧光定量PCR分析注射rIL-1β对肝脏IL-1β、NF-κB、AKR和Nrf2等基因表达的影响.结果表明:成功构建了黄鳝IL-1β基因的原核表达载体并实现了重组蛋白的分离纯化;重组的rIL-1β蛋白具有较好的生物活性,腹腔注射rIL-1β显著提高了肝脏IL-1β和NF-κB基因的表达水平,却对AKR和Nrf2基因的表达有明显的抑制作用.研究为进一步深入探索鱼类IL-1β基因在免疫系统中的功能提供了参考资料.

本研究通过生物信息学软件预测黄鳝FOXL2 (Forkhead box L2)基因5’上游3000bp内的序列,通过聚合酶链反应从黄鳝的基因组DNA PCR扩增出启动子序列,并构建到PGL3-basic载体中,经Kpn Ⅰ/HindⅢ双酶切和测序验证正确性,阳性克隆命名为pGL3-basic-FOXL2.将pGL3-basic-FOXL2和pRL-TK共转染HEK293细胞,采用双荧光素酶检测启动子活性.并采用gene-regulation.com网站的Alibaba2.1及The JASPAR database在线软件预测转录因子结合位点.结果 表明成功克隆了FOXL2的启动子,荧光素酶检测结果表明启动子具有活性.同时预测了启动子上具有以下转录因子如GATA-1、Oct-1、AP-1、Sp1、C/EBPalpha、Ftz、Hb、GR、TBP、USF、SOX9、E4、ER、RXR-beta、Pit-1a、HOXA4、HNF-1等的结合位点.为研究FOXL2参与细胞通路之间的调控研究提供了有力的工具.

为探讨产卵是否为雌性黄鳝(Monopterus albus Zuiew)性转变的必经过程,研究分析了实验室内从受精卵或幼苗开始养殖至不同时间段的黄鳝性腺组织学状况,采用性腺活检技术跟踪了34月龄雌性黄鳝性腺发育变化,并以免疫组织化学方法探讨了黄鳝不同发育状态性腺中增殖细胞核抗原(PCNA)的分布.在养殖过程中,实验黄鳝没有出现产卵现象或者繁殖行为.在5月龄黄鳝中,间性占比13.3％,雄性占比20.0％;在12月龄(1龄)黄鳝中,雄性占比17.6％;34月龄(3龄)黄鳝中,间性占比12.8％,雄性占比8.5％.通过性腺活检技术对36条34月龄雌性黄鳝性腺发育变化进行了为期1个月的跟踪研究,结果表明,16.7％的雌性黄鳝发生了性转变,性腺发育到间性阶段.黄鳝间性早期性腺生殖褶增厚,部分细胞呈现明显PCNA免疫阳性,包括间质细胞、精原细胞和初级精母细胞.上述结果提示,产卵并非雌性黄鳝发生性转变的必经过程;黄鳝性转变初期,性腺结构变化包括生殖褶中间质细胞和精原细胞的发生和增殖.