目的:探讨含人脐血来源富血小板血浆（HUCB-PRP）的海藻酸钠-明胶（AG）生物墨水（称为HUCB-PRP-AG生物墨水）的可打印性能和细胞相容性，及该生物墨水的三维打印组织治疗裸鼠全层皮肤缺损创面的效果。方法:采用实验研究方法。制备含体积分数2.5%、5.0%、10.0%HUCB-PRP的HUCB-PRP-AG生物墨水，分别命名为1P-AG、2P-AG、4P-AG。取AG、1P-AG、2P-AG、4P-AG，观察室温下外观，采用旋转流变仪检测黏度、储能模量和损耗模量。利用以上4种生物墨水分别进行三维生物打印并观察打印组织外观（后续使用交联后打印组织），将4种打印组织分别与人脐静脉内皮细胞（HUVEC）在Transwell小室内用HUVEC专用培养基共培养24 h，采用细胞计数试剂盒8检测细胞增殖水平（样本数为3）；将4种打印组织分别用DMEM培养基培养12、24、48 h，进行干燥称重并计算降解率（样本数为3）；将1P-AG、2P-AG、4P-AG打印组织分别用磷酸盐缓冲液培养0.5、24.0、48.0 h，采用酶联免疫吸附测定法检测培养上清液中血管内皮生长因子（VEGF）的表达（样本数为5）。取16只6~8周龄雌性BALB/c-NU裸鼠建立背部全层皮肤缺损创面模型，分为创面仅覆盖医用水胶体敷料的常规对照组和另予HUCB-PRP滴加的HUCB-PRP组、AG打印组织覆盖的AG组、4P-AG打印组织覆盖的4P-AG组（每组4只），观察每组3只裸鼠伤后4、8、14 d创面愈合情况并计算创面愈合率；取每组剩余裸鼠伤后8 d创面组织，行苏木精-伊红染色后观察组织病理学改变，行免疫组织化学染色后观察CD31阳性新生血管情况。对数据行重复测量方差分析、LSD检验及Bonferroni校正。结果:在室温下，AG、1P-AG、2P-AG、4P-AG均呈半透明液态；AG为淡黄色，1P-AG、2P-AG、4P-AG均为淡红色但颜色依次逐渐加深。在温度10 ℃和剪切率0.1~10.0 s -1范围内，AG、1P-AG、2P-AG、4P-AG的黏度均随着剪切率的增加而减小；在温度10 ℃和角频率1~100 rad/s范围内，4种生物墨水的储能模量均大于损耗模量。4种生物墨水打印组织的分辨率与形态均相近。与1P-AG、2P-AG、4P-AG打印组织共培养24 h的HUVEC增殖水平分别为0.885±0.030、1.126±0.032、1.156±0.045，均明显高于与AG打印组织共培养的HUVEC的0.712±0.019（ P<0.01）；与2P-AG、4P-AG打印组织共培养24 h的HUVEC增殖水平均明显高于与1P-AG打印组织共培养的HUVEC（ P<0.01）。1P-AG、2P-AG、4P-AG打印组织培养12、24、48 h的降解率均明显高于AG打印组织（ P<0.01）；2P-AG、4P-AG打印组织培养24、48 h的降解率均明显高于1P-AG打印组织（ P<0.01）；4P-AG打印组织培养12 h的降解率明显高于1P-AG打印组织（ P<0.01），培养24、48 h的降解率均明显高于2P-AG打印组织（ P<0.01）。培养0.5、24.0、48.0 h，2P-AG打印组织培养上清液中VEGF表达量均明显高于1P-AG打印组织（ P<0.01），1P-AG和2P-AG打印组织培养上清液中VEGF表达量均明显低于4P-AG打印组织（ P<0.01）。常规对照组与HUCB-PRP组裸鼠伤后8 d创面较伤后4 d干燥且缩小，HUCB-PRP组裸鼠伤后14 d创面较常规对照组缩小且无结痂；AG组、4P-AG组裸鼠伤后4 d创面上打印组织明显降解且创面无明显渗出，伤后8 d创面明显上皮化且缩小，伤后14 d创面无结痂；4P-AG组裸鼠伤后14 d创面完全上皮化。与常规对照组比较，AG组裸鼠伤后4 d创面愈合率明显降低（ P<0.05），HUCB-PRP组、4P-AG组裸鼠伤后各时间点及AG组裸鼠伤后8、14 d创面愈合率均明显升高（ P<0.01）；与HUCB-PRP组比较，AG组裸鼠伤后4、8 d及4P-AG组裸鼠伤后4 d创面愈合率均明显降低（ P<0.01），AG组裸鼠伤后14 d及4P-AG组裸鼠伤后8、14 d创面愈合率均明显升高（ P<0.01）；4P-AG组裸鼠伤后各时间点创面愈合率均明显高于AG组（ P<0.01）。伤后8 d，常规对照组裸鼠创面组织可见大量炎症细胞浸润、少量新生微血管以及少量CD31阳性新生血管，HUCB-PRP组裸鼠创面组织可见大量炎症细胞浸润、丰富新生微血管以及较多CD31阳性新生血管，AG组裸鼠创面组织可见轻度炎症浸润、少量新生微血管以及少量CD31阳性新生血管，4P-AG组裸鼠创面组织可见轻度炎症浸润、大量新生微血管以及大量CD31阳性新生血管。 结论:HUCB-PRP-AG生物墨水具备良好的可打印性能和细胞相容性，其三维打印组织可促进裸鼠全层皮肤缺损创面血管化，加速创面愈合。

目的:初步探讨改性纳米生物玻璃水凝胶的制备以及它的理化、生物学特性。方法:(1)取400 mL氢氧化钙饱和溶液，加入纳米二氧化硅悬液67 mL，制备纳米生物玻璃悬液，观察其悬浮稳定性。(2)制备终质量分数为10%明胶、1%海藻酸钠的水凝胶，设为对照组；在对照组水凝胶基础上加入实验(1)制备的纳米生物玻璃悬液，制备终质量分数为0.5%生物玻璃、10%明胶、1%海藻酸钠的水凝胶，设为实验组。观察2组水凝胶在4、25 ℃的成胶情况并记录成胶时间及在37 ℃的熔解情况并记录熔胶时间。另取2组水凝胶，4 ℃冷浴后用25 g/L的氯化钙溶液交联，用杨氏模量测定仪测量压缩模量。另取2组水凝胶，同前交联后于-20 ℃冻干，测量相关体积并计算孔隙率。样本数均为3。(3)取12只24 h龄C57BL/6J小鼠乳鼠，分离培养成纤维细胞(Fb)，倒置显微镜下观察其形态，并培养第3代Fb，用于后续实验。取Fb，制备细胞浓度为1×10 5个/mL的单细胞悬液，按随机数字表法(下同)分为实验组和对照组，分别加入实验(2)制备的实验组和对照组液态水凝胶，培养12、24、48 h，每组各取3孔，采用细胞计数试剂盒8法检测细胞存活率。(4)取第3代Fb，制备细胞浓度为(3.0～4.5)×10 7个/mL的单细胞悬液，分为实验组和对照组，每组1管，加入绿色荧光探针DIO染色，分别加入实验(2)中制备的实验组和对照组液态水凝胶9 mL，同前交联后制备载细胞水凝胶。培养3 d，激光共聚焦显微镜下观察细胞在凝胶中的存活情况；同前制备载细胞水凝胶块但不加绿色荧光探针DIO，培养7 d，在扫描电子显微镜下观察细胞在水凝胶中的黏附及伸展情况。(5)取6周龄雌性BALB/c-nu裸鼠12只，分为实验组和对照组，每组6只，在背部制作直径为1 cm的圆形全层皮肤缺损创面，伤后即刻，分别放入1块实验(4)制备的实验组和对照组载细胞水凝胶块。伤后7、14 d，每组取3只裸鼠，收集创面及创周组织，苏木精-伊红染色，观察创面愈合情况。对数据行独立样本 t检验。 结果:(1)纳米生物玻璃粒子可在水中均匀分散，具有良好的悬浮稳定性。(2)2组水凝胶在37 ℃下均呈熔融状态，均未见粒子析出。实验组和对照组水凝胶在37 ℃下的熔胶时间分别为5、10 min，在25 ℃下成胶时间分别为30、180 min，在4 ℃下成胶时间分别为5、10 min。实验组水凝胶压缩模量为(53±6)kPa，明显高于对照组的(23±6)kPa( t＝6.364， P<0.01)。实验组水凝胶孔隙率为(86.1±2.1)%，与对照组的(88.2±4.4)%相近( t＝1.210， P>0.05)。(3)细胞呈长梭形，细胞核所占比例较大，符合Fb形态学特征。培养12、24、48 h，实验组细胞存活率为(84±4)%、(89±4)%、(130±10)%，与对照组的(89±5)%、(90±4)%和(130±11)%相近( t＝1.534、0.611、0.148， P>0.05)。(4)培养3 d，2组细胞在水凝胶中形态完整，未见细胞核裂解、消失，细胞质保持完好，并且实验组细胞荧光强度明显强于对照组。培养7 d，实验组和对照组细胞在水凝胶中黏附、伸展，且实验组细胞在水凝胶中黏附数明显多于对照组。(5)伤后7 d，对照组、实验组裸鼠创面面积均缩小，且实验组减小更明显，2组裸鼠创面及创周均可见大量炎症细胞分布。伤后14 d，对照组裸鼠创面面积大于实验组，且创面及创周炎症细胞明显多于实验组。 结论:纳米生物玻璃水凝胶具有良好的理化、生物学特性和载细胞潜能，同时还具有促创面愈合能力，在临床应用方面有着较好的潜力。

目的:通过微流控电喷雾技术和多巴胺(DA)自聚合反应制备聚多巴胺(PDA)修饰的海藻酸钙微球(ALG@PDA微球)并探究其性能.方法:微流控电喷雾技术制备海藻酸钙微球(ALG微球);DA氧化自聚合反应修饰ALG微球;光镜观察微球粒径;傅里叶变换红外光谱(FTIR)检测微球吸收峰;扫描电子显微镜观察微球表面结构;近红外激光(NIR)和热成像仪探究微球光热效应;CCK-8法、细胞活死染色检测微球浸出液处理后3T3细胞的活性;小鼠组织测试微球的黏附能力.结果:通过探究微流控参数与微载体粒径的关系,得知在一定范围内,微载体的粒径与前驱体溶液浓度、前驱体溶液流速以及毛细玻璃管尖内径成正比,而与外加电压成反比.基于微流控电喷雾技术和DA氧化自聚合反应制备出粒径200 μm左右且可注射的ALG@PDA,ALG@PDA具有良好的生物相容性.得益于PDA的光热转换能力,与单纯的ALG相比,ALG@PDA具有良好的光热效应,在NIR的照射下,ALG@PDA可以在3 min时升温21.5℃.基于PDA表面丰富的儿茶酚基团,与单纯的ALG相比,ALG@PDA具有良好的黏附能力,ALG@PDA相互之间可以黏附,还可以黏附在组织表面,增加ALG@PDA在病灶的停留时间.结论:制备的ALG@PDA微球具有良好的生物相容性、光热效应和黏附性.

目的 调查自来水管网生物膜中细菌的耐药现状.方法 根据CLSI抗微生物药物敏感试验执行标准(ISBN 1-56238-898-3),用MH培养基纸片扩散法测量细菌对常用抗生素药物的抑菌圈直径,得出细菌的耐药性结果.结果 分离的198种菌的耐药性结果显示,肠杆菌科细菌中的类志贺邻单胞菌、聚团肠杆菌和黏质沙雷菌对头孢噻吩和头孢唑啉有较强的耐药性.6株不动杆菌属细菌对妥布霉素、头孢吡肟、头孢他啶的耐药率已达100,0％.16株假单胞菌科细菌均无耐药性.25株弧菌科细菌中,海鱼弧菌和梅氏弧菌均未耐药;而海藻弧菌对氨苄酉林、头孢西叮、头孢噻吩、头孢唑啉和头孢呋辛已完全耐药;拟态弧菌和沙鱼弧菌对头孢噻吩、头孢唑啉和头孢呋辛耐药率为33.3％.脆弱气单胞菌对头孢吡肟的耐药率已高于50％,舒伯特气单胞菌仅对头孢吡肟产生耐药.结论 自来水管网生物膜中分离的细菌已经普遍产生耐药性.

对分布在辽宁大连黑石礁、付家庄、石槽、金石滩、獐子岛与海洋岛沿岸的黏管藻[Gloiosiphonia capillaris(Hudson)Carmichael]的外部形态、营养与生殖结构、生物量、成熟个体比例与成熟个体生物量/总生物量(R/T指数)的变化、温度性质以及rbcL、COⅠ基因序列进行了详细研究.结果表明:(1)黏管藻配子体为雌雄同体,直立,单生或丛生,主轴明显,固着器呈圆盘状,质地胶质,颜色为红色或紫红色.采集于獐子岛与海洋岛的藻体长度和宽度明显高于其他采集地点;(2)藻体由皮层及髓部组成,皮层由6—10层细胞组成,髓部存在假根丝细胞.成熟囊果小,突出于藻体表面,呈球形或半球形,通常2—4个囊果聚集在一起;(3)黏管藻配子体的生物量在6月达到最大,平均生物量为3.628 g/m2.3—6月成熟个体比例逐渐增大,6月达到100％;(4)黏管藻配子体生长周期为3—7月,温度性质属于温带性;(5)rbcL基因序列分析表明,6个采集地点的样本间无碱基差异,与产自加拿大的黏管藻聚在一起,形成一个独立的分支.COⅠ基因序列分析表明,6个采集地点的样本间无碱基差异,形成一个独立的分支,均确定为黏管藻.

目的 探讨人工真皮移植联合藻酸盐辅料对糖尿病足慢性溃疡创面愈合的疗效评估及对血清碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、C肽及瘦素受体水平的影响.方法 2015年4月～2018年2月,我院接受治疗的糖尿病足慢性溃疡病人64例,用随机数字表将其分为对照组和观察组.对照组给予含藻酸盐辅料的无菌纱布换药治疗,观察组在传统的清创消毒后,按创面大小准备人工真皮联合藻酸盐辅料治疗.观察两组临床疗效,血清bFGF、C肽,瘦素受体及炎性因子水平.结果 观察组和对照组换药次数分别为(8.43±2.18)次和(13.61±2.87)次,换药需时分别为(10.46±2.78)分钟和(14.72±3.72)分钟,创面愈合需时分别为(26.07±2.78)天和(34.13±3.33)天,临床治愈率分别为75％和40.6％,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后,观察组和对照组血清血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)分别为(0.68±0.13) μg/ml和(1.02±0.24) μg/ml,成纤维细胞生长因子2(FGF2)分别为(15.14±3.18) pg/ml和(19.02±2.17) pg/ml,血清餐后2小时血糖(2hCP)分别为(7.03±1.47) mmol/L和(4.12±1.23) mmol/L,血清肿瘤坏死因子(TNF)-α分别为(15.34±2.43) pg/ml和(18.42±2.31) pg/ml,白介素(IL)-6)分别为(2.64±0.23) pg/ml和(9.38±1.18) pg/ml,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 人工真皮移植联合藻酸盐辅料可有效促进糖尿病足慢性溃疡创面愈合,降低血清瘦素,上调瘦素受体表达.

[目的]研究20 μmol/L褪黑素和0.2 mg/L水杨酸(SA)组合3.0 mg/L茉莉酸甲酯等组合处理诱导新型斜生栅藻协同促进积累虾青素的效应.[方法]在优化和改良的BG11培养基中培养,营养细胞培养阶段用一系列平行的40.0W红光灯管和1.2m长28.0 W蓝光灯管照射藻液(总光照强度为252 μmol·m-2 s-1),连续培养至对数生长期,每天震荡摇动培养物2次,防止黏壁.对数生长期1d后,通过1.2m长蓝光灯管+高光强+氮饥饿+51.8 g/L葡萄糖和20.0 g/L木糖,进行生物量发酵和诱导部分虾青素,继续培养3d(方案1),然后在广泛诱导阶段,分步提高光照强度高约555 μmol·m-2 s-1后,培养3d(方案2),继续光照,再通过2μmol/L褪黑素组合3.0 mg/L茉莉酸甲酯加0.2 mg/L水杨酸诱导获得虾青素,继续培养5d(方案3).[结果]3个处理方案均能轻微促进斜生栅藻细胞密度的增加,最大生物量达到0.91×106个/mL强度.方案3处理组藻细胞内SA含量适度提升为1.0 mmol/L,藻体内虾青素含量为9.6％,显著高于对照组(P＜0.05).运用荧光定量PCR分析表明:经过方案3处理后,斜生栅藻新藻种(Scenedesmus obliqast)体内ipi、psy、crtR-b基因的表达量分别为对照的15.60、16.20、19.68倍,均有显著差异(P＜0.05).尤其是lyc基因的表达量为对照的31.20倍,达到差异极显著(P＜0.01).从方案1到方案3,bkt、zds和ds基因的表达量逐渐增加,但不明显(P＞0.05).[结论]方案3的组合处理能使藻细胞内积累适度提升的水杨酸信号分子,适度提升的胞内SA含量就显著促进了虾青素的增长,而且组合处理协同调控7种关键酶基因表达.因此,2 μmol/L褪黑素组合0.2 mg/L水杨酸加3.0 mg/L茉莉酸甲酯等诱导是非常有效的.

目的 探讨岩藻黄素(Fucoxanthin,FUCO)对振荡剪切应力作用下内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells,EPCs)生物学功能及细胞衰老的影响作用.方法 采用Flexcell STR-4000平行板流动系统模拟体内扰动流剪切应力(振荡剪切应力,Oscillatory shear stress,OSS,±4 dynes/cm2,1 Hz)并加载于EPCs;利用结晶紫染色法观察OSS作用后EPCs的形态学改变;应用Boyden小室、自发性细胞贴壁及Matrigel基质胶分别检测细胞迁移、黏附和体外血管形成能力的变化;采用Western blot检测促沉默信息调节因子1(Silent mating type information regulation2 homolog-1,SIRT1)蛋白和β-半乳糖苷酶法检测细胞衰老程度的改变;通过Dihydroethidium(DHE)荧光探针法检测细胞内超氧化物阴离子.结果 与静态培养组相比,OSS导致EPCs形态学发生明显改变,表现为细胞长宽比降低,细胞之间间距增加;而FUCO对OSS导致的EPCs形态学改变无显著影响作用;与OSS处理组相比,FUCO可显著促进EPCs的迁移(10.00±1.73 vs 21.00±2.65)、黏附(8.00±1.00 vs 20.00±1.73)及体外血管形成能力(8 538.67±1 231.47 vs 11 009.33±570.08).进一步研究发现,FUCO可降低OSS导致的β-半乳糖苷酶阳性细胞比例(21.18％±1.38％ vs 12.69％±3.94％)以及促进SIRT1蛋白表达上调;同时,FUCO可减弱OSS诱导的EPCs胞内超氧阴离子的产生(P＜0.05).结论 FUCO可缓解OSS环境下引发的EPCs细胞功能降低、细胞衰老的发生,提示其可有效提升内源性EPCs的血管修复能力.

糖尿病与长期的血管和神经系统并发症密切相关. 糖尿病足是糖尿病影响患者生活质量的常见并发症之一[1].大约20％的糖尿病人群有足部问题,5％～10％的人有足部溃疡,高达3％的人需要进行截肢[2].糖尿病足溃疡(diabetic foot ulcers,DFU)的治疗非常复杂,即使处理得当,伤口也可能无法像预期一样愈合,伤口愈合往往是暂时的,难以维持. 治疗DFU的基础是频繁清创, 以促进伤口愈合. 新的先进的局部敷料,如聚氨酯泡沫、海藻酸盐、细胞复合材料、非黏附敷料和薄膜敷料等,可能改善DFU伤口护理. 生长因子主要活性是诱导有丝分裂[3]. 本研究旨在比较表皮生长因子(epider-mal growth factor,EGF)与常规0.9％氯化钠注射液敷料对DFU治疗的临床疗效.

阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSA)是指连续7 h睡眠呼吸暂停或者反复发作高达30次及以上又或者呼吸暂停通气指数(AHI)≥5次/h,从而引发慢性低氧血症以及高碳酸血症等临床综合征.OSA能够通过机体炎症因子促使高血压的发生与发展.目前,临床治疗OSA多以药物治疗为主,福多司坦为黏液溶解剂,其可以有效抑制气管分泌黏液的杯状细胞,并抑制高黏度的岩藻蛋白,这有助于降低痰液黏滞性,促使痰液咳出[1].福多司坦联合常规降压药治疗OSA伴高血压的疗效显著,可以改善患者通气状态[2].为此,本研究选取2017年8月至2019年8月期间在医院接受治疗的70例OSA合并高血压患者为研究对象,分析福多司坦联合常规降压药治疗OSA伴高血压的疗效,现报告如下.