目的:研究苗药黑龙骨茎叶对胶原诱导性关节炎(Collagen-induced Arthritis,CIA)模型大鼠类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)作用,探究黑龙骨茎叶抗RA作用的潜在开发利用度.方法:SD大鼠随机选取8只作为正常组,其余大鼠建立CIA模型.造模成功后随机分为模型组,黑龙骨茎叶高剂量组(100 mg·kg-1)、低剂量组(25 mg·kg-1),雷公藤多苷(TG)组(10 mg·kg-1),每组8只.在试验因素干预后,对各组大鼠AI评分、足趾厚度及病理形态变化进行分析比较.结果:给药前后,正常组与模型组比较有极显著差异(P＜0.01),说明造模成功.给药后,大鼠左、右足趾厚度测量值显示,模型组与黑龙骨茎叶高、低剂量组相比均有显著性差异(P＜0.05);AI评分显示,黑龙骨茎叶高、低剂量组与模型组相比,存在显著差异,组内比较中,黑龙骨茎叶低剂量组的消肿效果优于高剂量组(P＜0.05).病理切片结果显示,与正常组相比,模型组大鼠滑膜组织内见大量、弥漫性炎性细胞浸润;与模型组相比,黑龙骨茎叶低剂量组大鼠滑膜组织内炎性细胞浸润减少.结论:黑龙骨茎叶表现出了良好的抗RA效果,具有潜在的抗RA开发利用价值.

目的 明确黑骨藤抗类风湿性关节炎药效物质基础、质量标志物,建立该药材质量评价体系.方法 采用CIA模型药理学实验验证黑骨藤对照提取物的抗类风湿关节炎作用,UPLC法测定黑骨藤有效对照提取物含量,构建其抗类风湿性关节炎功效的质量评价体系,并应用于药材质量控制.结果 黑骨藤对照提取物、对照品可有效缓解足趾肿胀,减小关节炎评分、CIA大鼠血清促炎细胞因子水平,改善组织病理学变化.对照提取物法、单体对照品法含量测定结果基本一致.新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、绿原酸甲酯、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C为质量标志物.结论 该方法具有检测指标多、效率高、成本低等优点,可为构建黑骨藤及其他中药质量评价新模式提供借鉴.

目的 运用网络药理学及分子对接技术,探究苗药黑骨藤治疗阿尔茨海默病(AD)的活性成分和潜在作用机制.方法 通过文献搜集苗药黑骨藤的化学成分,利用中药系统药理学数据库(TCMSP)和Swiss ADME数据库筛选黑骨藤的主要活性成分,采用Swiss Target Prediction和SEA数据库预测活性成分的作用靶点.通过GeneCards、OMIM数据库检索AD相关靶点,经Venny2.1.0获取成分-疾病交集靶点,结合STRING数据库和Cytoscape3.8.0 软件对交集靶点进行蛋白互作(PPI)网络分析.再借助HIPLOT数据库对交集靶点进行基因本体(GO)分析和基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析.最后,利用AutoDock Tools1.5.6软件将潜在成分与核心靶点进行分子对接.结果 苗药黑骨藤的活性成分共 24 个,对应靶点 574 个,1 513个AD靶点,交集靶点159个;GO分析得到2 661条生物过程,587 条分子功能,311 条细胞成分;KEGG分析得到AD主要参与神经退行性疾病-多发性疾病途径、卡波西肉瘤相关疱疹病毒感染、癌症中的蛋白多糖等相关通路.分子对接结果显示,山柰酚、槲皮素、汉黄芩素、丹参酮ⅡA、杠柳苷元等与类固醇受体辅助活化因子(SRC)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)3、血管内皮生长因子(VEGF)A蛋白等具有较强结合能力.结论 通过成分-靶点-通路网络及分子对接验证,筛选出黑骨藤抗AD的有效成分,并探究其抗AD作用机制,为苗药黑骨藤抗AD的新药开发和应用提供思路和理论依据.

目的 探讨黑骨藤对高表达表皮生长因子(EGF)受体突变体Ⅲ(EGFRvⅢ)的人胶质母细胞瘤细胞DKMG的影响及其机制.方法 取对数生长期的 DKMG 和不表达 EGFRvⅢ的人脑星形胶质母细胞瘤细胞U87MG,各自分为空白(Con)组(DMEM培养液)、低浓度黑骨藤组(100 mg/L黑骨藤培养液)、中浓度黑骨藤组(200 mg/L黑骨藤培养液)及高浓度黑骨藤组(400 mg/L黑骨藤培养液),处理细胞 24 h,采用细胞增殖与毒力检测试剂盒(MTS)检测各组DKMG、U87MG细胞的存活率,采用流式细胞术检测各组DKMG细胞凋亡率;实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qRT-PCR)检测各组DKMG细胞中EGFRvⅢ、B淋巴细胞瘤-2 基因(Bcl-2)及BCL2-Associated X(Bax)的信使核糖核酸(mRNA)表达,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组DKMG细胞中EGFRvⅢ、Bcl-2、Bax、半胱氨酸蛋酶家族(Caspase-3、Cleaved caspase-3)蛋白的表达.结果 MTS检测显示,与Con组相比,各浓度黑骨藤组DKMG细胞存活率明显降低(P＜0.05),各浓度黑骨藤组U87MG细胞存活率比较、差异无统计学意义(P＞0.05);流式细胞术结果表明,与Con组比较,各浓度黑骨藤组DKMG细胞凋亡率明显增加(P＜0.05);qRT-PCR结果表明,与Con组比较,各浓度黑骨藤组DKMG细胞中EGFRvⅢ和Bcl-2 mRNA表达降低(P＜0.05),Bax 表达无变化(P＞0.05);Western blot 结果显示,各浓度黑骨藤组 DKMG 细胞中EGFRvⅢ、Bcl-2 及Caspase-3 蛋白表达下降(P＜0.05),Bax、Cleaved caspase-3 蛋白表达升高(P＜0.05).结论 黑骨藤可诱发DKMG细胞凋亡,产生细胞杀伤作用,其机制可能与下调EGFRvⅢ、Bcl-2、Caspase-3 表达及上调Bax、Cleaved caspase-3 表达有关.

目的 探究基于Toll样受体(TLR)4/核转录因子(NF)-κB研究苗药黑骨藤对急性痛风性关节炎(AGA)大鼠辅助性T细胞(Th)17/调节性T细胞(Treg)及相关细胞因子的影响.方法 在 90 只SPF级雄性健康大鼠中选取 15 只作为正常组,其余大鼠建立AGA模型,模成功后将大鼠随机分为模型组、秋水仙碱组、低剂量组、中剂量组、高剂量组各 15 只.低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给予25、50、100 mg/kg苗药黑骨藤灌胃,秋水仙碱组使用 0.1 mg/kg的秋水仙碱灌胃,正常组、模型组给予相同体积的生理盐水灌胃,持续给药7d.观察各组Th17/Treg及相关细胞因子水平及TLR4、NF-κB蛋白表达量.结果 与秋水仙碱组、中剂量组、低剂量组相比,高剂量组Th17、Th17/Treg及相关细胞因子水平及TLR4、NF-κB蛋白表达量明显较低,Treg明显较高(P<0.05).结论 苗药黑骨藤可通过下调TLR4、NF-κB蛋白表达量,抑制TLR4/NF-κB信号通路,减轻AGA炎症反应,降低Th17/Treg及相关细胞因子水平,起到治疗作用.

目的:探讨黑骨藤追风活络胶囊治疗风寒湿痹型类风湿关节炎的临床疗效及深层作用机制.方法:将80例宜宾市第二人民医院确诊的风寒湿痹型类风湿关节炎患者随机分为观察组与对照组,各40例,对照组给予口服洛索洛芬钠,60 mg/次,3次/d,氨甲蝶呤(MTX)7.5～2 mg/次,1次/周;观察组在口服洛索洛芬钠基础上加用黑骨藤追风活络胶囊治疗,0.9g/次,3次/d,连续服药3个月;采用视觉模拟评分法(VAS)观察治疗前后关节压痛数、关节肿胀数、关节肿胀指数、双手平均握力、静息痛、晨僵时间变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组患者治疗前后血清中血沉(ERS),C-反应蛋白(CRP),类风湿因子(RF)含量变化;ELISA法检测两组患者治疗前后关节液中白细胞介素(IL)-17A,IL-18,IL-27含量变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测两组患者治疗前后关节液微小mRNA(microRNA,miR)-146a,miR-16表达变化.结果:经Ridit分析,观察组临床疗效优于对照组(P＜0.05);观察组治疗后关节压痛数、关节肿胀数、关节肿胀指数、双手平均握力、静息痛、晨僵时间改善程度均显著优于对照组(P＜0.01);观察组治疗后血清ERS,CRP,RF含量明显低于对照组;观察组治疗后关节液IL-17A,IL-18,IL-27含量及miR-146a,miR-16表达明显低于对照组.结论:黑骨藤追风活络胶囊可能通过降低miR-146a,miR-16表达,调控炎症因子释放,进而减轻自身免疫因子的表达,从而达到改善风寒湿痹型RA患者体征及症状的作用.

目的 观察黑骨藤追风活络胶囊对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠关节炎症的缓解作用及对血清白细胞介素-1β(IL-1β)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-15(IL-15)表达水平的影响.方法 将40只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、雷公藤多苷片组和黑骨藤追风活络胶囊组,每组10只,对除正常组外,其余3组建立CIA模型,于初次免疫后10 d开始,给各组大鼠进行相应药物灌胃处理以延缓炎症进展,并每隔7 d评定一次各组大鼠的关节炎指数(AI),给药21 d后处死大鼠检测各组大鼠血清中IL-1β、IFN-γ和IL-15的表达水平.结果 正常组大鼠关节正常,而模型组关节红肿较为明显,AI指数评分较高(P<0.001),雷公藤多苷片组和黑骨藤追风活络胶囊组大鼠AI均较模型组有所缓解(P<0.01).模型组大鼠血清IL-1β、IFN-γ、IL-15水平均较正常组升高(P<0.01),雷公藤多苷片组及黑骨藤追风活络胶囊组大鼠IL-1β、IFN-γ、IL-15水平均显著低于模型组(P<0.05或P<0.01).结论 黑骨藤追风活络胶囊可在一定程度上抑制CIA大鼠促炎因子分泌,缓解关节炎症,可作为临床上治疗类风湿关节炎的辅助用药.

苗药与藏、蒙、维、傣、彝并称为六大民族药,其中常用药物289种,经筛选与再评价研究,已开发上百种苗药药材及成方制剂,但收集苗药的相关专著比较零散,无系统整理.文章首次梳理了苗药研究的主要专著,并重点对头花蓼、吉祥草、大果木姜子、艾纳香和黑骨藤5种特色苗药品种的资源分布和成方制剂进行归纳总结.通过分析近10年相关中英文文献、专利及基金资助情况,讨论苗药发展现状与存在问题,为其资源的可持续利用和深入研发提供依据.

目的: 通过响应面法对黑骨藤指纹图谱液相色谱方法进行研究,得到优化的色谱条件.方法: 采用响应面法优化液相色谱条件的6 个主要参数(流动相梯度、洗脱时间、流速、柱温、改性剂浓度以及进样体积).结果: 优化得到黑骨藤的色谱分析的条件为: Kromasil C18色谱柱(250 mm×4. 6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水,梯度洗脱,时间50 min,流速1. 5 mL/min,柱温50 ℃.结论: 利用响应面分析法成功优化了黑骨藤指纹图谱的液相色谱条件.

目的:建立同时测定苗药黑骨藤中绿原酸和杠柳毒苷含量的方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为Xtimate C18,流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为220 nm,柱温为25℃,进样量为10 μL.采用SPSS 23.0统计软件根据药材样品中绿原酸和杠柳毒苷的含量进行聚类分析.结果:绿原酸、杠柳毒苷检测进样量线性范围分别为0.040 6～1.8 μg(r＝0.999 4)、0.016 8～2.3 μg(r＝0.999 9);精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于5.0%;定量限分别为0.918 0、0.084 3 μg/mL,检测限分别为0.102 0、0.025 3 μg/mL;加样回收率分别为102.66%～104.00%(RSD＝0.53%,n＝6)、96.44%～100.79%(RSD＝1.73%,n＝6);耐用性试验的RSD均小于3.0%.18份药材样品可聚为三大类,即S2、S4、S10、S12、S14～S18聚为一类, S1、S3、S5～S7、S9、S11、S13聚为一类,S8为一类.结论:该方法可用于黑骨藤药材的质量控制和品质评价;不同产地黑骨藤药材中绿原酸和杠柳毒苷的含量有较大差异,各成分含量与产地有一定关联.